BILAGA I

Tekniska specifikationer i enlighet med artikel 2

1.   Urvalsram

Randomiserade stickprov på ett minsta antal svin som under minst de föregående 3 månaderna har hållits i medlemsstaten skall tas enligt följande:

Bulgarien: 192

Rumänien: 300

Bulgarien och Rumänien skall ta 10 % extra prov som skall analyseras om några prov av en eller annan orsak utesluts ur studien.

Provtagningen skall stratifieras efter deltagande slakteri och proportionellt till slakteriets kapacitet. Var och en av dessa medlemsstater skall rangordna samtliga slakterier efter produktionen av slaktsvin under föregående år. Var och en av dem skall därigenom identifiera de slakterier som stod för minst 80 % av alla slaktade slaktsvin.

Det sammanlagda antalet svin och slaktkroppar som skall provtas i varje slakteri som ingår i studien skall beräknas genom att provstorleken (t.ex. 2 400) multipliceras med andelen slaktsvin som hanterats under föregående år. Om ett slakteri t.ex. stod för 25 % av de slaktade slaktsvinen i de utvalda slakterierna (de som står för minst 80 % av samtliga slaktade slaktsvin i medlemsstaten) så skall 600 svin (2 400 × 0,25) provtas. Detta antal skall fördelas jämnt över tolv månader så att 50 svin provtas varje månad. Ett annat exempel visas i tabell 1.

Om ett slakteri inte längre är i drift, om ett nytt slakteri tagits i drift eller om en betydande förändring förväntas i anläggningens produktion under studiens gång skall den uppskattade produktionen dock anpassas i enlighet med detta.

Tabell 1

Viktning av slakterier med avseende på fördelning av antalet slaktsvin som skall provtas från varje slakteri; beräkning av antal djur som provtas per slakteri

Slakteriets ID	Antal slaktsvin som bearbetades under föregående år	Procentuell andel av totala antalet djur som slaktats och som ingår i studien	Antal prov per slakteri	Antal prov per månad (/12)
AXD	88 000	17,6	0,176 × 2 400 = 422,4	422,4 : 12 = 36
SVH	25 000	5,0
TPB	75 000	15,0
MLG	100 000	20,0
GHT	212 000	42,4
Totalt	500 000 (1)	100,0

Varje slakteri skall tilldelas ett tal mellan 1 och 31 varje månad. Om det slumpmässigt tilldelade numret är en slaktdag i den månaden skall den dagen utgöra provtagningsdag. Om det inte är slaktdag skall ett nytt slumpmässigt tal tilldelas. Detta förfarande skall genomföras en gång i månaden och upprepas så många gånger som det finns prov som skall uttas på slakteriet. På slakteri AXD skulle förfarandet t.ex. upprepas minst 36 gånger för att man skall få ihop minst 36 slumpvis valda arbetsdagar. Det kan följaktligen förekomma att mer än en slaktkropp skall provtas på en och samma dag.

Eftersom antalet slaktade djur under en viss dag kan variera åtskilligt skall det randomiserade urvalet av det enskilda djuret ske på slakteriet den dag som slumpmässigt valts ut för provtagning. Den givna dagen skall det sammanlagda antalet djur vara känt och slakteriets personal skall då göra ett slumpmässigt urval av slaktkroppar med hjälp av det randomiseringsschema som de har fått och som har genererats med hjälp av ett maximum som överskrider det högsta möjliga antalet slaktsvin som slaktats en viss dag på något av slakterierna i medlemsstaten.

Randomiseringsschemat kan då se ut som i tabell 2.

Tabell 2

Randomiseringsschema

Slakteri	Dag i månaden	Slaktkroppens identitet (2)
AXD	19	5
	4	2
	12	124
	12	2
	8	59

Följande djur skall undantas från studien:

—	Djur med en levande vikt på under 50 kg eller över 170 kg.

—	Djur som har nödslaktats.

—	Komplett kasserade slaktkroppar.

2.   Prov

2.1   Provtagning i allmänhet

—	Det skall tas samlingsprov av ileocekala lymfknutor eller åtminstone fem enstaka ileocekala lymfknutor från samtliga svin som valts ut; om möjligt minst 25 g lymfknutor utan fett eller bindväv.

—	Uppgifter om datum och klockslag för uttaget av de enskilda proven samt datum och klockslag för sändningen och namnet på den budfirma som anlitas för sändning av proven skall dokumenteras på slakteriet.

2.2   Närmare uppgifter om provtagning av ileocekala lymfknutor

Mesenteriet mellan cecum och den del av ileum som är närmast cecum öppnas och de ileocekala lymfknutorna visar sig på ovansidan av den synliga ytan. Om det skall tas enstaka lymfknutor tas dessa från det öppna mesenteriet utan användning av kniv men med handskar på. Lymfknutorna eller samlingsprovet skall läggas i en plastpåse som märkts med datum, klockslag, slakteriets identifikationsnummer och provets identifikationskod.

