1990R2676 — MT — 13.08.2005 — 011.001

---

Dan id-dokument ġie magħmul bil-ħsieb li jintuża bħala għodda ta’ dokumentazzjoni u l-istituzzjonijiet ma jassumu l-ebda responsabbiltà għall-kontenut tiegħu

►B	REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 2676/90 tas-17 ta' Settembru 1990 li jistabbilixxi metodi Komunitarji għall-analiżi ta' l-inbid (ĠU L 272, 3.10.1990, p.1)

Emendat bi:

		Il-Ġurnal Uffiċjali
		No	page	date
►M1	COMMISSION REGULATION (EEC) No 2348/91 of 29 July 1991 (*)	L 214	39	2.8.1991
M3	COMMISSION REGULATION (EEC) No 2645/92 of 11 September 1992 (*)	L 266	10	12.9.1992
M4	COMMISSION REGULATION (EC) No 60/95 of 16 January 1995 (*)	L 11	19	17.1.1995
►M5	IR-REGOLAMENT TAL-KUMMISSIJONI (KE) Nru 69/96 tat-18 ta’ Jannar 1996	L 14	13	19.1.1996
►M6	IR-REGOLAMENT TAL-KUMMISSIJONI (KE) Nru 822/97 tas-6 ta’ Mejju 1997	L 117	10	7.5.1997
►M7	IR-REGOLAMENT TAL-KUMMISSIJONI (KE) Nru 761/1999 tat-12 ta’ April 1999	L 99	4	14.4.1999
►M8	IR-REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 1622/2000 ta' l-24 ta' Lulju 2000	L 194	1	31.7.2000
►M10	IR-REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 440/2003 ta’ l-10 ta’ Marzu 2003	L 66	15	11.3.2003
►M11	IR-REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 128/2004 tat-23 a' Jannar 2004	L 19	3	27.1.2004
►M12	REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 355/2005 tat-28 ta’ Frar 2005	L 56	3	2.3.2005
►M13	REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 1293/2005 tal-5 ta' Awwissu 2005	L 205	12	6.8.2005

(*)	Dan l-att qatt ma ġie ppubblikat bil-Malti.

---

▼B

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 2676/90

tas-17 ta' Settembru 1990

li jistabbilixxi metodi Komunitarji għall-analiżi ta' l-inbid

Artikolu 1

1.  Il-metodi Komunitarji għall-analiżi ta' l-inbid li jagħmluha possibbli, fil-kuntest tat-transazzjonijiet kummerċjali u l-operazzjonijiet kollha ta' kontroll, li:

huma dawk stabbiliti fl-Anness ta' dan ir-Regolament.

2.  Għas-sustanzi li għalihom huma stabbiliti metodi ta' referenza u metodi tas-soltu, ir-riżultati miksuba bl-użu tal-metodi ta' referenza għandhom japplikaw.

Artikolu 2

Għall-iskopijiet ta' l-applikazzjoni ta' dan ir-Regolament:

Kemm-il darba ma' jingħadx mod ieħor, il-probabbilità għandha tkun 95 %.

Artikolu 3

1.  Il-metodi analitiċi awtomatiċi għandhom ikunu aċċettabli, taħt ir-responsabbiltà tad-Direttur ta' laboratorju fuq kondizzjoni li r-reqqa, ir-repetibbiltà u r-riproduċibbiltà tar-riżultati huma ta' mill-inqas ekwivalenti għal dawk tar-riżultati miksuba permezz tal-metodi analitiċi msemmija fl-Anness.

Meta tinqala' tilwima, l-metodi msemmija fl-Anness ma jistgħux jiġu mibdula b'metodi awtomatiċi.

▼M12 —————

▼B

Artikolu 4

Kulmeta jissemma l-ilma għal skopijiet ta' soluzzjoni, tgħammid, jew ħasil, dan għandu jfisser ilma ddistillat jew ilma dimineralizzat ta' purità ekwivalenti. Il-kimiċi kollha għandhom ikunu ta' kwalità għall-metodu analitiku ħlief meta speċifikat mod ieħor.

Artikolu 5

Ir-Regolament (KEE) Nru 1108/82 huwa mħassar.

Madanakollu l-Artikolu 1 (4) ta' dak ir-Regolament għandu japplika sal-31 ta' Diċembru 1990.

Artikolu 6

Dan ir-Regolament għandu jidħol fis-seħħ fil-jum meta jiġi ppubblikat fil-Ġurnal Uffiċjali tal-Komunitajiet Ewropej.

Għandu japplika b'effett mill-1 ta' Ottubru 1990.

Dan ir-Regolament għandu jorbot fl-intier tiegħu u huwa direttament applikabbli fl-Istati Membri kollha.

---

ANNESS

1.   DENSITÀ U GRAVITÀ SPEĊIFIKA F' 20 °C

1.   DEFINIZZJONIJIET

Id-densità hija l-l-massa għal kull unità ta' volum ta' inbid jew għeneb magħsur qabel ma jiħmar mhux fermentat f'20 °C. Hija espressa fi grammi għal kull millilitru u murija bis-simbolu r 20 °C.

Il-gravità speċifika f' 20 °C (jew l-20 °C/20 °C densità relattiva) hija l-iskala, espressa bħala numru deċimali, tad-densità ta' ċertu volum ta' l-inbid jew ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar mhux iffermentat f' 20 °C għad-densità ta' l-istess volum ta' l-ilma fl-istess temperatura. Hija espressa bis-simbolu d20 °C 20 °C

2.   PRINĊIPJI TAL-METODI

Id-densità u l-gravità speċifika f'20 °C huma mkejla fuq kampjun għall-eżami:

Nota:

Għal kejl preċiż ħafna, id-densità għandha tiġi korretta għall-efett tal-kubrit diossidu billi tintuża l-formula:

ρ 20 °C = ρ′ 20 °C – 0,0006 × meta

ρ20 °C = densità korretta

ρ20 °C = densità osservata

S = kwantità totali ta' diossidu silforiku fi grammi għal kull litru

3.   TRATTAMENT PRELIMINARI TAL-KAMPJUN

Jekk l-inbid jew l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar li għadu m'huwiex iffermentat ikun fih kwantitajiet sinifikanti ta' karbonju diossidu, neħħi ħafna minnu billi tħawwad 250 ml ilma fi flixkun ta' litru wieħed jew billi tiffiltrah taħt press mnaqqsa minn 2 g ta' tajjar mpoġġija f'tubu ta' estensjoni.

4.   METODU TA' REFERENZA

4.1.   Apparat:

Apparat normali ta' laboratorju, u b'mod partikolari:

4.1.1.

Piknometru tal-Pyrex ( 4 ), b'kapaċità ta' madwar 100 ml, b'termometru tal-ħġieġ mitħun li jinqala' ikkalibrat f'għexieren ta' gradi minn 10 sa 30 °C (Figura 1 - It-termometru għandu jkun standardizzat). Figura 1 Il-piknometru u t-tara tiegħu Il-piknometru għandu tubu mal-ġenb twil 25 mm u b'dijamteru intern ta' 1 mm (massimu), li jispiċċa f' ġonta ta' għamla konika. It-tubu tal-ġenb jistgħa jkun mgħotti b”tapp ta' riżerva' li jkun jikkonsisti f'tubu tal-ħġieġ mitħun ta' għamla konika u li jintemm f'sezzjoni miġbuda “l barra. Dan it-tapp iservi bħala post ta' espansjoni.” Iż-żewġ ġonot t'isfel ta' l-apparat għandhom ikunu mħejjija b'attenzjoni kbira.

4.1.2.

Flixkun tat-tara, li jkun jikkonsisti f' ġarra bl-istess volum minn barra (sa mill-inqas 1 ml) bħall-piknometru u b'massa ugwali għall-massa tal-piknometru mimli b'likwidu ta' gravità speċifika 1,01 (soluzzjoni tas-sodju kloridu 2,0 % m/v). Kontenitur insulat għas-sħana, li joqgħod bl-eżatt fil-piknometru.

4.1.3.

Miżien b 'żewġt itwaġen b'marġni ta' mill-inqas 300 g u sensittività ta' 0,1 mg, jew miżien b'taġen wieħed b'marġni ta' mill-inqas 200 g u sensittività ta' 0,1 mg.

4.2.   Kalibrazzjoni tal-piknometru

Il-kalibrazzjoni tal-piknometru tinvolvi li jiġu stabbiliti l-kwantitajiet li ġejjin:

4.2.1.   Metodu meta jintuża miżien b'żewġt itwaġen

Poġġi l-bott tat-tara fuq it-taġen tan-naħa tax-xellug tal-miżien u l-piknometru nadif u niexef, mħejji bit-'tapp ta' riżerva', fuq it-taġen tan-naħa tal-lemin. Żid l-użin fuq it-taġen lijżomm il-piknometru u reġistra l-użin meħtieġ sabiex jiġi stabbilit ekwilibriju: ħalliha tkun p grammi.

B'attenzjoni imla l-piknometru b'ilma distillat bit-temperatura ambjentali u poġġi t-termometru; b'attenzjoni imsaħ il-piknometru u poġġih fil-kontenitur insulat għas-sħana.Ħawdu billi teqleb il-kontenitur sakemm it-temperatura fuq it-termometru tkun kostanti. {Imsaħ it-tubu tal-ġenb u poġġi t-tapp ta' riżerva'; aqra t-temperatura t°C b'attenzjoni, u possibilment ikkorreġiha għall-ineżattezzi fl-iskala tat-temperatura.} {Iżen il-piknometru mimli bl-ilma kontra t-tara u irrekordja l-użin p2 fi grammi meħtieġa sabiex jiġi stabbilit ekwilibriju}

Kisi bit-tara tal-piknometru vojt:,

tara tal-piknometru vojt = p + m,

meta m = massa ta' l-arja li tinsab fil-piknometru,

m = 0,0012 (p – p′).

Volum f'20 °C:

V20 °C = (p+m-p′) × Ft

meta Ft = fattur meħud mit-Tabella I għat-temperatura t °C.

V 20 °C għandu jkun magħruf sa' ± 0,001 ml.

Massa tal-ilma f'20 °C:

M 20 °C = 0,998203 V 20 °C,

fejn 0,998203 hija d-densità tal-ilma f'20 °C.

4.2.2.   Metodu meta jintuża miżien b'taġen wieħed

Stabilixxi:

kisja bit-tara tal-piknometru vojt:

tara tal-piknometru vojt

meta m = massa ta' arja li tinsab fil-piknometru

m = 0,0012 (P 1 – P).

Volum f' 20 °C

V 20 °C = [P 1 – (P – m)] × Ft

Meta Ft = fattur me]ud mit-Tabella I g]at-temperatura t °C.

Il-volum f'20 °C għandu jkun magħruf sa' ± 0,001 ml

Massa ta' l-ilma f'20 °C

M 20 °C = 0,998203 V 20 °C,

fejn 0,998203 hija d-densità ta' l-ilma f' 20 °C.

4.3.   Metodu tal-kejl ( 7 )

4.3.1.   Metodu meta jintuża miżien b'żewġt itwaġen

Imla l-piknometru bil-kampjun preparat għall-eżami, bili issegwi l-proċedura deskritta f' 4.2.1 hawn fuq.

Ħalli p' tkun l-użin fi grammi meħtieġ sabiex jiġi stabbilit ekwilibriju f' t °C.

Massa tal-likwidu li jkun jinsab fil-piknometru = p + m – p″.

Densità apparenti f' t °C:

Ikkalkola d-densità f'20 °C billi tuża waħda mit-tabelli ta' korrezjoni mogħtija aktar tard, b'mod konformi man-natura tal-likwidu li jkun qiegħed jitkejjel: inbid niexef (Tabella II), għeneb magħsur qabel ma jiħmar naturali jew konċentrat (Tabella III), inbid ħelu (Tabella IV).

4.3.2. L-20 °C/20 °C li tispeċifika l-gravità ta' l-inbid hija ikkalkolata billi tiġi diviża d-densità f' 20 °C b' 0,998203.

4.3.2.   Metodu meta jintuża miżien b'taġen wieħed ( 8 )

Iżen il-flixkun tat-tara u ħalli l-massa tiegħu jkun T.

Ikkalkula d T = T 1 – T 0.

Massa tal-piknometru vojt fil-ħin meta jkun qed isir il-kejl = P – m + d T.

Iżen l-piknometru mimli bil-kampjun preparat għall-eżami, skond il-proċedura deskritta f' 4.2.1 hawn fuq. Ħalli l-massa tiegħu f' °C ikun P 2.

