PRILOG I.

Tehničke specifikacije u skladu s člankom 2.

1.   Opseg uzimanja uzoraka

Minimalni broj svinja koje su bile držane u državi članici najmanje tri prethodna mjeseca uzorkuje se nasumce u skladu s tablicom 1.

Tablica 1.

Minimalna veličina uzorka

Broj svinja prisutnih u populaciji	Minimalna veličina uzorka (1)
> 20 000 000	2 400
10 do 20 000 000	1 067
2 do 10 000 000	600
< 2 000 000	384

Države članice uzimaju 10 % više uzoraka za slučaj da neki uzorci iz različitih razloga budu isključeni iz analize.

Uzorkovanja su stratificirana po mjesecima kako bi se osigurala pokrivenost različitih sezona.

Uzorkovanje je stratificirano po klaonicama koje u njemu sudjeluju i razmjerno kapacitetu klaonice. Svaka država članica rangira klaonice prema broju svinja koje su prošle kroz klaonicu u prethodnoj godini. Tako svaka država članica utvrđuje na koje klaonice otpada najmanje 80 % svih zaklanih tovnih svinja.

Ukupan broj svinja i trupala koja se trebaju uzorkovati u svakoj klaonici obuhvaćenoj istraživanjem procjenjuje se tako da se pomnoži veličina uzorka (npr. 2 400) s udjelom tovnih svinja obrađenih u predmetnoj klaonici u prethodnoj godini. Na primjer, ako udio neke klaonice iznosi 25 % od ukupnog broja tovnih svinja zaklanih u odabranim klaonicama (koji čini najmanje 80 % od ukupnog broja tovnih svinja zaklanih u državi članici), potrebno je uzorkovati (2 400 × 0,25) 600 svinja. Ta se uzorkovanja trebaju jednakomjerno rasporediti tako da se tijekom 12 mjeseci svaki mjesec uzorkuje po 50 svinja. Sljedeći je primjer prikazan u tablici 2.

Naravno, ako klaonica više ne radi, ako se otvori novi klaonički objekt ili ako se predviđa značajna promjena u broju životinja koje će proći kroz klaonicu, procijenjeni se protok životinja prilagođava prema tome.

Tablica 2.

Ponderiranje klaonica za određivanje broja tovnih svinja koje treba uzorkovati u svakoj klaonici; izračun broja uzorkovanih životinja po klaonici

Identifikacijska oznaka klaonice	Broj tovnih svinja obrađenih prethodne godine	Postotak ukupnog broja zaklanih životinja uključen u istraživanje	Broj uzoraka po klaonici	Broj uzoraka na mjesec (/12)
AXD	88 000	17,6	0,176 × 2 400 = 422,4	422,4:12 = 36
SVH	25 000	5,0
TPB	75 000	15,0
MLG	100 000	20,0
GHT	212 000	42,4
Ukupno	500 000  (2)	100,0

Svaki se mjesec za svaku klaonicu nasumce izabere broj između 1 i 31. Ako je nasumce odabrani broj dan kada se obavlja klanje, onda se za uzorkovanje za taj mjesec odabire taj dan. Ako nije, treba nasumce odabrati novi broj. Ovaj se postupak provodi jednom mjesečno i ponavlja se onoliko puta koliko uzoraka treba uzeti u predmetnoj klaonici. Na primjer u klaonici AXD postupak se treba ponoviti najmanje 36 puta, kako bi se nasumce odabralo 36 radnih dana. Naravno, može se dogoditi da se više od jednog trupla uzorkuje isti dan.

Budući da broj životinja koje se zakolju na određeni dan može jako varirati, nasumični odabir pojedinačnih životinja provodi se u klaonici na dan koji je nasumce odabran za uzorkovanje. Na odabrani dan ukupan broj životinja je poznat i osoblje klaonice nasumce odabire truplo ili trupla koristeći se obrascem za nasumično biranje koji im je dan i koji je sastavljen uz primjenu maksimalnog broja koji je veći od mogućeg broja tovnih svinja koje će tog dana biti zaklane u bilo kojoj klaonici u državi članici.

