31984L0319

Komisijas direktīva

(1984. gada 7. jūnijs),

ar ko groza pielikumus Padomes Direktīvai 77/96/EEK par trihinellu (trichinella spiralis) pārbaudi, ievedot no trešām valstīm svaigu mājas cūku gaļu

(84/319/EEK)

EIROPAS KOPIENU KOMISIJA,

ņemot vērā Eiropas Ekonomikas kopienas dibināšanas līgumu,

ņemot vērā Padomes 1976. gada 21. decembra Direktīvu 77/96/EEK par trihinellu (trichinella spiralis) pārbaudi, ievedot no trešām valstīm svaigu mājas cūku gaļu [1], kurā jaunākie grozījumi izdarīti ar Direktīvu 83/91/EEK [2], un jo īpaši tās 8. pantu,

tā kā nesen veiktajos pētījumos ir atklātas konkrētas metodes, kā cūkgaļā atrast trihinellas; tā kā šīs metodes no veselības aizsardzības viedokļa ir tikpat drošas kā jau pastāvošās metodes; tā kā tāpēc atbilstoši jāpapildina Direktīvas 77/96/EEK I pielikums;

tā kā dalībvalstīm un trešām valstīm vajadzētu sniegt izvēles iespējas starp paredzētajām pārbaudes metodēm, lai atvieglotu darbu, veicot trihinellu pārbaudes;

tā kā tehniski jāpielāgo pašreiz izmantotās trihinellu pārbaudes metodes un nosacījumi, kas jāievēro laboratorijām, kuras veic trihinellu pārbaudes;

tā kā šajā direktīvā paredzētie pasākumi ir saskaņā ar Pastāvīgās veterinārijas komitejas atzinumu,

IR PIEŅĒMUSI ŠO DIREKTĪVU.

1. pants

Direktīvu 77/96/EEK groza, kā noteikts pielikumā.

2. pants

Ne vēlāk kā 1985. gada 1. janvārī dalībvalstīs stājas spēkā normatīvie un administratīvie akti, kas vajadzīgi, lai izpildītu šīs direktīvas prasības. Dalībvalstis par to tūlīt informē Komisiju.

3. pants

Šī direktīva ir adresēta dalībvalstīm.

Briselē, 1984. gada 7. jūnijā

Komisijas vārdā —

Komisijas loceklis

Poul Dalsager

[1] OV L 26, 31.1.1977., 67. lpp.

[2] OV L 59, 5.3.1983., 34. lpp.

--------------------------------------------------

PIELIKUMS

A. Direktīvas I pielikumu groza šādi.

1. Pielikuma II punkta a) apakšpunktā:

- desmito ievilkumu aizstāj ar šādu tekstu:

"Astereomikroskops (palielinājums 15 līdz 40 reizes) ar piemērotu gaismas avotu,"

- pēdējo ievilkumu aizstāj ar šādu tekstu:

"gremošanas fermenta šķīdums ar šādu sastāvu:

10 g pepsīna (80 FIP(Starptautiskā Farmācijas federācija) vienības vienā gramā), 5 ml HCl (vismaz 37 %), kas izšķīdināti vienā litrā krāna ūdens."

2. Pielikuma III punktu aizstāj ar šādu tekstu:

"III. MĀKSLĪGĀS FERMENTATĪVĀS HIDROLĪZES IZMANTOŠANAS METODE APVIENOTAJIEM PARAUGIEM

a) Iekārta un reaģenti

- nazis un pincete paraugu ņemšanai,

- ierīce gaļas sasmalcināšanai ar 2 līdz 3 mm lieliem caurumiem,

- 3 litru Erlenmeijera kolba ar gumijas vai vates aizbāzni,

- koniskā dalāmā piltuve ar 2000 ml ietilpību,

- parastais statīvs ar A pamatni, apmēram 28 cm garš un ar 80 cm garu kātu,

- statīva riņķis apmēram 10 līdz 11 cm diametrā, kuru var piestiprināt pie statīva,

- statīva skava ar plakanām skrūvspīlēm (23 × 40 mm), kuras var piestiprināt statīvam ar dubultuzmavu,

- siets (linuma acu izmērs 177 mikroni) ar 11 cm lielu ārējo diametru, kam pierīkots misiņa vai nerūsoša tērauda stieplīšu pinums,

- piltuve, kuras iekšējais diametrs nav mazāks par 12 cm,

- 100 ml stikla mērcilindrs,

- stereomikroskops (palielinājums 15 līdz 40 reizes) ar piemērotu gaismas avotu vai trihinoskops ar horizontālu galdiņu kompresoram un piemērotu gaismas avotu,