Massa ta' likwidu li jinsab fil-piknometru f't °C = P 2 – (P – m + d T)

Densità apparenti f' t °C:

Ikkalkula d-densità f'20 °C tal-likwidu li jkun qed jiġi eżaminat (inbid niexef, għeneb magħsur qabel ma jiħmar naturali jew ikkonċentrat, jew inbid ħelu) kif indikat f'4.3.1 hawn fuq.

Il-gravità speċifika -20 °C/20 °C hija kalkulata billi tiġi diviża d-densità f' 20 °C b' 0,998203.

4.3.3.

Ir-repetibbiltà tal-kejl tad-densità għall-inbejjed morri u ftit ħelwin: r = 0,00010, u għall-inbejjed ħelwin: r = 0,00018.

4.3.4.

Ir-riproduċibbiltà tal-kejl tad-densità: għall-inbejjed morri u ftit ħelwin: R= 0,00037, u għall-inbejjed ħelwin: R= 0,00045.

▼M8 —————

▼B

6.   EŻEMPJU TAL-KALKOLAZZJONI TAD-DENSITÀ F'20 °C U L-20 °C/20 °C GRAVITÀ SPEĊIFIKA (METODU TA' REFERENZA)

6.1.   Piknometrija meta jintuża miżien b'żewġt itwaġen

6.1.1.   Standarizazzjoni tal-piknometru:

1.	Użin tal-piknometru niexef u nadif: Tara = piknometru + p p = 104,9454 g

2.	Użin tal-piknometru mimli bl-ilma f't °C: Tara = piknometru + ilma + p′ p' = 1,2396 g att t = 20,5 °C

3.	Kalkolazzjoni tal-massa ta' l-arja miżmuma fil-piknometru: m = 0,0012 (p – p′) m = 0,0012 (104,9454 – 1,2396) m = 0,1244 g

4.

Valuri karatteristiċi li għandhom jinżammu: Tara tal-piknometru vojt, p + m: p + m = 104,9454 + 0,1244 p + m = 105,0698 g Volum f' 20 °C = F(p + m – p′)t °C F 20,5 °C = 1,001900 V 20 °C = (105,0698 – 1,2396) × 1,001900 V 20 °C = 104,0275 ml Massa ta' l-ilma f'20 °C = M 20 °C = V 20 °C · 0,998203 M 20 °C = 103,8405 g

6.1.2.   Kalkolu tad-densità u l-gravità speċifika f'20 °C/20 °C ta' inbid morr

ρ″ = 1,2622 at 17,80 °C

ρ 17,80 °C = 0,99788 g/ml

Tabella II tippermetti li ρ20 °C jiġi kalkolat minn ρt °Cwaqt li tintuża r-relazzjoni:

{Għal t = 17,80 °C u għal saħħa alkoħolika ta 11 % vol. c = 0,54.

ρ20 °C = 0,99734 g/ml

6.2.   Piknometrija waqt li jintuża miżien b'taġen wieħed

6.2.1.   Standarizazzjoni tal-piknometru:

1.	Piż tal-piknometru niexef u nadif: P = 67,7913

2.	Piż tal-piknometru mimli bl-ilma f' t °C: P 1 = 169,2715 at 21,65 °C

3.	Massa ta' arja miżmuma fil-piknometru:m m = 0,0012 (P 1 – P) m = 0,0012 × 101,4802 m = 0,1218

4.

Valuri karatteristiċi li għandhom jinżammu: Tara tal-piknometru vojt, P – m: P- m = 67,7913-0,1218 P- m = 67,6695 g Volum f' 20 °C = [P 1 – (P – m)] F t °C F 21,65 °C = 1,002140 V 20 °C = 1,002140 (169,2715-67,6695) V 20 °C = 101,8194 ml Massa ta' l-ilma f'20 °C: M 20 °C = V20 °C × 0,998203 M 20 °C = 101,6364 g Massa tal-flixkun tat-tara, sa T o = 171,9160 g

6.2.2.   Kalkolu tad-densità u tal-gravità speċifika f' 20 oC ta' inbid morr

T 1 = 171,9178 g

d T = 171,9178-171,9160 = 0,0018 g

P – m + d T = 67,6695 + 0,0018 = 67,6713 g

P 2 = 169,2799 at 18 °C

ρ 18 °C = 0,99793 g/ml

It-Tabella II tippermeti li ρ20 °C jiġi kalkolat minn ρt °C waqt li tintuża r-relazzjoni:

Għal t = 18 °C u qawwa alkoħolika ta' 11 % vol. c = 0,49.

ρ20 °C = 0,99744 g/ml

TABELLA I

Fatturi li permezz tagħhom il-massa ta' l-ilma li jkun jinsab fil-piknometru tal-Pyrex f' t °C għandu jiġi multiplikat sabiex jiġi kalkulat il-volum tal-piknometru f' 20 °C

TABELLA II

Korrezzjoni tat-temperatura c għad-densità ta' inbejjed morri mingħajr alkoħol mkejla b'piknometru tal-ħġieġ Pyrex f' t °C sabiex ir-riżultat jiġi relatat ma' 20 °C

Nota:

Din it-tabella tista' tintuża biex taqleb il-gravità speċifika d għall-gravità speċifika d20 t 20 20

TABELLA III

Korrezzjoni tat-temperatura c għad-densità ta'għasar magħsur qabel ma jiħmar naturali u dawk konċentrati mkejjla b'piknometru tal-ħġieġ Pyrex f' t °C sabiex ir-riżultat ikun relatat ma'20 °C

Nota:

Din it-tabella tista' tintuża biex taqleb il-gravità speċifika d20 t għall-gravità speċifika d20 20

TABELLA IV

Korrezjoni tat-temperatura c għad-densità ta' inbejjed ta' 13 % vol u “l fuq li jkun fih zokkor fil-qiegħ mkejjel b'piknometru tal-ħġieġ Pyrex f' t °C sabiex ir-riżultat ikun relatat ma' 20 °C”

TABELLA V

Korrezzjoni tat-temperatura c għad-densità ta' inbejjed morri u nbejjed morri mingħajr alkoħol mkejla b'piknometru tal-ħġieġ ordinarju jew idrometru f' t °C sabiex ir-riżultat ikun relatat ma' 20 °C

Nota:

Din it-tabella tista' tintuża biex taqleb il-gravità speċifika d20 t għall-gravità speċifika d20 20

TABELLA VI

Korrezzjoni tat-temperatura c għad-densità ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar naturali u dawk konċentrati mkejjla b'piknometru jew idrometru ta' ħġieġ ordinarju f' t °C sabiex ir-riżultat ikun relatat ma' 20 °C

Nota:

Din it-tabella tista' tintuża biex taqleb il-gravità speċifika d20 t għall-gravità speċifika d20 20

TABELLA VII

Korrezjoni tat-temperatura c għad-densità ta' inbejjed ta' 13 % vol u aktar li jkun fih fdalijiet ta' zokkor mkejjla b'idrometru jew piknometru tal-ħġieġ ordinarju f' t °C sabiex ir-riżultat ikun relatat ma' 20 °C

2.   EVALWAZZJONI PERMEZZ TA' RIFRATTOMERIJA TAL-KONĊENTRAZZJONI TAZ-ZOKKOR FL-GĦENEB MAGĦSUR QABEL MA JIĦMAR, L-GĦENEB MAGĦSUR QABEL KONĊENTRAT U DAK RETTIFIKAT

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

L-indiċi refrattiv f' 20 °C, muri jew bħala valur assolut jew bħala perċentwal bil-massa tas-sukrożju, huwa mogħti fit-tabella xierqa sabiex jipprovdi mezz kif tinkiseb il-konċentrazzjoni taz-zokkor fi grammi kull litru u fi grammi kull kilogramma għall-għeneb magħsur qabel ma jiħmar, għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat u dak rettifikat.

2.   APPARAT

2.1.   Abbé refrattometru

Ir-refrattometru wżat għandu jkun armt b’miżien kli jagħti:

Ir-refrattometru għandu jkun armat b'termometru li jkollu skala li testendi mill-inqas minn + 15 °C sa + 25 °C u b'arranġament sabiex jiċċirkola l-ilma ħalli jkun jista' jsir kejl f'temperatura ta' 20 ± 5 °C.

L-istruzzjonijiet ta' kif jaħdem dan l-istrument għandhom jiġu segwiti b'mod strett, b'mod partikolari għar-rigward tal-kalibrazzjoni u s-sors tad-dawl.

3.   TĦEJJIJA TAL-KAMPJUN

3.1.   Għeneb magħsur qabel ma jiħmar u għeneb magħsur qabel ma jiħmar konċentrat

Għaddi l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar, jekk dan ikun meħtieġ, minn garża niexfa mitwijja f'erbgħa u, wara li tneħħi l-ewwel qatriet tal-filtru, wettaq il-kalkolu fuq il-prodott iffiltrat.

3.2.   Għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat

Skond il-konċentrazzjoni, uża jew l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat jew soluzzjoni miksuba billi żżid 200 g għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat sa 500 g bl-ilma, u kull użin għandu jsiq b'reqqa.

4.   PROĊEDURA

Saħħan il-kampjun sa temperatura viċin l-20 °C. Poġġi kampjun ta' eżami żgħir fuq il-priżma ta' taħt tar-refrattometru, b'attenzjoni (minħabba li l-priżmi huma pressati sew kontra xulxin) li dak il-kampjun jgħatti l-wiċċ tal-ħġieġa b'mod uniformi. Ħu l-kejl skond l-istruzzjonijiet ta' l-użu ta' l-istrument użat.

Aqra l-perċentwal skond l-massa tas-sukrożju sa madwar 0,1 % jew aqra l-indiċi refrattiv sa erba postijiet deċimali.

Għamel mill-inqas żewġ kalkoli fuq l-istess kampjun preparat.

Ħu nota tat-temperatura t °C.

5.   KALKOLU

5.1.   Korrezzjoni tat-temperatura

5.1.1.

Strumenti gradati f'perċentwal b'massa tas-sukrożju: uża t-Tabella I sabiex tikseb il-korrezzjoni tat-temperatura.

5.1.2.

Strumenti gradati f'indiċi refrattiv: Sib l-indiċi mkejjel f' t °C fit-Tabella II sabiex tikseb (kolonna 1) il-valur korrispondenti tal-perċentwal ta' massa tas-sukrożju f t °C. Dan il-valur huwa korreġut għat-temperatura u espress bħala konċentrazzjoni f' 20 °C permezz tat-Tabella I.

5.2.   Konċentrazzjoni taz-zokkor fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar u għeneb magħsur qabel ma jiħmar konċentrat

Sib il-perċentwal bil-massa tas-sukrożju f' 20 °C fit-Tabella II u aqra mill-istess linja il-konċentrazzjoni taz-zokkor fi grammi kull litru u grammi kull kilogramma. Il-konċentrazzjoni taz-zokkor hija espressa f'termini ta' zokkor maqlub sa post deċimali wieħed.

5.3.   Konċentrazzjoni taz-zokkor f'għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat u rettifikat

Sib il-perċentwal bil-massa tas-sukrożju f' 20 °C fit-Tabella III u aqra mill-istess linja l-konċentrazzjoni taz-zokkor fi grammi kull litru u grammi kull kilogramma. Il-konċentrazzjoni taz-zokkor hija espressa f'termini ta' zokkor maqlub sa post wieħed deċimali.

Jekk il-kejl sar fuq għeneb magħsur qabel ma jiħmar li huwa ikkonċentrat u rettifikat u li huwa dilwit, immoltiplika r-riżultat bil-fattur tat-taħlit.

5.4.   Indiċi refrattiv ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar, għeneb magħsur qabel ma ikkonċentrat u għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat .

Sib il-perċentwal bil-massa tas-sukrożju f' 20 °C fit-Tabella II u aqra mill-istess linja l-indiċi refrattiv f' 20 °C. Dan l-indiċi huwa espress sa erba' postijiet deċimali.

