ALLEGATO IX

ANALISI SPETTROFOTOMETRICA NELL’ULTRAVIOLETTO

PREMESSA

L’esame spettrofotometrico nell’ultravioletto può fornire informazioni sulla qualità di una sostanza grassa, sul suo stato di conservazione e sulle modificazioni indotte da processi tecnologici.

Gli assorbimenti alle lunghezze d’onda previste nel metodo sono dovuti alla presenza di sistemi dieni e trinci coniugati. I valori di tali assorbimenti sono espressi come estinzione specifica E 1 % 1 cm (estinzione di una soluzione della sostanza grassa all’1 % nel solvente prescritto, in uno spessore di 1 cm) convenzionalmente indicata con K (detto anche “coefficiente di estinzione”).

1.   OGGETTO

Il metodo descrive il procedimento per l’esecuzione dell’esame spettrofotometrico dell’olio di oliva (secondo la descrizione riportata nell’Appendice).

2.   PRINCIPIO DEL METODO

La sostanza grassa in esame viene disciolta nel solvente stabilito, quindi si determina l’estinzione della soluzione alle lunghezze d’onda prescritte, in riferimento al solvente puro. Dalle letture spettrofotometriche si calcolano le estinzioni specifiche. Si determina la specifica assorbanza alle lunghezze d’onda di 232 e 268 nm nell’isoottano o di 232 e 270 nm nel cicloesano, per una concentrazione di 1 g per 100 ml in una cuvetta di 10 mm.

3.   APPARECCHIATURA

3.1.   Spettrofotometro per misurare l’estinzione nell’ultravioletto fra 220 e 360 nm, con possibilità di lettura per ogni unità nanometrica. Prima dell’uso, si raccomanda di effettuare il controllo delle scale di lunghezza d’onda e di assorbanza secondo le modalità indicate qui di seguito.

3.1.1.

Scala delle lunghezza d’onda: questo controllo può essere effettuato mediante materiale di riferimento costituito da un filtro di vetro ottico contenente ossido di olmio, che presenta bande di assorbanza separate. Il materiale di riferimento è destinato alla la verifica e alla taratura della scala delle lunghezze d’onda dei spettrofotometri UV-visibile con ampiezza di banda spettrale nominale uguale o inferiore a 5 nm. Il filtro di vetro all’ossido di olmio è misurato in modalità di assorbanza rispetto ad una prova in bianco all’aria, su un intervallo di lunghezze d’onda compreso tra 640 e 240 nm. Per ogni ampiezza di banda spettrale (0,10 – 0,25 – 0,50 – 1,00 – 1,50 – 2,00 e 3,00), si esegue una correzione della linea di base con un porta-cuvette vuoto. Nella norma ISO 3656, le lunghezze d’onda della banda spettrale sono elencate nel certificato del materiale di riferimento.

3.1.2.

Scala di assorbanza: tale controllo può essere eseguito utilizzando materiale di riferimento composto da quattro soluzioni di dicromato di potassio in acido perclorico, sigillate in quattro cuvette UV in quarzo utilizzate per misurare la linearità e la precisione fotometrica di riferimento nell’ultravioletto. Le cuvette contenenti dicromato di potassio (40 mg/ml, 60 mg/ml, 80 mg/ml e 100 mg/ml) sono misurate rispetto ad una prova in bianco con acido perclorico. Nella norma ISO 3656 i valori netti di assorbanza sono elencati nel certificato del materiale di riferimento.

3.2.   Cuvette in quarzo rettangolari, con coperchio, di percorso ottico da 1 cm. Riempite di acqua o con altro solvente idoneo, non devono presentare fra di loro differenze superiori a 0,01 unità di estinzione.

3.3.   Matracci tarati da 25 ml.

3.4.   Bilancia analitica, idonea a fornire una lettura con l’approssimazione di 0,0001 g.

4.   REAGENTI

Si raccomanda di utilizzare solo reagenti di qualità analitica riconosciuta, salvo indicazione contraria.

Solvente: Isoottano (2,2,4 trimetilpentano) per la misurazione a 232 nm e 268 nm o cicloesano per la misurazione a 232 nm e 270 nm, con assorbanza inferiore a 0,12 a 232 nm e a 0,05 a 250 nm in riferimento all’acqua distillata, misurata in una cuvetta di 10 mm.