- izmantojot trihinoskopu, lieto kāpuru skaitīšanas kameru ar šādu konstrukciju:

kāpuru skaitīšanas kamera ir izgatavota no 3 mm biezām akrila plātnēm šādi:

i) kameras pamatne ir 180 × 40 mm, kas sadalīta kvadrātos;

ii) malu izmēri ir 230 × 20 mm;

iii) galu izmēri ir 40 × 20 mm. Pamatnei un galiem jābūt ieliekamiem starp malām, tādējādi veidojot kameru ar diviem maziem rokturīšiem katrā galā. Pamatnes augšējai malai jāatrodas par 7 līdz 9 mm augstāk par malu un galu veidotā karkasa apakšpusi. Detaļas jāsastiprina ar materiālam piemērotu līmi,

- vairākas Petrī plates 9 cm diametrā (ja tiek izmantots stereomikroskops), kuru apakšdaļa, izmantojot smailu priekšmetu, sadalīta 10 × 10 mm pārbaudes kvadrātos,

- vairākas 10 litru atkritumu tvertnes, kas izmantojamas piederumu attīrīšanai, piemēram, ar formalīnu, kā arī iekārtu un atlikušā hidrolizāta uzglabāšanai, ja tiek iegūti pozitīvi rezultāti,

- koncentrēta (37 %) sālsskābe,

- pepsīns koncentrācijā 1: 10000 NF (ASV Nacionālais formulārs),

kas atbilst 1: 12500 BP (British Pharmacopoea),

kā arī 2000 FIP (Starptautiskā Farmācijas federācija),

- vairākas paplātes, kas piemērotas 50 paraugu turēšanai, no kuriem katrs ir apmēram 2 g liels,

- svari ar precizitāti līdz 0,1 g.

b) Paraugu ņemšana

1. No veseliem liemeņiem paņem apmēram 2 g paraugu no diafragmas saites pārejā no muskuļainās daļas cīpslainajā daļā. Ja diafragmas saites nav, tad paņem tāda paša lieluma paraugu no diafragmas krūšu kaula daļas ribu daļas, no mēles muskuļiem vai košļāšanas muskuļiem, vai vēdera muskuļiem.

2. No gaļas gabaliem paņem apmēram 2 g lielu paraugu no šķērssvītru muskuļa, kurā būtu mazliet tauku un kurš pēc iespējas atrastos pie kauliem vai cīpslām.

c) Metode

1. i) Pilnas paraugu grupas (100 paraugi vienlaikus)

Paņem apmēram 1 g no katra no 100 atsevišķajiem cūkgaļa paraugiem. Kopējo paraugu samaļ gaļas smalcināšanas ierīcē.

Sasmalcināto gaļu ievieto 3 litru Erlenmeijera kolbā, pievienojot 7 g pepsīna, apmēram 2 litrus krāna ūdens, kas sasildīts apmēram 40 līdz 41 °C, un 25 ml koncentrētas sālsskābes. Šo maisījumu sakrata, lai izšķīdinātu pepsīnu.

Šķīduma pH vērtībai jābūt apmēram no 1,5 līdz 2.

- Lai notiktu fermentatīva hidrolīze, Erlenmeijera kolbu apmēram četras stundas inkubē 40 līdz 41 °C temperatūrā. Inkubācijas laikā kolbu regulāri sakrata vismaz divas reizes stundā.

- Hidrolizātu izfiltrē cauri sietam koniskajā 2 litru dalāmajā piltuvē un atstāj mierīgi stāvam statīvā vēl vismaz stundu.

- Mērcilindrā pavisam ielej apmēram 45 ml šķidruma un sadala pa trim Petrī platēm, kuru pamatne sadalīta kvadrātos, t.i., 15 ml katrai platei.

- Katru Petrī plati rūpīgi pārbauda zem stereomikroskopa, meklējot trihinellu kāpurus.

- Izmantojot kāpuru skaitīšanas kameras, šie 45 ml jāsadala pa divām kāpuru skaitīšanas kamerām un jāpārbauda zem trihinoskopa.

Kāpuri parādās nogulsnēs kā identificējami organismi, turklāt remdenā ūdenī bieži var novērot spirālveida satīšanās un attīšanās kustības.

- Hidrolizāts jāpārbauda, tiklīdz tas ir gatavs. Pārbaudi nekādā gadījumā nevajadzētu atlikt līdz nākamajai dienai.