TABELLA I

Korrezzjoni li għandha issir meta l-perċentwal skond il-massa tas-sukrożju ikun ġie kalkulat f'temperatura differenti minn 20 °C

It-temperaturi ma jistgħux ivarjaw minn 20°C b’aktar minn ± 5°C

TABELLA II

Tabella li tagħti l-konċentrazzjoni taz-zokkor ( 9 ) fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar fi grammi għal kull litru u grammi għal kull kilogramma, stabbilit permezz ta' refrattometru gradat jew f'perċentwal mal-massa tas-sukrożju f'20 °C jew fl-indiċi refrattiv f' 20 °C. Id-densità f' 20 °C hija wkoll mogħtija

TABELLA III

Tabella li tagħti l-konċentrazzjoni taz-zokkor ( 10 ) fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar retifikat u konċentrat fi grammi għal kull litru u grammi għal kull kilogramma, ikkalkulata permezz ta' refrattometru gradat jew f'perċentwal mal-massa tas-sukrożju f'20 °C jew fl-indiċi refrattiv f' 20 °C. Id-densità f' 20 °C hija ukoll mogħtija

3.   QAWWA ALKOĦOLIKA PERMEZZ TAL-VOLUM

1.   DEFINIZZJONI

Il-qawwa alkoħolika skond il-volum hija n-numru ta' litri ta' etinol li jkun jinsab f'100 litru ta' inbid, iż-żewġ volumi jkunu mkejjla f'temperatura ta' 20 °C. Hija espressa bis-simbolu “% vol”.

Nota:

Omologi ta' etanol, flimkien ma' l-etanol u l-omologi tal-etanol f' esteri ta' l-etanol, huma inklużi fil-qawwa alkoħolika minħabba li jidru fid-distillat.

2.   PRINĊIPJI TAL-METODI

2.1.	Distillazzjoni ta' l-inbid magħmul alkalin b'sospensjoni ta' idrossidu tal-kalċju. Kejl tal-qawwa alkoħolika tad-distillat

▼M12

2.2.	Metodi ta’ referenza: — il-kejl tas-saħħa alkoħolika tad-distillat bl-użu ta’ piknometru, — il-kejl tas-saħħa alkoħolika tal-inbejjed bl-użu ta’ miżien idrostatiku, — il-kejl tas-saħħa alkoħolika tal-inbejjed permezz ta’ densimetrija elettronika bl-użu ta’ oxxillatur tal-frekwenza.

▼B

2.3.

Metodi tas-soltu: 2.3.1. Kejl tal-qawwa alkoħolika tad-distillat b'idrometru. ▼M11 ————— ▼B 2.3.3. Kejl tal-qawwa alkoħolika tad-distillat permezz ta' rifrattometrija. Nota: Sabiex tikseb il-qawwa alkoħolika mid-densità tad-distillat, uża t-Tabelli I, II u III fl-Anness II għal din it-taqsima ta' l-Anness. Dawn ġew ikkalkolati mit-Tabelli Internazzjonali tal-Qawwa Alkoħolika ippublikati fl-1972 mill-Organizzazzjoni Internazzjonali tal-Metroloġija Legali fir-Rakomandazzjoni 22 tagħha u adottata mill-OIV (Assemblea Ġenerali, 1974). It-Tabella I tagħti il-formola ġenerali rigward il-qawwa alkoħolika permezz tal-volum u d-densità tat-taħlit ta' l-alkoħol bl-ilma bħala funzjoni tat-temperatura.

3.   METODU KIF JINKISEB DISTILLAT

3.1.   Apparat

3.1.1.

Apparat ta' distillazjoni, li jikkonsisti fi: — flixkun tal-litru bil-qiegħ tond b'ġonot tal-ħġieġ mitħun, — kolonna rettifikanti ogħlja madwar 20 cm jew xi apparat li jipprevjeni t-titjir, għajn ta' sħana, — kull pirolożi ta' materja estratta m'għandiex titħalla permezz ta' arranġament sodisfaċenti, — kaldarun li jtemm f'tubu maħruġ l barra li jilqa' id-distillat fil-qiegħ ta' flixkun riċevitur gradat li jkunu xiftit ml ilma.

3.1.2.

Apparat ta' distillazzjoni bil-fwar jikkonsisti f': 1. ġeneratur tal-fwar; 2. pajp tal-fwar; 3. kolonna rettifikanti; 4. kaldarun. Kull tip ta' distillazjoni jew apparat ta' distillazzjoni bil-fwar jista' jintuża kemm-il darba dan jissodisfa l-eżami li ġej: Iddistilla taħlita ta' etinol u ilma b'qawwa alkoħolika ta' 10 % vol ħames darbiet wara xulxin. Id-distillat għandu jkollu qawwa alkoħolika ta' mill-inqas 9,9 % vol wara l-ħames distillazjoni, i.e. it-telf ta' l-alkoħol matul kull distillazzjoni m'għandux ikun ta' aktar minn 0,02 % vol.

3.2.   Kontenut

3.2.1

A 2 M sospensjoni ta' idrossidu tal-kalċju, miksub billi b'attenzjoni tferra 1 litru ilma f'60 sa 70 °C fuq 120 g ta' quicklime (CaO).

3.3.   Tħejjija tal-kampjun

Neħħi l-biċċa l-kbira ta' kull diossidu tal-karbonju minn inbejjed żgħar u frizzanti billi tħawwad 250 sa 300 ml ta' l-inbid fi flixkun ta' 500-ml flask.

3.4.   Proċedura

Kejjel 200 ml ta' l-inbid billi tuża flixkun gradat.

Irreġistra t-temperatura ta' l-inbid.

Trasferixxi l-inbid għall-flixkun ta' distillazjoni u introduċi l-pajp tal-fwar ta' l-apparat ta' distillazjoni tal-fwar. Laħlaħ il-flixkun gradat erba' darbiet b' ħasliet ta' 5-ml ta' ilma wara xulxin miżjuda fil-flixkun jew fil-pajp tal-fwar.Żid 10 ml ta' (3.2.1) kalċju idrossidu u diversi biċċiet ta' materjal inert poruż (ħaffiefa, eċċ).

Iġbor id-distillat fi flixkun gradat ta' 200-ml użat biex jitkejjel l-inbid.

Iġbor volum ta' madwar tlett kwarti tal-volum inizjali jekk tintuża d-distillazjoni u volum ta' 198 sa 199 ml tad-distillat jekk tintuża distillazzjoni bil-fwar. Żid sa 200 ml bl-ilma distillat, żomm id-distillat f'temperatura ta' madwar 2 °C tat-temperatura inizzjali.

Ħawwad b'attenzjoni kbira, billi tuża moviment ċirkolari.

Nota:

Fil-każ ta' inbejjed li jkun fihom konċentrazzjonijiet b'mod partikolari kbar ta' jonji ta' l-ammonju, id-distillat jista' jerġa jiġi distillat taħt il-kundizzjonijiet deskritti hawn fuq, iżda biddel is-sospensjoni ta' idrossidu tal-kalċju b' 1 M aċidu sulfuriku dilwit sa 10 partijiet f' 100 (vol/vol).

▼M12

4.   METODI TA’ REFERENZA

4–A   Il-kejl tas-saħħa alkoħolika tad-distillat bl-użu ta’ piknometru

▼B

4.1.   Apparat

4.1.1.

Uża l-piknometru standardizzat kif deskritt fil-kapitolu “Densità u gravità speċifika” (l-Anness, Kapitolu 1).

4.2.   Proċedura

Kejjel id-densità reali tad-distillat (3.4) f' t °C kif deskritt fil-kapitolu “Densità u gravità speċifika” (l-Anness, Kapitolu 1, sezzjonijiet 4.3.1 u 4.3.2). Ħalli din id-densità tkun ρt.

4.3.   Espressjoni tar-riżultati

4.3.1.   Metodu ta' kalkolu

Sib il-qawwa alkoħolika f'20 °C billi tuża t-Tabella I. Fil-linja orizzontali ta' din it-tabella li tikkorrispondi mat-temperatura T (espressa bħala numru sħiħ) immedjatament taħt t °C, sib l-iżgħar densità akbar minn ρt. Uża d-differenza tabulari eżattament taħt din id-densità sabiex tikkalkula id-densità ρ f'din it-temperatura T.

Fuq il-linja tat-temperatura T, sib id-densità ρ immedjatament fuq ρ' u ikkalkula id-differenza bejn id-densitajiet ρ u ρ'. Iddividi din id-differneza bid-differenza tabulari eżatt fuq il-lemin tad-densità ρ'. Ir-risposta tagħti il-parti deċimali tal-qawwa alkoħolika, filwaqt li n-numru sħiħ parti minn din il-qawwa huwa muri fir-ras tal-kolonna li fiha tinsab id-densità ρ'.

Eżempju tal-kalkolazzjoni tal-qawwa alkoħolika huwa mogħti fl-Appendiċi I ta' dan il-Kapitolu ta' l-Anness.

Din il-korrezzjoni tat-temperatura ġiet inkorporata fi programm tal-kompjuter u tista' possibilment titwettaq b'mod awtomatiku.

4.3.2.

Repetibbiltà, r: r = 0,10 % vol.

4.3.3

Riproduċibbiltà, R: R = 0,19 % vol.

▼M12

4–B   Il-kejl tas-saħħa alkoħolika tal-inbejjed bl-użu ta’ miżien idrostatiku

▼M11

1.   IL-METODU TAL-KEJL

1.1.   Daħla

Il-qawwa alkolika skond il-volum trid tiġi mkejla qabel il-marketing, prinċipalment sabiex tikkonforma mar-regoli tal-għoti tat-tikketti.

Il-qawwa alkolika skond il-volum hija egwali għan-numru ta' litri ta' l-etanol li jkun hemm f'100 litru ta' nbid imkejla f'temperatura ta' 20 °Ċ. Riferit bħala ' % vol'.

1.2.   L-oġġett u l-kamp ta' l-applikazzjoni

Il-metodu tal-kejl deskritt huwa d-densimetrija bl-użu ta' miżien idrostatiku.

Għall-għanijiet tad-dispożizzjonijiet regolatorji fis-seħħ, it-temperatura tal-prova hija ffissata għal 20 °Ċ.

1.3.   Il-prinċipju u d-definizzjonijiet

Il-prinċipju ta' dan il-metodu huwa msejjes fuq id-distillazzjoni ta' l-inbid volum b'volum. Il-metodu tad-distillazzjoni huwa deskritt f'dan il-Kapitolu. Id-distillazzjoni telimina s-sustanzi li ma jtirux. L-omologi ta' l-etanol, flimkien ma' l-etanol u l-omologi ta' l-etanol fl-etil esteri, huma inklużi fil-qawwa alkolika ġaladarba jidhru fid-distillat.

Iiġi mbagħad imkejla d-densità tad-distillat miksub. Id-densità ta' likwidu f'temperatura mogħtija hija egwali għall-kwozjent tal-massa fuq il-volum tagħha: p 2 = m/V; għall-inbid, hija espressa fi g/ml.

Il-qawwa alkolika ta' l-inbejjed tista' tiġi mkejla bid-densimetrija bl-użu ta' miżien idrostatiku msejjes fuq il-prinċipju ta' Arkimede, li skondu korp imgħaddas f'likwidu jirċievi mbottatura vertikali 'l fuq mil-likwidu egwali għall-piż tal-likwidu spostat.

1.4.   Ir-reaġenti

Matul l-analiżi, għajr jekk iddikjarat xorta oħra, uża r-reaġenti biss tal-grad analitiku magħruf u l-ilma ta' mill-inqas il-grad 3 kif iddefinit fl-ISO 3696:1987.

1.4.1.   Is-soluzzjoni tat-tindif tal-galleġġjant (l-idrossidu tas-sodju, 30 % w/v)

Sabiez tħejji 199 ml, iżen 30 g idrossidu tas-sodju u wassal għall-volum billi tuża 96 % etanol fil-volum.

1.5.   L-apparat u t-tagħmir

L-apparat tas-soltu tal-laboratorju u b'mod partikolari dan li ġej:

1.5.1.

Il-miżien idrostatiku ta' keffa waħda b'sensittività ta' 1 mg.

1.5.2.

Galleġġjant b'volum ta' mill-inqas 20 ml, addattat b'mod speċjali għall-miżien, sospiż b'ħajta ta' dijametru li ma jaqbiżx iż-0,1 mm.

1.5.3.

Iċ-ċilindu tal-kejl li jġorr marka tal-livell. Il-galleġġjant irid ikun kapaċi li jkun ikkontenut b'mod komplet ġewwa l-volum taċ-ċilindru lokat taħt il-marka; il-wiċċ tal-likwidu jista jiġi ppenetrat biss bil-ħajta tas-sostenn. Iċ-ċilindru tal-kejl irid ikollu dijametru intern ta' mill-inqas 6 mm ikbar minn dak tal-galleġġjant.

1.5.4.