5.   PROCEDIMENTO

5.1.   Il campione in esame deve essere perfettamente omogeneo ed esente da impurità in sospensione. Gli oli liquidi a temperatura ambiente sono filtrati su carta ad una temperatura di circa 30 °C, i grassi concreti devono essere omogeneizzati e filtrati a una temperatura al massimo superiore di 10 °C rispetto alla loro temperatura di fusione.

5.2.   Del campione così preparato si versano circa 0,25 g (con un’approssimazione di 1 mg) in un matraccio tarato da 25 ml, si porta a volume con il solvente prescritto e si omogeneizza. La soluzione risultante deve essere perfettamente limpida. Qualora si riscontri opalescenza o torbidità si filtra rapidamente con carta.

5.3.   Con la soluzione ottenuta si riempie una cuvetta di quarzo e si misurano le estinzioni, usando come riferimento il solvente impiegato, ad una lunghezza d’onda adeguata fra 232 e 276 nm.

I valori di estinzione registrati devono essere compresi tra a 0,1 a 0,8; in caso contrario è necessario ripetere le misure utilizzando soluzioni più concentrate o più diluite, a seconda del caso.

NOTA: non è sempre necessario misurare l’assorbanza sull’intero intervallo delle lunghezze d’onda.

6.   ESPRESSIONE DEI RISULTATI

6.1.   Si rilevano le estinzioni specifiche (coefficienti di estinzione) alle varie lunghezze d’onda calcolate come segue:

in cui:

Κλ	=	estinzione specifica alla lunghezza d’onda λ,
Ελ	=	estinzione misurata alla lunghezza d’onda λ;
c	=	concentrazione della soluzione in g/100 ml;
s	=	spessore della cuvetta di quarzo in cm.

I risultati devono essere espressi con due cifre decimali.

6.2.   Variazione dell’estinzione specifica (ΔΚ)

L’esame spettrofotometrico dell’olio di oliva secondo il metodo ufficiale stabilito dalla legislazione dell’Unione prevede anche la determinazione della variazione del valore assoluto dell’estinzione specifica (ΔΚ), intesa come:

in cui Km è l’estinzione specifica alla lunghezza d’onda m: la lunghezza d’onda di massimo assorbimento dipende dal solvente utilizzato: 270 nm per il cicloesano e 268 nm per l’isoottano.

Appendice

CARATTERISTICHE DELL’OLIO DI OLIVA

Categoria

Esteri metilici di acidi grassi (FAME) e esteri etilici di acidi grassi (FAEE)

Acidità (%) (*)

Indice di perossido mEq 02/kg (*)

Cere mg/kg (**)

2-gliceril monopalmitato (%)

Stigmastadiene mg/kg (1)

Differenza: ECN 42 (HPLC) e ECN 42 (calcolo teorico)

K232 (*)

K270 (*) ‧K 270 o K 268 (5)‧

Delta-K (*) (5)

Valutazione organolettica Mediana del difetto (Md) (*)

Valutazione organolettica Mediana del fruttato (Mf) (*)

1.

Olio di oliva extravergine

Σ FAME + FAEE ≤75 mg/kg oppure 75 mg/kg <Σ FAME + FAEE ≤150 mg/kg e (FAEE/FAME) ≤1,5

≤ 0,8

≤ 20

≤ 250

≤ 0,9 se % acido palmitico totale ≥ 14 %

≤ 0,10

≤ 0,2

≤ 2,50

≤ 0,22

≤ 0,01

Md = 0

Mf > 0

≤ 1,0 se % acido palmitico totale > 14 %

2.

Olio di oliva vergine

—

≤ 2,0

≤ 20

≤ 250

≤ 0,9 se % acido palmitico totale ≤ 14 %

≤ 0,10

≤ 0,2

≤ 2,60

≤ 0,25

≤ 0,01

Md ≤ 3,5

Mf > 0

≤ 1,0 se % acido palmitico totale > 14 %

3.

