ALLEGATO I

Specifiche tecniche di cui all’articolo 2

1.   Estensione del campionamento

Un numero minimo di suini rimasti per almeno gli ultimi tre mesi nello Stato membro è sottoposto a campionamento casuale nel modo seguente:

Bulgaria: 192

Romania: 300.

La Bulgaria e la Romania effettueranno il 10 % in più dei campionamenti, che saranno analizzati nel caso in cui i campioni siano esclusi dall’indagine per varie ragioni.

I campionamenti saranno stratificati per il macello che partecipa e proporzionalmente alle capacità di ogni macello. Ciascuno di questi Stati membri farà un elenco progressivo dei macelli a seconda delle cifre di produzione relative all’anno precedente. Ciascuno di essi identificherà pertanto gli impianti che hanno trattato almeno l’80 % dei suini da ingrasso macellati.

Il numero totale di suini e di carcasse da sottoporre a campionamento in ogni macello compreso nelle indagini sarà stimato moltiplicando la dimensione del campione (ad esempio 2 400) per la proporzione di suini da ingrasso trattati l’anno precedente. Ad esempio, se un macello ha trattato il 25 % dei suini da ingrasso macellati nei macelli selezionati (quelli che rappresentano almeno l’80 % dei suini da ingrasso macellati in uno Stato membro), 600 suini saranno sottoposti a campionamento (2 400 × 0,25). Questi saranno suddivisi in modo che 50 suini siano sottoposti a campionamento ogni mese, per 12 mesi. Per un ulteriore esempio si veda la tabella 1.

Tuttavia, nel caso in cui un macello non sia più in produzione e un nuovo impianto sia stato aperto o se si prevede un cambiamento significativo nella produzione durante le indagini, la produzione stimata sarà modificata di conseguenza.

Tabella 1

Ponderazione dei macelli per determinare il numero di suini da ingrasso da sottoporre a campionamento per ogni macello; calcolo di animali sottoposti a campionamento per macello

N. di identità del macello	Numero di suini da ingrasso trattati l’anno precedente	Percentuale di abbattimento totale compresa nell’indagine	Numero di campioni per macello	Campioni per mese (/12)
AXD	88 000	17,6	0,176 × 2 400 = 422,4	422,4 : 12 = 36
SVH	25 000	5,0
TPB	75 000	15,0
MLG	100 000	20,0
GHT	212 000	42,4
Totale	500 000 (1)	100,0

Per ogni macello ogni mese un numero da 1 a 31 sarà selezionato a caso. Se il numero scelto a caso è un giorno di macellazione per quel mese, allora quel giorno è selezionato per il campionamento. In caso contrario un nuovo numero è selezionato a caso. Tale processo è effettuato una volta al mese e ripetuto tante volte per quanti campioni devono essere raccolti nel macello. Ad esempio, nel macello AXD il processo sarà ripetuto almeno 36 volte per selezionare almeno 36 giorni lavorativi a caso. Di conseguenza, è possibile che ci sia più di una carcassa da sottoporre a campionamento nello stesso giorno.

Poiché il numero di animali macellati in un giorno specifico può variare in modo notevole, la selezione casuale del singolo animale avrà luogo nel macello nella giornata scelta in modo casuale per il campionamento. Il giorno stabilito, il numero totale di animali deve essere noto e il personale del macello deve scegliere a caso una o più carcasse utilizzando il modulo di randomizzazione che è stato fornito e che è basato su un totale massimo che supera il numero massimo possibile di suini da ingrasso macellati in un determinato giorno in un qualunque macello dello Stato membro.

La tabella di randomizzazione potrebbe essere simile a quella indicata alla tabella 2.

Tabella 2

Tabella di randomizzazione

Macello	Giorno del mese	Identità della carcassa (2)
AXD	19	5
	4	2
	12	124
	12	2
	8	59

I seguenti animali saranno esclusi dallo studio di riferimento:

—	animali dal peso vivo inferiore a 50 kg o superiore a 170 kg,

—	animali sottoposti a macellazione d’urgenza,

—	carcasse non idonee.

2.   Campionamenti

2.1.   Campionamento in generale

—	Deve essere raccolto l’aggregato di linfonodi ileocaecali o almeno cinque singoli linfonodi ileocaecali di tutti i suini selezionati. Se è possibile devono essere raccolti 25 grammi di linfonodi senza grasso o tessuti connettivi.

—	I macelli devono conservare i dati riguardanti il giorno e l’ora del campionamento per ciascun campione e l’ora e il giorno e il nome dello spedizioniere che si occupa dell’invio dei campioni.

2.2.   Dettagli relativi al campionamento dei linfonodi ileocaecali

Il mesentere tra l’intestino ceco e la parte dell’ileo che è più vicina al ceco deve essere strappato e i linfonodi ileocaecali presentati alla superficie della zona strappata. Utilizzando guanti di gomma e non un coltello, i linfonodi vanno «accolti» tra il mesentere aperto, nel caso in cui si raccolgano i linfonodi individuali. I linfonodi o gli aggregati saranno posti in un sacchetto di plastica che deve indicare la data, l’ora, l’identificazione del macello e il numero di identificazione del campione.

