BILAG I

Tekniske specifikationer, jf. artikel 2

1.   Prøveudtagning

Der udtages randomiserede stikprøver af svin, der er blevet holdt i mindst de 3 forudgående måneder i medlemsstaten, i et minimumsantal, der fremgår af skema 1.

Skema 1

Mindste antal stikprøver

Antal svin i populationen	Mindste antal stikprøver (1)
> 20 000 000	2 400
10 000 000 til 20 000 000	1 067
2 000 000 til 10 000 000	600
< 2 000 000	384

Medlemsstaterne udtager yderligere 10 % ekstra prøver, der skal analyseres, hvis nogle af prøverne af en eller anden årsag udelukkes fra undersøgelsen.

Prøveudtagningen stratificeres pr. måned for at sikre, at de forskellige årstider er dækket.

Prøveudtagningen stratificeres pr. deltagende slagteri og proportionalt med slagterikapaciteten. De enkelte medlemsstater opstiller alle slagterier i størrelsesorden efter antal slagtede svin i det foregående år. De enkelte medlemsstater skal på den måde kortlægge, hvilke slagterier der har stået for mindst 80 % af alle slagtede slagtesvin.

Der beregnes et overslag over det samlede antal svin og slagtekroppe, der skal udtages prøver af på hvert af de slagterier, der indgår i undersøgelsen, ved at gange antallet af stikprøver (f.eks. 2 400) med andelen af behandlede slagtesvin i det foregående år. Hvis et slagteri f.eks. stod for 25 % af svineslagtningerne i de udvalgte slagterier (dvs. dem, der repræsenterer mindst 80 % af alle slagtesvin, der slagtes i den pågældende medlemsstat), skal der udtages prøver af 600 svin (= 2 400 × 0,25). Dette antal deles ligeligt, så der udtages prøver af 50 svin pr. måned i 12 måneder, jf. eksemplet i skema 2.

Hvis et slagteri ikke længere er i drift, hvis der er åbnet et nyt slagteri, eller hvis man forventer en betydelig ændring i anlæggets kapacitet i undersøgelsesperioden, justeres den skønnede kapacitet naturligvis i overensstemmelse hermed.

Skema 2

Vægtning af slagterier med henblik på fordeling af, hvor mange slagtesvin der skal udtages prøver af på de enkelte slagterier; beregning af antal dyr, der udtages prøver af, pr. slagteri

Slagteri-id	Antal slagtesvin behandlet året før	Procentandel af det samlede antal slagtede dyr omfattet af undersøgelsen	Antal prøver pr. kategori	Prøver pr. måned (/12)
AXD	88 000	17,6	0,176 × 2 400 = 422,4	422,4:12 = 36
SVH	25 000	5,0
TPB	75 000	15,0
MLG	100 000	20,0
GHT	212 000	42,4
I alt	500 000 (2)	100,0

For hvert slagteri udtrækkes der hver måned et tilfældigt tal fra 1 til 31. Hvis det tilfældigt valgte tal er en slagtedag i den pågældende måned, vælges den pågældende dag som prøveudtagningsdag. Hvis det ikke er en slagtedag, udtrækkes et nyt tilfældigt tal. Denne procedure gennemføres en gang om måneden og gentages lige så mange gange, som der er prøver, der skal udtages på slagteriet. F.eks. gentages proceduren for slagteriet AXF mindst 36 gange med henblik på at finde mindst 36 tilfældigt valgte arbejdsdage. Det kan naturligvis forekomme, at der skal tages prøver af mere end 1 slagtekrop pr. dag.

Da antallet af dyr, der slagtes på en given dag, kan variere særdeles meget, foretages den randomiserede udvælgelse af det enkelte dyr på slagteriet på den dag, der er tilfældigt valgt til prøveudtagning. På den pågældende dag kender man det samlede antal dyr, og slagteriet skal da vælge en slagtekrop eller slagtekroppe ved hjælp af et randomiseringsskema, som de har fået udleveret, og som er genereret ved at anvende et maksimumsantal, der overstiger det højest mulige antal slagtesvin, der slagtes på en dag på et slagteri i medlemsstaten.

Et randomiseringsskema kan se ud som vist i skema 3.

Skema 3

Randomiseringsskema

Slagteri	Dag i måneden	Slagtekrops identitet (3)
AXD	19	5
	4	2
	12	124
	12	2
	8	59

Følgende dyr er udelukket fra at deltage i referenceundersøgelsen:

—	dyr på under 50 kg levende vægt eller på over 170 kg levende vægt

—	dyr, der er nødslagtede

—	slagtekroppe, der er helt kasseret.