Olio di oliva lampante

—

> 2,0

—

≤ 300 (3)

≤ 0,9 se % acido palmitico totale ≤ 14 %

≤ 0,50

≤ 0,3

—

—

—

Md > 3,5 (2)

—

≤ 1,1 se % acido palmitico totale > 14 %

4.

Olio di oliva raffinato

—

≤ 0,3

≤ 5

≤ 350

≤ 0,9 se % acido palmitico totale ≤ 14 %

—

≤ 0,3

—

≤ 1,10

≤ 0,16

—

—

≤ 1,1 se % acido palmitico totale > 14 %

5.

Olio di oliva composto da oli di oliva raffinati e oli di oliva vergini

—

≤ 1,0

≤ 15

≤ 350

≤ 0,9 se % acido palmitico totale ≤ 14 %

—

≤ 0,3

—

≤ 0,90

≤ 0,15

—

—

≤ 1,0 se % acido palmitico totale > 14 %

6.

Olio di sansa di oliva greggio

—

—

—

> 350 (4)

≤ 1,4

—

≤ 0,6

—

—

—

—

—

7.

Olio di sansa di oliva raffinato

—

≤ 0,3

≤ 5

> 350

≤ 1,4

—

≤ 0,5

—

≤ 2,00

≤ 0,20

—

—

8.

Olio di sansa di oliva

≤ 1,0

≤ 15

> 350

≤ 1,2

—

≤ 0,5

—

≤ 1,70

≤ 0,18

—

—

«ALLEGATO XVIII

DETERMINAZIONE DELLA DIFFERENZA TRA IL CONTENUTO EFFETTIVO E IL CONTENUTO TEORICO DI TRIACILGLICEROLI CON ECN 42

1.   OGGETTO

Determinazione della differenza assoluta tra i valori sperimentali dei triacilgliceroli (TAG) con numero di carbonio equivalente pari a 42 (ECN 42HPLC) ottenuti mediante determinazione nell’olio per cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) e il valore teorico dei TAG con un numero di carbonio equivalente pari a 42 (ECN 42teorico), calcolato a partire dalla composizione degli acidi grassi.

2.   CAMPO DI APPLICAZIONE

Il metodo è applicabile agli oli d’oliva. Mira a individuare la presenza di piccole quantità di oli di semi (ricchi in acido linoleico) in qualunque categoria di olio d’oliva.

3.   PRINCIPIO

Per gli oli puri, il contenuto in triacilgliceroli con ECN 42, determinato mediante HPLC, corrisponde all’incirca al contenuto teorico di triacilgliceroli con ECN 42 (calcolato in base alla determinazione mediante GLC (gascromatografia gas-liquido) della composizione in acidi grassi). Una differenza superiore ai valori adottati per ciascun tipo di olio indica che l’olio contiene oli di semi.

4.   METODO

Il metodo per il calcolo del contenuto teorico di triacilgliceroli con ECN 42 e della differenza rispetto ai dati HPLC si basa essenzialmente sulla coordinazione dei dati analitici ottenuti mediante altri metodi. È possibile distinguere tre fasi: determinazione della composizione in acidi grassi per cromatografia in fase gassosa su colonna capillare, calcolo della composizione teorica dei triacilgliceroli con ECN 42 e determinazione HPLC dei triacilgliceroli con ECN 42.

4.1.   Apparecchiatura

4.1.1.   Matracci a fondo arrotondato (palloni) da 250 e 500 ml.

4.1.2.   Becher da 100 ml.

4.1.3.   Colonna cromatografica in vetro (diametro interno: 21 mm, lunghezza 450 mm), provvista di rubinetto e cono normalizzato (femmina) alla sommità.

4.1.4.   Imbuti separatori da 250 ml con cono normalizzato (maschio) alla base, che si può adattare alla la sommità della colonna.

4.1.5.   Bacchetta di vetro, lunghezza 600 mm.

4.1.6.   Imbuto di vetro, diametro 80 mm.

4.1.7.   Matracci volumetrici, 50 ml.

4.1.8.   Matracci volumetrici, 20 ml.

4.1.9.   Evaporatore rotante.

4.1.10.   Cromatografo in fase liquida ad alta prestazione, con regolazione termostatica della temperatura della colonna.

