ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ

ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΑΠΑΙΤΗΣΕΙΣ

ΜΕΡΟΣ Α

ΠΛΑΙΣΙΟ ΔΕΙΓΜΑΤΟΛΗΨΙΑΣ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗ

1.   Προέλευση των απομονωθέντων στελεχών

Τα κράτη μέλη συλλέγουν αντιπροσωπευτικά απομονωθέντα στελέχη για την παρακολούθηση της μικροβιακής αντοχής από τουλάχιστον καθένα από τους ακόλουθους ζωικούς πληθυσμούς και κατηγορίες τροφίμων:

α)

απομονωθέντα στελέχη Salmonella spp. από: i) κάθε πληθυσμό ορνίθων ωοπαραγωγής, κοτόπουλων κρεατοπαραγωγής και γαλόπουλων πάχυνσης που αποτέλεσαν αντικείμενο δειγματοληψίας στο πλαίσιο των εθνικών προγραμμάτων ελέγχου, τα οποία καταρτίστηκαν σύμφωνα με το άρθρο 5 παράγραφος 1 του κανονισμού (ΕΚ) αριθ. 2160/2003· ii) σφάγια κοτόπουλων κρεατοπαραγωγής και γαλόπουλων πάχυνσης που αποτέλεσαν αντικείμενο δειγματοληψίας για τη δοκιμή και την επαλήθευση της συμμόρφωσης, σύμφωνα με το σημείο 2.1.5 του κεφαλαίου 2 του παραρτήματος I του κανονισμού (ΕΚ) αριθ. 2073/2005· iii) σφάγια χοίρων πάχυνσης που αποτέλεσαν αντικείμενο δειγματοληψίας για τη δοκιμή και την επαλήθευση της συμμόρφωσης σύμφωνα με το σημείο 2.1.4 του κεφαλαίου 2 του παραρτήματος I του κανονισμού (ΕΚ) αριθ. 2073/2005· iv) σφάγια βοοειδών ηλικίας κάτω του ενός έτους όπου η παραγωγή κρέατος των βοοειδών αυτών στο κράτος μέλος είναι μεγαλύτερη από 10 000 τόνους σφαγίων ανά έτος, που αποτέλεσαν αντικείμενο δειγματοληψίας για τη δοκιμή και την επαλήθευση της συμμόρφωσης σύμφωνα με το σημείο 2.1.3 του κεφαλαίου 2 του παραρτήματος I του κανονισμού (ΕΚ) αριθ. 2073/2005.

β)	Απομονωθέντα στελέχη C. jejuni από ορθικά επιχρίσματα που συγκεντρώθηκαν κατά τη σφαγή από κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής και από γαλοπούλες πάχυνσης, όπου η παραγωγή κρέατος γαλοπούλας στο κράτος μέλος είναι μεγαλύτερη από 10 000 τόνους σφαγίων ανά έτος.

γ)

Απομονωθέντα στελέχη συμβιωτικού βακτηρίου-δείκτη E. coli από: i) ορθικά επιχρίσματα που συγκεντρώθηκαν κατά τη σφαγή από κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής και από γαλοπούλες πάχυνσης, όπου η παραγωγή κρέατος γαλοπούλας σε ένα κράτος μέλος είναι μεγαλύτερη από 10 000 τόνους σφαγίων ανά έτος· ii) ορθικά επιχρίσματα συγκεντρώθηκαν κατά τη σφαγή από χοίρους πάχυνσης και από βοοειδή, όπου η παραγωγή κρέατος των βοοειδών αυτών στο κράτος μέλος είναι μεγαλύτερη από 10 000 τόνους σφαγίων ανά έτος.

δ)

E. coli που παράγει ESBL ή AmpC ή καρβαπενεμάσες από: i) ορθικά επιχρίσματα που συγκεντρώθηκαν κατά τη σφαγή από κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής και από γαλοπούλες πάχυνσης, όπου η παραγωγή κρέατος γαλοπούλας σε ένα κράτος μέλος είναι μεγαλύτερη από 10 000 τόνους σφαγίων ανά έτος· ii) ορθικά επιχρίσματα συγκεντρώθηκαν κατά τη σφαγή από χοίρους πάχυνσης και από βοοειδή, όπου η παραγωγή κρέατος των βοοειδών αυτών στο κράτος μέλος είναι μεγαλύτερη από 10 000 τόνους σφαγίων ανά έτος· iii) δείγματα νωπού κρέατος κοτόπουλων κρεατοπαραγωγής, χοιρινού κρέατος και βοδινού κρέατος που συλλέγονται σε επίπεδο λιανικής πώλησης.

ε)

Όταν ένα κράτος μέλος αποφασίζει να πραγματοποιήσει δοκιμές για το C. coli σύμφωνα με το άρθρο 2 παράγραφος 3 στοιχείο α), συλλέγει απομονωθέντα στελέχη από: i) ορθικά επιχρίσματα που συγκεντρώθηκαν κατά τη σφαγή από κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής· ii) ορθικά επιχρίσματα που συγκεντρώθηκαν κατά τη σφαγή από χοίρους πάχυνσης.