Ja hidrolizāts ir nedzidrs vai netiek pārbaudīts 30 minūtēs no tā sagatavošanas, tas jādzidrina šādi: 45 ml galīgo paraugu ielej mērcilindrā un nostādina 10 minūtes. Kad šis laiks pagājis, no nostādināšanas virsslāņa atsūc 30 ml un atlikušos 15 ml ar krāna ūdeni papildina līdz 45 ml. Vēl pēc 10 nostādināšanas minūtēm no virsslāņa atsūc 30 ml un atlikušos 15 ml izlej uz Petrī plāksnes vai kāpuru skaitīšanas kamerā, lai pārbaudītu. Mērcilindru izskalo ar 10 ml krāna ūdens, un skalojamo ūdeni pievieno pārbaudāmajam paraugam uz Petrī plāksnes vai kāpuru skaitīšanas kamerā.

ii) Paraugu grupas, kurās mazāk par 100 paraugiem

Ja atsevišķo paraugu skaits nepārsniedz 15, tos var pievienot 100 paraugu kopējam paraugam un pārbaudīt kopā. Ja pārbaudāmo paraugu skaits pārsniedz 15 un ir mazāks par 100, fermentatīvās hidrolīzes šķīdums proporcionāli jāsamazina.

2. Ja rezultāts, kas iegūts, pārbaudot apvienoto paraugu, ir pozitīvs vai apšaubāms, no katras cūkas paņem vēl 20 g paraugu saskaņā ar iepriekšminēto b) punktu. 20 g paraugus, kas ņemti no piecām cūkām, apvieno vienā grupā un pārbauda atbilstoši iepriekš aprakstītajai metodei. Šādā veidā pārbauda paraugus no 20 grupām, kas sastāv no piecām cūkām. Atklājot trihinellas piecu cūku apvienotajā paraugā, no atsevišķajām grupas cūkām paņem vēl 20 g paraugus, ko pārbauda atsevišķi, izmantojot iepriekš aprakstīto metodi."

3. Pievieno šādas IV, V un VI nodaļas:

"IV. MEHĀNISKI VEICINĀTĀ APVIENOTO PARAUGU HERMENTATĪVĀS HIDROLĪZES METODE/ SEDIMENTĀCIJAS METODE

a) Iekārta un reaģenti

- nazis vai šķēres paraugu nogriešanai,

- paplātes, kas sadalītas 50 kvadrātos, uz kuriem iespējams novietot apmēram 2 g lielus gaļas paraugus,

- homogenizators Stomacher Lab-blender, modelis 3500 Thermo,

- homogenizatoram Stomacher Lab-blender piemēroti plastmasas maisiņi,

- koniskā dalāmā piltuve ar 2 l tilpumu, vēlams ar teflona aizbāzni drošībai,

- statīvi, statīva riņķi un skavas,

- sieti, linuma acu izmērs 177 mikroni, ārējais diametrs 11 cm, izgatavoti no nerūsējoša tērauda stiepļu pinuma,

- piltuves ar vismaz 12 cm iekšējo diametru, kas paredzētas sietu ielikšanai,

- 100 ml stikla mērcilindri,

- 25 ml dozators,

- vārglāzes ar 3 litru tilpumu,

- karotīte vai stikla stienītis fermentatīvās hidrolīzes šķīduma samaisīšanai vārglāzē,

- atsūkšanai paredzēta plastmasas šļirce un caurulīte,

- 6 g mērkarote,

- termometrs ar precizitāti līdz ± 0, 5 °C un mērīšanas diapazonu no 1 līdz 100 °C,

- vibrators, piem., elektriskais skuveklis ar noņemtu uzgali,

- relejs, kas ieslēdzas un izslēdzas ar vienas minūtes intervālu,

- trihinoskops ar horizontālu galdiņu vai stereomikroskops ar piemērotu gaismas avotu,

- kāpuru skaitīšanas kamera (izmantojot trihinoskopu): kāpuru skaitīšanas kamera, kas izgatavota no 3 mm biezām akrila plātnēm šādi:

i) kameras pamatne ir 180 × 40 mm, kas sadalīta kvadrātos;

ii) malu izmēri ir 230 × 20 mm;

iii) galu izmēri ir 40 × 20 mm. Pamatnei un galiem jābūt ieliekamiem starp malām, tādējādi veidojot divus rokturīšus katrā galā. Pamatnes augšējai malai jāatrodas 7 līdz 9 mm augstāk par malu un galu veidotā karkasa apakšpusi. Detaļas jāsastiprina ar materiālam piemērotu līmi,

- vairākas Petrī plates 9 cm diametrā (ja tiek izmantots stereomikroskops), kuru apakšdaļa, izmantojot smailu priekšmetu, sadalīta 10 × 10 mm pārbaudes kvadrātos,

- 17,5 % sālsskābes šķīdums,

- pepsīns koncentrācijā 1: 10000 NF (ASV Nacionālais formulārs),

kas atbilst 1: 12500 BP (British Pharmacopoea),

kā arī 2000 FIP (Starptautiskā Farmācijas federācija),

- vairākas 10 litru atkritumu tvertnes, kas izmantojamas piederumu attīrīšanas gaitā, piemēram, ar formalīnu, kā arī iekārtu un atlikušā hidrolizāta uzglabāšanai, ja tiek iegūti pozitīvi rezultāti,

- svari ar precizitāti līdz 0,1 g.

b) Paraugu ņemšana

1. No veseliem liemeņiem paņem apmēram 2 g paraugu no diafragmas saites pārejā no muskuļainās daļas cīpslainajā daļā. Ja diafragmas saites nav, tad paņem tāda paša lieluma paraugu no ribu daļas vai no diafragmas krūšu kaula daļas, no košļāšanas muskuļa, vai vēdera muskuļa.