2.   Prøver

2.1.   Prøveudtagning generelt

Der udtages følgende prøver:

—	en samleprøve af ileocækale lymfeknuder eller mindst 5 enkeltprøver af ileocækale lymfeknuder fra alle udvalgte svin. Om muligt tages mindst 25 g lymfeknuder uden fedt eller bindevæv

—

svaberprøver fra 4 steder, jf. punkt 2.3, pr. slagtekrop fra i alt mindst 384 svin, der udvælges tilfældigt blandt de udvalgte svin. Svaberprøvemetoden anvendes i overensstemmelse med seneste udgave af standard ISO 17604. Denne prøveudtagning foretages af Belgien, Tjekkiet, Danmark, Frankrig, Irland, Cypern, Letland, Litauen, Østrig, Polen, Slovenien, Sverige og Det Forenede Kongerige

—

en muskelprøve til serologisk undersøgelse af kødsaft eller blod (hvis metoden svarer til metoden vedrørende kødsaft) fra alle udvalgte svin. Der tages tilstrækkeligt muskelvæv fra hals eller mellemgulv til, at man får kødsaft nok til, at der kan nedfryses en portion til opbevaring med henblik på senere sammenlignende undersøgelser. Denne prøveudtagning foretages af Danmark, Tyskland, Frankrig, Irland, Cypern, Litauen, Nederlandene, Slovenien, Sverige og Det Forenede Kongerige.

På slagteriet opbevares optegnelser vedrørende den muskel, der er udtaget prøver af, klokkeslæt og dato for udtagning af de enkelte prøver samt klokkeslæt og dato for afsendelsen af prøverne og navnet på kurervirksomheden.

2.2.   Nærmere beskrivelse af udtagning af prøver af ileocækale lymfeknuder

Mesenteriet mellem cæcum og den del af ileum, der er tættest på cæcum, rives åbent, og de ileocækale lymfeknuder viser sig på overfladen af det iturevne sted. Hvis der tages individuelle lymfeknuder, tages de uden videre fra det åbnede mesenterium uden brug af kniv, men med handsker. Lymfeknuderne eller samleprøven anbringes i en plasticpose, der mærkes med dato, klokkeslæt, slagteriets identifikationsnummer og prøvens identifikationskode.

2.3.   Nærmere beskrivelse af udtagning af svaberprøver af overflader

Prøverne tages fra slagtekroppen, efter at organerne er udtaget, og inden køling. Et overfladeareal på ca. 100 cm2 pr. sted afsvabres ved hjælp af én enkelt svaber med ru overflade, der også anvendes til alle nedennævnte steder (antallet er også angivet) i overensstemmelse med bilag A til standard ISO 17604:

—	indersiden af skinken (9)

—	siden af abdomen (bryst) (3)

—	midten af ryggen (4)

—

kæbe (7).

To steder afsvabres med den ene side af svaberen, som derefter vendes og anvendes til de 2 resterende steder. Der gnides hårdt frem og tilbage. Der trykkes så hårdt, at den nederste del af slagtekroppen svinger lidt (2-5 mm) væk fra den, der udtager prøverne. Svaberen gnides hen over det enkelte prøveudtagningssted i alt ca. 10 gange lodret og 10 gange vandret. Hvis der anvendes skabeloner, skal der træffes forholdsregler, så krydskontaminering mellem slagtekroppene undgås.

Prøven opbevares ved maks. 7 °C under opbevaring og transport. Plasticposen mærkes med dato, klokkeslæt, slagteriets identifikationsnummer og prøvens identifikationskode.

3.   Transport

Prøverne sendes ekspres eller med kurer højst 36 timer efter prøveudtagningen og skal være laboratoriet i hænde senest 72 timer efter prøveudtagningen. Prøver, der ankommer mere end 72 timer efter prøveudtagningen kasseres, medmindre analysen påbegyndes senest 96 timer efter prøveudtagningen, og forudsat at kølekæden ikke er blevet brudt.

4.   Analyse af prøver

Analyse og serotypning foretages på det nationale referencelaboratorium. Hvis det nationale referencelaboratorium ikke råder over den nødvendige kapacitet til at foretage alle analyserne, eller hvis det ikke er referencelaboratoriet, der rutinemæssigt foretager påvisning, kan de kompetente myndigheder dog beslutte at udpege et begrænset antal andre laboratorier, som tager del i den offentlige salmonellakontrol, til at foretage analyserne. Disse laboratorier bør have dokumenteret erfaring med anvendelse af den krævede påvisningsmetode, de bør have etableret et kvalitetssikringssystem, som er i overensstemmelse med ISO 17025-standarden, og de bør arbejde under det nationale referencelaboratoriums tilsyn.

