I PIELIKUMS

Tehniskās specifikācijas saskaņā ar 2. pantu

1.   Izlases pārbaužu pamats

Nejaušinātas izlases pārbaudes saskaņā ar 1. tabulu izdarāmas minimālajam skaitam cūku, kuras vismaz 3 iepriekšējos mēnešus audzētas dalībvalstī.

1.   tabula

Minimālais izlases lielums

Cūku skaits populācijā	Minimālais izlases lielums (1)
> 20 000 000	2 400
10 000 000–20 000 000	1 067
2 000 000–10 000 000	600
< 2 000 000	384

Dalībvalstis ievāc papildus 10 % paraugu analīzei gadījumā, ja kādi paraugi dažādu iemeslu dēļ nebūtu derīgi pētījumam.

Paraugu vākšanu stratificē pa mēnešiem, lai tiktu aptverti dažādi gadalaiki.

Paraugu vākšanu stratificē pa kautuvēm, kuras piedalās, un proporcionāli kautuvju jaudai. Katra dalībvalsts sašķiro visas kautuves pēc barokļu caurlaidības iepriekšējā gadā. Tādējādi katra dalībvalsts nosaka tās kautuves, kurās nokauts vismaz 80 % no visiem barokļiem.

Kopējais pētījuma paraugiem vajadzīgo cūku un kautķermeņu skaits katrā no kautuvēm aprēķināms, pareizinot paraugu skaitu (piem., 2 400) ar iepriekšējā gadā apstrādāto barokļu proporciju. Piemēram, ja vienā kautuvē nokauti 25 % visu barokļu, kas nokauti atlasītajās kautuvēs (kuras pārstāv vismaz 80 % no visiem barokļiem, kas nokauti dalībvalstī), tad jāņem paraugi no 600 (2 400 × 0,25) cūkām. Tās sadala līdzīgās daļās, lai 12 mēnešus katru mēnesi tiktu ievākti paraugi no 50 cūkām. Otrs piemērs dots 2. tabulā.

Dabīgi, ja kautuve vairs nedarbojas, ja ir atvērtas jaunas iekārtas vai ja pētījuma laikā ir paredzamas būtiskas pārmaiņas kautuves caurlaidībā, tad aprēķinātā caurlaidība ir attiecīgi jākoriģē.

2.   tabula

Kautuvju īpatsvara noteikšana ar nolūku iegūt barokļu skaitu, no kuriem jāievāc paraugi katrā kautuvē; katrā kautuvē ievācamo paraugu aprēķināšana.

Kautuves ID	Iepriekšējā gadā pārstrādātie barokļi	Pētījumā iekļautā kopējā nokāvuma procents	Paraugu skaits vienā kautuvē	Paraugi mēnesī (/12)
AXD	88 000	17,6	0,176 × 2 400 = 422,4	422,4:12 = 36
SVH	25 000	5,0
TPB	75 000	15,0
MLG	100 000	20,0
GHT	212 000	42,4
Kopā	500 000 (2)	100,0

Katrā kautuvē katru mēnesi nejaušinātas atlases veidā izraugās skaitli no 1 līdz 31. Ja nejaušināti atlasītais skaitlis ir kaujamā diena, tad tajā mēnesī paraugu ņemšanai izraugās to dienu. Ja ne, tad tāpat izraugās jaunu skaitli. To dara vienreiz mēnesī un atkārto tik daudz reižu, cik paraugu kautuvē ir jāievāc. Piemēram, kautuvē AXD process atkārtojams vismaz 36 reizes, lai nejaušā atlasē iegūtu vismaz 36 darba dienas. Dabīgi, ka vienā dienā var būt jāņem paraugi vairāk nekā no viena kautķermeņa.