2. No gaļas gabaliem paņem apmēram 2 g lielu paraugu no šķērssvītru muskuļa, kurā būtu mazliet tauku un kurš atrastos pēc iespējas tuvāk pie kauliem vai cīpslām.

c) Metode

1. Fermentatīvā hidrolīzes procedūra

i) Pilnas paraugu grupas (100 paraugi vienlaikus)

- Stomacher Lab-blender3500 homogenizatorā ieliek dubultu plastmasas maisiņu, un temperatūras kontrolierīci noregulē uz 40 līdz 41 °C.

- Iekšējā plastmasas maisiņā ielej pusotru litru ūdens, kas sasildīts līdz apmēram 32 līdz 35 °C, un ūdeni sakarsē līdz 40 līdz 41 °C.

- Tad ūdenim stomaherā pievieno 25 ml 17,5 % sālsskābes.

- Tad pievieno 100 paraugus, no kuriem katrs ir apmēram 1 g liels (temperatūrā no 25 līdz 30 °C), kas paņemti no katra atsevišķā parauga saskaņā ar b) punktu.

- Visbeidzot pievieno 6 g pepsīna. Stingri jāievēro šī pievienošanas secība, lai novērstu pepsīna sadalīšanos.

- Tad maisiņa saturu apstrādā stomaherā 25 minūtes.

- Tad plastmasas maisiņu izņem no stomahera, un fermentatīvās hidrolīzes šķidrumu izfiltrē cauri sietam 3 litru vārglāzē.

- Plastmasas maisiņu izskalo ar apmēram 100 ml ūdens, ko tad izmanto sieta noskalošanai un beigās pievieno filtrātam vārglāzē.

Ja atsevišķo paraugu skaits nepārsniedz 15, tos var pievienot 100 paraugu kopējam paraugam un pārbaudīt kopā.

ii) Nelielas paraugu grupas, kurās mazāk par 100 paraugiem

- Stomacher Lab-blender 3500 homogenizatorā ieliek dubultu plastmasas maisiņu, un temperatūras kontrolierīci noregulē uz 40 līdz 41 °C.

- Sagatavo fermentatīvās hidrolīzes šķīdumu, sajaucot pusotru litru ūdens ar 25 ml 17,5 % sālsskābes. Pievieno 6 g pepsīna, un visu kopā samaisa 40 līdz 41 °C temperatūrā. Stingri jāievēro šī pievienošanas secība, lai novērstu pepsīna sadalīšanos.

- No fermentatīvās hidrolīzes šķīduma paņem daudzumu, kas atbilst 15 ml uz katru parauga gramu (piem., 30 paraugiem vajadzīgais tilpums ir 30 × 15 ml jeb 450 ml), un ielej iekšējā no abiem plastmasas maisiņiem, pievienojot apmēram 1 g lielus gaļas paraugus (25 līdz 30 °C temperatūrā), kas ņemti no katra atsevišķā parauga saskaņā ar b) punktu.

- Ārējā maisiņā ielej ūdeni apmēram 41 °C tā, lai abu maisiņu kopējais tilpums būtu pusotrs litrs.

- Tad maisiņa saturu apstrādā stomaherā 25 minūtes.

- Tad plastmasas maisiņu izņem no stomahera, un hidrolizātu izfiltrē cauri sietam 3 litru vārglāzē.

- Plastmasas maisiņu izskalo apmēram 100 ml ūdens, ko tad izmanto sieta noskalošanai un beigās pievieno filtrātam vārglāzē.

2. Kāpuru izolēšana ar sedimentāciju

- Fermentatīvās hidrolīzes šķīdumam pievieno ledu (300 līdz 400 g ledus pārslu, pulverveida vai sadrupināta ledus veidā), palielinot tā tilpumu līdz apmēram 2 litriem. Tad fermentatīvās hidrolīzes šķīdumu maisa, līdz ledus ir izkusis.

Mazākam paraugu apjomam (skat. 1. punkta ii) daļu) ledus daudzums attiecīgi jāsamazina.

- Atdzesēto fermentatīvās hidrolīzes šķīdumu ielej 2 litru dalāmajā piltuvē, kurai ar īpašu skavu pievienots vibrators.