στ)

Όταν ένα κράτος μέλος αποφασίζει να πραγματοποιήσει δοκιμές για το E. faecalis και το E. faecium σύμφωνα με το άρθρο 2 παράγραφος 3 στοιχείο β), συλλέγει απομονωθέντα στελέχη από: i) ορθικά επιχρίσματα που συγκεντρώθηκαν κατά τη σφαγή από κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής και από γαλοπούλες πάχυνσης, όπου η παραγωγή κρέατος γαλοπούλας σε ένα κράτος μέλος είναι μεγαλύτερη από 10 000 τόνους σφαγίων ανά έτος· ii) ορθικά επιχρίσματα συγκεντρώθηκαν κατά τη σφαγή από χοίρους πάχυνσης και από βοοειδή, όπου η παραγωγή κρέατος των βοοειδών αυτών στο κράτος μέλος είναι μεγαλύτερη από 10 000 τόνους σφαγίων ανά έτος.

Τα απομονωθέντα στελέχη που συνελέγησαν στο κράτος μέλος με προέλευση άλλη από εκείνη που αναφέρεται στα στοιχεία α) έως στ), είναι δυνατόν να υποβληθούν σε δοκιμή για μικροβιακή αντοχή από την αρμόδια αρχή σε εθελοντική βάση και διατηρούνται χωριστά κατά την υποβολή έκθεσης σύμφωνα με το σημείο 2 του μέρους Β του παραρτήματος. Ωστόσο, κατά τη διενέργεια των εν λόγω δοκιμών για τη μικροβιακή αντοχή, ισχύουν οι ειδικές τεχνικές απαιτήσεις των σημείων 3, 4 και 5.

2.   Συχνότητα, μέγεθος και σχέδιο δειγματοληψίας

2.1.   Συχνότητα δειγματοληψίας

Τα κράτη μέλη διεξάγουν κάθε δύο χρόνια δειγματοληψία, συλλογή και έλεγχο ευαισθησίας στα αντιμικροβιακά όπως προβλέπεται στα άρθρα 2 έως 4 για κάθε συνδυασμό ειδών βακτηρίων και κάθε κατηγορία δείγματος ζωικών πληθυσμών ή κατηγοριών τροφίμων που απαριθμούνται στο σημείο 1 του παρόντος μέρους, καθώς και ειδική παρακολούθηση των Salmonella spp. και E. coli που παράγουν ESBL ή AmpC ή καρβαπενεμάσες σύμφωνα με το σημείο 4 του παρόντος μέρους σύμφωνα με το ακόλουθο εκ περιτροπής σύστημα:

α)

Κατά τα έτη 2014, 2016, 2018 και 2020 σε όρνιθες ωοπαραγωγής, κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής και το νωπό κρέας τους, καθώς και σε γαλοπούλες πάχυνσης. Ωστόσο, το 2014 δεν είναι υποχρεωτική η ειδική παρακολούθηση του συμβιωτικού βακτηρίου-δείκτη E. coli που παράγει ESBL ή AmpC ή καρβαπενεμάσες σύμφωνα με το σημείο 4.1·

β)	Κατά τα έτη 2015, 2017 και 2019 σε χοίρους, βοοειδή ηλικίας κάτω του ενός έτους, στο χοιρινό κρέας και το βοδινό κρέας.

2.2.   Αριθμός δειγμάτων

Τα κράτη μέλη υποβάλλουν 170 απομονωθέντα στελέχη σε έλεγχο ευαισθησίας στα αντιμικροβιακά για κάθε συνδυασμό ειδών βακτηρίων και τύπων δειγμάτων ζωικού πληθυσμού ή κατηγορία τροφίμων που απαριθμούνται στο σημείο 1 στοιχεία α), β), γ), ε) και στ). Εντούτοις, σε κράτη μέλη με παραγωγή μικρότερη από 100 000 τόνους κρέατος πουλερικών που σφάζονται ετησίως και μικρότερη από 100 000 τόνους κρέατος χοίρων που σφάζονται ετησίως (1), υποβάλλονται σε δοκιμή 85 απομονωθέντα στελέχη αντί 170 απομονωθέντα στελέχη για κάθε αντίστοιχο συγκεκριμένο συνδυασμό.

Σε εκείνα τα κράτη μέλη όπου, σε οποιοδήποτε έτος, διατίθεται ο υψηλότερος αριθμός απομονωθέντων στελεχών για ορισμένους από τους συνδυασμούς ειδών βακτηρίων και κατηγορίας δειγμάτων ζωικού πληθυσμού ή κατηγορίας τροφίμων που απαριθμούνται στο σημείο 1 στοιχεία α), β), γ), ε) και στ), στον έλεγχο ευαισθησίας στα αντιμικροβιακά περιλαμβάνονται όλα τα απομονωθέντα στελέχη ή αντιπροσωπευτική τυχαία επιλογή ίση με ή μεγαλύτερη από τον αριθμό των απομονωθέντων στελεχών που απαιτούνται σύμφωνα με την πρώτη παράγραφο.

Στα κράτη μέλη όπου λόγω του χαμηλού βακτηριακού επιπολασμού ή του χαμηλού αριθμού των επιδημιολογικών μονάδων σε οποιοδήποτε έτος δεν μπορεί να επιτευχθεί ο αριθμός των απομονωθέντων στελεχών που απαιτούνται σύμφωνα με την πρώτη παράγραφο για ορισμένους από τους συνδυασμούς ειδών βακτηρίων και κατηγορίας δειγμάτων ζωικού πληθυσμού ή κατηγορίας τροφίμων που απαριθμούνται στο σημείο 1 στοιχεία α), β), γ), ε) και στ), περιλαμβάνονται στον έλεγχο ευαισθησίας στα αντιμικροβιακά όλα τα διαθέσιμα απομονωθέντα στελέχη κατά το πέρας της περιόδου παρακολούθησης.

