“ANNESS C

BRUĊELLOŻI

1.   IDENTIFIKAZZJONI TAL-AĠENT

Id-dimostrazzjoni permezz ta’ tbajja’ aċidu-reżistenti jew immunospeċifiċi ta’ organiżmi bil-morfoloġija tal-Brucella fil-materjal tal-abort, fit-tnixxijat vaġinali jew fil-ħalib tagħti evidenza preżuntiva ta’ bruċellożi, speċjalment jekk tkun sostnuta minn testijiet seroloġiċi. Il-metodi ta’ reazzjoni katina tal-polimerażi (PCR) jipprovdu mezzi addizzjonali ta’ sejbien.

Fejn ikun possibbli, il-Brucella spp. għandha tiġi iżolata billi jintużaw mezzi komuni jew selettivi skont il-kultura minn tnixxijat uterini, feti abortiti, tnixxijat tal-glandola mammarja jew tessuti magħżula, bħal glandoli limfatiċi u organi riproduttivi maskili u femminili.

Wara l-iżolament, l-ispeċi u l-bijovarjanti għandhom jiġu identifikati mil-lisi faġika u/jew testijiet ta’ metaboliżmu ossidativ, kriterji kulturali, bijokimiċi u seroloġiċi. Il-PCR tista’ tipprovdi kemm metodu komplementari kif ukoll dak bijotipiku bbażati fuq sekwenzi ġenomiċi speċifiċi.

It-tekniki u l-mezzi użati, l-istandardizzazzjoni u l-interpretazzjoni tagħhom tar-riżultati għandhom jikkonformaw ma’ dak speċifikat fil-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008, il-Kapitolu 2.4.3. (bruċellożi bovina), il-Kapitolu 2.7.2 (bruċellożi kaprina u ovina) u l-Kapitolu 2.8.5 (bruċellożi tal-ħnieżer).

2.   TESTIJIET IMMUNOLOĠIĊI

2.1.   Standards

2.1.1.   Ir-razza Nru 99 ta’ Weybridge jew ir-razza 1119-3 tal-USDA tal-bijovarjanti 1 tal-Brucella abortus għandhom jintużaw għall-preparazzjoni tal-antiġeni kollha użati fit-test rose Bengal (RBT), fit-test ta’ agglutinazzjoni tas-serum (SAT), fit-test tal-fissazzjoni kumplimentari (CFT) u fit-test taċ-ċirku fuq il-ħalib (MRT).

2.1.2.   Is-serum standard ta’ referenza għat-testijiet RBT, SAT, CFT u MRT għandu jkun is-serum standard ta’ referenza (OIEISS) qabel imsejjaħ it-tieni serum internazzjonali standard anti-Brucella abortus tal-WHO (ISAbS).

2.1.3.   Is-sjeri ta’ referenza standard għal analiżijiet ta’ immunoassorbiment enzimatiċi (ELISAs) għandhom ikunu:

—

l-OIEISS,

—	is-serum standard ELISA pożittiv b’mod dgħajjef tal-OIE (OIEELISAWPSS),

—	is-serum standard ELISA pożittiv b’mod qawwi tal-OIE (OIEELISASPSS),

—	is-serum standard ELISA negattiv tal-OIE (OIEELISANSS).

2.1.4.   Is-sjeri ta’ referenza standard għal analiżijiet bi fluworexxenza polarizzata (FPAs) għandhom ikunu:

—	is-serum standard ELISA pożittiv b’mod dgħajjef tal-OIE (OIEELISAWPSS),

—	is-serum standard ELISA pożittiv b’mod qawwi tal-OIE (OIEELISASPSS),

—	is-serum standard ELISA negattiv tal-OIE (OIEELISANSS).

2.1.5.   Is-sjeri standard imniżżla fil-punti 2.1.3 u 2.1.4 huma disponibbli mil-laboratorju ta’ referenza Komunitarju għall-bruċellożi jew mill-Veterinary Laboratories Agency (VLA), Weybridge, ir-Renju Unit.

2.1.6.   L-OIEISS, l-OIEELISAWPSS„ l-OIEELISASPSS u l-OIEELISANSS huma standards primarji internazzjonali li minnhom l-istandards nazzjonali ta’ referenza sekondarji tas-sjeri (‘standards ta’ ħidma’) għandhom jiġu stabbiliti għal kull test imsemmi fil-punt 2.1.1 f’kull Stat Membru.