- 30 minūtes notiek sedimentācija, kuras laikā sedimentācijas piltuvi pārmaiņus pakļauj vibrācijām, t.i., vienai vibrāciju minūtei seko vienu minūti ilga pauze.

- Pēc 30 minūtēm 60 ml lielo nogulšņu paraugu ātri ielej 100 ml mērcilindrā. (Piltuvi pēc lietošanas izskalo ar tīrīšanas līdzekļa šķīdumu.)

- 60 ml paraugu nostādina vismaz 10 minūtes, pēc tam tiek nosūkts nostādināšanas virsslānis, atstājot 15 ml tilpumu, kurā pārbaudīs kāpuru esamību.

- Atsūkšanai drīkst izmantot vienreizējās lietošanas šļirci, kam pielikta plastmasas caurulīte.

Caurulītei jābūt tik garai, lai 15 ml paliktu mērcilindrā, šļirces sānu izvirzījumiem balstoties uz mērcilindra malām.

- Atlikušos 15 ml ielej kāpuru skaitīšanas kamerā vai uz divām Petrī plāksnēm un pārbauda, attiecīgi izmantojot trihinoskopu vai stereomikroskopu.

- Hidrolizāts jāpārbauda, tiklīdz tas ir gatavs. Pārbaudi nekādā gadījumā nevajadzētu atlikt līdz nākamajai dienai.

Ja hidrolizāts ir nedzidrs vai netiek pārbaudīts 30 minūtēs no tā sagatavošanas, tas jādzidrina šādi: 60 ml galīgo paraugu ielej mērcilindrā un nostādina 10 minūtes. Kad šis laiks ir pagājis, no nostādināšanas virsslāņa atsūc 45 ml un atlikušos 15 ml ar krāna ūdeni papildina līdz 45 ml. Vēl pēc 10 nostādināšanas minūtēm no virsslāņa atsūc 30 ml un atlikušos 15 ml izlej uz Petrī plāksnes vai ielej kāpuru skaitīšanas kamerā, lai pārbaudītu. Mērcilindru izskalo ar 10 ml krāna ūdens, un skalojamo ūdeni pievieno pārbaudāmajam paraugam uz Petrī plāksnes vai kāpuru skaitīšanas kamerā.

3. Ja rezultāts, kas iegūts, pārbaudot apvienoto paraugu, ir pozitīvs vai apšaubāms, no katras cūkas paņem vēl 20 g paraugu saskaņā ar iepriekšminēto b) punktu. 20 g paraugus, kas ņemti no piecām cūkām, apvieno paraugu grupā un pārbauda atbilstoši iepriekš aprakstītajai metodei. Šādā veidā pārbauda paraugus no 20 paraugu grupām, kas sastāv no piecām cūkām. Atklājot trihinellas piecu cūku apvienotajā paraugā, no atsevišķajām grupas cūkām paņem vēl 20 g paraugus, ko pārbauda atsevišķi, izmantojot iepriekš aprakstīto metodi.

V. MEHĀNISKI VEICINĀTĀ APVIENOTO PARAUGU FERMENTATĪVĀS HIDROLĪZES METODE/ IZOLĀCIJAS METODE AR FILTRA PALĪDZĪBU

a) Iekārta un reaģenti

Tie, kas norādīti IV metodes a) punktā.

Papildus iepriekšminētajām šādas iekārtas:

- 1 litra Gelmana piltuve ar filtra turētāju (diametrs 45 mm),

- filtrēšanas diski; filtrēšanas diski sastāv no:

apaļas formas nerūsējoša tērauda stieplīšu pinuma, kura acojums ir 35 mikroni (diska diametram jābūt 45 mm),

diviem gumijas gredzeniem, kas izgatavoti no 1 mm biezas gumijas (ārējais diametrs 45 mm un iekšējais diametrs 38 mm),

apaļo sietu ievieto starp abiem gumijas gredzeniem un nostiprina, izmantojot divkomponenšu līmi, kas piemērota divu materiālu salīmēšanai,

- Erlenmeijera kolba ar 3 litru tilpumu, kam sānos pierīkota atsūkšanas caurulīte,

- filtra sūknis,

- plastmasas maisiņi, kuru tilpums nav mazāks par 80 ml,

- ierīce plastmasas maisiņu aizkausēšanai,

- himozīns, stipruma pakāpe 1: 150000 soksleta vienību uz gramu.

b) Paraugu ņemšana

Skatīt IV metodes b) punktu.

c) Metode

1. Fermentatīvās hidrolīzes procedūra

i) Pilnas paraugu grupas (100 paraugi vienlaikus)

Skatīt IV metodes c) punkta 1. apakšpunkta i) daļu.

ii) Nepilnas paraugu grupas, kurās mazāk par 100 paraugiem

Skatīt IV metodes c) punkta 1. apakšpunkta ii) daļu.