På laboratoriet opbevares prøverne nedkølet, indtil den bakteriologiske undersøgelse, som skal foretages senest 24 timer efter modtagelsen, og således at analysen påbegyndes senest 96 timer efter prøveudtagningen.

Muskelprøver til serologisk undersøgelse opbevares nedfrosset indtil analysen, som skal gennemføres straks efter optøning.

4.1.   Forberedelse af prøver til bakteriologisk undersøgelse

Lymfeknuder dekontamineres på overfladen inden analysen, ved at de nedsænkes i ren alkohol og derefter lufttørres.

Alle lymfeknuder samles i en plasticpose, der lukkes, og som man slår på med en hammer eller lignende og dermed knuser lymfeknuderne.

De homogeniserede lymfeknuder vejes og anbringes i en steril beholder med opvarmet »buffered« peptonvand (BPW) i en fortynding på 1:10. Beholderne inkuberes i alt i (18 ± 2) timer ved (37 ± 1) °C.

Hvad angår svaberprøverne tilsættes de på laboratoriet 100 ml BPW som berigelsesmedium. Prøven inkuberes ved 37 °C natten over og undersøges for salmonella ved anvendelse af et halvfast medium (modified semi-solid Rappaport-Vassiladis medium (MRSV) method) (jf. forslag til bilag D i ISO 6579:2002(E)).

4.2.   Bakteriologisk påvisningsmetode

Den metode, der anbefales af EF-referencelaboratoriet for salmonella i Bilthoven, Nederlandene, skal anvendes. Metoden er beskrevet i den aktuelle udgave af forslag til bilag D til ISO 6579:2002: »Bestemmelse af Salmonella spp. i dyrefæces og i prøver fra primærproduktionsleddet«. Ved denne metode anvendes MSRV som eneste selektive berigelsesmedium.

4.3.   Serotypning

Alle stammer, der er isoleret og bekræftet som værende Salmonella spp., serotypebestemmes efter Kaufmann-White-skemaet.

Som led i kvalitetssikringen sendes 16 af de typbare stammer og 16 af de ikke-typbare isolater til EF-referencelaboratoriet. Hvis der er isoleret færre stammer, sendes alle.

4.4.   Fagtypning

Hvis der foretages fagtypning af isolater af Salmonella serovar typhimurium og Salmonella serovar enteritidis (fakultativt), anvendes de metoder, der er beskrevet af WHO's referencecenter for fagtypning af Salmonella under Health Protection Agency (HPA), Colindale, Det Forenede Kongerige.

4.5.   Testning for antimikrobiel følsomhed

Ved testning for antimikrobiel følsomhed (fakultativt) skal der anvendes en valideret og kontrolleret testmetode, f.eks. en af dem, der anbefales af National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, siden den 1. januar 2005: »Clinical and Laboratory Standards Institute« — CLSI).

Såvel agar-diffusionsmetoder som bouillonfortyndingsmetoder kan accepteres. Resultaterne indberettes både som kvantitative data (MIC-værdi for fortyndingsmetoder og hæmningszonediameter for diffusionsmetoder) og som kvalitative data (andel af resistente isolater). De kvalitative data skal baseres på en fortolkning i overensstemmelse med epidemiologiske cut-off-værdier som fremlagt af European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) på http://www.eucast.org.

Isolaterne testes for modtagelighed for nedenstående antimikrobielle stoffer:

—	Ampicillin eller amoxicillin

—	Tetracyklin

—	Chloramphenicol

—	Florfenicol

—	Nalidixinsyre

—	Ciprofloxacin (helst) eller enrofloxacin

—	Sulfonamid (helst sulfametoxazol)

—	Sulfonamid/trimethoprim eller trimethoprim

—	Gentamicin

—	Streptomycin

—	Kanamycin (helst) eller neomycin

—	Tredjegenerations-cephalosporin (helst cefotaxim)

—	Colistin (fakultativ)

Medlemsstaterne opfordres til at arrangere uddannelse for de involverede parter, inden undersøgelsen påbegyndes.

5.   Opbevaring af optegnelser og prøver

Optegnelser om bakteriologiske undersøgelser vedrørende alle behandlede prøver opbevares i et format, der ligner eller svarer til eksemplet i skema 4.

Alle isolerede stammer opbevares på det nationale referencelaboratorium, under forudsætning af at det sikrer, at stammerne forbliver intakte i mindst 5 år.

Alle kødsaftprøver til serologisk undersøgelse opbevares frosset i 2 år.