Tā kā konkrētā dienā nokauto lopu skaits var atšķirties, atsevišķā lopa atlasei jānotiek kautuvē tajā dienā, kas atlasīta paraugu ņemšanai. Kad noliktā diena un lopu kopskaits ir zināms, tad kautuves personāls nejaušinātā atlasē izraugās kautķermeni(-us), izmantojot tiem piegādāto nejaušināšanas lapu, kas izveidota, izmantojot maksimumu, kas pārsniedz augstāko iespējamo skaitu barokļu, ko nokauj vienā konkrētā dienā jebkurā dalībvalsts kautuvē.

Nejaušināšanas tabula var izskatīties tā, kā parādīts 3. tabulā.

3.   tabula

Nejaušināšanas tabula

Kautuve	Mēneša diena	Kautķermeņa apzīmējums (3)
AXD	19	5
	4	2
	12	124
	12	2
	8	59

Bāzlīnijas pētījumā neiekļauj:

—	lopus, kuru dzīvsvars ir mazāks par 50 kg vai lielāks par 170 kg,

—	lopus, ka nokauti ārkārtas izkaušanā,

—	kautķermeņus, kas pilnīgi izbrāķēti.

2.   Paraugi

2.1.   Paraugu ievākšana vispār

Ievācami šādi paraugi:

—	ileocekālo limfmezglu sakopojums vai vismaz 5 atsevišķi ileocekālie limfmezgli no visām atlasītajām cūkām. Ja iespējams, jāievāc vismaz 25 g limfmezglu bez taukiem un saistaudiem,

—

sūklītis, ar kuru ņem nomazgājumus četrās vietās saskaņā ar 2. punkta 3. apakšpunktu, katram kautķermenim no kopā vismaz 384 cūkām, ko nejaušā atlasē izraugās no atlasītajām cūkām. Sūklīša metodi izmanto saskaņā ar pašu jaunāko standarta ISO 17604 izdevumu. Šādu paraugu ņemšanu izdara Beļģijā, Čehijā, Dānijā, Francijā, Īrijā, Kiprā, Latvijā, Lietuvā, Austrijā, Polijā, Slovēnijā, Zviedrijā un Apvienotajā Karalistē,

—

muskuļa paraugs gaļas sulas vai asiņu (ja tā ir līdzvērtīga gaļas sulas metodei) seroloģijai no visām atlasītajām cūkām. Ir jāņem pietiekami daudz kakla vai diafragmas muskuļa, lai iegūtu pietiekami daudz gaļas sulas, kas ļautu vienu daļu sasaldēt un noglabāt vēlākiem salīdzinošiem pētījumiem. Šādu paraugu ņemšanu izdara Dānijā, Vācijā, Francijā, Īrijā, Kiprā, Lietuvā, Nīderlandē, Slovēnijā, Zviedrijā un Apvienotajā Karalistē.

Kautuvē jāglabā pieraksti par parauga muskuļiem, katra parauga ņemšanas laiks un datums un paraugu piegādātāja kurjera datums un vārds.

2.2.   Ileocekālo limfmezglu paraugu ņemšanas sīkāks apraksts

Jāpārplēš apzarnis starp aklo zarnu un tai tuvāko līkumainās zarnas daļu, un ileocekālie limfmezgli parādās atplēstā laukuma virspusē. Ja ņem atsevišķus limfmezglus, tad bez naža, ar cimdotiem pirkstiem “ievāc” limfmezglus no atvērtā apzarņa. Limfmezglus vai to sakopojumu ievieto plastmasas maisiņā, uz kura uzraksta datumu, laiku, kautuves identifikāciju un parauga identifikācijas šifru.

2.3.   Virsmas paraugu ņemšanas no kautķermeņa sīkāks apraksts

Kautķermeņa paraugu ņemšanu izdara pēc iekšu izņemšanas, pirms dzesināšanas. Apmēram 100 cm2 katras vietas virsmas nobrauka ar vienu abrazīvu sūklīti visās šādās vietās tā, kā tālāk uzrādīts un numurēts saskaņā ar standarta ISO 17604 A pielikumu:

—	pakaļkājas vidusdaļa (9),

—	vēdera sānu daļa (krūtiņa, 3),

—	muguras vidusdaļa (4),

—	žoklis (7).