Για τη συγκεκριμένη παρακολούθηση του συμβιωτικού βακτηρίου-δείκτη E. coli που παράγει ESBL ή AmpC ή καρβαπενεμάσες που ορίζεται στο σημείο 4.1, τα κράτη μέλη αναλύουν 300 δείγματα κάθε ζωικού πληθυσμού και κατηγορίας τροφίμου που αναφέρονται στο σημείο 1 στοιχείο δ). Ωστόσο, σε κράτη μέλη με παραγωγή μικρότερη των 100 000 τόνων κρέατος πουλερικών που σφάζονται ετησίως, μικρότερη από 100 000 τόνους κρέατος χοίρων που σφάζονται ετησίως και μικρότερη από 50 000 τόνους κρέατος βοοειδών που σφάζονται ετησίως (2), υποβάλλονται σε δοκιμή 150 δείγματα αντί 300 δειγμάτων για κάθε αντίστοιχο συγκεκριμένο συνδυασμό.

2.3.   Σχεδιασμός της δειγματοληψίας

Τα απομονωθέντα στελέχη που υποβάλλονται σε έλεγχο ευαισθησίας στα αντιμικροβιακά όπως προβλέπεται στο άρθρο 2 πρέπει να προέρχονται από τα προγράμματα παρακολούθησης με τυχαιοποιημένη δειγματοληψία. Τα απομονωθέντα στελέχη βακτηρίων που αναφέρονται στο άρθρο 2 πρέπει να προέρχονται από τυχαία επιλεγμένες επιδημιολογικές μονάδες ή να επιλέγονται τυχαία εντός των σφαγείων. Όταν λαμβάνονται δείγματα από νοσούντα ζώα, το αποτέλεσμα του ελέγχου ευαισθησίας στα αντιμικροβιακά πρέπει να αναφέρεται χωριστά στην έκθεση σύμφωνα με το σημείο 2 του μέρους Β.

Η αρμόδια αρχή διασφαλίζει την τυχαιοποίηση του προγράμματος δειγματοληψίας και την ορθή εφαρμογή του.

Στην περίπτωση δειγματοληψίας σε σφαγεία όπως προβλέπεται στο σημείο 1 του μέρους A, η δειγματοληψία πρέπει να διενεργείται σε σφαγεία που επεξεργάζονται τουλάχιστον το 60 % του συγκεκριμένου εγχώριου ζωικού πληθυσμού στο κράτος μέλος, με αρχή τα σφαγεία με τη μεγαλύτερη δυναμικότητα.

Δεν περιλαμβάνεται στην παρακολούθηση πάνω από ένα απομονωθέν στέλεχος ανά είδος βακτηρίων από την ίδια επιδημιολογική μονάδα ανά έτος σύμφωνα με την παρούσα απόφαση. Η επιδημιολογική μονάδα για ωοτόκους όρνιθες, κοτόπουλα πάχυνσης και γαλοπούλες πάχυνσης είναι το σμήνος. Για τους χοίρους πάχυνσης και τα βοοειδή ηλικίας κάτω του ενός έτους, η επιδημιολογική μονάδα είναι η εκμετάλλευση.

2.3.1.   Αντιπροσωπευτική δειγματοληψία δειγμάτων κατά τη σφαγή

Η τυχαία δειγματοληψία στρωματοποιείται ανά σφαγείο με κατανομή του αριθμού δειγμάτων από τα εγχωρίως παραγόμενα ζώα που συλλέγονται ανά σφαγείο σε συνάρτηση με την ετήσια δυναμικότητα του σφαγείου.

Τα δείγματα που συλλέγονται κατά τη σφαγή πρέπει να είναι ομοιόμορφα κατανεμημένα για κάθε μήνα του έτους, ώστε να υπάρχει η δυνατότητα να καλύπτονται οι διαφορετικές εποχές.

Συλλέγεται μόνο ένα αντιπροσωπευτικό ορθικό επίχρισμα ανά επιδημιολογική μονάδα, προερχόμενο είτε από ένα μοναδικό σφάγιο είτε από έναν αριθμό σφαγίων, ώστε να λαμβάνεται υπόψη η συρροή. Διαφορετικά, η δειγματοληψία βασίζεται σε τυχαία επιλογή όσον αφορά τις ημέρες δειγματοληψίας κάθε μήνα και τις παρτίδες που θα αποτελέσουν αντικείμενο δειγματοληψίας σε μία επιλεγμένη ημέρα δειγματοληψίας.

Ο αριθμός των βιολογικών δειγμάτων που πρέπει να συλλέγονται σύμφωνα με το σημείο 1 στοιχεία α), β), γ), ε) και στ) του μέρους Α καθορίζεται για να επιτευχθεί ο απαιτούμενος αριθμός απομονωθέντων στελεχών λαμβανομένου υπόψη του επιπολασμού των ειδών βακτηρίων υπό παρακολούθηση.