Skema 4

Eksempel på optegnelser, der skal laves for alle behandlede prøver

Prøve

Modtagelse

Analyse

Prøve-id + type (4)

Slagteri-id

Navn

Dato

Klokkeslæt

Navn

Dato

Klokkeslæt

Pos. eller neg.

Serovar

Fagtype

Antibiogram

Opbevarings-id

1 S

EU012

PW

3-10-06

12:00

AB

3-10

14:00

Neg

2 L

EU023

PW

4-10

12:30

AB

4-10

14:00

Pos

Typh

DT104

ASTSu

(IDnr)

3 L

EU083

PW

8-10

16:30

AB

9-10

9:00

Pos

Agona

i.r. (5)

ASTE

(IDnr)

6.   Rapportering fra medlemsstaterne

Den kompetente myndighed med ansvar for udarbejdelse af den årlige nationale rapport om overvågningen af salmonella hos dyr, jf. artikel 9 i direktiv 2003/99/EF, indsamler og evaluerer resultaterne og meddeler Kommissionen resultatet af denne evaluering.

Rapporterne skal mindst indeholde følgende oplysninger:

6.1.   Overordnet beskrivelse af programmets gennemførelse

—	beskrivelse af den undersøgte population, stratificeret efter slagterikapacitet

—	beskrivelse af randomiseringsprocedure, herunder indberetningssystem

—	beregnet antal stikprøver

—	nærmere oplysninger om myndigheder og laboratorier, der har deltaget i prøveudtagning/testning/typning

—	de overordnede resultater af undersøgelsen (bakteriologiske og serologiske undersøgelser af prøver, antal positive prøver, serovar, fagtype og test af antibiotikaresistens).

6.2.   Fuldstændige oplysninger om hvert dyr, der er udtaget prøver på/af, og resultaterne af de gennemførte analyser

Medlemsstaterne forelægger resultaterne af undersøgelsen i form af rådata ved anvendelse af en dataordbog og dataindsamlingsskemaer, som Kommissionen har udleveret. Dataordbogen og skemaerne udarbejdes af Kommissionen.

—	identifikation af slagteriet

—	slagteriets kapacitet

—	dato og klokkeslæt for prøveudtagning

—	identifikation af prøverne (f.eks. nummer)

—	prøvetype: lymfeknuder, svaberprøve af slagtekrop

—	dato for afsendelse til laboratoriet.

Følgende oplysninger indsamles i medlemsstaterne for hver prøve, der sendes til laboratoriet:

—	identifikation af laboratoriet (hvis mere end ét laboratorium er involveret)

—	transportmiddel, der er anvendt til prøverne

—	dato for modtagelse på laboratoriet

—	prøvematerialets vægt, når det drejer sig om analyse af lymfeknuder

—	resultat for den enkelte analyserede prøve: »negativ« eller, hvis den er positiv for Salmonella spp., også resultaterne af serotypebestemmelsen »Salmonella serovar« eller »ikke-typbar«

—	resultater for stammer testet for antimikrobiel følsomhed og/eller resultater af fagtypning.

---

(1)  På basis af en uendelig population (> 100 000 pr. år), en skønnet prævalens på 50 %, et konfidensniveau på 95 % og en nøjagtighed på henholdsvis 2, 3, 4 og 5 %.

(2)  Dette antal bør repræsentere mindst 80 % af antallet af slagtede slagtesvin i en medlemsstat.

(3)  Dvs. at der til undersøgelsen bør udtages prøver af den 5. slagtekrop, der behandles den 19. dag i den pågældende måned.

(4)  Prøvetype L = lymfeknuder, S = svaberprøve, MJ = kødsaft.

(5)  i.r. = ikke relevant (fagtypning foretages kun efter isolation af Salmonella typhimurium og Salmonella enteritidis).

BILAG II

Maksimalt EF-tilskud til medlemsstaterne

(EUR)
Medlemsstat	Beløb
Belgien — BE	25 584
Tjekkiet — CZ	25 584
Danmark — DK	48 396
Tyskland — DE	86 400
Estland — EE	9 984
Grækenland — EL	9 984
Spanien — ES	62 400
Frankrig — FR	48 396
Irland — IE	23 808
Italien — IT	15 600
Cypern — CY	23 808
Letland — LV	19 968
Litauen — LT	23 808
Luxembourg — LU	9 984
Ungarn — HU	15 600
Malta — MT	9 984
Nederlandene — NL	38 412
Østrig — AT	25 584
Polen — PL	37 726
Portugal — PT	15 600
Slovenien — SI	23 808
Slovakiet — SK	9 984
Finland — FI	9 984
Sverige — SE	23 808
Det Forenede Kongerige — UK	31 584
I alt	675 778

BILAG III