Divas vietas nobrauka ar vienu sūklīša pusi, tad to apgriež otrādi un nobrauka divas pārējās vietas, ar beršanu. Ir pietiekami stingri jāuzspiež, kautķermeņa apakšdaļu mazliet (2–5 mm) atspiežot no paraugu ņemšanas rīka. Ar sūklīti nobrauc pār katru parauga vietu kopā apmēram 10 reizes vertikālā un 10 reizes horizontālā virzienā. Ja izmanto šablonus, jāievēro piesardzība, lai nepieļautu kautķermeņu savstarpēju inficēšanos.

Uzglabājot un pārvadājot paraugam jābūt ne vairāk kā 7 °C temperatūrā. Uz plastmasas maisiņa atzīmē datumu, laiku, kautuves identifikāciju un parauga identifikācijas šifru.

3.   Pārvadāšana

Paraugi nosūtāmi 36 stundu laikā ar ātro pastu vai kurjeru, un tiem jānonāk laboratorijā ne vēlāk kā 72 stundas pēc paraugu ievākšanas. Paraugus, kas saņemti vēlāk nekā 72 stundas pēc parauga noņemšanas, iznīcina, ja vien analīzi nesāk 96 stundu laikā pēc parauga noņemšanas un netiek pārtraukta aukstuma ķēde.

4.   Paraugu analīze

Analīze un serotipizēšana notiek valsts references laboratorijā (VRL). Tomēr gadījumos, kad tajā visas analīzes veikt nav iespējams vai tādu noteikšanu parasti neveic, kompetentās iestādes var analīžu veikšanai ierobežotā skaitā izraudzīties citas laboratorijas, kas saistītas ar oficiālu salmonellas kontroli. Laboratorijām ir jābūt pierādījušām, ka tām ir minētās noteikšanas metodes izmantošanas pieredze, un tajās jābūt kvalitātes nodrošināšanas sistēmai, kas atbilst ISO standartam 17025, un tai jābūt VRL uzraudzībā.

Laboratorijā paraugi ir jāuzglabā ledusskapī līdz bakterioloģiskajai izmeklēšanai, kas jāveic 24 stundu laikā pēc paraugu saņemšanas un ne vēlāk kā 96 stundas pēc paraugu noņemšanas.

Muskuļu paraugs seroloģijai glabājams sasaldēts līdz analīzei, kas veicama uzreiz pēc atkausēšanas.

4.1.   Parauga sagatavošana bakterioloģijai

Limfmezglu virsmu pirms analīzes dekontaminē, iemērcot absolūtajā spirtā un izžāvējot gaisā.

Visus limfmezglus savāc kopā plastmasas maisiņā, ko aizdara un dauza, lai tos sasmalcinātu.

Homogenizētos limfmezglus nosver un ievieto sterilā traukā ar uzsildītu buferētu peptona ūdeni (BPW) atšķaidījumā 1:10. Traukus iztur 37 ± 1 °C temperatūrā kopā 18 ± 2 stundas.

Nomazgājumu paraugiem laboratorijā pievieno 100 ml BPW pirmsuzkrāšanas barotni. Paraugu iztur pa nakti 37 °C temperatūrā un salmonellu tajā nosaka pēc modificētās pusšķidrās Rapaporta-Vasiliada barotnes (MRSV) metodes (ISO 6579:2002(E) projekta D pielikums).

4.2.   Noteikšanas metode bakterioloģijā

Ir jāizmanto metode, ko ieteikusi Kopienas salmonellas references laboratorija (KRL) Bilthofenē, Nīderlandē. Metode ir aprakstīta ISO 6579:2002 D pielikuma projekta pašreizējā redakcijā: “Salmonella spp. atklāšana dzīvnieku izkārnījumos un pirmējās ražošanas paraugos”. Pēc šās metodes par vienīgo selektīvo bagātināšanas barotni izmanto MSRV.