4.1.11.   Unità di iniezione di 10 μl.

4.1.12.   Rivelatore: rifrattometro differenziale. La sensibilità su tutta la scala deve essere pari almeno a 10–4 unità dell’indice refrattivo.

4.1.13.   Colonna: tubo in acciaio inossidabile della lunghezza di 250 mm e del diametro interno di 4,5 mm, riempito con particelle di silice del diametro di 5 μm, contenente il 22-23 % di carbonio sotto forma di ottadecilsilano.

4.1.14.   Software di elaborazione dati.

4.1.15.   Fialette da circa 2 ml, con setti in teflon e cappucci a vite.

4.2.   Reagenti

I reagenti devono evidenziare una purezza per analisi. I solventi di eluizione devono essere degassati e possono essere riciclati più volte senza ripercussioni sulle separazioni.

4.2.1.   Etere di petrolio 40-60 °C, qualità per cromatografia o esano.

4.2.2.   Etere etilico, esente da perossidi, distillato da poco.

4.2.3.   Solvente per eluizione per purificare l’olio mediante cromatografia su colonna: miscela di etere di petrolio/etere etilico 87:13 (v/v).

4.2.4.   Gel di silice, 70-230, tipo Merck 7734, con un tenore di acqua normalizzato al 5 % (m/m).

4.2.5.   Lana di vetro.

4.2.6.   Acetone per HPLC.

4.2.7.   Acetonitrile o propionitrile per HPLC.

4.2.8.   Solvente di eluzione per HPLC: acetonitrile + acetone (proporzioni da regolare in modo da ottenere la separazione desiderata: cominciare con una miscela 50:50), o propionitrile.

4.2.9.   Solvente di solubilizzazione: acetone.

4.2.10.   Trigliceridi di riferimento: si possono usare i trigliceridi che si trovano in commercio (tripalmitina, trioleina ecc.), riportando su un grafico i rispettivi tempi di ritenzione in funzione del numero di carbonio equivalente, oppure utilizzare cromatogrammi di riferimento ottenuti impiegando olio di soia, miscela 30:70 olio di soia - olio di oliva e olio di oliva puro (cfr. note 1 e 2 e figure 1, 2, 3 e 4).

4.2.11.   Colonna di estrazione in fase solida (SPE) con gel di silice, 1 g, 6 ml.

4.3.   Preparazione del campione

Poiché alcune sostanze interferenti possono dar luogo a risultati falsamente positivi, il campione deve essere sempre purificato secondo il metodo IUPAC 2.507, impiegato per la determinazione dei composti polari nei grassi di frittura.

4.3.1.   Preparazione della colonna cromatografica

Riempire la colonna (4.1.3) con 30 ml circa di solvente di eluizione (4.2.3), introducendo poi nella colonna un tampone di lana di vetro (4.2.5) spingendolo sul fondo della colonna con la bacchetta di vetro (4.1.5).

In un becher da 100 ml, sospendere 25 g di gel di silice (4.2.4) in 80 ml di miscela di eluizione (4.2.3), trasferendola quindi nella colonna mediante un imbuto di vetro (4.1.6).

Per assicurare il completo trasferimento del gel di silice nella colonna, lavare il becher con la miscela di eluizione e trasferire nella colonna anche le porzioni di lavaggio.

Aprire il rubinetto e lasciar eluire il solvente dalla colonna fin a quando il suo livello supera di circa 1 cm quello del gel di silice.

4.3.2.   Cromatografia su colonna

In un matraccio tarato da 50 ml (4.1.7), pesare, con la precisione di 0,001 g, 2,5 ± 0,1 g di olio previamente filtrato, omogeneizzato e se necessario disidratato.

Diluirlo in 20 ml circa di solvente di eluizione (4.2.3), se necessario riscaldandolo leggermente per facilitare la dissoluzione. Raffreddare a temperatura ambiente e portare a volume con solvente di eluizione.

Con una pipetta volumetrica, introdurre 20 ml di soluzione all’interno della colonna preparata come indicato al punto 4.3.1, aprire il rubinetto e lasciar defluire il solvente fino al livello dello strato di gel di silice.

Eluire in seguito con 150 ml di solvente di eluizione (4.2.3), regolando il flusso del solvente a circa 2 ml/min (per passare attraverso la colonna, 150 ml impiegheranno circa 60-70 minuti).