2.2.   Analiżijiet ta’ immuno-assorbiment enzimatiċi (ELISAs) jew analiżijiet oħra ta’ agglutinazzjoni għas-sejbien ta’ bruċellożi bovina fis-serum jew fil-ħalib.

2.2.1.   Materjali u reaġenti

It-teknika użata u l-interpretazzjoni tar-riżultati għandhom ikunu ġew validati skont il-prinċipji stabbiliti fil-Kapitolu 1.1.4 tal-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008, u għandha tinkludi għall-inqas studji djanjostiċi u tal-laboratorju.

2.2.2.   Standardizzazzjoni tat-test

2.2.2.1.   Standardizzazzjoni tal-proċedura tat-test għal kampjuni individwali tas-serum:

(a)	predilwizzjoni ta’ 1/150 (1) tal-OIEISS jew predilwizzjoni ta’ 1/2 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/16 tal-OIEELISASPSS magħmula b’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) għandha tagħti reazzjoni pożittiva;

(b)	predilwizzjoni ta’ 1/600 tal-OIEISS jew predilwizzjoni ta’ 1/8 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/64 tal-OIEELISASPSS magħmula f’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) għandha tagħti reazzjoni negattiva;

(ċ)	l-OIEELISANSS għandha dejjem tagħti reazzjoni negattiva.

2.2.2.2.   Standardizzazzjoni tal-proċedura tat-test tat-taħlit ta’ kampjuni tas-serum:

(a)

predilwizzjoni ta’ 1/150 tal-OIEISS jew predilwizzjoni ta’ 1/2 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/16 tal-OIEELISASPSS magħmula f’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) u dilwita mill-ġdid ma’ seri negattivi għal numru ta’ drabi daqs dak tal-kampjuni li jagħmlu t-taħlita għandha tagħti reazzjoni pożittiva;

(b)	l-OIEELISANSS għandha dejjem tagħti reazzjoni negattiva;

(ċ)	it-test għandu jkun adegwat biex isib evidenza ta’ infezzjoni f’annimal wieħed mill-grupp ta’ annimali, li l-kampjuni tagħhom tas-serum kienu ġew imħallta.

2.2.2.3.   Standardizzazzjoni tal-proċedura tat-test għal ħalib imħallat jew ta’ xorrox:

(a)	predilwizzjoni ta’ 1/1 000 tal-OIEISS jew predilwizzjoni ta’ 1/16 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/125 tal-OIEELISASPSS magħmula f’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) u dilwita mill-ġdid għal 1/10 f’ħalib negattiv għandha tagħti reazzjoni pożittiva;

(b)	l-OIEELISANSS dilwita għal 1/10 f’ħalib negattiv għandha dejjem tagħti reazzjoni negattiva;

(ċ)	it-test għandu jkun adegwat biex isib l-infezzjoni f’annimal wieħed mill-grupp ta’ annimali, li l-kampjuni tal-ħalib u tax-xorrox tagħhom ikunu ġew imħallta.

2.2.3.   Kundizzjonijiet għall-użu tal-ELISAs għad-dijanjożi tal-bruċellożi bovina:

2.2.3.1.   Fl-użu tal-kundizzjonijiet ta’ kalibrazzjoni għall-ELISAs stabbiliti fil-punti 2.2.2.1 u 2.2.2.2 fuq il-kampjuni tas-serum, is-sensittivita’ dijanjostika tal-ELISA għandha tkun daqs jew akbar mir-RBT jew CFT filwaqt li titqies is-sitwazzjoni epidemjoloġika li fiha tiġi użata.

2.2.3.2.   Fl-użu tal-kundizzjonijiet ta’ kalibrazzjoni għall-ELISA stabbiliti fil-punt 2.2.2.3 fuq it-taħlita ta’ kampjuni tal-ħalib, is-sensittivita’ dijanjostika tal-ELISA għandha tkun daqs jew akbar mill-MRT filwaqt li titiqies mhux biss is-sitwazzjoni epidemjoloġika iżda wkoll is-sistemi ta’ trobbija medji u estremi mistennija.