4.3.   Serotipizēšana

Visus celmus, kas izolēti un apstiprināti kā Salmonella spp., serotipizē pēc Kaufmaņa-Vaita shēmas.

Kvalitātes nodrošināšanai 16 tipizējamus celmus un 16 netipizējamus izolātus nosūta KRL. Ja izolēts mazāk celmu, nosūta visus.

4.4.   Fāgu tipizēšana

Ja tiek tipizēti (fakultatīvi) Salmonella serotips typhimurium un Salmonella serotips enteritidis, jāizmanto PVO references centra aprakstītās Apvienotās Karalistes Health Protection Agency (HPA), Colindale fāgu tipizēšanas metodes.

4.5.   Antibakteriālās uzņēmības pārbaudes

Ja tiek pārbaudīta antibakteriālā uzņēmība (fakultatīvi), jāizmanto validēta un kontrolēta testēšanas metode, piemēram, tā, ko iesaka National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, kopš 2005. gada 1. janvāra – Clinical and Laboratory Standards Institute jeb CLSI).

Pieņemama ir gan agara difūzija, gan buljona atšķaidīšana. Rezultātus dara zināmus gan kvantitatīvi (atšķaidīšanas metožu MIC un difūzijas metožu aiztures zonas diametrs), gan kvalitatīvi (rezistento izolātu daļa). Kvalitatīvie dati jāpamato uz interpretāciju saskaņā ar epidemioloģiskajām robežvērtībām, ko Eiropas Antibakteriālās uzņēmības pārbaudes komiteja (EUCAST) publicē vietnē http://www.eucast.org

Izolātiem pārbauda uzņēmību pret tālāk uzskaitītajām antimikrobiālajām vielām:

—	ampicilīns vai amoksicilīns,

—	tetraciklīns,

—	hloramfenikols,

—	florfenikols,

—	nalidiksskābe,

—	ciprofloksacīns (vēlams) vai enrofloksacīns,

—	sulfonamīds (vēlams sulfametoksazols),

—	sulfonamīds/trimetoprims vai trimetoprims,

—	gentamicīns,

—	streptomicīns,

—	kanamicīns (vēlams) vai neomicīns,

—	3. paaudzes cefalosporīns (vēlams cefotaksims),

—	kolistīns (fakultatīvi).

Dalībvalstis tiek mudinātas pirms pētījuma uzsākšanas sarīkot iesaistīto personu apmācību.

5.   Rezultāti un paraugu uzglabāšana

Bakterioloģijas rezultāti par visiem apstrādātajiem paraugiem glabājami formātā, kas līdzinās 4. tabulā dotajam vai ir ar to salīdzināms.

Visi izolētie celmi glabājami atsevišķu dalībvalstu VRL, ja vien tā nodrošina celmu saglabāšanos vismaz 5 gadus.

Visus gaļas sulas paraugus seroloģijai glabā sasaldētus 2 gadus.

4.   tabula

Piemērs ar pierakstiem par visiem apstrādātajiem paraugiem

Paraugs

Saņemšana

Analīze

Parauga ID + tips (4)

Kautuves ID

Vārds

Datums

Laiks

Vārds

Datums

Laiks

Poz. vai neg.

Serotips

Fāga tips

Antibiogramma

Glabātavas ID

1 S

EU012

PW

3-10-06

12:00

AB

3-10

14:00

Neg

2 L

EU023

PW

4-10

12:30

AB

4-10

14:00

Pos

Typh

DT104

ASTSu

(IDnr)

3 L

EU083

PW

8-10

16:30

AB

9-10

9:00

Pos

Agona

n.a. (5)

ASTE

(IDnr)

6.   Dalībvalstu ziņojumi

Kompetentā iestāde, kas atbild par gada ziņojuma par salmonellas novērošanu dzīvniekiem saskaņā ar Direktīvas 2003/99/EK 9. pantu, apkopo un izvērtē rezultātus un ziņo Komisijai.