3.   Trasporto

I campioni vanno inviati entro 36 ore per posta celere o per corriere e devono arrivare al laboratorio non più tardi di 72 ore dopo il campionamento. I campioni che arrivano dopo 72 ore dal campionamento vanno eliminati a meno che l’analisi abbia inizio entro 96 ore dal campionamento e la catena del freddo non sia interrotta.

4.   Analisi e sierotipizzazione dei campioni

L’analisi e la sierotipizzazione si effettuano nel laboratorio nazionale di riferimento (LNR). Tuttavia, qualora il laboratorio nazionale di riferimento non sia in grado di compiere tutte le analisi o non esegua esso stesso abitualmente le analisi, le autorità competenti possono chiedere a un numero limitato di altri laboratori che partecipano ai controlli ufficiali della salmonella di effettuare le analisi.

Tali laboratori devono avere una comprovata esperienza nell’uso del metodo di rilevazione necessario, devono applicare un sistema di garanzia della qualità conforme allo standard ISO 17025 e sottoporsi alla supervisione del laboratorio nazionale di riferimento.

Presso il laboratorio i campioni vanno tenuti refrigerati fino al test batteriologico, che va effettuato entro 24 ore dal ricevimento dei campioni, in modo tale che le analisi inizino non più tardi di 96 ore dopo che il campione è stato prelevato.

4.1.   Preparazione del campione

I linfonodi devono essere disinfettati in superficie prima dell’analisi mediante alcool puro e vanno fatti asciugare all’aria.

Tutti i linfonodi devono essere chiusi in un sacchetto di plastica che sarà colpito con un martello o uno strumento simile per poterli schiacciare.

I linfonodi omogeneizzati saranno pesati e posti in un contenitore sterile con una soluzione acquosa di peptone preriscaldata (BPW) diluita 1:10. I contenitori vanno tenuti in incubazione per un totale di (18 ± 2) ore a (37 ± 1) °C.

4.2.   Metodo di rilevazione

Per la rilevazione si usa il metodo raccomandato dal Laboratorio comunitario di riferimento (LCR) per la salmonella di Bilthoven, nei Paesi Bassi.

Tale metodo è descritto nell’attuale versione del progetto di allegato D alla norma ISO 6579:2002: «Rilevazione della Salmonella spp. nelle feci animali e nei campioni della fase della produzione primaria». In questo metodo, il mezzo semisolido modificato Rappaport-Vassiladis (MSRV) è utilizzato come terreno di arricchimento selettivo unico.

4.3.   Classificazione in base al sierotipo

Tutti gli isolati positivi alla Salmonella spp. devono essere sottoposti a tipizzazione secondo il sistema Kaufmann-White.

Per la garanzia della qualità, 16 ceppi tipizzabili e 16 isolati non tipizzabili devono essere inviati al CRL. In caso di quantità minore, tutti gli isolati vanno inviati al CRL.

4.4.   Tipizzazione dei fagi

Nel caso in cui siano tipizzati (opzionale) ceppi isolati di Salmonella serovar Tiphimurium e Salmonella serovar Enteritidis, vanno usati i metodi descritti dal centro di riferimento dell’OMS per la tipizzazione dei fagi di salmonella dell’Agenzia per la tutela della salute (HPA), di Colindale, Regno Unito.

4.5.   Test di suscettibilità agli antimicrobici

In caso di test di suscettibilità agli antimicrobici (opzionale), deve essere utilizzato un metodo di prova convalidato e controllato, come quelli raccomandati dal National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, dal 1o gennaio 2005: «Clinical and Laboratory Standards Institute» — CLSI).

Sia la prova di diffusione su agar che il metodo di diluizione sono accettabili. I risultati saranno riportati sia in quanto dati quantitativi (concentrazione minima inibente per metodi di diluizione e diametro della zona di inibizione per le prove di diffusione) che come dati qualitativi (proporzione di isolati resistenti).

I dati qualitativi sono basati sull’interpretazione secondo i valori di demarcazione epidemiologica presentati dall’EUCAST (comitato europeo sui test di suscettibilità antimicrobica) al seguente indirizzo: http://www.eucast.org

Gli isolati saranno sottoposti ai test di suscettibilità per le sostanze antimicrobiche elencate qui di seguito:

—	ampicillina o amoxicillina,

—	tetraciclina,

—	cloramfenicolo,

—	florfenicolo,

—	acido nalixidico,

—	ciprofloxacina (di preferenza) o enrofloxacina,

—	sulfonammide (di preferenza sulfametoxazolo),

—	sulfonammide/trimetoprim oppure trimetoprim,

—	gentamicina,

—	streptomicina,

—	kanamicina (di preferenza) o neomicina,

—	cefalosporina di 3a generazione (di preferenza cefotaxima),

—	colistina (facoltativo).

Si raccomanda ai due Stati membri di organizzare la formazione per le parti interessate prima dell’inizio dello studio.