2.3.2.   Συλλογή αντιπροσωπευτικών απομονωθέντων στελεχών Salmonella spp. που συλλέγονται στο πλαίσιο των εθνικών προγραμμάτων ελέγχου της Salmonella spp. στους σχετικούς ζωικούς πληθυσμούς και στο πλαίσιο του κανονισμού (ΕΚ) αριθ. 2073/2005

Έλεγχος της ευαισθησίας στα αντιμικροβιακά πρέπει να εκτελείται για ένα μόνον απομονωθέν στέλεχος ανά ορότυπο Salmonella από την ίδια επιδημιολογική μονάδα ανά έτος.

Όταν ο αριθμός των απομονωθέντων στελεχών Salmonella που διατίθενται ετησίως ανά ζωικό πληθυσμό στο κράτος μέλος είναι υψηλότερος από τον αριθμό των απομονωθέντων στελεχών που απαιτούνται σύμφωνα με το σημείο 2.2, διενεργείται τυχαία δειγματοληψία τουλάχιστον 170 ή 85 απομονωθέντων στελεχών από τη συλλογή των ετησίως διαθέσιμων απομονωθέντων στελεχών στο κράτος μέλος, έτσι ώστε να εξασφαλίζονται η γεωγραφική αντιπροσωπευτικότητα και η ομοιόμορφη κατανομή των ημερομηνιών δειγματοληψίας καθ’ όλη τη διάρκεια του έτους. Αντίθετα, στην περίπτωση χαμηλού επιπολασμού, υποβάλλονται σε έλεγχο ευαισθησίας όλα τα διαθέσιμα απομονωθέντα στελέχη της Salmonella.

2.3.3.   Συλλογή δειγμάτων κατά τη λιανική πώληση

Τα κράτη μέλη συλλέγουν κατά τη λιανική πώληση τυχαία δείγματα νωπού κρέατος κοτόπουλων κρεατοπαραγωγής, χοιρινού κρέατος και κρέατος βοοειδών χωρίς προεπιλογή δειγμάτων με βάση την προέλευση των τροφίμων.

3.   Αντιμικροβιακά για έλεγχο ευαισθησίας, επιδημιολογικές τιμές αποκοπής και εύρος συγκεντρώσεων που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο ευαισθησίας στα αντιμικροβιακά των απομονωθέντων στελεχών

Τα κράτη μέλη υποβάλλουν σε έλεγχο τα αντιμικροβιακά και ερμηνεύουν τα αποτελέσματα με τη χρήση των επιδημιολογικών τιμών αποκοπής και του εύρους συγκεντρώσεων που ορίζονται στους πίνακες 1, 2 και 3, προκειμένου να προσδιοριστεί η ευαισθησία των Salmonella spp., C. coli, C. jejuni και των συμβιωτικών βακτηρίων-δεικτών E. coli, E. faecalis και E. faecium.

Οι μέθοδοι αραιώσεων πρέπει να εκτελούνται σύμφωνα με τις μεθόδους που περιγράφονται από την Ευρωπαϊκή Επιτροπή Ελέγχου Ευαισθησίας των Μικροοργανισμών στα Αντιμικροβιακά (EUCAST) και του Ινστιτούτου Κλινικών και Εργαστηριακών Προτύπων (CLSI), αποδεκτή ως η κατεξοχήν διεθνής μέθοδος αναφοράς (πρότυπο ISO 20776-1:2006).

Πίνακας 1

Ομάδα αντιμικροβιακών ουσιών που πρέπει να περιληφθούν στην παρακολούθηση της μικροβιακής αντοχής, κατώτατα όρια αντοχής της EUCAST και εύρος συγκεντρώσεων προς δοκιμή στη Salmonella spp. και το συμβιωτικό βακτήριο-δείκτη E. coli (πρώτη ομάδα)

Αντιμικροβιακό	Είδος	Ερμηνευτικά κατώτατα όρια μικροβιακής αντοχής (mg/L)		Εύρος συγκεντρώσεων (mg/L) (Αριθ. βοθρίων εντός παρενθέσεων)
		ECOFF (3)	Κλινικό όριο ευαισθησίας (4)
Αμπικιλλίνη	Salmonella	> 8	> 8	1 - 64 (7)
	E. coli	> 8	> 8
Κεφοταξίμη	Salmonella	> 0,5	> 2	0,25 - 4 (5)
	E. coli	> 0,25	> 2
Κεφταζιδίμη	Salmonella	> 2	> 4	0,5 - 8 (5)
	E. coli	> 0,5	> 4
Μεροπενέμη	Salmonella	> 0,125	> 8	0,03 - 16 (10)
	E. coli	> 0,125	> 8
Ναλιδιξικό οξύ	Salmonella	> 16	ΔΔ	4 - 128 (6)
	E. coli	> 16	ΔΔ
Κιπροφλοξακίνη	Salmonella	> 0,064	> 1	0,015 - 8 (10)
	E. coli	> 0,064	> 1
Τετρακυκλίνη	Salmonella	> 8	ΔΔ	2 - 64 (6)
	E. coli	> 8	ΔΔ
Κολιστίνη	Salmonella	> 2	> 2	1 - 16 (5)
	E. coli	> 2	> 2
Γενταμυκίνη	Salmonella	> 2	> 4	0,5 - 32 (7)
	E. coli	> 2	> 4
Τριμεθοπρίμη	Salmonella	> 2	> 4	0,25 - 32 (8)
	E. coli	> 2	> 4
Σουλφαμεθοξαζόλιο	Salmonella	ΔΔ	ΔΔ	8 - 1 024 (8)
	E. coli	> 64	ΔΔ
Χλωραμφαινικόλη	Salmonella	> 16	> 8	8 - 128 (5)
	E. coli	> 16	> 8
Αζιθρομυκίνη	Σαλμονέλα	ΔΔ	ΔΔ	2 - 64 (6)
	E. coli	ΔΔ	ΔΔ
Τιγεκυκλίνη	Salmonella	> 1 (5)	> 2( (5))	0,25 - 8 (6)
	E. coli	> 1	> 2
ΔΔ: Δεν διατίθεται.