3.   Transport

Proven skall sändas inom 36 timmar som expressförsändelse eller med budfirma och skall vara framme på laboratoriet senast 72 timmar efter provtagning. Prov som kommer fram senare än 72 timmar efter provtagning kan användas endast om analys påbörjas inom 96 timmar efter provtagningen och kylkedjan inte har brutits. Annars skall de kasseras.

4.   Analys och serotypning av proven

Analys och serotypning av proven skall ske på det nationella referenslaboratoriet. Om det nationella referenslaboratoriet inte har tillräcklig kapacitet att utföra samtliga analyser, eller om det inte är det laboratorium som rutinmässigt utför detektion, får de behöriga myndigheterna besluta att utse ett begränsat antal andra laboratorier som deltar i de officiella kontrollerna av salmonella att utföra analyserna.

Dessa laboratorier skall ha dokumenterad erfarenhet av den detektionsmetod som erfordras, ha ett kvalitetssäkringssystem som uppfyller ISO-standard 17025 och stå under det nationella referenslaboratoriets överinseende.

Vid laboratoriet skall proven förvaras kylda fram till den bakteriologiska undersökningen, som skall genomföras inom 24 timmar efter mottagandet av proven och på så sätt att analysen påbörjas senast 96 timmar efter det att proven samlades in.

4.1   Provberedning

Lymfknutor dekontamineras på ytan före analys genom att de doppas ned i absolut alkohol och därefter får lufttorka.

Samtliga lymfknutor skall poolas och slås sönder med en hammare eller något liknande i den förslutna plastpåsen.

De homogeniserade lymfknutorna skall vägas och läggas i en steril behållare med uppvärmt buffrat peptonvatten i spädning 1:10. Behållarna skall inkuberas i sammanlagt (18 ± 2) timmar vid (37 ± 1) °C.

4.2   Detektionsmetod

Den metod som gemenskapens referenslaboratorium i Bilthoven i Nederländerna rekommenderar för salmonella skall användas.

Metoden beskrivs i den aktuella versionen av utkastet till bilaga D till ISO 6579:2002: Detection of Salmonella spp. in animal faeces and in samples of the primary production stage. Vid denna metod skall ett halvfast medium (modified semi-solid Rappaport-Vassiladis medium, MSRV) användas som enda selektiva anrikningssubstrat.

4.3   Serotypning

Samtliga stammar som isolerats och bekräftats vara Salmonella spp. skall serotypas enligt Kauffmann White-schemat.

För kvalitetssäkringen skall 16 typbara stammar och 16 icke-typbara isolater sändas till gemenskapens referenslaboratorium. Om färre stammar har isolerats skall samtliga sändas in.

4.4   Fagtypning

Vid fagtypning av isolat av Salmonella serovar Typhimurium och Salmonella serovar Enteritidis (fakultativt) skall de metoder som beskrivs av WHO:s referenscentrum för fagtypning av salmonella vid Health Protection Agency (HPAA) i Colindale, Förenade kungariket, användas.

4.5   Testning av antimikrobiell känslighet

Vid testning av antimikrobiell känslighet (fakultativt) skall en validerad och kontrollerad testmetod användas, t.ex. en av dem som rekommenderas av National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, sedan den 1 januari 2005: Clinical and Laboratory Standards Institute – CLSI).

Såväl diffusion i agar som utspädning i buljong skall vara godtagbara metoder. Resultaten skall redovisas både som kvantitativa data (MIC för utspädningsmetoder och inhiberingszonens diameter för diffusionsmetoder) och som kvalitativa data (andelen resistenta isolat).

Kvalitativa data skall grundas på en tolkning i överensstämmelse med de epidemiologiska cut off-värden som presenteras på European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testings (EUCAST) webbplats (http://www.eucast.org).

Isolaten skall testas för känslighet mot följande antimikrobiella substanser:

—	Ampicillin eller amoxicillin.

—	Tetracyklin.

—	Kloramfenikol.

—	Florfenikol.

—	Nalidixinsyra.

—	Ciprofloxacin (helst) eller enrofloxacin.

—	Sulfonamid (helst sulfametoxazol).

—	Sulfonamid/trimetoprim eller trimetoprim.

—	Gentamicin.

—	Streptomycin.

—	Kanamycin (helst) eller neomycin.

—	Tredje generationens cefalosporiner (helst cefotaxim).

—	Kolistin (fakultativt).

De två medlemsstaterna skall anordna utbildning för berörda parter innan studien inleds.

5.   Dokumentation och lagring av prov

De bakteriologiska undersökningarna på samtliga prov skall dokumenteras i det format som anges i tabell 3, eller ett liknande format.