2.2.3.3.   Meta l-ELISAs jintużaw għall-għanijiet ta’ ċertifikazzjoni skont l-Artikolu 6(1) jew għall-istabbiliment jew iż-żamma tal-istatus ta’ merħla skont l-Anness A(II)(10), it-taħlit tal-kampjuni tas-serum għandu jsir b’tali mod li r-riżultati tat-test ikunu jistgħu jiġu bla dubju relatati mal-annimali individwali inklużi fit-taħlita. Kull test ta’ konferma għandu jsir fuq il-kampjuni ta’ serum meħuda mill-annimali individwali.

2.2.3.4.   L-ELISAs jistgħu jintużaw fuq kampjun ta’ ħalib meħud mill-ħalib miġbur minn razzett b’għall-inqas 30 % tal-baqar tal-ħalib ikollhom il-ħalib. Jekk jintuża dan il-metodu, għandhom jittieħdu miżuri biex jiġi żgurat li l-kampjuni meħuda għall-eżaminazzjoni jistgħu jiġu mingħajr dubju relatati mal-annimali individwali li minnhom ikun oriġina l-ħalib. Kull test ta’ konferma għandu jsir fuq kampjuni ta’ serum meħuda mill-annimali individwali.

2.3.   Test ta’ fissazzjoni kumplimentari (CFT)

2.3.1.   L-antiġenu jirrappreżenta sospensjoni ta’ batterji f’soluzzjoni fenol-salina (NaCl 0.85 % (m/v) u fenol b’0.5 % (v/v)) jew f’ilqugħ veronali. L-antiġeni jistgħu jitwasslu fl-istat konċentrat sakemm il-fattur ta’ dilwizzjoni li għandu jintuża jiġi indikat fuq it-tikketta tal-flixkun. L-antiġenu għandu jinħażen f’4 °C u mhux iffriżat.

2.3.2.   Is-seri għandhom jiġu inattivati kif ġej:

—	serum tal-bovini: 56 sa 60 °C għal 30 sa 50 minuta,

—	serum tal-ħnieżer: 60 °C għal 30 sa 50 minuta.

2.3.3.   Sabiex issir ir-reazzjoni ġenwina fil-proċedura tat-test, għandha tintuża doża kumplimentari ogħla mill-minimu meħtieġ għal emoliżi totali.

2.3.4.   Sabiex isir it-test ta’ fissazzjoni kumplimentari, il-kontrolli li ġejjin għandhom isiru kull darba:

(a)	kontroll tal-effett antikumplimentari tas-serum;

(b)	kontroll tal-antiġenu;

(ċ)	kontroll taċ-ċelluli ħomor tad-demm issensibilizzati;

(d)	kontroll tal-komplement;

(e)	kontroll bl-użu ta’ serum pożittiv ta’ sensittività fil-bidu tar-reazzjoni;

(f)	kontroll tal-ispeċifiċità tar-reazzjoni bl-użu ta’ serum negattiv.

2.3.5.   Kalkolu tar-riżultati

L-OIEISS fih 1 000 unità internazzjonali ta’ CFT (ICFTU) għal kull ml. Jekk l-OIEISS jiġi ttestjat b’metodu partikolari r-riżultat jingħata bħala titrazzjoni (jiġifieri l-ogħla dilwizzjoni diretta tal-OIEISS li tagħti 50 % ta’ emoliżi, TOIEISS). Ir-riżultat tat-test għall-kampjun tas-serum mogħti bħala titrazzjoni (TTESTSERUM) għandu jiġi espress f’ICFTU għal kull ml. Biex tiġi konvertita l-espressjoni ta’ titrazzjoni f’ICFTU, il-fattur (F) meħtieġ għall-konverżjoni ta’ titrazzjoni tal-kampjun tas-serum mhux magħruf (TTESTSERUM) ittestjat b’dak il-metodu fl-espressjoni ICFTU jista’ jinstab mill-formula:

F = 1 000 × 1/TOIEISS

u l-kontenut ta’ unitajiet internazzjonali ta’ CFT għal kull ml ta’ kampjun ta’ serum (ICFTUTESTSERUM) mill-formula:

ICFTUTESTSERUM = F × TTESTSERUM

2.3.6.   Interpretazzjoni tar-riżultati

Serum li jkun fih 20 ICFTU jew aktar għal kull ml jitqies bħala pożittiv.

2.4.   Test taċ-ċirku fuq il-ħalib (MRT)

2.4.1.   L-antiġenu jirrappreżenta sospensjoni ta’ batterji f’soluzzjoni fenol-salina (NaCl 0.85 % (m/v) u fenol b’0.5 % (v/v)) imtebba’ b’ematossilina. L-antiġenu għandu jinħażen f’4 °C u mhux iffriżat.