Πίνακας 2

Ομάδα αντιμικροβιακών που πρέπει να περιληφθούν στην παρακολούθηση της μικροβιακής αντοχής, ερμηνευτικά κατώτατα όρια αντοχής της EUCAST και εύρος συγκεντρώσεων προς δοκιμή στα C. jejuni και C. coli

Αντιμικροβιακό	Είδος	Ερμηνευτικά κατώτατα όρια μικροβιακής αντοχής (mg/L)		Εύρος συγκεντρώσεων (mg/L) (Αριθ. βοθρίων εντός παρενθέσεων)
		ECOFF (6)	Κλινικό όριο ευαισθησίας (7)
Ερυθρομυκίνη	C. jejuni	> 4	> 4	1 - 128 (8)
	C. coli	> 8	> 8
Κιπροφλοξακίνη	C. jejuni	> 0,5	> 0,5	0,12 - 16 (8)
	C. coli	> 0,5	> 0,5
Τετρακυκλίνη	C. jejuni	> 1	> 2	0,5 - 64 (8)
	C. coli	> 2	> 2
Γενταμυκίνη	C. jejuni	> 2	ΔΔ	0,12 - 16 (8)
	C. coli	> 2	ΔΔ
Ναλιδιξικό οξύ	C. jejuni	> 16	ΔΔ	1 - 64 (7)
	C. coli	> 16	ΔΔ
Στρεπτομυκίνη (8)	C. jejuni	> 4	ΔΔ	0,25 - 16 (7)
	C. coli	> 4	ΔΔ
ΔΔ: Δεν διατίθεται.

Πίνακας 3

Ομάδα αντιμικροβιακών που πρέπει να περιληφθούν στην παρακολούθηση της μικροβιακής αντοχής, κατώτατα όρια της EUCAST και εύρος συγκεντρώσεων προς δοκιμή στα E. faecalis και E. faecium

Αντιμικροβιακό	Είδος	Ερμηνευτικά κατώτατα όρια μικροβιακής αντοχής (mg/L)		Εύρος συγκεντρώσεων (mg/L) (Αριθ. βοθρίων εντός παρενθέσεων)
		ECOFF (9)	Κλινικό όριο ευαισθησίας (10)
Γενταμυκίνη	E. faecalis	> 32	ΔΔ	8 - 1 024 (8)
	E. faecium	> 32	ΔΔ
Χλωραμφαινικόλη	E. faecalis	> 32	ΔΔ	4 - 128 (6)
	E. faecium	> 32	ΔΔ
Αμπικιλλίνη	E. faecalis	> 4	> 8	0,5 - 64 (8)
	E. faecium	> 4	> 8
Βανκομυκίνη	E. faecalis	> 4	> 4	1 - 128 (8)
	E. faecium	> 4	> 4
Τεϊκοπλανίνη	E. faecalis	> 2	> 2	0,5 - 64 (8)
	E. faecium	> 2	> 2
Ερυθρομυκίνη	E. faecalis	> 4	ΔΔ	1 - 128 (8)
	E. faecium	> 4	ΔΔ
Κινουπριστίνη/ Δαλφοπριστίνη	E. faecalis	ΔΔ	ΔΔ	0,5 - 64 (8)
	E. faecium	> 1	> 4
Τετρακυκλίνη	E. faecalis	> 4	ΔΔ	1 - 128 (8)
	E. faecium	> 4	ΔΔ
Τιγεκυκλίνη	E. faecalis	> 0,25	> 0,5	0,03 - 4 (8)
	E. faecium	> 0,25	> 0,5
Λινεζολίδη	E. faecalis	> 4	> 4	0,5 - 64 (8)
	E. faecium	> 4	> 4
Δαπτομυκίμη	E. faecalis	> 4	ΔΔ	0,25 - 32 (8)
	E. faecium	> 4	ΔΔ
Κιπροφλοξακίνη	E. faecalis	> 4	ΔΔ	0,12 - 16 (8)
	E. faecium	> 4	ΔΔ
ΔΔ: Δεν διατίθεται.

4.   Συγκεκριμένη παρακολούθηση των Salmonella και E. coli που παράγουν ESBL ή AmpC ή καρβαπενεμάσες

4.1.   Μέθοδος ανίχνευσης E. coli που παράγει ESBL ή AmpC ή καρβαπενεμάσες στα κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής, τις γαλοπούλες πάχυνσης, τους χοίρους πάχυνσης, τα βοοειδή ηλικίας κάτω του ενός έτους και το νωπό κρέας κοτόπουλων κρεατοπαραγωγής, το χοιρινό κρέας και το βοδινό κρέας

Για να εκτιμηθεί το ποσοστό των δειγμάτων που περιέχουν E. coli που παράγει ESBL ή AmpC ή καρβαπενεμάσες μεταξύ των ορθικών επιχρισμάτων που έχουν συλλεγεί από κοτόπουλα κρεατοπαραγωγής, γαλοπούλες πάχυνσης, χοίρους πάχυνσης, βοοειδή ηλικίας κάτω του ενός έτους, νωπό κρέας κοτόπουλων κρεατοπαραγωγής, χοιρινό κρέας και βοδινό κρέας σύμφωνα με την παράγραφο 1 στοιχείο δ) του παρόντος μέρους, εφαρμόζεται η ακόλουθη μέθοδος.