Termometru (jew sonda tal-kejl tat-temperatura) iggradwat fi gradi u l-għexur ta' grad minn 10 °Ċ sa 40 °Ċ, ikkalibrat għal 0,05 °Ċ.

1.5.5.

Piżijiet, ikkalibrati minn korp magħruf taċ-ċertifikazzjoni.

1.6.   Il-proċedura

Il-galleġġjant u ċ-ċilindru tal-kejl iridu jiġu mnaddfa bejn kull kejl bl-ilma ddistillat, imnixxef b'karta ratba tal-laboratorju li ma twaqqax fibri u mlaħlaħ bis-soluzzjoni li d-densità tagħha trid tiġi stabbilita. Il-kejlijiet iridu jsiru hekk kif l-apparat ikun laħaq l-istabbiltà għalbiex jirrestrinġi t-telf ta' l-alkol bl-evaporazzjoni.

1.6.1.   Il-kalibrazzjoni tal-miżien

Għalkemm l-imwieżen is-soltu jkollhom sistema interna tal-kalibrazzjoni, il-miżien idrostatiku jrid ikun kapaċi jikkalibra b'piżijiet iċċekkjati minn korp uffiċjali taċ-ċertifikazzjoni.

1.6.2.   Il-kalibrazzjoni tal-galleġġjant

1.6.2.1.

Imla ċ-ċilindru tal-kejl sal-marka bl-ilma ddistillat għal darbtejn (jew ilma ta' safa ekwivalenti, p.e. l-ilma mikro-ffiltrat b'kondittività ta' 18,2 MO/ċm) f'temperatura ta' bejn il-15 °Ċ u l-25 °Ċ imma preferibbilment ta' 20 °Ċ.

1.6.2.2.

Għaddas il-galleġġjant u t-termometru, ħawwad u aqra d-densità tal-likwidu mill-apparat u, jekk meħtieġ, ikkorreġi l-qari hekk li jkun egwali għal dak ta' l-ilma fit-temperatura tal-kejl.

1.6.3.   Ikkontrolla billi tuża soluzzjoni ta' l-ilma-alkol.

1.6.3.1.

Imla ċ-ċilindru tal-kejl sal-marka b'taħlita ta' ilma-alkol ta' qawwa magħrufa u f'temperatura ta' bejn il-15 °Ċ u l-25 °Ċ imma preferibbilment ta' 20 °Ċ.

1.6.3.2.

Għaddas il-galleġġjant u t-termometru, ħawwad, aqra d-densità tal-likwidu (jew il-qawwa alkolika jekk dan ikun possibbli) mill-apparat. Il-qawwa alkolika hekk stabbilita għandha tkun egwali għall-qawwa stabbilita qabel ta' l-alkol. Din is-soluzzjoni ta' qawwa alkolika magħrufa tista' tintuża wkoll sabiex tikkalibra l-galleġġjant minflok l-ilma ddistillat doppjament.

1.6.4.   Il-kejl tad-densità ta' distillat (jew tal-qawwa alkolika tiegħu jekk l-apparat jippermetti)

1.6.4.1.

Ferragħ il-kampjun tat-test għal goċ-ċilindru sal-marka tal-gradazzjoni.

1.6.4.2.

Għaddas il-galleġġjant u t-termometru, ħawwad, aqra d-densità tal-likwidu (jew il-qawwa alkolika jekk dan ikun possibbli) mill-apparat. Innota t-temperatura jekk id-densità titkejjel f'temperatura ta' p °Ċ.

1.6.4.3.

Ikkorreġi t-temperatura p bl-użu tad-densitajiet f'temperatura ta' p għat-taħlitiet ta' ilma-alkol (it-Tabella II ta' l-Anness II ma' dan il-Kapitolu).

1.6.5.   It-tindif tal-galleġġjant u ċ-ċilindru tal-kejl.

1.6.5.1.

Għaddas il-galleġġjant fis-soluzzjoni tat-tindif tal-galleġġjant fiċ-ċilidru tal-kejl.

1.6.5.2.

Ħalli jixxarrab għal siegħa filwaqt li ddawwar il-galleġġjant perjodikament.

1.6.5.3.

Laħlaħ b'ammonti kbar ta' l-ilma tal-vit segwit bl-ilma ddistillat.

1.6.5.4.

Nixxef b'karta ratba tal-laboratorju li ma twaqqax fibri. Wettaq din il-proċedura meta l-galleġġjant jintuża għall-ewwel darba, imbagħad b'mod regolari kif meħtieġ.

1.6.6.   Ir-riżultat

Billi tuża d-densità ta' 20, ikkalkola l-qawwa vera ta' l-alkol bl-użu tat-tabella li tagħti l-valur tal-qawwa alokolika skond il-volum (il- % vol.) f'temperatura ta' 20 °Ċ bħala funzjoni tad-densità f'20 °Ċ tat-taħlitiet ta' ilma-alkol, jiġifieri t-tabella internazzjonali adottata mill-Organizzazzjoni Internazzjoni tal-Metroloġija Legali fir-Rakkommandazzjoni tagħha Nru 22.

2.   IL-PARAGUN TAL-KEJLIJIET MAGĦMULA BL-UŻU TA' MIŻIEN IDROSTATIKU BIL-PROĊEDURI MIKSUBA BL-UŻU TA' DENSIMETRU ELETTRONIKU

Bl-użu tal-kampjuni b'qawwa alkolika ta' bejn il-4 % u t-18 % vol., il-kapaċità tal-kapaċita tat-tennija u r-riproduċibbiltà kienu mkejla wara test taċ-ċirku inter-laboratorju. Kienu pparagunati l-qawwa alkolika tal-kampjuni differenti kif imkejla bl-użu tal-miżien idrostatiku u d-densimetru elettroniku u l-valuri tal-kapaċità tat-tennija u r-riproduċibbità dderivati minn eżerċizzju multi-annwali ta' fost il-paraguni.

2.1.   Il-kampjuni

L-inbejjed ta' densità u qawwa alkolika differenti mħejjija kull xahar fuq skala industrijali, meħuda minn ħażna maħżuna kif jixraq ta' fliexkien u kkunsinnati bħala prodotti anomimi lill-laboratorji.

2.2.   Il-laboratorji

Il-laboratorji li jipparteċipaw fit-test ta' kull xahar taċ-ċirku organizzat mill-Unione Italiana Vini (ta' Verona, l-Italja) skond ir-regoli ta' l-ISO 5727 (l-UNI 9225) u l-Protokoll Internazzjonali tat-Testijiet tal-Profiċjenza għall-laboratorji ta' l-analiżi kimika stabbilit mill-AOAC, l-ISO u l-IUPAC u l-linji gwida ta' l-ISO 43 u l-ILAC G13. Irid jiġi fornit rapport annwali minn din il-kumpanija lill-parteċipanti kollha.

2.3.   It-Tagħmir

2.3.1.

Miżien idrostatiku elettroniku (eżatt sa 5 postijiet deċimali), jekk possibbli b'mezz tal-proċessar ta' l-informazzjoni.

2.3.2.

Densimetru elettroniku, jekk possibbli b'mezz tat-teħid tal-kampjuni waħdu.

2.4.   L-analiżi

Skond ir-regoli għall-validazzjoni tal-metodi, kull kampjun kien analizzat darbtejn konsekuttivament sabiex jistabbilixxi l-qawwa alkolika.

2.5.   Ir-riżultat

It-Tabella 1 turi r-riżultati tal-kejlijiet miksuba mil-laboratorji bl-użu tal-miżien idrostatitku.

It-Tabella 2 turi r-riżultati miksuba mil-laboratorji bl-użu ta' densimetru elettroniku.

2.6.   Il-valutazzjoni tar-riżultati

2.6.1.

Ir-riżultati tal-prova ġew eżaminati għal xiehda ta' żball sistematiku individwali (p < 0,023) bl-użu tat-testijiet ta' Cochran u ta' Grubb konsekuttivament, bil-poċeduri deskritti fil-Protokoll miftiehem internazzjonalment tad-Disinn, il-Kondotta u l-Interpetazzjoni ta' l-Istudji dwar it-Twettiq tax-Xogol tal-Metodu.

2.6.2.

Il-kapaċità tat-tennija (r) u r-riproduċibbiltà (R) Il-kalkoli tal-kapaċità tat-tennja (r) u tar-riproduċibbiltà (R) kif iddefiniti b'dan il-protokoll kienu mwettqa fuq dawk ir-riżultat li baqgħu wara r-tneħħija ta' l-oġġetti li kienu fuq barra. Meta jkun qiegħed jiġi stmat metodu ġdid spiss ma jkun hemm l-ebda metodu tar-riferiment jew statutorju vvalidati sabiex jiġu pparagunati l-kriterji tal-preċiżjoni, għalhekk ikun utli li tiġi pparagunata l-informazzjoni ta' preċiżjoni miksuba minn prova kollaborattiva b'livelli 'mbassra' ta' preċiżjoni, Dawn il-livlli 'mbassra' jiġu kkalkolati mill-ekwazzjoni ta' Horwitz. Il-paragun tar-riżultati tal-prova u l-livelli mbassra jagħtu indikazzjoni dwar jekk il-metodu jkunx preċiż biżżejjed għal-livell ta' l-analit li jkun qiegħed jitkejjel. Il-valur tal-livell imbassar ta' Horwitx jiġi kkalkolat mill-ekwazzjoni ta' Horwitz. fejn il-C = il-konċentrazzjoni mkejla ta' l-analit espressa bħala deċimali (p.e. 1 g/100 g = 0,01). Il-valur ta' Horrat jagħti paragum tal-preċiżjoni attwali mkejla bil-preċiżjoni mbassra mill-ekwazzjoni ta' Horwitz għal metodu tal-kejl f'dan il-livell partikolari ta' l-analit. Jiġi kkalkolat kif ġej: HoR =RSDR(imkejjel)/RSDR(Horwitz)

2.6.3.

Il-preċiżjoni bejn il-laboratorji Valur ta' Horrat ta' 1 is-soltu jindika preċiżjoni bejn il-laboratorji sodisfaċenti, filwaqt li valur ta' 2 is-soltu jindika proċiżjoni mhux sodisfaċenti, jiġifieri wieħed li jvarja żżejjed għall-biċa l-kbira tal-għanijiet analitiċi jew meta l-varjazzjoni miksuba tkun ikbar minn dik mistennija għat-tip ta' metodu wżat. Il-Hor jiġi kkalkolat ukoll, u wżat għalbiex jistma l-preċiżjoni bejn il-laboratorji, bl-użu ta' l-approssimazzjoni li ġejja: RSDr(Horwitz) = 0,66 RSDR(Horwitz) (din tassumi l-approssimazzjoni r = 0,66 R). It-Tabella 3 turi d-differenza bejn il-kejlijiet miksuba mil-laboratorji li jużaw id-densimetrija elettronika u dawk li jużaw il-miżien idrostatiku. Jekk jitħalla barra l-kampjun 2000/3, li kellu qawwa alkolika baxxa ħafna u li għalih iż-żewġ metodi tat-teknika juru riproduċibbiltà fqira, jiġi ġeneralment osservat qbil tajjeb ħafna għall-kampjuni l-oħra.

2.6.4.

Il-parametri tal-fedeltà It-Tabella 4 turi l-medju ġenerali tal-parametri tal-fidelità kkomputAti mill-provi kollha ta' kull xahar imwettqa minn Jannar 1999 sa Mejju 2001. B'mod partikolari: IL-kapaċità tat-tennija (r) = 0,074 ( % vol.) għall-miżien idrostatiku u 0,061 ( % vol.) għal-densimetrija elettronika. Ir-riproduċibbiltà (R) = 0,229 ( % vol.) għall-miżien idrostatiku u 0,174 ( % vol.) għad-densimetrija elettronika.

2.7.   Il-konklużjoni

Ir-riżultati sabiex tiġi stabbilita l-qawwa alkolika għal firxa wiesgħa ta' nbejjed juru l-paragunabbiltà tal-kejlijiet imwettqa bil-miżien idrostatiku u d-densimetru elettroniku bl-użu ta' oxxillatur tal-frekwenzi u juru illi l-valuri tal-parametri tal-validazzjoni huma simili għaż-żewġ metodi.

▼M12

4–C   Kejl tas-saħħa alkoħolika tal-inbejjed permezz ta’ densimetrija elettronika bl-użu ta’ oxxillatur elettroniku.

1.   Metodu ta' kejl

1.1.   Titolu u introduzzjoni

Is-saħħa alkoħolika bil-volum tal-inbejjed trid titkejjel qabel il-kummerċjalizzazzjoni tal-prodott, prinċipalment biex tintlaħaq konformità mar-regoli tal-ittikkettar.