2.4.2.   Is-sensittività tal-antiġenu għandha tiġi standardizzata b’rabta mal-OIEISS b’tali mod li l-antiġenu jipproduċi reazzjoni pożittiva f’dilwizzjoni ta’ 1/500 tal-OIEISS fil-ħalib negattiv, waqt li dilwizzjoni ta’ 1/1 000 għandha tkun negattiva.

2.4.3.   It-test taċ-ċirku għandu jsir fuq kampjuni li jirrappreżentaw il-kontenuti ta’ kull mastella tal-ħalib jew il-kontenut ta’ kull tank kbir mir-razzett.

2.4.4.   Il-kampjuni tal-ħalib ma’ għandhomx ikunu ġew iffriżati, imsaħħna jew suġġetti għal ċaqliq qawwi.

2.4.5.   Ir-reazzjoni għandha titwettaq bl-użu ta’ wieħed mill-metodi li ġejjin:

—	fuq kolonna ta’ ħalib ta’ mill-inqas 25 mm għoli u volum ta’ ħalib ta’ 1 ml li miegħu jkunu ġew miżjuda jew 0.03 ml jew 0.05 ml ta’ wieħed mill-antiġeni mtebba’ standardizzati,

—	fuq kolonna ta’ ħalib ta’ mill-inqas 25 mm għoli u volum ta’ ħalib ta’ 2 ml li miegħu jkunu ġew miżjuda 0.05 ml ta’ wieħed mill-antiġeni mtebba’ standardizzati,

—	fuq volum ta’ ħalib ta’ 8 ml li miegħu jkunu ġew miżjuda 0.08 ml ta’ wieħed mill-antiġeni mtebba’ standardizzati.

2.4.6.   It-taħlita tal-ħalib u l-antiġeni għandha tiġi inkubata f’37 °C għal 60 minuta, flimkien mal-istandards ta’ ħidma pożittivi u negattivi. Inkubazzjoni sussegwenti ta’ 16 sa 24 siegħa f’4 °C iżżid is-sensittività tat-test.

2.4.7.   Interpretazzjoni tar-riżultati:

(a)	reazzjoni pożittiva: ħalib ikkulurit, krema bla kulur;

(b)	reazzjoni pożittiva: — ħalib u krema kkuluriti b’mod identiku, jew — ħalib bla kulur u krema kkulurita.

2.5.   Test tal-antiġeni tal-Brucella newtralizzat (it-test Rose Bengal (RBT))

2.5.1.   L-antiġenu jirrappreżenta sospensjoni ta’ batterji f’dilwit tal-antiġeni tal-Brucella newtralizzat b’pH ta’ 3.65 ± 0.05, imtebba’ bl-użu tal-kolorant tar-rose Bengal. L-antiġenu għandu jitwassal lest għall-użu u għandu jinħażen f’4 °C u mhux iffriżat.

2.5.2.   L-antiġenu għandu jiġi ppreparat mingħajr referenza għall-konċentrazzjoni taċ-ċelluli, iżda s-sensittività tiegħu għandha tiġi standardizzata skont l-OIEISS b’tali mod li l-antiġenu jipproduċi reazzjoni pożittiva b’dilwizzjoni tas-serum ta’ 1/45 u reazzjoni negattiva b’dilwizzjoni ta’ 1/55.

2.5.3.   Ir-RBT għandu jitwettaq bil-mod li ġej:

(a)	serum (20-30 μl) huwa mħallat ma’ volum ekwivalenti ta’ antiġenu fuq maduma bajda jew platt tal-iżmalt biex tiġi prodotta żona ta’ madwar 2 cm bħala dijametru. It-taħlita tiġi mħallta bil-mod għal erba’ minuti f’temperatura tal-ambjent, u mbagħad osservata f’dawl tajjeb għall-agglutinazzjoni;

(b)	jista’ jintuża metodu awtomatizzat iżda għandu jkun sensittiv u preċiż għall-anqas daqs il-metodu manwali.

2.5.4.   Interpretazzjoni tar-riżultati

Kull reazzjoni viżibbli għandha titqies li hija pożittiva, sakemm ma jkunx hemm nixfa żejda mat-trufijiet.