Recuperare l’eluato in un matraccio a fondo arrotondato da 250 ml (4.1.1) precedentemente tarato in una stufa e pesato con accuratezza. Eliminare il solvente a pressione ridotta in un evaporatore rotante (4.1.9) e pesare il residuo che sarà impiegato per preparare la soluzione per l’analisi HPLC e per la preparazione dell’estere metilico.

Il campione deve essere recuperato almeno al 90 % per le categorie olio extra vergine, olio vergine, olio raffinato e olio d’oliva, e all’80 % per l’olio lampante e per l’olio di sansa.

4.3.3.   Purificazione mediante SPE

Attivare la colonna SPE con assorbente siliceo eluendo 6 ml di esano (4.2.3) sotto vuoto, evitandone l’essicazione.

Pesare con un’accuratezza dello 0,001 g, 0,12 g in una pipetta da 2 ml (4.1.15) e dissolvere in 0,5 ml di esano (4.2.3).

Versare nella colonna SPE la soluzione ed eluire con 10 ml di esano-etere dietilico (87:13 v/v) (4.2.3) sotto vuoto.

La frazione ottenuta è fatta evaporare completamente in un evaporatore rotante (4.1.9) a pressione ridotta e a temperatura ambiente. Il residuo è disciolto in 2 ml di acetone (4.2.6) per l’analisi dei triacilgliceroli (TAG).

4.4.   Analisi HPLC

4.4.1.   Preparazione dei campioni per l’analisi cromatografica

Preparare una soluzione al 5 % del campione da analizzare pesando 0,5 g (con uno scarto massimo di ± 0,001 g) del campione in un matraccio tarato da 10 ml e portare a volume (10 ml) con il solvente di solubilizzazione (4.2.9).

4.4.2.   Procedimento

Predisporre il sistema cromatografico. Far defluire il solvente di eluizione (4.2.8) ad un flusso di 1,5 ml/min, in modo da spurgare l’intero sistema. Attendere finché la linea di base è diventata stabile.

Iniettare 10 μl del campione preparato come indicato al punto 4.3.

4.4.3.   Calcolo ed espressione dei risultati

Impiegare il metodo della normalizzazione interna, ossia partendo dal presupposto che la somma delle aree dei picchi corrispondenti ai TAG da ECN 42 a ECN 52 è uguale al 100 %.

Calcolare la percentuale relativa di ciascun trigliceride applicando la formula:

I risultati devono essere espressi con almeno due cifre decimali.

Vedere le note 1, 2, 3 e 4.

4.5.   Calcolo della composizione dei triacilgliceroli (% di moli) a partire dai dati relativi alla composizione in acidi grassi (% dell’area)

4.5.1.   Determinazione della composizione in acidi grassi

La composizione in acidi grassi è determinata conformemente alla norma ISO 5508, mediante una colonna capillare. La preparazione degli esteri metilici è eseguita conformemente al metodo COI/T.20/Doc. n. 24.

4.5.2.   Acidi grassi considerati per il calcolo

I gliceridi sono raggruppati secondo i loro numeri di carbonio equivalente (ECN), tenendo conto delle equivalenze fra ECN e acidi grassi riportate qui di seguito. Sono stati presi in considerazione soltanto gli acidi grassi con 16 e 18 atomi di carbonio, perché sono i soli ad avere importanza per l’olio di oliva. Gli acidi grassi devono essere riproporzionati al 100 %.

Acidi grassi (FA)	Abbreviazione	Peso molecolare (PM)	ECN
Acido palmitico	P	256,4	16
Acido palmitoleico	Po	254,4	14
Acido stearico	S	284,5	18
Acido oleico	O	282,5	16
Acido linoleico	L	280,4	14
Acido linolenico	Ln	278,4	12

4.5.3.   Trasformazione in moli della % dell’area per tutti gli acidi grassi (1)

4.5.4.   Riproporzionamento degli acidi grassi al 100 % (2)

Il risultato esprime la percentuale di ciascun acido grasso in moli % sulla posizione complessiva (1, 2, 3) dei TAG.