Id-definizzjoni tas-saħħa alkoħolika bil-volum tidher fil-paragrafu 1 ta’ dan il-Kapitolu.

1.2.   Finijiet u ambitu

Il-metodu ta’ kejl imfisser huwa densimetrija elettronika bl-użu ta’ oxxillatur elettroniku.

Għall-finijiet tad-dispożizzjonijiet regolatorji li jinsabu fis-seħħ, it-temperatura tal-provi hija ffissata għal 20 °C.

1.3.   Prinċipju u definizzjonijiet

Il-prinċipju ta’ dan il-metodu huwa bbażat fuq l-iddistillar tal-inbid volum b’volum. Il-metodu tal-iddistillar huwa mfisser fil-paragrafu 3 ta’ dan il-Kapitolu. Id-distillazzjoni telimina s-sustanzi li mhumiex volatili. L-omologi tal-alkoħol, flimkien ma’ l-alkoħol u l-omologi tal-alkoħol fl-esteri tal-etile, huma inklużi fis-saħħa alkoħolika minħabba li dawn jinsabu fid-distillat.

Imbagħad titkejjel id-densità tad-distillat miksub. Id-densità ta’ likwidu f’temperatura speċifikata hi ugwali għall-kwozjent tal-massa diviża bil-volum tagħha:

ρ = m/V, għall-inbid, espressa f’g/ml.

Għal soluzzjoni idroalkoħolika bħal ma huwa distillat, fejn it-temperatura hija magħrufa, jistgħu jintużaw tabelli biex jiġu stabbiliti fid-dettall id-densità u s-saħħa alkoħolika. Din is-saħħa alkoħolika tikkorrispondi għal dik tal-inbid (id-distillazzjoni volum b’volum).

B’dan il-metodu, id-densità tad-distillat titkejjel permezz ta’ densimetrija elettronika bl-użu ta’ miżuratur elettroniku tal-frekwenza tar-reżonanza. Il-prinċipju jikkonsisti mill-kejl tal-perjodu ta' oxxillazzjoni ta' tubu li fih ikun hemm il-kampjun li jiġi ssuġġettat għal stimulazzjoni elettromanjetika. Id-densità tista’ mbagħad tiġi kkalkulata — din tkun marbuta mal-perjodu ta’ oxxillazzjoni fuq il-bażi ta’ din il-formula:

(1)

ρ

=

id-densità tal-kampjun

T

=

il-perjodu ta’ vibrazzjoni indotta

M

=

il-massa tat-tubu battal

C

=

kostant ta’ rkupru

V

=

il-volum tal-kampjun waqt il-vibrazzjoni

Din ir-relazzjoni tieħu l-forma ρ = A T2 — B (2); għalhekk teżisti relazzjoni lineari bejn id-densità u l-perjodu kwadrat. L-elementi kostanti A u B huma speċifiċi għal kull miżuratur u l-valuri tagħhom huma stmati billi jitkejjel il-perjodu tal-fluwidi tad-densità magħrufa.

1.4.   Reaġenti u prodotti

1.4.1   Fluwidi ta’ referenza

Biex jiġi aġġustat id-densimetru għandhom jintużaw żewġ fluwidi ta' referenza. Id-densitajiet tal-fluwidi ta’ referenza għandhom jinkludu dawk tad-distillati li jridu jitkejlu. Hija rrakkomandata differenza fid-densità tal-fluwidi ta’ referenza ikbar minn 0,01000 g/ml. Id-densità tagħhom trid tkun magħrufa bi grad ta’ inċertezza taħt +/– 0,00005 g/ml, f’temperatura ta’ 20,00 °C +/– 0,05 °C.

Biex titkejjel is-saħħa alkoħolika bil-volum bl-użu ta’ densimetru elettroniku, il-fluwidi ta’ referenza huma:

1.4.2   Prodotti għat-tindif u t-tnixxif

1.5.   Apparat

1.5.1   Densimetru elettroniku bl-użu ta’ miżuratur elettroniku tal-frekwenza tar-reżonanza

Id-densimetru elettroniku hu magħmul minn:

Id-densimetru jitqiegħed fuq wiċċ perfettament stabbli li jkun insulat minn kwalunkwe vibrazzjoni.

1.5.2   Ikkontrollar tat-temperatura fiċ-ċellula għall-kejl

It-tubu għall-kejl jitqiegħed fl-ispazju termostatiku magħluq. L-istabbiltà tat-temperatura trid tkun +/– 0,02 °C jew aħjar.

Fejn possibbli, it-temperatura taċ-ċellula għall-kejl għandha tiġi ċċekkjata minħabba li din għandha impatt qawwi fuq ir-riżultati tal-kejl. Id-densità ta’ soluzzjoni idroalkoħolika 10 % tal-vol. hija 0,98471 g/ml f’temperatura ta’ 20 °C u 0,98447 g/ml f’temperatura ta’ 21 °C, jew differenza ta’ 0,00024 g/ml.

It-temperatura għall-provi tiġi ffissata għal 20 °C. It-temperatura titkejjel fiċ-ċellula bl-użu ta' termometru b’riżoluzzjoni ta’ inqas minn 0,01 °C konformi ma’ l-istandards nazzjonali. Dan għandu jiggarantixxi kejl ta’ temperatura b’inċertezza ta’ inqas +/– 0,07 °C.

1.5.3   Kalibrazzjoni tal-apparat

L-apparat irid jiġi kkalibrat qabel ma jintuża għall-ewwel darba, imbagħad kull sitt xhur jew kull meta l-iċċekkjar ma jkunx sodisfaċenti. Għandhom jintużaw żewġ fluwidi ta’ referenza biex jiġu kkalkulati l-elementi kostanti A u B (ara l-formula (2) ta’ hawn fuq). Il-kalibrazzjoni għandha titwettaq b’konformità ma’ l-istruzzjonijiet operattivi għall-apparat. Bħala prinċipju, il-kalibrazzjoni għandha titwettaq bl-użu ta’ arja niexfa (waqt li titqies il-pressjoni atmosferika) u ta’ ilma estremament pur (iddistillat darbtejn u/jew mikroffiltrat b’reżistività estremament għolja ta’ > 18 MΩ).

1.5.4   Ivverifikar tal-kalibrazzjoni

Biex tiġi vverifikata l-kalibrazzjoni għandha titkejjel id-densità tal-fluwidi ta’ referenza.

Id-densità tal-arja għandha tiġi ċċekkjata kuljum. Differenza akbar minn 0,00008 g/ml bejn id-densità teoretika u dik attwali tista’ tkun indikazzjoni li t-tubu huwa miżdud. Għaldaqstant, it-tubu għandu jitnaddaf. Wara t-tindif, id-densità tal-arja għandha terġa’ tiġi ċċekkjata. Jekk dan l-ivverifikar ma jkunx konklużiv, l-apparat irid jiġi aġġustat.

Id-densità tal-ilma wkoll għandha tiġi vverifikata. Jekk id-differenza bejn id-densità teoretika u dik attwali tkun akbar minn 0,00008 g/ml, l-apparat għandu jiġi aġġustat.

Jekk ikun diffiċli li tiġi ċċekkjata t-temperatura taċ-ċellula, id-densità ta’ soluzzjoni idroalkoħolika b’saħħa alkoħolika bil-volum komparabbli ma’ dik tad-distillati analizzati tista’ tiġi vvalutata direttament.

1.5.5   Verifikazzjonijiet

Jekk id-differenza bejn id-densità teoretika ta’ soluzzjoni ta’ referenza (speċifikata b’inċertezza taħt 0,00005 g/ml) u l-kejl tkun akbar minn 0,00008 g/ml, it-temperatura taċ-ċellula trid tiġi vverifikata.

1.6.   Teħid u tħejjija tal-kampjuni

(ara l-punt 3 ta’ dan il-Kapitolu, “Metodu ta’ kif jinkiseb id-distillat”).

1.7.   Proċedura

Wara li jinkiseb id-distillat, għandha titkejjel id-densità jew is-saħħa alkoħolika tiegħu bil-volum bl-użu ta’ densimetru.

L-ewwel għandha tiġi vverifikata l-istabbiltà tat-temperatura fiċ-ċellula għall-kejl. Id-distillat fid-densimetru ma jridx ikollu fih bżieżaq tal-arja u jrid ikun omoġenju. Jekk tkun disponibbli sistema ta’ dawl li tista’ tgħin biex jiġi vverifikat li mhemmx bżieżaq tal-arja, din għandha tintefa malajr wara li jkun sar l-iċċekkjar minħabba li s-sħana ġġenerata mill-bozoz taffettwa t-temperatura għall-kejl.

Jekk l-apparat jagħti biss il-perjodu, id-densità għandha tiġi kkalkulata bl-użu tal-elementi kostanti A u B (ara 1.3). Jekk l-apparat ma jagħtix is-saħħa alkoħolika bil-volum direttament, din tista’ tinkiseb mit-tabelli.

1.8   Espressjoni tar-riżultati

Is-saħħa alkoħolika bil-volum tal-inbid hija dik miksuba għad-distillat u hija espressa f’“% tal-vol.”.

Jekk ma tkunx tista’ tintlaħaq kompatibbiltà mal-kundizzjonijiet tat-temperatura, għandu jiġi kkoreġut ir-riżultat biex it-temperatura tiġi espressa bħala 20 °C. Ir-riżultat jingħata mqarreb għal żewġ punti deċimali.

1.9   Osservazzjonijiet

Il-volum imqiegħed fiċ-ċellula għall-kejl irid ikun kbir biżżejjed biex tiġi evitata kwalunkwe kontaminazzjoni mill-kampjun preċedenti. Konsegwentement, il-kejl għandu jittieħed mill-inqas darbtejn. Jekk dawn ma jagħtux riżultati fil-limitu tar-ripetibbiltà, ikun meħtieġ it-tielet kejl. Ir-riżultati tal-aħħar żewġ kejlijiet huma normalment omoġenji u l-ewwel valur jiġi eliminat.

1.10   Preċiżjoni

Għal dawk il-kampjuni b’saħħa alkoħolika bil-volum ta’ bejn 4 % tal-vol. u 18 % tal-vol.

2.   Provi bejn il-laboratorji. Preċiżjoni u akkuratezza fir-rigward ta’ żidiet awżiljari

Il-karatteristiċi tal-prestazzjoni tal-metodu li jidhru fil-paragrafu 1.10 inkisbu minn test magħmul bejn il-laboratorji fuq sitt kampjuni ttestjati minn ħdax-il laboratorju skont proċeduri internazzjonali stabbiliti.

Id-dettalji kollha u l-kalkoli ta’ ripetibbiltà u riproduċibbiltà kollha marbuta ma’ dan it-test huma deskritti fil-Kapitolu “TITRE ALCOOMETRIQUE VOLUMIQUE” (“Saħħa alkoħolika skont il-volum”) (il-punt 4.B.2) tar-“Recueil International des Méthodes d’Analyse” (kompendju tal-metodi analitiċi — edizzjoni 2004) tal-OIV.

▼M8 —————

▼B

6.   EŻEMPJU TAL-KALKOLU TAL-QAWWA ALKOĦOLIKA TA' L-INBID

6.1.   Kejl b'piknometru fuq miżien b'żewġt itwaġen

6.1.1.

Il-kostanti tal-piknometru ġew stabbiliti u kkalkolati kif deskritt fil-kapitolu 1, “Densità u gravità speċifika”, taqsima 6.1.1.

6.1.2.

Użin tal-piknometru mimli bid-distillat.     Eżempju numeriku Tara = piknometru + distillat f t °C + p″ t °C = 18,90 °C t °C koreġut = 18,70 °C p″ = 2,8074 g p + m – p″ = il-massa tad-distillat f t °C 105,0698-2,8074 = 102,2624 g Densità apparenti f’ t °C

6.1.3.

Kalkolazzjoni tal-qawwa alkoħolika Irreferi għat-tabella ta' densitajiet apparenti tat-taħlit bl-ilma u l-alkoħol f'temperaturi differenti, kif indikat hawn fuq Fil-linja 18 °C tat-tabella tad-densitajiet apparenti, l-iżgħar densità ikbar mid-densità osservata ta' 0,983076 hija 0,98398 fil-kolonna 11 % vol Id-densità f' 18 °C hija: (98307,6 + 0,7 × 22) 10-5 = 0,98323 0,98398 -0,98323 = 0,00075 Il-porzjon deċimali tal-% vol tal-qawwa alkoħolika hija 75/114 = 0,65 Il-qawwa alkoħolika hija 11,65 % vol

6.2.   Kejl permezz ta' piknometru b'miżien b'taġen wieħed

6.2.1.