L-istandards ta’ ħidma pożittivi u negattivi għandhom jiġu inklużi f’kull serje ta’ testijiet.

2.6.   Test ta’ agglutinazzjoni tas-serum (SAT)

2.6.1.   L-antiġenu jirrappreżenta sospensjoni ta’ batterji f’soluzzjoni fenol-salina (NaCl 0.85 % (m/v) u fenol b’0.5 % (v/v)).

Formaldeide ma għandux jintuża.

L-antiġeni jistgħu jitwasslu fl-istat konċentrat sakemm il-fattur ta’ dilwizzjoni li għandu jintuża jiġi indikat fuq it-tikketta tal-flixkun.

Jista’ jiżdied l-EDTA mas-sospensjoni tal-antiġeni ma’ 5 mM tad-dilwizzjoni finali tat-test biex jitnaqqas il-livell ta’ pożittivi foloz fit-test ta’ agglutinazzjoni tas-serum. Sussegwentement il-pH ta’ 7.2 għandu jiġi aġġustat mill-ġdid fis-sospensjoni tal-antiġenu.

2.6.2.   L-OIEISS fih 1 000 unità internazzjonali ta’ agglutinazzjoni.

2.6.3.   L-antiġenu għandu jiġi ppreparat mingħajr referenza għall-konċentrazzjoni taċ-ċelluli, iżda s-sensittività tiegħu għandha tiġi standardizzata b’rabta mal-OIEISS b’tali mod li l-antiġenu jipproduċi jew 50 % ta’ agglutinazzjoni b’dilwizzjoni finali tas-serum ta’ 1/600 sa 1/1 000 jew 75 % ta’ agglutinazzjoni b’dilwizzjoni finali tas-serum ta’ 1/500 sa 1/750.

Għandu mnejn ikun rakkomandabbli wkoll li titqabbel ir-reattività ta’ gruppi ta’ antiġeni ġodda ma’ dik ta’ gruppi standardizzati minn qabel billi jintuża pakket ta’ seri definiti.

2.6.4.   It-test għandu jsir jew f’tubi jew f’mikropjastri. It-taħlita tal-antiġenu u d-dilwizzjonijiet tas-serum għandha tiġi inkubata għal 16 sa 24 siegħa f’37 °C.

Għall-inqas tliet dilwizzjonijiet għandhom jiġu ppreparati għal kull serum. Id-dilwizzjonijiet ta’ serum sospett għandhom isiru b’tali mod li l-qari tar-reazzjoni fil-limitu ta’ pożittività jsir fit-tubu medjan (jew fir-reċipejnt medjan jekk jintuża l-metodu tal-mikropjastri).

2.6.5.   Interpretazzjoni tar-riżultati:

Il-grad ta’ agglutinazzjoni tal-Brucella f’serum għandu jiġi espress f’IU għal kull ml.

Serum li jkun fih 30 IU jew iktar għal kull ml jitqies bħala pożittiv.

2.7.   L-analiżi bi fluworexxenza polarizzata (FPA)

2.7.1.   Il-FPA jista’ jsir f’tubi tal-ħġieġ jew f’format ta’ pjastri ta’ 96 reċipjent. It-teknika użata, l-istandardizzazzjoni u l-interpretazzjoni tagħha tar-riżultati għandhom jikkonformaw ma’ dik speċifikata fil-Kapitolu 2.4.3 (bruċellożi bovina) tal-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008.

2.7.2.   Standardizzazzjoni tat-test

Il-FPA għandu jiġi standardizzat sabiex:

(a)	l-OIEELISASPSS u l-OIEELISAWPSS jagħtu b’mod konsistenti riżultati pożittivi.

(b)	predilwizzjoni ta’ 1/8 tal-OIEELISAWPSS jew predilwizzjoni ta’ 1/64 tal-OIEELISASPSS magħmula f’serum negattiv (jew f’taħlita ta’ seri negattivi) dejjem tagħti reazzjoni negattiva;

(ċ)	l-OIEELISANSS dejjem tagħti reazzjoni negattiva.

Dan li ġej għandu jiġi inkluż f’kull grupp ta’ testijiet: serum pożittiv b’mod qawwi, serum pożittiv b’mod dgħajjef, serum ta’ standard ta’ ħidma negattiv (kalibrat mas-Sera Standard ELISA tal-OIE).