2. Kāpuru izolēšana ar filtrāciju

- Fermentatīvās hodrolīzes šķīdumam pievieno ledu (300 līdz 400 g ledus pārslu, pulverveida vai sadrupināta ledus veidā), palielinot tā tilpumu līdz apmēram 2 litriem.

Mazākam paraugu skaitam ledus daudzums attiecīgi jāsamazina.

- Tad fermentatīvās hidrolīzes šķīdumu maisa, līdz ledus ir izkusis. Tad atdzesētajam fermentatīvās hidrolīzes šķīdumam ļauj vismaz trīs minūtes nostāvēties, lai kāpuri varētu satīties.

- Uz Erlenmeijera kolbas, kurai pievienots filtra sūknis, uzmontē Gelmana piltuvi ar filtra turētāju un filtrēšanas disku.

- Fermentatīvās hidrolīzes šķīdumu ielej Gelmana piltuvē un izfiltrē. Filtrācijas beigās fermentatīvās hidrolīzes šķīduma izplūšanu cauri filtram var veicināt ar atsūkšanu, izmantojot filtra sūkni. Atsūkšana jāpārtrauc, iekams filtrs vēl nav kļuvis sauss, t.i., kad piltuvē vēl palikuši 2 līdz 5 ml šķidruma.

- Kad izfiltrēts viss fermentatīvās hidrolīzes šķīdums, filtrēšanas disku noņem un ievieto 80 ml plastmasas maisiņā, pievienojot 15 līdz 20 ml himozīna šķīduma. Himozīna šķīdumu sagatavo, 2 g himozīna pievienojot 100 ml krāna ūdens.

- Plastmasas maisiņu divreiz aizkausē un ievieto stomaherā starp iekšējo un ārējo maisiņu.

- Stomaheru darbina trīs minūtes, piem., kamēr aparātu izmanto pilnas vai nepilnas paraugu grupas apstrādei.

- Pēc trim minūtēm plastmasas maisiņu ar filtrēšanas disku un himozīna šķīdumu izņem no stomahera un atgriež ar šķērēm. Šķidro saturu izlej kāpuru skaitīšanas kamerā vai uz Petrī plāksnes. Maisiņu izskalo ar 5 līdz 10 ml ūdens, ko pielej kāpuru skaitīšanas kameras saturam, lai pārbaudītu ar trihinoskopu, vai uzlej uz Petrī plāksnes, lai pārbaudītu ar stereomikroskopu.

- Hidrolizāts jāpārbauda, tiklīdz tas ir gatavs. Pārbaudi nekādā gadījumā nevajadzētu atlikt līdz nākamajai dienai.

Piezīme

Nekādā ziņā nevajadzētu izmantot filtrēšanas diskus, kas nav pilnīgi tīri. Netīriem diskiem nekādā ziņā nedrīkst ļaut izkalst.

Filtrēšanas diskus var notīrīt, pa nakti atstājot tos himozīna šķīdumā. Pirms lietošanas tie jānomazgā svaigā himozīna šķīdumā, izmantojot stomaheru.

3. Ja rezultāts, kas iegūts, pārbaudot apvienoto paraugu, ir pozitīvs vai apšaubāms, no katras cūkas paņem vēl 20 g paraugu saskaņā ar iepriekšminēto b) punktu. 20 g paraugus, kas ņemti no piecām cūkām, apvieno kopējā paraugā un pārbauda atbilstoši iepriekš aprakstītajai metodei. Šādā veidā pārbauda paraugus no 20 grupām, kuras sastāv no piecām cūkām. Atklājot trihinellas piecu cūku apvienotajā paraugā, no atsevišķajām grupas cūkām paņem vēl 20 g paraugus, ko pārbauda atsevišķi, izmantojot iepriekš aprakstīto metodi.

VI. MAGNĒTISKĀS MAISĪŠANAS METODE APVIENOTO PARAUGU FERMENTATĪVAI HIDROLĪZEI

a) Iekārta un reaģenti

- nazis un pincete paraugu nogriešanai,

- paplātes, kas sadalītas 50 kvadrātveida laukumos, uz kuriem iespējams novietot apmēram 2 g lielus gaļas paraugus,

- homogenizators Moulinette,

- magnētiskais maisītājs ar sildplāksni, ko iespējams regulēt ar termostatu, un ar apmēram 5 cm gariem teflonu klātiem maisīšanas ķermenīšiem,

- koniskās dalāmās piltuves ar 2 litru tilpumu,

- statīvi, statīva riņķi un skavas,

- sieti, linuma acu izmērs 177 mikroni, ārējais diametrs 11 cm, darināti no nerūsējoša tērauda stiepļu pinuma,