Il-kostanti tal-piknometru ġew stabbiliti u kkalkolati kif deskritt fil-kapitolu 1, “Densità u gravità speċifika”, taqsima 6.2.1.

6.2.2.

Użin tal-piknometru mimli bid-distillat Użin tal-flixkun tat-tara fil-ħin tal-kejl bil-grammi: T 1 = 171,9178 Piknometru mimli bid-distillat f’ 20,50 °C in grams: P 2 = 167,8438 Tibdil fil-kwalità elastika ta’ l-arja: d T = 171,9178-171,9160   = + 0,0018 Massa tad-distillat f’ 20,50 °C: L t = 167,8438 – (67,6695 + 0,0018)   = 100,1725 Densità apparenti tad-distillat:

6.2.3.

Kalkolazzjoni tal-qawwa alkoħolika Irreferi għat-tabella ta' densitajiet apparenti tat-taħlit bl-ilma u l-alkoħol f'temperaturi differenti, kif indikat hawn fuq Fuq il-linja 20 °C tat-tabella tad-densitajiet apparenti, l-iżgħar densità ikbar mid-densità osservata ta' 0,983825 hija 0,98471 fil-kolonna 10 % vol Id-densità f' 20 °C hija: (98382,5 + 0,5 × 24) 10-5 = 0,983945 0,98471 – 0,983945 = 0,000765 Il-porzjoni deċimali tal-% vol tal-qawwa alkoħolika hija 76,5/119 = 0,64 Il-qawwa alkoħolika hija 10,64 % vol

FORMULA LI MINNHA JIĠU KALKULATI L-QAWWA ALKOĦOLIKA TA' TAĦLIT TA' L-ILMA U L-ETANOL

Id-densità ρ f'kilogrammi kull metru kubiku (kg/m3) ta' taħlita tal-ilma u l-etanol f'tempertaura t fi gradi Celsius hija mogħtija bil-formula li tinsab hawn taħt bħala funzjoni ta':

Il-formula hija valida għal temperaturi bejn- 20 u + 40 °C.

koeffiċjenti numeriċi fil-formola

TABELLA I

QAWWA ALKOĦOLIKA INTERNAZZJONALI F' 20 °C

Tabella tad-densitajiet apparenti tat-taĦlit bl-ilma u l-etinol – piknometru tal-pyrex t

densitajiet f' t oC ikkoreĠuti gĦal tibdil fl-elastiĊitÀ ta' l-arja

TABELLA II

QAWWA ALKOĦOLIKA INTERNAZZJONALI F' 20 °C

Tabella tal-korrezzjonijiet li gĦandhom japplikaw gĦall-qawwa alkoĦolika apparenti sabiex jiĠi koreĠut l-effett tat-temperatura

Żid jew naqqas mill-qawwa alkoĦolika apparenti f' t oC (alcoĦolmiter tal-ĦĠieĠ ordinarju) il-korrezzjoni ndikata hawn taĦt

TABELLA III

QAWWA ALKOĦOLIKA INTERNAZZJONALI F' 20 °C

TABELLA TAD-DENSITAJIET APPARENTI TAT-TAĦLIT BL-ILMA U L-ETINOL APPARAT TAL-ĦĠIEĠ ORDINAJRU T °C IKKOREĠUTI GĦAL TIBDIL FL-ELASTIĊITÀ TA' L-ARJA

DENSITAJIET F't °C corrected for air buoyancy

TABELLA IV

Tabella li tagħti l-indiċi refrattivi tat-taħlit pur etanol-ilma u distillati f'20 °C u l-qawwa alkoħolika korrispondenti f' 20 °C

4.   TOTAL TA' L-ESTRATT NIEXEF

Total tal-materja niexfa

1.   DEFINIZZJONI

It-total ta' l-estratt niexef jew it-total tal-materja niexfa jinkludi l-materja kollha li ma' tisvintax taħt kondizzjonijiet fiżiċi speċifiki. Dawn il-kondizzjonijiet fiżiċi għandhom ikunu tali li l-materja li tifforma l-estratt tgħaddi mill-inqas alterazzjonijiet possibli waqt li jkun qiegħed isir l-eżami.

L-estratt ta' mingħajr zokkor huwa d-differenza bejn it-total ta' l-estratt niexef u t-total taz-zokkor.

L-estratt imnaqqas huwa d-differenza bejn it-total ta' l-estratt niexef u t-total taz-zokkor iżjed minn 1 g/l, sulfat tal-potassju potassium iżjed minn 1 g/l, kull mannitol preżenti u kull sustanza kimika oħra li setgħat ġiet miżjuda ma' l-inbid.

L-estratt residwu huwa l-estratt mingħajr zokkor mingħajr l-aċidità fissa espressa bħala aċtu tartariku.

L-estratt huwa espress fi grammi għal kull litru u għandu jiġi kalkulat sa l-eqreb 0,5 g.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Metodu wieħed: kejl permezz ta' densimetru

It-total ta' l-estratt niexef huwa ikkalkolat indirettament mill-gravità speċifika ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar u, għall-inbid, mill-gravità speċifika ta' l-inbid mingħajr alkoħol.

Dan l-estratt niexef huwa espress f'termini tal-kwantità ta' sukrożju li, meta maħlul jinħall fl-ilma u jiġi miżjud sa volum ta' litru, jagħti soluzzjoni ta'l-istess gravità speċifika bħall-għeneb magħsur qabel ma jiħmar jew l-inbid mingħajr alkoħol. Din il-kwantità hija murija fit-tabella I.

3.   METODU TA' KALKOLU

L-20/20 gravità speċifika dr ta' “inbid mingħajr alkoħol” hija kalkolata billi tintuża l-formula li ġejja:

d r = d v – d a + 1,000

fejn:

dv = gravità speċifika ta' l-inbid f'20 °C (ikkoreġuta għall-aċidità li tisvinta) ( 12 )

da = gravità speċifika f' 20 °C tat-taħlita ta' ilmau alkoħol ta' l-istess qawwa alkoħolika bħall-inbid.

d r tista' wkoll tiġi kkalkolata mid-densitajiet f'20 °C, ρ v ta' l-inbid u ρ a tat-taħlita ta' ilma u alkoħol ta' l-istess qawwa alkoħolika bill-formula:

d r = 1,0018 (ρv - ρa) + 1,000

fejn il-koeffiċjent 1,0018 jqarreb lejn 1 meta ρv huwa anqas minn 1,05, kif ħafna drabi ikun il-każ.

4.   ESPRESSJONI TA' RIŻULTATI

It-tabella I għandha tintuża sabiex jiġi kalkolat it-total ta' l-estratt niexef fi g/l mill-20/20 gravità speċifika d r ta' l-inbid mingħajr alkoħol jew mill-gravità speċifika ta' l-inbid ġdid għadu mhux fermentat.

It-total ta' l-estratt niexef huwa espress fi g/l sa post deċimali wieħed.

TABELLA I

għall-kalkolazzjoni tal-kontenut totali ta' l-estratt niexef (g/l)

5.   ZOKKOR LI JNAQQAS

1.   DEFINIZZJONI

Iz-zokkor li jnaqqas jinkludi z-zokkor kollu li jesebixxi funzjonijiet ketoniċi u aldeidriċi u huma kalkulati permezz ta' l-azzjoni tagħhom li tnaqqas fuq soluzzjoni alkalina ta' melħ tar-ram.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODI

2.1.   Kjarifika

2.1.1.

Metodu ta' referenza: wara n-newtralizazzjoni u t-tneħħija ta' l-alkoħol, l-inbid jiġi mgħoddi minn kolonna ta' skambju tal-joni li fiha l-anjoni jiġu mibdula b'joni ta' l-aċetat, segwit bi kjarifika b'acetat newtrali taċ-ċomb.

2.1.2.

Metodi tas-soltu: l-inbid jiġi trattat b'wieħed mir-reaġenti li ġejjin: 2.1.2.1. Aċetat newtrali taċ-ċomb; 2.1.2.2. Żingu 2-hexacyanoferrate

2.2.	Kalkolu 2.2.1. Metodu wieħed: l-inbid kjarifikat jew l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar jiġi reaġit bi kwantità speċifika ta' soluzzjoni ta' melħ tar-ram alkalin u l-eċċess tal-joni tar-ram mbagħad jigu kalkolati iodometrikament.

3.   KJARIFIKA

Il-kontenut taz-zokkor tal-likwidu li fih irid jiġi kalkulat iz-zokkor għandu jkun bejn 0,5 u 5 g/l.

L-inbejjed morri m'għandhomx jiġu dilwiti matul il-kjarifika sabiex il-livell taz-zokkor jinġieb fil-limiti stabbiliti fit-tabella li ġejja:

3.1.   Metodu ta' referenza

3.1.1.   Reaġenti

3.1.1.1.

1 M soluzzjoni aċtu idrokloriku (HCl);

3.1.1.2.

1 M soluzzjoni idrossidu tas-sodju (NaOH);

3.1.1.3.

4 M soluzzjoni aċtu aċetiku (CH3COOH);

3.1.1.4.

2 M soluzzjoni idrossidu tas-sodju (NaOH);

3.1.1.5.

Raża ta' skambju ta' anjon (Dowex 3 (20-50 mesh) jew raża ekwivalenti). Poġġi kobba zgħira ta' suf tal-ħgieġ u 15 ml tar-raża ta' l-iskambju ta' l-anjon (3.1.1.5) fil-qiegħ tal-burette. Qabel ma' tintuża r-raża, għaddiha minn żewġ ċikli sħaħ ta' riġenerazzjoni billi tgħaddi b'mod alternat s-soluzzjonijiet 1 M ta' l-aċtu idroliku (3.1.1.1) u l-idrossidu tas-sodju (3.1.1.2) minnu. Wara li tlaħlaħ b'50 ml ilma distillat, itfa' r-raża f' buqar, żid 50 ml tas-soluzzjoni 4 M ta' l-aċtu aċetiku (3.1.1.3) u ħawwad għal ħames minuti. Erġa' imla l-burette bir-raża u ferra 100 ml tas-soluzzjoni 4 M aċtu aċetiku (3.1.1.3) mill-kolonna. (Ikun aħjar li wieħed ikollu ħażna ta' raża merfugħa fi flixkun mimli b'din is-soluzzjoni 4 M ta' aċtu aċetiku.) Aħsel il-kolonna b'ilma distillat sakemm dak li jfur ikun newtrali. Ferra 150 ml ta' soluzzjoni 2 M ta' idrossidu tas-sodju minn ġewwa r-raża sabiex tneħħi l-aċidi u l-parti l-kbira tal-kuluri mwaħħla mar-raża. Laħlaħ b'100 ml ilma, u mbagħad ferra 100 ml ta' soluzzjoni 4 M aċtu aċetiku minnha. Aħsel il-kolonna sakemm dak li jfur ikun newtrali.

3.1.1.6.

Soluzzjoni newtrali ta' l-aċetat taċ-ċomb (bejn wieħed u ieħor saturat) Aċetat taċ-ċomb newtrali gPb (CH3 COO)2 . 3 H2O; 250 g; ilma jaħraq ħafna sa 500 ml; ħawwad sakemm jinħall.

3.1.1.7.

Karbonat tal-kalċju (Ca CO3)

3.1.2.   Proċedura

3.1.2.1.   Inbejjed morri

Poġġi 50 ml ta' l-inbid ġewwa buqar li għandu diametru ta' madwar 10 sa 12 ċm flimkien ma' 1/2 (n 0,5) ml ta' soluzzjoni 1 M ta' idrossidu tas-sodju (3.1.1.2) (n huwa l-volum ta' 0,1 M soluzzjoni idrossidu tas-sodju użat sabiex tiġi kkalkulata l-aċidità totali f'10 ml ta' l-inbid), u evapora fuq banju ta' ilma jagħli f'nixxiegħa ta' arja sħuna sakemm il-likwidu jonqos għal madwar 20 ml.