Για την ανίχνευση E. coli που παράγει ESBL ή AmpC η μέθοδος αρχίζει με στάδιο προεμπλουτισμού ακολουθούμενο από εμβολιασμό σε άγαρ McConkey που περιέχει τρίτης γενιάς κεφαλοσπορίνη σε συγκέντρωση εκλογής σύμφωνα με την πλέον πρόσφατη έκδοση του λεπτομερούς πρωτοκόλλου τυποποίησης του Εργαστηρίου Αναφοράς της Ευρωπαϊκής Ένωσης για τη Μικροβιακή Αντοχή (11). Το μικροβιακό είδος E. coli πρέπει να ταυτοποιείται με κατάλληλη μέθοδο.

Το κράτος μέλος μπορεί να αποφασίσει, βάσει των επιδημιολογικών συνθηκών, τη διενέργεια παράλληλης δοκιμής σε πρόσθετη εκλεκτική πλάκα που αναστέλλει την ανάπτυξη του E. coli που παράγει AmpC, ώστε να διευκολυνθεί η εξειδικευμένη ανίχνευση E. coli που παράγει ESBL. Όταν χρησιμοποιείται αυτή η δυνατότητα, τα αποτελέσματα της πρόσθετης εκλεκτικής πλάκας που αναστέλλει την ανάπτυξη E. coli που παράγει AmpC αναφέρονται χωριστά στην έκθεση που υποβάλλεται σύμφωνα με το σημείο 2 του μέρους Β.

Τα κράτη μέλη μπορούν να αποφασίζουν να εκτελέσουν ταυτοποίηση μικροοργανισμών που παράγουν καρβαπενεμάσες με τη χρήση εκλεκτικού προεμπλουτισμού και, στη συνέχεια, καλλιέργεια σε πλάκες με εκλεκτικό θρεπτικό μέσο που περιέχει καρβαπενέμη, σύμφωνα με την πιο πρόσφατη έκδοση του λεπτομερούς πρωτοκόλλου τυποποίησης του Εργαστηρίου Αναφοράς της Ευρωπαϊκής Ένωσης για τη Μικροβιακή Αντοχή (12).

Ένα πιθανό απομονωθέν στέλεχος E. coli που παράγει ESBL ή AmpC ή καρβαπενεμάσες το οποίο λαμβάνεται από κάθε θετικό ορθικό επίχρισμα και δείγμα κρέατος ελέγχεται για την πρώτη ομάδα αντιμικροβιακών ουσιών σύμφωνα με τον πίνακα 1 και υποβάλλεται περαιτέρω σε εκτεταμένο έλεγχο ευαισθησίας όπως ορίζεται στο σημείο 4.2 εφόσον είναι ανθεκτικό στη κεφοταξίμη ή την κεφταζιδίμη ή τη μεροπενέμη με βάση τα ερμηνευτικά κριτήρια (επιδημιολογικές τιμές αποκοπής) που απαριθμούνται στον πίνακα 1.

4.2.   Μέθοδος για τον περαιτέρω χαρακτηρισμό και την ταξινόμηση των απομονωθέντων στελεχών Salmonella spp. και E. coli που εμφανίζουν αντοχή σε τρίτης γενιάς κεφαλοσπορίνες ή τη μεροπενέμη

Κάθε πιθανό απομονωθέν στέλεχος E. coli που παράγει ESBL ή AmpC ή καρβαπενεμάσες και ταυτοποιείται με καλλιέργεια σε εκλεκτικό θρεπτικό υλικό όπως περιγράφεται στην ενότητα 4.1, καθώς και όλα τα τυχαίως επιλεγμένα απομονωθέντα στελέχη Salmonella spp. και E. coli τα οποία μετά τον έλεγχο με την πρώτη ομάδα αντιμικροβιακών σύμφωνα με τον πίνακα 1, εμφανίζουν ανθεκτικότητα στην κεφοταξίμη ή την κεφταζιδίμη ή τη μεροπενέμη, εξετάζονται περαιτέρω με μια δεύτερη ομάδα αντιμικροβιακών σύμφωνα με τον πίνακα 4. Η εν λόγω ομάδα περιλαμβάνει έλεγχο της κεφοξιτίνης, της κεφεπίμης, καθώς και έλεγχο της συνέργειας του κλαβουλανικού οξέος με κεφοταξίμη και κεφταζιδίμη για την ανίχνευση παραγωγής ESBL και AmpC. Επιπλέον, η δεύτερη ομάδα περιλαμβάνει επίσης ιμιπενέμη, μεροπενέμη και ερταπενέμη για τη φαινοτυπική επαλήθευση των πιθανών μικροοργανισμών που παράγουν καρβαπενεμάσες.