- piltuves ar vismaz 12 cm iekšējo diametru, paredzētas sietu ielikšanai,

- vārglāze ar 3 litru tilpumu,

- mērcilindri ar apmēram 50 ml tilpumu vai centrifūgas stobriņi,

- trihinoskops ar horizontālu galdiņu vai stereomikroskops ar piemērotu gaismas avotu,

- kāpuru skaitīšanas kamera (izmantojot trihinoskopu): kāpuru skaitīšanas kamera, kas izgatavota no 3 mm biezām akrila plātnēm šādi:

i) kameras pamatne ir 180 × 40 mm, kas sadalīta kvadrātos;

ii) malu izmēri ir 230 × 20 mm;

iii) galu izmēri ir 40 × 20 mm. Pamatnei un galiem jābūt ieliekamiem starp malām, tādējādi veidojot divus rokturīšus katrā galā. Pamatnes augšējai malai jāatrodas 7 līdz 9 mm augstāk par malu un galu veidotā karkasa apakšpusi. Detaļas jāsastiprina ar materiālam piemērotu līmi,

- vairākas Petrī plates 9 cm diametrā (ja tiek izmantots stereomikroskops), kuru apakšdaļa, izmantojot smailu priekšmetu, sadalīta 10 × 10 mm pārbaudes kvadrātos,

- alumīnija folija,

- 25 % sālsskābe,

- pepsīns koncentrācijā 1: 10000 NF (ASV Nacionālais formulārs),

kas atbilst 1: 12500 BP (British Pharmacopoea),

kā arī 2000 FIP (Starptautiskā Farmācijas federācija),

- krāna ūdens, kas uzsildīts līdz 46 līdz 48 °C,

- vairākas 10 litru atkritumu tvertnes, kas izmantojamas piederumu attīrīšanai, piemēram, ar formalīnu, kā arī iekārtu un atlikušā hidrolizāta uzglabāšanai, ja tiek iegūti pozitīvi rezultāti,

- svari ar precizitāti līdz 0,1 g.

b) Paraugu ņemšana

1. No veseliem liemeņiem paņemt apmēram 2 g paraugu no diafragmas saites, pārejā no muskuļainās daļas cīpslainajā daļā. Ja diafragmas saites nav, tad paņemt tāda paša lieluma paraugu no ribu daļas vai no diafragmas krūšu kaula daļas, no košļāšanas muskuļa, vai vēdera muskuļa.

2. No gaļas gabaliem paņemt apmēram 2 g lielu paraugu no šķērssvītru muskuļa, kurā būtu mazliet tauku un kurš atrastos pēc iespējas tuvāk pie kauliem vai cīpslām.

c) Metode

1. i) Pilnas paraugu grupas (100 paraugi vienlaikus)

- 100 paraugus, no kuriem katrs ir apmēram 1 g liels un kuri ņemti no katra atsevišķā parauga saskaņā ar b) punktu, sasmalcina Moulinette homogenizatorā. Homogenizatoru darbina trīs līdz četras reizes, katru reizi apmēram sekundi.

- Sasmalcināto gaļu ieliek 3 l vārglāzē un apsmidzina ar 10 g pepsīna. Vārglāzē ielej 2 litrus krāna ūdens, kas sasildīts līdz 46 līdz 48 °C, pievienojot 16 ml sālsskābes.

- Moulinette homogenizatora smalcinātājieliktni atkārtoti iegremdē vārglāzē esošajā fermentatīvās hidrolīzes šķīdumā, lai atdalītu gaļas paliekas.

- Maisīšanas ķermenīti ievieto vārglāzē, un vārglāzi pārsedz ar alumīnija foliju.

- Vārglāzi novieto uz iepriekš sasildītas magnētiskā maisītāja sildvirsmas un uzsāk maisīšanas procesu. Pirms maisīšanas procesa sākšanas magnētiskais maisītājs jānoregulē tā, lai tas visu darbības laiku spētu uzturēt konstantu temperatūru no 44 līdz 46 °C. Maisīšanas procesā fermentatīvās hidrolīzes šķīdumam jāgriežas pietiekami lielā ātrumā, lai radītu dziļus virpuļus bez šļakstīšanās.

- Fermentatīvās hidrolīzes šķīdumu turpina maisīt 30 minūtes, beidzoties šim laikam, maisītāju izslēdz un fermentatīvās hidrolīzes šķīdumu cauri sietam ielej sedimentācijas piltuvē.

- Fermentatīvās hidrolīzes šķīdumam ļauj nostāvēties piltuvē 30 minūtes.