Tablica za nasumični odabir prikazana je kao tablica 3.

Tablica 3.

Tablica za nasumični odabir

Klaonica	Dan u mjesecu	Identitet trupla (3)
AXD	19	5
	4	2
	12	124
	12	2
	8	59

Iz temeljne studije isključene su sljedeće životinje:

—	životinje žive vage manje od 50 kg i veće od 170 kg,

—	životinje podvrgnute prisilnom klanju,

—	svako truplo koje je proglašeno potpuno neprikladnim za upotrebu.

2.   Uzorci

2.1.   Uzorkovanje općenito

Prikupljaju se sljedeći uzorci:

—	zbir ileocekalnih limfnih čvorova ili najmanje pet pojedinačnih ileocekalnih limfnih čvorova od svih odabranih svinja. Po mogućnosti treba prikupiti najmanje 25 grama limfnih čvorova bez masnog i vezivnog tkiva,

—

bris uzet spužvom na četiri mjesta u skladu sa stavkom 2. točkom 3., od ukupnog broja od najmanje 384 svinje, nasumce odabrane među odabranim svinjama. Metoda uzimanja uzorka spužvom koristi se u skladu s najnovijim izdanjem norme ISO 17604. Ovo se uzorkovanje provodi u Belgiji, Češkoj, Danskoj, Francuskoj, Irskoj, Cipru, Latviji, Litvi, Austriji, Poljskoj, Sloveniji, Švedskoj i Ujedinjenoj Kraljevini,

—

uzorak mišićnog tkiva za serološko ispitivanje mesnog soka ili krvi (ako je ekvivalentna metodi ispitivanja mesnoga soka) od svih odabranih svinja. Treba uzeti dovoljno tkiva vratnog i ošitnog mišića da se dobije dovoljna količina mesnog soka kako bi se dio mogao zamrznuti i pohraniti za kasnija komparativna istraživanja. Ovo se uzorkovanje provodi u Danskoj, Njemačkoj, Francuskoj, Irskoj, Cipru, Litvi, Nizozemskoj, Sloveniji, Švedskoj i Ujedinjenoj Kraljevini.

U klaonici se vode evidencije o uzorkovanim mišićnim tkivima, vremenu i datumu uzimanja svakog uzorka i vremenu i datumu dostave, te imenima dostavljača uzoraka.

2.2.   Pojedinosti o uzorkovanju ileocekalnih limfnih čvorova

Crijevna opna (mezenterij) između slijepog crijeva (caecum) i dijela tankoga crijeva (ileum) koji je najbliži slijepom crijevu treba se rastrgnuti tako da se ileocekalni limfni čvorovi pokažu na površini otvorenog dijela. Ileocekalni limfni čvorovi se iz tako otvorenog mezenterija jednostavno „ubiru” bez noža, rukom zaštićenom rukavicom, ako se prikupljaju pojedinačni ileocekalni limfni čvorovi. Limfni čvorovi ili njihov zbir stavljaju se u plastičnu vrećicu na kojoj je naznačen datum, vrijeme, identifikacijska oznaka klaonice i identifikacijska oznaka uzorka.

2.3.   Pojedinosti o uzorkovanju trupala uzimanjem površinskih briseva

Uzorkovanje trupala provodi se nakon vađenja utrobe i prije rashlađivanja. Bris se uzima s površine od oko 100 cm2 na svakom mjestu, upotrebljavajući samo jednu abrazivnu spužvu za sva mjesta koja su dolje navedena i nabrojena u skladu s Prilogom A normi ISO 17604:

—	zadnji ud, srednji dio (9),

—	abdomen, bočni dio (trbuh, 3),

—	srednji leđni dio (sredina leđa, 4),

—	čeljusni dio (7).

Bris se uzima trljanjem, pri čemu se za dva mjesta koristi jedna strana spužve, koja se zatim preokrene za preostala dva mjesta. Pritom se treba pritisnuti dovoljno jako da se donji dio trupla malo pomakne (2 do 5 mm) od osobe koja uzima uzorak. Svako mjesto s kojeg se uzima uzorak mora se prijeći spužvom 10 puta u vertikalnom smjeru i 10 puta u horizontalnom smjeru. Ako se koriste šablone, moraju se poduzeti mjere predostrožnosti kako bi se izbjegla međusobna kontaminacija trupala.