Πίνακας 4

Ομάδα αντιμικροβιακών, επιδημιολογικές τιμές αποκοπής της EUCAST (ECOFF) και κλινικά όρια ευαισθησίας και συγκεντρώσεων που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο αποκλειστικά απομονωθέντων στελεχών Salmonella spp. και του συμβιωτικού βακτηρίου-δείκτη E. coli με ανθεκτικότητα στην κεφοταξίμη ή την κεφταζιδίμη ή τη μεροπενέμη — (δεύτερη ομάδα)

Αντιμικροβιακό	Είδος	Ερμηνευτικά κατώτατα όρια μικροβιακής αντοχής (mg/L)		Εύρος συγκεντρώσεων (mg/L) (Αριθ. βοθρίων εντός παρενθέσεων)
		ECOFF (13)	Κλινικό όριο ευαισθησίας (14)
Κεφοξιτίνη	Salmonella	> 8	ΔΔ	0,5 - 64 (8)
	E. coli	> 8	ΔΔ
Κεφεπίμη	Salmonella	ΔΔ	ΔΔ	0,06 - 32 (10)
	E. coli	> 0,125	> 4
Κεφοταξίμη + κλαβουλανικό οξύ (15)	Salmonella	ΔΔ (16)	ΔΔ (16)	0,06 - 64 (11)
	E. coli	ΔΔ (16)	ΔΔ (16)
Κεφταζιδίμη + κλαβουλανικό οξύ (15)	Salmonella	ΔΔ (16)	ΔΔ (16)	0,125 - 128 (11)
	E. coli	ΔΔ (16)	ΔΔ (16)
Μεροπενέμη	Salmonella	> 0,125	> 8	0,03 - 16 (10)
	E. coli	> 0,125	> 8
Τεμοκιλλίνη	Salmonella	ΔΔ	ΔΔ	0,5 - 64 (8)
	E. coli	ΔΔ	ΔΔ
Ιμιπενέμη	Salmonella	> 1	> 8	0,12 - 16 (8)
	E. coli	> 0,5	> 8
Ερταπενέμη	Salmonella	> 0,06	> 1	0,015 - 2 (8)
	E. coli	> 0,06	> 1
Κεφοταξίμη	Salmonella	> 0,5	> 2	0,25 - 64 (9)
	E. coli	> 0,25	> 2
Κεφταζιδίμη	Salmonella	> 2	> 4	0,25 - 128 (10)
	E. coli	> 0,5	> 4
ΔΔ: Δεν διατίθεται.

4.3.   Ποσοτική μέθοδος εκτίμησης του ποσοστού E. coli που παράγει ESBL ή AmpC

Τα κράτη μέλη, ιδίως τα κράτη μέλη όπου έχει ανιχνευθεί υψηλός επιπολασμός E. coli που παράγει ESBL ή AmpC με τη μέθοδο ανίχνευσης που περιγράφεται στο σημείο 4.1, μπορούν να χαρακτηρίζουν το ποσοστό E. coli που παράγει ESBL ή AmpC στο σύνολο του πληθυσμού E. coli.

Αυτό θα πρέπει να γίνει με την καταμέτρηση των αποικιών E. coli που παράγουν ESBL ή AmpC και την καταμέτρηση του συνόλου των αποικιών E. coli που υπάρχουν σε ένα δείγμα με τη χρήση των μεθόδων αραιώσεων, η οποία ακολουθείται από καλλιέργεια σε πλάκες με εκλεκτικά και μη εκλεκτικά θρεπτικά μέσα, σύμφωνα με την πιο πρόσφατη έκδοση του λεπτομερούς πρωτοκόλλου του Εργαστηρίου Αναφοράς της Ευρωπαϊκής Ένωσης για τη Μικροβιακή Αντοχή (17).

5.   Ποιοτικός έλεγχος και φύλαξη των απομονωθέντων στελεχών

Τα εργαστήρια που έχουν οριστεί από την αρμόδια αρχή για να διενεργούν τον έλεγχο ευαισθησίας στα αντιμικροβιακά των απομονωθέντων στελεχών που περιλαμβάνονται στο εναρμονισμένο πρόγραμμα παρακολούθησης συμμετέχουν σε ένα σύστημα διασφάλισης της ποιότητας, συμπεριλαμβανομένων των δοκιμών ικανότητας που έχουν οριστεί σε εθνικό ή ενωσιακό επίπεδο, όσον αφορά την ταυτοποίηση, τη λυσιτυπία και τον έλεγχο ευαισθησίας των βακτηρίων που αφορά η εναρμονισμένη παρακολούθηση της μικροβιακής αντοχής.

Τα απομονωθέντα στελέχη φυλάσσονται από τα εθνικά εργαστήρια αναφοράς για τη μικροβιακή αντοχή σε θερμοκρασία – 80 °C για ελάχιστο χρονικό διάστημα πέντε ετών. Εναλλακτικά, μπορεί να χρησιμοποιούνται άλλες μέθοδοι φύλαξης υπό τον όρο ότι εξασφαλίζονται η βιωσιμότητα και η απουσία αλλαγών στις ιδιότητες των στελεχών.

ΜΕΡΟΣ Β

ΥΠΟΒΟΛΗ ΕΚΘΕΣΕΩΝ

1.   Γενικές διατάξεις για την υποβολή εκθέσεων όσον αφορά τα στοιχεία

Όταν η παρακολούθηση της μικροβιακής αντοχής πραγματοποιείται από την αρμόδια αρχή από απομονωθέντα στελέχη που λαμβάνονται από μια αρμόδια αρχή σε στάδια της τροφικής αλυσίδας διαφορετικά από εκείνα που αναφέρονται στο σημείο 1 του μέρους Α αλλά σύμφωνα με τις τεχνικές προδιαγραφές που αναφέρονται στα σημεία 3, 4 και 5 του μέρους Α, τα αποτελέσματα αυτής της παρακολούθησης της μικροβιακής αντοχής κοινοποιούνται σύμφωνα με το σημείο 2 του παρόντος μέρους, αλλά κοινοποιούνται χωριστά και το γεγονός αυτό δεν αλλάζει τον αριθμό απομονωθέντων στελεχών προς δοκιμή σύμφωνα με το σημείο 2 του μέρους Α.