5.   Relazioni e conservazione dei campioni

Le relazioni degli esami batteriologici di tutti i campioni esaminati vanno conservate in un formato simile o comparabile a quello dato come esempio nella tabella 3.

Tutti gli isolati vanno conservati nei laboratori nazionali di riferimento dei due Stati membri a condizione di poter assicurare l’integrità dei ceppi per un minimo di cinque anni.

Tutti i campioni di succo di carne per l’esame sierologico vanno conservati congelati per due anni.

Tabella 3

Esempio dei dati relativi a tutti i campioni esaminati

Campione

Ricevuta

Analisi

ID e tipo di campione

ID macello

Nome

Data

Ora

Nome

Data

Ora

Positivo o negativo

Serovar

Fagotipo

Antibiogramma

Numero d’identità conservazione

1 S

EU012

PW

3-10-06

12:00

AB

3-10

14:00

Neg

2 L

EU023

PW

4-10

12:30

AB

4-10

14:00

Pos

Typh

DT104

ASTSu

(IDnr)

3 L

EU083

PW

8-10

16:30

AB

9-10

9:00

Pos

Agona

n.a.

ASTE

(IDnr)

Ecc.

6.   Comunicazione dei dati dalla Bulgaria e dalla Romania

L’autorità competente responsabile della stesura della relazione nazionale annuale sulla rilevazione della salmonella negli animali di cui all’articolo 9 della direttiva 2003/99/CE della Commissione raccoglie e valuta i risultati della rilevazione e riferisce i risultati alla Commissione.

Le relazioni devono contenere le seguenti informazioni minime.

6.1.   Descrizione generale dell’attuazione del programma di inchiesta

—	Descrizione della popolazione studiata stratificata in base alla capacità dei macelli.

—	Descrizione della procedura di randomizzazione, compreso il sistema di notifica.

—	Dimensione del campione calcolata.

—	Particolari sulle autorità e i laboratori partecipanti alla raccolta dei campioni, ai test e alla tipizzazione.

—	Risultati globali dello studio (campioni analizzati per esame batteriologico e sierologico, numero di positivi, serovar, fagotipi e test di resistenza antibiotica).

6.2.   Dati completi su ogni animale esaminato e risultati dei test corrispondenti

Gli Stati membri presenteranno i risultati dell’inchiesta sotto forma di dati grezzi utilizzando un dizionario di dati e moduli di raccolta dei dati forniti dalla Commissione.

Tali dizionari e moduli saranno elaborati dalla Commissione e comprenderanno almeno le seguenti informazioni:

—	riferimento del macello,

—	capacità del macello,

—	data e luogo del campionamento,

—	riferimento dei campioni (ad esempio numero),

—	tipo di campione: linfonodi,

—	data di consegna al laboratorio.

Gli Stati membri raccoglieranno le seguenti informazioni per ciascun campione inviato al laboratorio:

—	identità del laboratorio (nel caso in cui vengano utilizzati vari laboratori),

—	mezzo di trasporto utilizzato per i campioni,

—	data di ricevimento da parte del laboratorio,

—	nei test dei linfonodi, peso del campione,

—	risultato del campione individuale esaminato: «negativo» o nel caso in cui sia positivo per la Salmonella spp., anche i risultati della sierotipizzazione («salmonella serovar» oppure «non tipizzabile»),

—	risultati per gli isolati sottoposti al test di suscettibilità antimicrobica e/o risultati della tipizzazione dei fagi.

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(1)  Questa cifra deve rappresentare almeno l’80 % dei suini da ingrasso macellati in uno Stato membro.

(2)  La quinta carcassa a elaborare il diciannovesimo giorno di tale mese dovrebbe essere sottoposta a campionamento per l’indagine.

ALLEGATO II

Contributo finanziario massimo della Comunità per la Bulgaria e la Romania

(EUR)
Stato membro	Importo
Bulgaria	4 992
Romania	7 800

ALLEGATO III

Relazione finanziaria certificata relativa all’esecuzione di uno studio di riferimento sulla prevalenza di Salmonella spp. nelle popolazioni di suini da ingrasso

Periodo di riferimento: dal 1o aprile 2007 al 30 settembre 2007

Dichiarazione relativa alle spese sostenute per l’indagine e rimborsabili attraverso il contributo finanziario comunitario

Numero di riferimento della decisione della Commissione relativa al contributo finanziario comunitario: …

…

Spese sostenute relative a funzioni presso/da	Numero di test	Spese totali per le analisi sostenute nel periodo di riferimento (in valuta nazionale)
Rilevazione batteriologica della Salmonella spp.
Sierotipizzazione degli isolati della salmonella

Dichiarazione del beneficiario

Si dichiara che:

—	le spese di cui sopra sono reali, sono state sostenute per l’espletamento dei compiti previsti dalla decisione 2007/219/CE della Commissione e sono risultate indispensabili ai fini di un’efficace attuazione di tali compiti,

—	tutti i relativi documenti giustificativi sono disponibili per eventuali controlli.

Data: …

Responsabile finanziario: …

Firma: …