Tijekom skladištenja i prijevoza uzorak se mora držati na najviše 7 °C. Na plastičnoj vrećici mora biti naznačen datum, vrijeme, identifikacijska oznaka klaonice i identifikacijska oznaka uzorka.

3.   Prijevoz

Uzorci se šalju u roku od 36 sati hitnom poštom ili po dostavljaču i u laboratorij ne smiju stići kasnije od 72 sata nakon uzorkovanja. Uzorci koji dođu nakon 72 sata od uzorkovanja odbacuju se, osim ako se s analizom započne u roku od 96 sati od uzorkovanja, te ako pritom hladni lanac nije bio prekinut.

4.   Analiza uzoraka

Analiza i serotipizacija obavljaju se u nacionalnom referentnom laboratoriju (NRL). U slučaju da NRL nije u mogućnosti obaviti sve analize ili ako to nije laboratorij koji rutinski obavlja detekciju, nadležno tijelo može odlučiti da za obavljanje tih analiza imenuje određeni broj drugih laboratorija koji sudjeluju u službenoj kontroli salmonele. Ti laboratoriji moraju imati dokazano iskustvo u korištenju zahtijevanih metoda detekcije, moraju imati sustav osiguranja kvalitete koji je usklađen s ISO normom 17025 i biti pod nadzorom NRL-a.

U laboratoriju se uzorci drže u hladnjaku do bakteriološkog pregleda koji se mora obaviti u roku od 24 sata nakon njihovog primitka, tako da analiza započne najkasnije 96 sati od uzimanja uzorka.

Uzorak mišićnog tkiva za serološku analizu mora se držati zamrznut do analize, koja se obavlja neposredno nakon otapanja.

4.1.   Priprema uzorka za bakteriološki pregled

Površina limfnih čvorova mora se prije analize dekontaminirati uranjanjem u apsolutni alkohol i sušenjem pomoću zraka.

Svi limfni čvorovi moraju se sakupiti i zatvoriti u jednu plastičnu vrećicu, te zdrobiti udarajući čekićem po plastičnoj vreći.

Homogenizirani limfni čvorovi se trebaju izvagati i staviti u sterilnu posudu s predgrijanom puferiranom peptonskom vodom (BPW) u razrjeđenju 1:10. Posude se inkubiraju ukupno (18 ± 2) sata na (37 ± 1) °C.

Što se tiče uzoraka briseva, u laboratoriju se za predobogaćivanje treba dodati 100 ml puferirane peptonske vode. Uzorak se inkubira na 37 °C preko noći i pregleda na salmonelu koristeći metodu s polučvrstom hranjivom podlogom po Rappaportu-Vassiladisu (MRSV) (nacrt Priloga D ISO normi 6579:2002(E)).

4.2.   Metoda otkrivanja za bakteriologiju

Upotrebljava se metoda koju preporuči Referentni laboratorij Zajednice (CRL) za bakterije salmonele u Bilthovenu u Nizozemskoj. Ova je metoda opisana u važećoj verziji nacrta Priloga D ISO normi 6579:2002: „Otkrivanje salmonele sp. u životinjskim fekalijama u uzorcima primarne faze proizvodnje”. Kod te metode MSRV se koristi kao jedina selektivna hranjiva podloga za obogaćivanje.

4.3.   Serotipizacija

Svi sojevi izolirani i potvrđeni kao salmonela sp. moraju se serotipizirati prema shemi Kaufmann-White.

Za osiguranje kvalitete u Referentni laboratorij Zajednice šalje se 16 izolata koji se mogu tipizirati i 16 izolata koji se ne mogu tipizirati. Ako se izolira manji broj sojeva, šalju se svi.

4.4.   Fagotipizacija

U slučaju da se fagotipiziraju izolati Salmonella serovar Typhimurium i Salmonella serovar Enteritidis (neobavezno) koriste se metode koje je opisao referentni centar za fagotipizaciju salmonele WHO-ove Agencije za zaštitu zdravlja, Colindale, Ujedinjena Kraljevina.