2.   Πληροφορίες που πρέπει να περιλαμβάνονται για κάθε επιμέρους δείγμα

Οι εκθέσεις περιλαμβάνουν τις πληροφορίες που αναφέρονται στα σημεία 2.1 έως 2.6 για κάθε απομονωθέν στέλεχος, εξετάζοντας ξεχωριστά κάθε συνδυασμό ειδών βακτηρίων και ζωικού πληθυσμού και κάθε συνδυασμό ειδών βακτηρίων και τροφίμων που αναφέρεται στο σημείο 1 του μέρους Α.

Τα κράτη μέλη υποβάλλουν τα αποτελέσματα της εναρμονισμένης παρακολούθησης της μικροβιακής αντοχής που προβλέπεται στην παρούσα απόφαση με τη μορφή ανεπεξέργαστων στοιχείων με βάση τα απομονωθέντα στελέχη, με χρήση του λεξικού δεδομένων και τα έντυπα ηλεκτρονικής συλλογής που παρέχονται από την EFSA (18).

2.1.   Γενική περιγραφή της υλοποίησης της παρακολούθησης της μικροβιακής αντοχής

—	Περιγραφή των σχεδίων δειγματοληψίας, των διαδικασιών στρωματοποίησης και τυχαιοποίησης ανά ζωικό πληθυσμό και κατηγορία τροφίμων.

2.2.   Γενικές πληροφορίες

—	Αναγνωριστικός αριθμός ή κωδικός του απομονωθέντος στελέχους

—	Είδος βακτηρίου

—	Ορότυπος (για τη Salmonella spp.)

—	Λυσίτυπος της Salmonella Enteriditis και της Salmonella Typhimurium (προαιρετικά)

2.3.   Ειδικές πληροφορίες όσον αφορά τη δειγματοληψία

—	Ζωικός πληθυσμός που χρησιμοποιείται για την παραγωγή τροφίμων ή κατηγορία τροφίμων

—	Στάδιο δειγματοληψίας

—	Κατηγορία δείγματος

—	Δειγματολήπτης

—	Στρατηγική δειγματοληψίας

—	Ημερομηνία δειγματοληψίας

—	Ημερομηνία απομόνωσης

2.4.   Ειδικές πληροφορίες όσον αφορά τις δοκιμές για την αντοχή στα αντιμικροβιακά

—	Αναγνωριστικός αριθμός ή κωδικός του απομονωθέντος στελέχους που δόθηκε από το εργαστήριο που διενεργεί τον έλεγχο ευαισθησίας του απομονωθέντος στελέχους στα αντιμικροβιακά

—	Ημερομηνία ελέγχου ευαισθησίας

—	Αντιμικροβιακό

2.5.   Ειδικές πληροφορίες όσον αφορά τα αποτελέσματα της μεθόδου αραιώσεων

—	Τιμή ελάχιστης ανασταλτικής συγκέντρωσης (MIC) (σε mg/l)

2.6.   Αποτελέσματα των δοκιμών συνέργειας

—	Δοκιμές συνέργειας με κλαβουλανικό οξύ για την κεφταζιδίμη

—	Δοκιμές συνέργειας με κλαβουλανικό οξύ για την κεφοταξίμη

---

(1)  Σύμφωνα με τα τελευταία διαθέσιμα στοιχεία της Eurostat (http://epp.eurostat.ec.europa.eu).

(2)  Βλέπε υποσημείωση 1.

(3)  Επιδημιολογικές τιμές αποκοπής της EUCAST.

(4)  Κλινικό όριο ευαισθησίας της EUCAST.

(5)  Τα στοιχεία από τη EUCAST διατίθενται για τη Salmonella Enteriditis, Typhimurium, Typhi και Paratyphi.

ΔΔ: Δεν διατίθεται.

(6)  Επιδημιολογικές τιμές αποκοπής της EUCAST.

(7)  Κλινικό όριο ευαισθησίας της EUCAST.

(8)  Προαιρετικά.

ΔΔ: Δεν διατίθεται.

(9)  Επιδημιολογικές τιμές αποκοπής της EUCAST.

(10)  Κλινικό όριο ευαισθησίας της EUCAST.

ΔΔ: Δεν διατίθεται.

(11)  www.crl-ar.eu

(12)  Βλέπε υποσημείωση 3.

(13)  Επιδημιολογικές τιμές αποκοπής της EUCAST.

(14)  Κλινικό όριο ευαισθησίας της EUCAST.

ΔΔ: Δεν διατίθεται.

(15)  4 mg/l κλαβουλανικού οξέος

(16)  Οι τιμές συγκρίνονται με τις τιμές της κεφοταξίμης και της κεφταζιδίμης και ερμηνεύονται σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές του CLSI ή του EUCAST όσον αφορά τη δοκιμή συνέργειας.

(17)  Βλέπε υποσημείωση 3.

(18)  www.efsa.europa.eu