Ferra dan il-likwidu minn ġo kolonna tar-raża ta' l-iskambju ta' anjoni f'forma ta' aċetat (3.1.1.5) b'rata ta' 3 ml kull żewġ minuti. Iġbor dak li jfur fi flixkun b'volum ta' 100 ml. Aħsel il-flixkun u l-kolonna sitt darbiet billi tuża 10 ml ilma distillat kull darba. Waqt li tħawwad il-ħin kollu, żid 2,5 ml ta' soluzzjoni ta' aċetat taċ-ċomb saturata (3.1.1.6) u 0,5 g ta' karbonat tal-kalċju (3.1.1.7) ma' dak li jfur: Ħawwad diversi drabi u ħallih joqgħod ta' mill-inqas għal 15-il minuta. Żid sal-marka bl-ilma. Saffi.

1 ml ta' dan il-filtrat jikkorrispondi għal 0,5 ml inbid.

3.1.2.2.   Għeneb magħsur qabel ma jiħmar, mistelles, inbid ħelu u nofsu ħelu:

Is-soluzzjonijiet dilwiti mogħtija hawn taħt huma mogħtija bħala gwida.

1.	Għeneb magħsur qabel ma jiħmar u mistelles: ħejji soluzzjoni ta' 10 tal-likwidu li għandha tiġi analizzata u ħu 10 ml tal-kampjun dilwit.

2.	Inbejjed ħelwin, sew jekk iffortifikati jew le, li għandhom densità ta' madwar 1,005 u 1,038: ħejji soluzzjoni ta' 20 % tal-likwidu li għandu jiġi analizzat u ħu 20 ml tal-kampjun dilwit.

3.

Inbejjed nofshom ħelwin li għandhom densità ta' 20 °C bejn 0,997 u 1,005: ħu 20 ml ta' l-inbid mhux dilwit. Ħalli l-volum ta' l-inbid jew għeneb magħsur qabel ma jiħmar msemmi hawn fuq jgħaddi minn kolonna ta' skambju ta' l-anjoni fil-forma ta' aċetat b'rata ta' 3 ml kull żewġ minuti. Iġbor dak li jfur fi flixkun b'volum ta' 100 ml u laħlaħ il-kolonna bl-ilma sakemm tikseb madwar 90 ml ta' dak li jfur. Żid 0,5 g karbonat tal-kalċju u 1 ml soluzzjoni ta' aċetat taċ-ċomb maħlul ma' dak li jfur. Ħawwad u ħallih joqgħod għal 15-il minuta, waqt li tħawwad kultant. Żid sal-marka bl-ilma. Saffi. Fil-każ: 1. 1 ml tal-filtrat jikkorrispondi għal 0,01 ml ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar jew mistelle. 2. 1 ml tal-filtrat jikkorrispondi għal 0,04 ml inbid ħelu. 3. 1 ml tal-filtrat jikkorrispondi għal 0,20 ml inbid nofsu ħelu.

▼M8 —————

▼B

4.   KALKOLU TAZ-ZOKKOR

4.1.   Reaġenti

4.1.1   Soluzzjoni kimika tal-melħ tar-ram:

Ħoll is-sulfat tar-ram f'100 ml ilma, l-aċtu ċitriku fi 300 ml ilma u l-karbonat tas-sodju fi 300 sa 400 ml misħun. Ħawwad is-soluzzjonijiet ta' l-aċtu ċitriku u l-karbonat tas-sodju. Żid is-soluzzjoni tas-sulfat tar-ram u żid sa litru.

4.1.2.   Soluzzjoni ta' l-iodide:

Aħżen fi flixkun tal-ħġieġ ikkulurit.

4.1.3.   25 % aċtu sulfuriku:

Żid l-aċtu bil-mod ma' l-ilma, ħallih jibred u żid sa 100 ml bl-ilma.

4.1.4.   5 g/l soluzzjoni tal-lamtu:

Ħawwad 5 g tal-lamtu flimkien ma' madwar 500 ml ilma. Għalli, ħawwad il-ħin kollu, u għalli għal 10 minuti. Żid 200 g ta' klorur tas-sodju (NaCl). Ħallih jibred u mbagħad żid sa litru bl-ilma.

Poġġi dan li ġej fi flixkun b'volum ta' 200 ml:

Saħħan il-flixkun f'banju ta' l-ilma miżmum f' 60 °C sakemm it-temperatura tas-soluzzjoni tilħaq 50 °C; imbagħad żomm il-flixkun u s-soluzzjoni f' 50 °C għal 15-il minuta. Ħalli l-flixkun jibred b'mod naturali għal 30 minuta u mbagħad għaddsu f'banju ta' l-ilma kiesaħ. Itfa s-soluzzjoni fi flixkun volumetriku ta' litru u żid sa litru. Din is-soluzzjoni żżomm b'mod sodisfaċenti għal xahar. Meta tkun sejra tintuża, innewtralizza l-kampjun ta' l-eżami (is-soluzzjoni għandha tkun madwar 0,06 M aċtu) bis-soluzzjoni idrossidu tas-sodju.

4.2.   Proċedura

Ħallat 25 ml tas-soluzzjoni kimika tal-melħ tar-ram, 15 ml ilma u 10 ml tas-soluzzjoni kjarifikata fi flixkun ta' għamla konika ta' 300 ml. Dan il-volum ta' soluzzjoni taz-zokkor m'għandux ikun fih aktar minn 60 mg ta' zokkor meqlub.

Żid ftit biċċiet żgħar ta' ġebla ħaffiefa. Poġġi kaldarun meqlub fejn jiġbru l-fwar mal-flixkun u għalli t-taħlita f'żewġ minuti. Ħalli t-taħlita tagħli għal 10 minuti eżatti.

Berred il-flixkun immedjatament f'ilma kiesaħ ġieri. Meta jkun għal kollox biered, żid 10 ml ta' 30 % soluzzjoni jodju tal-potassju (4.1.2), 25 ml ta' 25 % aċtu sulfuriku (4.1.3) u 2 ml tas-soluzzjoni tal-lamtu (4.1.4).

Ittitrah b' 0,1 M soluzzjoni tiosulfat tas-sodju (4.1.5) Ħalli n ikun in-numru ta' ml użati.

Wettaq ukoll titratazzjoni fil-vojt li fiha 10 ml ta' soluzzjoni taz-zokkor jiġu mibdula b' 10 ml ta' ilma distillat. Ħalli n2 ikun in-numru ta' ml tat-tiosulfat tas-sodju użat.

4.3.   Espressjoni tar-riżultati

4.3.1.   Kalkoli

Il-kwantità ta' zokkor, espressa bħala zokkor meqlub, li jkunu jinsab fil-kampjun ta' l-eżami hija mogħtija fit-tabella hawn taħt bħala funzjoni tan-numru (n2 - n) ta' ml tat-tiosulfat tas-sodju wżat.

Il-kontenut taz-zokkor ta' l-inbid għandu jkun espress fi grammi ta' zokkor meqlub kull litru sa post wieħed deċimali, waqt li titqies is-sustanza dilwita li tkun seħħet matul il-kjarifika u l-volum tal-kampjun ta' l-eżami.

4.3.2.   Ripetibbiltà

r

=

0,015 x i

xi

=

konċentrazzjoni ta' zokkor meqlub fi g/l kull kampjun.

4.3.3   Riproduċibbiltà

R

=

0,058 x i

x i

=

konċentrazzjoni ta' zokkor meqlub fi g/l kull kampjun

6.   SUKROŻJU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODI

I.	Għall-eżami kwalitattiv permezz ta' saff irqiq ta' kromotografija: is-sukrożju jiġi sseparat minn zokkor ieħor billi jintuża saff irqiq ta' kromotografija fuq platt miksi biċ-ċellulosi. L-aġent ta' żvilupp huwa aċtu urea-idrokloriku f' 105 o C.

II.

Għall-eżami u l-kalkolazzjoni permezz ta' likwidu kromotografiku ta' prestazzjoni għolja: is-sukrożju jiġi sseparat f'kolonna ta' silika mwaħħla bl- alkylamine u skopert bir-refrattometrija. Ir-riżultat huwa kwantifikat b'referenza għal standard estern analizzat taħt l-istess kondizzjonijiet. Nota: L-awtentikazzjoni ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar jew ta' inbid tista' tiġi kontrollata bil-metodu li juża NMR tad-dewterjum deskritt sabiex jiskopri l-arrikament ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar, għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat u nbejjed. Għall-eżaminazzjoni u l-kalkolu tas-sukrożju, tista' tintuża wkoll il-kromotografija fil-fażi gassuża, kif deskritt fil-Kapitolu 42, punt (f).

2.   EŻAMI KWALITATTIVA PERMEZZ TA' KROMOTOGRAFIJJA B'SAFF IRQIQ

2.1.   Tagħmir

2.1.1.

Pjanċi kromatografiċi miksija bil-ħxuna mixtieqa ta' trab ċellulosi (e.g. MN 300) (20 × 20).

2.1.2.

tank tal-kromotagrofija.

2.1.3.

Siringa mikrometrika jew mikropipetta.

2.1.4.

Forn b'regolament sa 105 ± 2 °C.

2.2.   Reaġenti

2.2.1.

Faħam tal-kannol mingħajr kulur.

2.2.2.

Fażi mobbli Dichloromethane – aċtu glaċjali aċetiku (p20 - 1,05 g/ml)- etanol - metanol - ilma (50:25:9:6:10).

2.2.3.

Aġent li jkun qiegħed jiżviluppa Urea 5 g Aċtu idrokloriku 2 M 20 ml Etanol 100 ml

2.2.4.

Soluzzjonijiet ta' referenza Glukożju 35 g Fruttożju 35 g Sukrożju 0,5 g Ilma ddistillat 1 000 ml

2.3.   Proċedura

2.3.1.   Tħejjija tal-kampjun

Meta l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar jew l-inbid ikollu kulur qawwi, neħħilu mill-kulur billi titrattah b'faħam tal-kannol attivat.

Għall-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat, uża s-soluzzjoni b'konċentrazzjoni taz-zokkor ta' 25 % skond il-massa (25 o Brix) imħejjija kif deskritt fil-Kapitolu “pH ta' l-inbid u l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar”, taqsima 4.1.2, u ħollu bl-ilma sa kwart mill-konċentrazzjoni tiegħu billi żżid 25 ml sa 100 ml fi flixkun volumetriku.

2.3.2.   Kisba tal-kromatogramm

Poġġi fuq linja paralella 2,5 cm mit-tarf tal-qiegħ tal-platt:

Poġġi l-platt fit-tank, li qabel ikun ġie saturit bil-fwar mill-fażi mobbli. Ħalli l-fażi mobbli tonqos sa madwar 1 cm mill-fuq tal-platt. Neħħi l-platt u nixxfu f'kurrent ta' arja sħuna. Irrepeti l-migrazzjoni darbtejn oħra, filwaqt li tnixxef il-platt kull darba. Bexxex il-platt b'mod uniformi b'15 ml ta' l-aġent ikkulurit u poġġih fil-forn f' 105 °C għal madwar ħames minuti.

2.4.   Riżultati

Is-sakkarożju u l-fruttożju jidhru bħala tikka blu skura fuq sfond abjad: il-glukożju jagħti tikka ħadra li tkun inqas qawwija.

3.   EŻAMI U KALKOLU PERMEZZ TA' KROMATOGRAFIJA LIKWIDA TA' PRESTAZZJONI GĦOLJA

Il-kundizzjonijiet kromatografiċi huma mogħtija bħala gwida

3.1.   Tagħmir

3.1.1.

Kromatografu likwidu ta' prestazzjoni: 1. 10 μl Injettur loop, 2. rifrattomiter differenzjali jew interferomiter rifrattomiter, 3. Kolonna ta' silika mgħaquda bl-alkylamine (tul 25 ċm, dijametru intern 4 mm), 4. Kolonna ta' ħarsien mimlija bl-istess fażi , 5. Arranġament għall-insulazzjoni tal-kolonna ta' ħarsien u kolonni analitiċi jew għaż-żamma tat-temperatura tagħhom (30 o C), 6. Reġistratur u, jekk hemm bżonn, integratur, 7. rata taċ-ċirkolazzjoni tal-fażi mobbli: 1 ml/min.

3.1.2.

Arranġament għall-filtrazzjoni tal-membrana (0,45 μm).

3.2.   Reaġenti

3.2.1.

Ilma ddistillat darbtejn.

3.2.2.

HPLC acetonitrile ta' kwalità (CH3CN).

3.2.3.

Fażi mobbli: ilma acetonitrile, li qabel ikun ġie soġġett għall-filtrazzjoni tal-membrana (0,45 μm), (80:20 v/v). Din il-fażi mobbli għandha titneħħilha l-gass qabel ma tintuża.

3.2.4.

Soluzzjoni standard: 1,2 g/l soluzzjoni ta' sukrożju bl-ilma. Iffiltra billi tuża filtru tal-membrana 0,45 μm.