4.5.   Ispitivanje antimikrobne osjetljivosti

U slučaju ispitivanja antimikrobne osjetljivosti (neobavezno) mora se koristiti validirana i kontrolirana ispitna metoda kao što su one koje je preporučio Nacionalni odbor za kliničke laboratorijske standarde (NCCLS, od 1. siječnja 2005.: „Institut za kliničke i laboratorijske standarde” – CLSI).

Prihvatljive su i metoda difuzije u agaru i metoda razrjeđenja u bujonu. Rezultati se javljaju kao kvantitativni podaci (minimalna inhibicijska koncentracija (MIC) za metode razrjeđivanja i promjer zone inhibicije za metode difuzije) i kao kvalitativni podaci (omjer otpornih izolata). Kvalitativni podaci temelje se na tumačenju prema epidemiološkim graničnim normalnim vrijednostima koje je predstavio Europski odbor za testiranje antimikrobne osjetljivosti (EUCAST) na: http://www.eucast.org.

Izolati se testiraju na osjetljivost na dolje navedene antimikrobne tvari:

—	ampicilin ili amoksicilin,

—	tetraciklin,

—	kloramfenikol,

—	florfenikol,

—	nalidiksična kiselina,

—	ciprofloksacin (poželjno) ili enrofloksacin,

—	sulfonamid (poželjno sulfametoksazol),

—	sulfonamid/trimetoprim ili trimetoprim,

—	gentamicin,

—	streptomicin,

—	kanamicin (poželjno) ili neomicin,

—	3. generacija cefalosporina (poželjno cefotaksim),

—	kolistin (neobavezno).

Prije početka istraživanja državama članicama se preporučuje da organiziraju osposobljavanje za uključene stranke.

5.   Zapisi i pohranjivanje uzoraka

Za sve obrađene uzorke vodi se evidencija o bakteriološkim ispitivanjima, u formatu koji je jednak ili sličan formatu iz tablice 4.

Svi izolirani sojevi pohranjuju se u nacionalnim referentnim laboratorijima (NRL) različitih država članica pod uvjetom da osiguravaju cjelovitost sojeva najmanje pet godina.

insert missing txt

Tablica 4.

Primjer zapisa koje treba napraviti za sve obrađene uzorke

Uzorak

Zaprimljen

Analiza

Oznaka uuzorka + tip (4)

Oznaka klaonice

Naziv

Datum

Vrijeme

Naziv

Datum

Vrijeme

Pozitivan ili negativan

Serovar

Fagotip

Antibiogram

Identifikacijska oznaka skladišta

1 B

EU012

PW

3-10-06

12.00

AB

3-10

14.00

Neg

2 L

EU023

PW

4-10

12.30

AB

4-10

14.00

Poz

Typh

DT104

ASTSu

(Ozn.br.)

3 L

EU083

PW

8-10

16.30

AB

9-10

9.00

Poz

Agona

n.str. (5)

ASTE

(Ozn.br.)

6.   Izvještavanje iz država članica

Nadležno tijelo odgovorno za pripremu godišnjeg nacionalnog izvještaja o praćenju Salmonella kod životinja u skladu s člankom 9. Direktive 2003/99/EZ prikuplja i ocjenjuje rezultate te izvještava Komisiju.

Izvještaji moraju sadržavati najmanje sljedeće podatke:

6.1.   Ukupni opis primjene programa

—	opis populacije koja se istražuje stratificiran prema kapacitetu klaonica,

—	opis postupka nasumičnog odabira, uključujući sustav obavješćivanja,

—	izračunatu veličinu uzorka,

—	pojedinosti o tijelima i laboratorijima koji su uključeni u uzorkovanje/testiranje/tipiziranje,

—	sveukupne rezultate istraživanja (bakteriološki i serološki analizirani uzorci, broj pozitivnih uzoraka, serovar, fagotip i testiranje otpornosti na antibiotike).