Si calcola quindi la somma degli acidi grassi saturi P e S (SFA) e degli acidi grassi insaturi Po, O, L e Ln (UFA) (3):

4.5.5.   Calcolo della composizione degli acidi grassi nelle posizioni 2, e 1, 3 dei TAG:

Gli acidi grassi sono distribuiti in tre gruppi, nel modo seguente: uno per la posizione 2 e due identici per le posizioni 1 e 3, con coefficienti diversi per gli acidi saturi (P e S) e gli acidi insaturi (Po, O, L e Ln).

4.5.5.1.   Acidi grassi saturi nella posizione 2 [P(2) e S(2)] (4)

4.5.5.2.   Acidi grassi insaturi nella posizione 2 [Po(2), O(2), L(2) e Ln(2)] (5):

4.5.5.3.   Acidi grassi nelle posizioni 1e 3 [P(1,3), S(1,3), Po(1,3), O(1,3), L(1,3) e Ln(1,3)] (6):

4.5.6.   Calcolo dei triacilgliceroli

4.5.6.1.   TAG con un solo acido grasso (AAA, qui LLL, PoPoPo) (7)

4.5.6.2.   TAG con due acidi grassi (AAB, qui PoPoL, PoLL) (8)

4.5.6.3.   TAG con tre diversi acidi grassi (ABC, qui OLLn, PLLn, PoOLn, PPoLn) (9)

4.5.6.4.   Triacilgliceroli con ECN 42

I triagliceroli ECN 42 sono calcolati secondo le equazioni 7, 8 e 9 e sono espressi nell’ordine previsto di eluizione in HPLC (normalmente soltanto tre picchi).

LLL

PoLL e isomero di posizione LPoL

OLLn e isomeri di posizione OLnL e LnOL

PoPoL e isomero di posizione PoLPo

PoOLn e isomeri di posizione OPoLn e OLnPo

PLLn e isomeri di posizione LLnP e LnPL

PoPoPo

SLnLn e isomero di posizione LnSLn

PPoLn e isomeri di posizione PLnPo e PoPLn

I triacilgliceroli ECN 42 sono espressi dalla somma dei nove triacilgliceroli, compresi i loro isomeri di posizione. I risultati devono essere espressi con almeno due cifre decimali.

5.   VALUTAZIONE DEI RISULTATI

Si confrontano il contenuto teorico calcolato e il contenuto determinato mediante HPLC. Se la differenza nel valore assoluto tra i dati HPLC e i dati teorici è superiore ai valori riportati nella norma per la pertinente categoria di olio, il campione contiene olio di semi.

I risultati vanno espressi con due cifre decimali.

6.   ESEMPIO (I NUMERI SI RIFERISCONO ALLE SEZIONI NEL TESTO DEL METODO)

— 4.5.1.   Calcolo della % di moli degli acidi grassi a partire dai dati della GLC (% normalizzata dell’area)

Per la composizione in acidi grassi si ottengono mediante GLC i dati seguenti:

FA	P	S	Po	O	L	Ln
PM	256,4	284,5	254,4	282,5	280,4	278,4
Area %	10,0	3,0	1,0	75,0	10,0	1,0

— 4.5.3   Conversione, in moli, della % dell’area per tutti gli acidi grassi (cfr. formula (1)]

moli P	=
moli S	=
moli Po	=
moli O	=
moli L	=
moli Ln	=
Somma	=	0,35821 moli TAG

— 4.5.4   Normalizzazione al 100 % delle moli di acidi grassi (cfr. formula (2)]

moli % P(1,2,3)	=
moli % S(1,2,3)	=
moli % Po(1,2,3)	=
moli % O(1,2,3)	=
moli % L(1,2,3)	=
moli % Ln(1,2,3)	=
Totale moli %	=	100 %

Somma degli acidi grassi saturi e insaturi nella posizione 1,2,3- dei TAG (cfr. formula (3)]:

— 4.5.5   Calcolo della composizione di acidi grassi nelle posizioni 2 e 1, 3 dei TAG

— 4.5.5.1   Acidi grassi saturi nella posizione 2 [P(2) e S(2)] (cfr. formula (4)]

— 4.5.5.2   Acidi grassi insaturi nella posizione 2 [Po(1,3), O(1,3), L(1,3) e Ln(1,3)] (cfr. formula (5)]