Samtliga stammar som har isolerats skall förvaras på de nationella referenslaboratorierna i de två medlemsstaterna så länge det kan garanteras att stammarna förblir intakta i minst fem år.

Samtliga prov av köttsaft för serologisk undersökning skall förvaras frysta i två år.

Tabell 3

Exempel på uppgifter som skall dokumenteras för samtliga bearbetade prov

Prov

Mottagande

Analys

Provets ID och typ

Slakteriets ID

Namn

Datum

Klockslag

Namn

Datum

Klockslag

Positivt/negativt

Serovar

Fagtyp

Antibiogram

Lagrings-ID

1 S

EU012

PW

3-10-06

12:00

AB

3-10

14:00

Neg

2 L

EU023

PW

4-10

12:30

AB

4-10

14:00

Pos.

Typh

DT104

ASTSu

(ID-nr)

3 L

EU083

PW

8-10

16:30

AB

9-10

9:00

Pos.

Agona

Ej tillämpligt

ASTE

(ID-nr)

etc.

6.   Bulgariens och Rumäniens rapportering

Den nationella myndigheten med ansvar för utarbetandet av den årliga nationella rapporten om övervakningen av salmonella hos djur enligt artikel 9 i direktiv 2003/99/EG skall samla in och bedöma resultaten och avlägga rapport till kommissionen.

Rapporterna skall innehålla minst följande uppgifter:

6.1   Övergripande beskrivning av genomförandet av programmet

—	Beskrivning av den undersökta populationen, stratifierad efter slakteriets kapacitet.

—	Beskrivning av randomiseringsförfarandet, inklusive rapporteringssystemet.

—	Beräknad provstorlek.

—	Närmare uppgifter om de myndigheter och laboratorier som deltar i provtagningen/testningen/typningen.

—	De övergripande resultaten från studien (prov som analyserats genom bakteriologiska undersökningar, antal positiva prov, serovar, fagtyp och testning av antibiotikaresistens).

6.2   Fullständiga uppgifter om varje djur som provtagits och tillhörande testresultat:

Medlemsstaterna skall överlämna resultaten av studien i form av rådata med användning av en dataordlista och datainsamlingsblanketter som kommissionen tillhandahåller.

Ordlistan och blanketterna skall fastställas av kommissionen och innehålla minst följande information:

—	Slakteriets referensnummer.

—	Slakteriets kapacitet.

—	Datum och klockslag för provtagning.

—	Referensuppgifter om proven (nummer).

—	Typ av prov som uttagits: lymfknutor.

—	Datum för sändning till laboratoriet.

Följande uppgifter skall inhämtas i medlemsstaterna för varje prov som sänds till laboratoriet:

—	Laboratoriets identifikationsnummer (om flera laboratorier deltar).

—	Transportmedel för proven.

—	Datum då laboratoriet tog emot proven.

—	Vid testning av lymfknutor: provets vikt.

—	Resultat för det enskilda prov som testats: ”negativt” eller om positivt för Salmonella spp., även resultaten av serotypning: ”Salmonella serovar” eller ”icke-typbar”.

—	För stammar som skall testas för antimikrobiell känslighet och/eller fagtypas anges resultaten.

---

(1)  Detta antal skall motsvara minst 80 % av samtliga slaktade slaktsvin i en medlemsstat.

(2)  Den femte slaktkroppen som bearbetas den 19:e dagen i denna månad bör provtas för studien.

BILAGA II

Maximalt ekonomiskt bidrag från gemenskapen till Bulgarien och Rumänien

(EUR)
Medlemsstat	Belopp
Bulgarien	4 992
Rumänien	7 800

BILAGA III

Bestyrkt ekonomisk redovisning av genomförandet av en grundläggande studie om prevalensen av Salmonella spp. i besättningar av slaktsvin

Rapporteringsperiod: 1 april 2007–30 september 2007

Redovisning av kostnader för studien som berättigar till ekonomiskt bidrag från gemenskapen:

Referensnummer för kommissionens beslut att bevilja ekonomiskt bidrag: …

…

Kostnader i samband med verksamhet bedriven på/av	Antal tester	Sammanlagda kostnader för test under rapporteringsperioden (i nationell valuta)
Bakteriologisk detektion av Salmonella spp.
Serotypning av isolat av salmonella

Försäkran från bidragsmottagaren

Härmed intygas att

—	kostnaderna i kostnadsredovisningen utgör faktiska kostnader och har uppkommit i samband med de uppgifter som föreskrivs i kommissionens beslut 2007/219/EG och att de var nödvändiga för att dessa uppgifter skulle fullgöras korrekt,

—	alla handlingar som bestyrker kostnaderna finns tillgängliga för revision.

Datum: …

Ekonomiskt ansvarig: …

Namnteckning: …