3.   TESTIJIET KUMPLIMENTARI

3.1.   Test tal-bruċellożi fil-ġilda (BST)

3.1.1.   Kundizzjonijiet għall-użu tal-BST

(a)

It-test tal-bruċellożi fil-ġilda ma’ għandux jintuża għall-għan ta’ ċertifikazzjoni għall-kummerċ intra-Komunitarju.

(b)

It-test tal-bruċellożi fil-ġilda huwa wieħed mill-aktar testijiet speċifiċi għas-sejbien tal-bruċellożi fl-annimali mhux imlaqqma; madankollu ma għandhiex issir dijanjożi fuq il-bażi ta’ reazzjonijiet intradermali pożittivi biss.

(c)

L-annimali bovini, li jipproduċu riżultat negattiv f’wieħed mit-testijiet seroloġiċi definti f’dan l-Anness u li jirreaġixxu b’mod pożittiv għall-BST għandhom jitqiesu bħala infettati jew jiġu ssuspettati li huma infettati.

(d)

L-annimali bovini, li jipproduċu riżultat pożittiv f’wieħed mit-testijiet seroloġiċi definiti f’dan l-Anness jistgħu jkunu suġġetti għall-BST biex tiġi sostnuta l-interpretazzjoni tar-riżultati tat-testijiet seroloġiċi; b’mod partikolari fejn f’merħliet bovini uffiċjalment ħielsa mill-bruċellożi jew ħielsa mill-bruċellożi ma tistax tiġi eskluża reazzjoni inkroċjata kontra antikorpi oħra.

3.1.2.   It-test għandu jsir permezz ta’ preparazzjoni standardizzata u definita ta’ allerġen kontra l-bruċellożi li ma jkunx fiha antiġenu ta’ lipopolysaccharide (LPS) lixx, minħabba li dan jista’ joħloq reazzjonijiet infjammatorji mhux speċifiċi jew ifixkel it-testijiet seroloġiċi sussegwenti.

Ir-rekwiżiti għall-produzzjoni tal-bruċellina għandhom jikkonformaw mat-Taqsima C1 tal-Kapitolu 2.4.3 tal-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008.

3.1.3.   Proċedura tat-test

3.1.3.1.   Il-volum ta’ 0.1 ml ta’ allerġen kontra l-bruċellożi għandu jiġi injettat fil-ġilda fit-tinja tad-denb, fil-ġilda tal-ġenb, jew fil-ġemb tal-għonq.

3.1.3.2.   It-test għandu jinqara wara 48 sa 72 siegħa.

3.1.3.3.   Il-ħxuna tal-ġilda fil-punt tal-injezzjoni għandha titkejjel bil-kaliper vernier qabel l-injezzjoni u waqt ir-rieżaminazzjoni.

3.1.3.4.   Interpretazzjoni tar-riżultati:

Ir-reazzjonijiet qawwija jiġu faċilment rikonoxxuti min-nefħa u mill-ebusija lokali.

Ħxuna tal-ġilda ta’ 1.5 sa 2 mm għandha titqies bħala reazzjoni pożittiva għall-BST.

3.2.   Test ta’ immunoassorbiment enzimatiku kompetittiv (cELISA)

3.2.1.   Kundizzjonijiet għall-użu ta’ cELISA

It-test cELISA ma’ għandux jintuża għall-għan ta’ ċertifikazzjoni tal-kummerċ intra-Komunitarju.

L-annimali bovini, li jipproduċu riżultat pożittiv f’wieħed mit-testijiet seroloġiċi definiti f’dan l-Anness jistgħu jkunu suġġetti għat-test cELISA biex tiġi sostnuta l-interpretazzjoni tar-riżultati l-oħra tat-testijiet seroloġiċi; b’mod partikolari fejn fil-merħliet bovini uffiċjalment ħielsa mill-bruċellożi jew ħielsa mill-bruċellożi ma tistax tiġi eskluża reazzjoni inkroċjata kontra antikorpi oħra jew biex jiġu eliminati reazzjonijiet dovuti għal antikorpi residwali prodotti f’rispons għat-tilqim b’S19.

3.2.2.   Proċedura tat-test

It-test għandu jitwettaq skont il-preskrizzjoni fit-Taqsima B(2) tal-Kapitolu 2.4.3 tal-Manwal tal-OIE ta’ Testijiet Dijanjostiċi u Tilqim għall-Annimali tal-Art, is-Sitt Edizzjoni, 2008.”