— 4.5.5.3   Acidi grassi nelle posizioni 1, 3 [P(1,3), S(1,3), Po(1,3), O(1,3), L(1,3) e Ln(1,3)] (cfr. formula (6)]

— 4.5.6.   Calcolo dei triacilgliceroli

Dalla composizione calcolata di acidi grassi nelle posizioni 2 e 1e 3:

AG in	posiz.1,3-	posiz. 2-
P	16,004 %	0,653 %
S	4,325 %	0,177 %
Po	1,015 %	1,262 %
O	68,526 %	85,296 %
L	9,204 %	11,457 %
Ln	0,927 %	1,153 %
Somma	100,0 %	100,0 %

si calcolano i seguenti triacilgliceroli:

LLL

PoPoPo

PoLL con 1 isomero di posizione

SLnLn con 1 isomero di posizione

PoPoL con 1 isomero di posizione

PPoLn con 2 isomeri di posizione

OLLn con 2 isomeri di posizione

PLLn con 2 isomeri di posizione

PoOLn con 2 isomeri di posizione

— 4.5.6.1.   TAG con un unico acido grasso (LLL, PoPoPo) (cfr. formula (7)]

— 4.5.6.2   TAG con due acidi grassi (PoLL, SLnLn, PoPoL) (cfr. formula (8)]

0,03210 moli PoLL

0,00094 moli SLnLn

0,00354 moli PoPoL

— 4.5.6.3   TAG con tre diversi acidi grassi (PoPLn, OLLn, PLLn, PoOLn) Cfr. formula (9)

0,00761 moli PPoLn

0,43655 moli OLLn

0,06907 moli PLLn

0,04812 di moli PoOLn

ECN42 = 0,69512 % di moli TAG

Nota 1: L’ordine di eluizione può essere determinato calcolando i numeri di carbonio equivalente, spesso definiti dalla relazione , dove CN è il numero di carbonio ed n è il numero di doppi legami; esso può essere calcolato precisamente tenendo conto dell’origine del doppio legame. Se no, nl e nln sono i numeri di doppi legami attribuiti rispettivamente agli acidi oleico, linoleico e linolenico, il numero di carbonio equivalente può essere calcolato mediante la relazione data dalla formula:

dove i coefficienti do, dl e dln possono essere calcolati mediante i trigliceridi di riferimento. Nelle condizioni specificate nel presente metodo, la relazione ottenuta sarà vicina a:

Nota 2: Con diversi trigliceridi di riferimento, è anche possibile calcolare la risoluzione rispetto alla trioleina:

trioleina

impiegando il tempo corretto di ritenzione RT

Il grafico di log α in funzione di f (numero di doppi legami) consente di determinare i valori di ritenzione per tutti i trigliceridi degli acidi grassi contenuti nei trigliceridi di riferimento - cfr. figura 1.

Nota 3: l’efficienza della colonna dovrebbe permettere una chiara separazione del picco della trilinoleina dai picchi dei trigliceridi con un RT adiacente. L’eluizione viene effettuata fino al picco corrispondente a ECN 52.

Nota 4: una misura corretta delle aree di tutti i picchi rilevanti per la presente determinazione è garantita quando l’altezza del secondo picco della serie ECN 50 è pari al 50 % del massimo della scala di registrazione.

Figura 1

Grafico di log α in funzione di f (numero di doppi legami)

Figura 2

Olio di oliva a basso tenore in acido linoleico

a

b

Figura 3

Olio di oliva ad alto tenore in acido linoleico

a

b

«ALLEGATO XXI

Risultati dei controlli di conformità eseguiti sugli oli di oliva di cui al paragrafo 2 dell’articolo 8

Etichettatura

Parametri chimici

Caratteristiche organolettiche (4)

Conclusione finale

Campione

Categoria

Paese di origine

Luogo di ispezione (1)

Denominazione legale

Denominazione di origine

Condizioni di conservazione

Informazione erronea

Leggibilità

C/NC (3)

Parametri fuori limite SÌ/NO

Se sì, indicare quale/quali (2)

C/NC (3)

Mediana dei difetti

MEDIA-na del fruttato

C/NC (3)

Azione richiesta

Sanzione