6.2.   Potpuni podaci o svakoj uzorkovanoj životinji i odgovarajući rezultati testiranja:

Države članice dostavljaju rezultate istraživanja u obliku neobrađenih podataka koristeći katalog podataka i obrasce za prikupljanje podataka koje osigurava Komisija. Katalog i obrasce sastavlja Komisija:

—	uputa na klaonicu,

—	kapacitet klaonice,

—	datum i vrijeme uzorkovanja,

—	uputa na uzorke (npr. broj),

—	vrsta uzetih uzoraka: limfni čvorovi, bris trupla,

—	datum otpreme u laboratorij.

Sljedeći se podaci prikupljaju u državama članicama za svaki uzorak poslan u laboratorij:

—	identifikacijska oznaka laboratorija (u slučaju da sudjeluje više laboratorija),

—	prijevozno sredstvo za uzorke,

—	datum primitka u laboratoriju,

—	kad se ispituju limfni čvorovi, masa uzoraka,

—	rezultat ispitivanja pojedinačnog uzorka: „negativan” ili, u slučaju pozitivnog rezultata ispitivanja na salmonelu sp., isto tako rezultati serotipizacije „serovar Salmonella” ili „netipiziran”,

—	rezultati za sojeve testirane na osjetljivost na antibiotike i/ili rezultati fagotipizacije.

---

(1)  Na osnovi beskonačne populacije (> 100 000 godišnje), procijenjene raširenosti od 50 %, razine pouzdanosti od 95 % i točnosti od 2, 3, 4, odnosno 5 %.

(2)  Ovaj broj treba predstavljati najmanje 80 % od broja zaklanih tovnih svinja u državi članici.

(3)  Tj. peto truplo koje će se obraditi 19. dan u mjesecu treba se uzorkovati za istraživanje.

(4)  Tip uzorka: L = limfni čvorovi, B = bris, MS = mesni sok

(5)  n.p. = ne primjenjuje se (fagotipizacija se radi samo nakon izolacije Salmonella Typhimurium i Salmonella Enteritidis).

PRILOG II.

Maksimalni iznos financijske potpore Zajednice državama članicama

(EUR)
Država članica	Iznos
Belgija – BE	25 584
Češka – CZ	25 584
Danska – DK	48 396
Njemačka – DE	86 400
Estonija – EE	9 984
Grčka – EL	9 984
Španjolska – ES	62 400
Francuska – FR	48 396
Irska – IE	23 808
Italija – IT	15 600
Cipar – CY	23 808
Latvija – LV	19 968
Litva – LT	23 808
Luksemburg – LU	9 984
Mađarska – HU	15 600
Malta – MT	9 984
Nizozemska – NL	38 412
Austrija – AT	25 584
Poljska – PL	37 726
Portugal – PT	15 600
Slovenija – SI	23 808
Slovačka – SK	9 984
Finska – FI	9 984
Švedska – SE	23 808
Ujedinjena Kraljevina – UK	31 584
Ukupno	675 778

PRILOG III.

Ovjereni financijski izvještaj o provođenju temeljnog istraživanja o raširenosti salmonele sp. kod stada tovnih svinja

Razdoblje obuhvaćeno izvještajem: … do …

Izjava o troškovima nastalim tijekom istraživanja, koji ispunjavaju uvjete za financijski doprinos Zajednice:

Referentni broj odluke Komisije kojom se predviđa financijska pomoć Zajednice: …

…

Troškovi nastali u vezi s	Broj testova	Ukupni troškovi testiranja nastali tijekom razdoblja obuhvaćenog izvještajem (nacionalna valuta)
bakteriološkim testiranjem na salmonelu sp.
serotipizacijom izolata salmonele
serološkim ispitivanjem mesnog soka

Izjava korisnika

Potvrđujemo da:

—	su gore navedeni troškovi stvarni i da su nastali pri obavljanju zadataka predviđenih ovom Odlukom, te da su bili neophodni za pravilno obavljanje tih zadataka,

—	je sva dokazna dokumentacija o troškovima raspoloživa za reviziju.

Datum: …

Financijski odgovorna osoba: …

Potpis: …