- Pēc 30 minūtēm 40 ml lielu fermentatīvās hidrolīzes šķīduma paraugu ātri ielej mērcilindrā vai centrifūgas stobriņā.

- 40 ml paraugam ļauj nostāvēties 10 minūtes, beidzoties šim laikam, no nostādināšanas virsslāņa atsūc 30 ml, atstājot 10 ml tilpumu.

- Atlikušo 10 ml nogulšņu paraugu ielej kāpuru skaitīšanas kamerā vai uzlej uz Petrī plāksnes.

- Tad mērcilindru vai centrifūgas stobriņu izskalo ar apmēram 10 ml krāna ūdens, ko pievieno paraugam kāpuru skaitīšanas kamerā vai uz Petrī plāksnes. Pēc tam paraugu pārbauda ar trihinoskopa vai attiecīgi stereomikroskopa palīdzību.

- Hidrolizāts jāpārbauda, tiklīdz tas ir gatavs. Pārbaudi nekādā gadījumā nevajadzētu atlikt līdz nākamajai dienai.

Ja hidrolizāts netiek pārbaudīts 30 minūtēs no tā sagatavošanas, tas jādzidrina šādi. Apmēram 40 ml lielo galīgo paraugu ielej mērcilindrā un ļauj tam nostāvēties 10 minūtes, kad pagājis šis laiks, atdala 30 ml no nostādināšanas virsslāņa šķidruma, atstājot 10 ml. Šo tilpumu papildina ar krāna ūdeni līdz 40 ml. Kad pagājušas vēl 10 nogulsnēšanās minūtes, 30 ml no nostādināšanas virsslāņa atsūc, atstājot 10 ml, ko pārbauda uz Petrī plāksnes vai kāpuru skaitīšanas kamerā. Mērtrauku izskalo ar 10 ml krāna ūdens, un skalojamo ūdeni pievieno pārbaudāmajam paraugam uz Petrī plāksnes vai kāpuru skaitīšanas traukā.

Ja pārbaudes laikā konstatē, ka nosēdumi ir nedzidri, paraugu ielej mērcilindrā un papildina ar krāna ūdeni līdz 40 ml, tad atkārto iepriekšminēto procedūru.

ii) Paraugu grupas, kurās mazāk par 100 paraugiem

Ja nepieciešams, 100 paraugu kopējai paraugu grupai var pievienot ne vairāk kā 15 paraugus, no kuriem katrs ir 1 g liels, pārbaudot tos kopā atbilstoši c) punkta 1. apakšpunkta i) daļai. Ja paraugu skaits pārsniedz 15, tos pārbauda kā pilnu paraugu grupu. Paraugu grupai, kuras apjoms nepārsniedz 50 paraugus, fermentatīvās hidrolīzes šķīdumu var samazināt līdz 1 litram.

2. Ja rezultāts, kas iegūts, pārbaudot apvienoto paraugu, ir pozitīvs vai apšaubāms, no katras cūkas paņem vēl 20 g lielu paraugu saskaņā ar iepriekšminēto b) punktu. 20 g paraugus, kas ņemti no piecām cūkām, apvieno kopējā paraugā un pārbauda atbilstoši iepriekš aprakstītajai metodei. Šādā veidā pārbauda paraugus no 20 grupām, kas sastāv no piecām cūkām. Atklājot trihinellas piecu cūku apvienotajā paraugā, no atsevišķajām grupas cūkām paņem vēl 20 g paraugus, ko pārbauda atsevišķi, izmantojot iepriekš aprakstīto metodi."

B. Direktīvas II pielikuma I nodaļas 1. rindkopu groza šādi.

1. Ar šādu tekstu aizstāj b) punkta tekstu:

"b) pienācīgi iekārtota aizslēdzama pārbaudes telpa, kuru iespējams aptumšot, veicot pārbaudi ar trihinoskopu."

2. Svītro f) punktu; g), h), i), j), k), l), m) un n) punkti attiecīgi kļūst par f), g), h), i), j), k), l) un m) punktiem.

3. Ar šādu tekstu aizstāj jaunā g) punkta tekstu:

"g) tualetes istaba pārbaudes aprīkojuma (piem., paraugiem domāto konteineru, kompresoru, nažu un šķēru) tīrīšanai un dezinficēšanai, tajā jābūt:

- ūdensnecaurlaidīgam grīdas segumam, kas netrūd, ir viegli tīrāms un dezinficējams,

- gludām sienām, kuras vismaz līdz 2 m augstumam ir klātas ar mazgājamu gaišu materiālu vai krāsu.

Šis noteikums nav jāpiemēro, izmantojot I pielikuma II, III, IV, V un VI nodaļā norādītās metodes, ja laboratorijās atrodas liela, kanalizācijai piemēroti pievienota izlietne."

--------------------------------------------------