Ziņojumos iekļaujamas vismaz šādas ziņas:

6.1.   Vispārīgs programmas īstenošanas apraksts

—	pētāmās populācijas apraksts, stratificējot pēc kautuvju jaudas,

—	nejaušināšanas procedūras apraksts, ieskaitot paziņošanas sistēmu,

—	aprēķinātais parauga lielums,

—	dati par varas iestādēm un laboratorijām, kas iesaistītas paraugu ievākšanā/testēšanā/tipizēšanā,

—	pētījuma vispārīgie rezultāti (bakterioloģiski un seroloģiski analizētie paraugi, pozitīvo skaits, serotips, fāga tips un antibiotiku rezistences pārbaudes).

6.2.   Pilnīgi dati par katru lopu, no kura ņemts paraugs, un attiecīgo izmeklējumu rezultāti

Dalībvalstis iesniedz izmeklēšanas rezultātus neapstrādātu datu veidā, izmantojot Komisijas doto datu vārdnīcu un datu vākšanas veidlapas. Šo vārdnīcu un veidlapas izveido Komisija:

—	norāde uz kautuvi,

—	kautuves jauda,

—	paraugu ievākšanas diena un laiks,

—	norāde uz paraugiem (piem., numurs),

—	ievākto paraugu tips: limfmezgli, kautķermeņa nomazgājums,

—	nosūtīšanas uz laboratoriju datums.

Par katru laboratorijai nosūtītu paraugu dalībvalstīs ievāc šādas ziņas:

—	laboratorijas ID (ja iesaistītas vairākas laboratorijas),

—	paraugu pārvadāšanas veids,

—	saņemšanas laboratorijā datums,

—	pārbaudot limfmezglus – parauga svars,

—	atsevišķa parauga pārbaudes rezultāti: “negatīvs” vai, ja pozitīvs uz Salmonella spp., arī “Salmonella serotipa” serotipizēšanas rezultāti vai “netipizējams”,

—	rezultāti attiecībā uz celmiem, kuriem izdarīta antimikrobiālās uzņēmības pārbaude, un/vai fāga tipa noteikšanas rezultāti.

---

(1)  Balstoties uz neierobežotu populāciju (> 100 000 gadā), lēsto izplatību 50 %, ticamības pakāpi 95 % un precizitāti attiecīgi 2, 3, 4 un 5 %.

(2)  Šim skaitlim jāatspoguļo vismaz 80 % no nokautajiem barokļiem dalībvalstī.

(3)  T. i., pētījumam paraugu ievāc no tā mēneša 19. dienā pārstrādājamā 5. kautķermeņa.

(4)  Parauga veids: L = limfmezgli, S = nomazgājums, MJ = gaļas sula.

(5)  n. p. = nav piemērojams (fāga tipizēšana tiek izdarīta tikai pēc Salmonella typhimurium un Salmonella enteritidis izolēšanas).

II PIELIKUMS

Maksimālā finansiālā līdzdalība, ko Kopiena piešķir dalībvalstīm

(EUR)
Dalībvalsts	Summa
Beļģija – BE	25 584
Čehija – CZ	25 584
Dānija – DK	48 396
Vācija – DE	86 400
Igaunija – EE	9 984
Grieķija – EL	9 984
Spānija – ES	62 400
Francija – FR	48 396
Īrija – IE	23 808
Itālija – IT	15 600
Kipra – CY	23 808
Latvija – LV	19 968
Lietuva – LT	23 808
Luksemburga – LU	9 984
Ungārija – HU	15 600
Malta – MT	9 984
Nīderlande – NL	38 412
Austrija – AT	25 584
Polija – PL	37 726
Portugāle – PT	15 600
Slovēnija – SI	23 808
Slovākija – SK	9 984
Somija – FI	9 984
Zviedrija – SE	23 808
Apvienotā Karaliste – UK	31 584
Kopā	675 778

III PIELIKUMS