3.3.   Proċedura

3.3.1.   Tħejjija tal-kampjun:

3.3.2.   Kalkolu kromatografiku

Injetta fil-kromatografu 10 μl tas-soluzzjoni standard u 10 μm tal-kampjun imħejji kif deskritt f' 3.3.1. Irrepeti dawn l-injezzjonijiet fl-istess ordni.

Irreġistra l-kromatogram.

Il-ħin taż-żamma tas-sukrożju huwa madwar 10 minuti.

3.4.   Kalkoli

Għall-kalkolazzjoni, uża l-mejda ta' żewġ riżultati għas-soluzzjoni standard u għall-kampjun.

3.4.1.

Għall-inbid u għeneb magħsur qabel ma jiħmar: ikkalkola l-konċentrazzjoni f'g/l.

3.4.2.

Għall-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat: ħalli C tkun il-konċentrazzjoni tas-sukrożju f' g/l tal-40 % (m/v) soluzzjoni ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat. Il-konċentrazzjoni tas-sukrożju fi-g/kg ta'l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat hija: 2,5 C.

3.5.   Espressjoni tar-riżultati

Il-konċentrazzjoni tas-sukrożju fl-inbid, għeneb magħsur qabel ma jiħmar u għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat hija espressa fi grammi kull litru għall-inbid u għeneb magħsur qabel ma jiħmar u fi grammi għal kull kilogramma għall-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat, kull wieħed sa punt deċimali wieħed.

7.   GLUKOŻJU U FRUTTOŻJU

1.   DEFINIZZJONI

Il-glukożju u l-fruttożju jistgħu jiġu kkalkulati individwalment b'metodu enżimatiku, bl-uniku skop illi jiġi kkalkolat ir-ratio ta' glukożju/fruttożju.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Il-glukożju u l-fruttożju jiġu fosforilati permezz ta' adenosina trifosfat (ATP) matul reazzjoni enzimatika katalizzata bil-hexokinase (HK), u tipproduċi glukożju 6-fosfat (G6P) u fruttożju 6-fosfat (F6P):

Glukożju + ATPG6P + ADP

Fruttożju + ATPF6P + ADP

Il-glukożju 6-fosfat huwa l-ewwe jiġi ossidizzat għal glukonat 6-fosfat permezz ta' nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP) fil-preżenza ta' l-enżima glukożju 6-fosfat dehydrogenase (G6PDH). Il-kwantità ta' nikotinamida adenina dinucleotide fosfat (NADPH) ridott magħmula tikkorrispondi għal dik tal-glukożju 6-fosfat u b'hekk għal dik tal-glukożju.

G6P + NADP+ gluconate 6-phosphate + NADPH + H+

In-nicotinamide adenine dinucleotide phosphate ridott huwa kkalkulat minn kemm jiġi assorbit f'340 nm.

Fit-tmiem ta' din ir-reazzjoni, il-fruttożju 6-fosfat jinqaleb fi glukożju 6-fosfat permezz ta' l-azzjoni ta' phosphoglucose isomerase (PGI):

F6PG6P

Il-glukożju 6-fosfat għal darba oħra jirreaġixxi man-nicotinamide adenine dinucleotide phosphate sabiex jagħti glukonat 6-fosfat u nicotinamide adenine dinucleotide phosphate ridott, u dan ta' l-aħħar jiġi mbagħad kalkulat.

3.   TAGHMIR

4.   REAĠENTI

4.1.

Soluzzjoni 1: Soluzzjoni buffer (0,3 M triethanolamine, pH 7,6, 4 × 10–3 f' g 2+): ħoll 11,2 g triethanolamine hydrochloride ((C2H5)3N . HCl) u 0,2 g MgSO4 . 7H2O f' 150 ml ilma ddistillat darbtejn, żid madwar 4 ml ta' 5 M soluzzjoni sodju idrossid (NaOH) sabiex tikseb valur ta' pH 7,6 u żid sa 200 ml. Din is-soluzzjoni buffer tista' tinżamm għal erba' ġimgħat f'+4 °C.

4.2.	Soluzzjoni 2: Soluzzjoni nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (madwar 11,5 × 10–3 M): ħoll 50 mg disodium nicotinamide adenine dinucleotide phosphate f'5 ml ilma distillata darbtejn. Din is-soluzzjoni tista tinżamm għal erba' ġimgħat f'+4 °C.

4.3.	Soluzzjoni 3: Soluzzjoni adenosine 52-triphosphate (madwar 81 × 10-3 M): ħoll 250 mg disodium adenosine 52-triphosphate u 250 mg sodju idroġenukarbonat (NaHCO3) f'5 ml ta' ilma ddistillat darbtejn. Din is-soluzzjoni tista' tinżamm għal erba' ġimgħat f'+4 °C.

4.4.	Soluzzjoni 4: Hallat 0,5 ml hexokinase (2 mg ta' proteina/ml jew 280 U/ml) b'0,5 ml glukożju 6-fosfat dehydrogenase (1 mg ta' proteina/ml). Din it-taħlita tista' tinżamm għal sena f'madwar +4 °C.

4.5.	Soluzzjoni 5: fosfoglukożju isomerase (2 mg ta' proteina/ml jew 700 U/ml). Is-sospensjoni tintuża m'hIx imħallta bl-ilma. Din tista' tinżamm għal sena f'madwar +4 °C. Nota: Is-soluzzjonijiet kollha wżati hawn fuq huma disponibbli kummerċjalment.

5.   PROĊEDURA

5.1.   Tħejjija tal-kampjun

Skond l-ammont stmat tal-glukożju + fruttożju għal kull litru, ħallat il-kampjun bl-ilma skond kif ġej:

5.2.   Kalkolu

Bl-ispettrofotomiter aġġustat għat-tul tal-mewġa 340 nm wavelength, ħu qisien billi tuża l-arja (l-ebda ċellola fil-passaġġ ottiku) jew ilma bħala referenza.

Temperatura bejn 20 u 25 °C.

F'żewġ ċelloli b'passaġġi ottiċi ta' 1 ċm, poġġi dan li ġej:0,10 ml 0,10 ml

Ħallat, u wara madwar tlett minuti aqra l-assorbenza tas-soluzzjonijiet (A1). Agħti bidu għar-reazzjoni billi żżid:

Ħallat; stenna 15-il minuta; aqra l-assorbenza u kkontrolla jekk ir-reazzjoni tkun waqfet wara żewġ minuti oħra (A 2).

Żid minnufih:

Ħallat; aqra l-assorbenza wara għaxar minuti u kkontrolla li r-reazzjoni tkun waqfet wara żewġ minuti oħra (A 3).

Ikkalkula d-differenzi fl-assorbenzi:

A 2 - A 1 jikkorrispondu għall-glukożju,

A 3 - A 2 li jikkorrispondu għall-fruttożju

għaċ-ċelloli ta' referenza u dawk tal-kampjun.

Ikkalkula d-differenzi fl-assorbenza taċ-ċellola ta' referenza (Δ A R) u ċ-ċellola tal-kampjun (Δ A S) u mbagħad ikseb:

għall-glukożju: Δ A G = Δ A S - Δ A R

għall-fruttożju: Δ A F = Δ A S - Δ A R

Nota:

Il-ħin meħtieġ sabiex titlesta l-attività ta' l-enżimi jista' jvarja minn grupp wieħed għall-ieħor. Il-valur ta' hawn fuq huwa moghti biss bħala gwida u wieħed jagħti parir illi dan jiġi kkalkulat għal kull grupp.

5.3.   Espressjoni tar-riżultati

5.3.1.   Kalkolu

Il-formola ġenerali sabiex jiġu kkalkulati l-konċentrazzjonijiet hija:

fejn

V = volum tas-soluzzjoni ta' l-eżami (ml)

v = volum tal-kampjun (ml)

M = massa molekulari tas-sustanza li għandha tiġi stabbilita

d = il-passaġġ ottiku fiċ-ċellola (ċm)

e = il-koeffiċjent ta' l-assorbiment tan-NADPH f' 340 nm (= 6,3 mM -1 × l × cm -1)

u

V = 2,92 ml għall-kalkolu tal-glukożju

V = 2,94 ml għall-kalkolu tal-fruttożju

v = 0,20 ml

M = 180

d = 1

sabiex:

għall-glukożju: C (g/l) = 0,417 Δ A G

għall-fruttożju: C (g/l) = 0,420 Δ A F

Jekk il-kampjun kien imħallat bl-ilma matul it-tħejjija tiegħu, immultiplika r-riżultat bil-fattur ta' taħlit bl-ilma F.

Nota:

Jekk il-qisien isiru f'334 jew 365 nm, jinkisbu l-espressjonijiet li ġejjien:

5.3.2.   Repetibbiltà (r):

r = 0,056 x i

5.3.3.   Riproduċibbiltà (R):

R

=

0,12 + 0,076 xi

xi

=

konċentrazzjoni ta' glukożju jew fruttożju fi g/l.

8.   KIF WIEĦED JISKOPRI L-ARRIKKIMENT TA' GĦENEB MAGĦSUR QABEL MA JIĦMAR, GĦENEB MAGĦSUR QABEL MA JIĦMAR IKKONĊENTRAT, GĦENEB MAGĦSUR QABEL MA JIĦMAR IKKONĊENTRAT U RETTIFIKAT U NBEJJED BL-APPLIKAZZJONI TA' REŻONANZA NUKLEARI MANJETIKA TA' DEWTERJUM (SNIF-NMR/RMN-FINS)

1.   DEFINIZZJONI

Id-dewterjum li jkunu jinsab fiz-zokkor u l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar għandu jiġi distribwit mill-ġdid wara l-fermentazzjoni fil-mollekoli I, II, III u IV ta' l-inbid:

Iż-żjieda ta' zokkor eksoġenuż (zokkor li jsir iktar ħelu meta jinxef) qabel ma' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar jibda jiffermenta jkollu effett fuq id-distribuzzjoni tad-dewterjum.

Meta mqabbel mal-figuri għall-parametri ta' nbid naturali ta' kontroll mill-istess reġjun, l-arrikkiment ta' zokkor eksoġenuż iwassal għall-varjazzjonijiet li ġejjin:

(D/H)I

:

Proporzjon isotopju assoċjat mal-mollekula I

(D/H)II

:

Ratio ta' l-isotopju assoċjat mal-mollekola II

(D/H)W Q

:

Ratio ta' l-isotopju ta' l-ilma fl-inbid

R = 2 (D/H)II/(D/H)I tesprimi d-distribuzzjoni relattiva tad-dewterjum f'mollekuli I u II; R hija mkejjla direttament mill-h-intensititajiet u mbgħad R = 3hII/hI.

(D/H)I prinċipalment tikkaratterizza l-ipeċi veġetali li tkun issintesizzat iz-zokkor u b'mod inqas il-lokazzjoni ġeografika tal-post tal-ħsad (it-tip ta' ilma wżat matul il-fotosinteżi).

(D/H)II tirrappreżenta il-klimatoloġija tal-post ta' produzzjoni ta' l-għeneb (it-tip ta' ilma tax-xita u l-kundizzjonijiet klimatiċi) u b'mod inqas il-konċentrazzjoni taz-zokkor ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar oriġinali.

(D/H)Q W tirrapreżenta l-klimatoloġija tal-post ta' produzzjoni u l-kontenut taz-zokkor ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar oriġinali.

2.   PRINCIPJU

Il-parametri definiti hawn fuq (R, (D/H)I, (D/H)II) huma kalkulati permezz ta' resonanza nuklejari manjetika tad-dewterjum fl-etanol estratt mill-inbid jew mill-prodotti ta' fermentazzjoni ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar, l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat jew l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat miksub taħt kondizzjonijiet partikolari; dawn jistgħu jiġu supplimentati billi jiġi kkalkulat il-proporzjon ta' l-isotopju ta' l-ilma estratt mill-inbid, (D/H)Q W u billi tistabilixxi l-proporzjon 13C/ 12 fl-etanol.

▼M1 —————

▼B

3.   THEJJIJA TAL-KAMPJUN GĦALL-ANALIŻI

3.1.   Estrazzjoni ta' l-etanol u l-ilma fl-inbid

Nota:

Kull metodu għall-estrazzjoni ta' l-etanol jista' jintuża sakemm 98 sa 98,5 % ta' l-alkoħol totali fl-inbid jiġi rkuprat f'ditillat li jkun fih 92 sa 93 % mas (95 % vol).

3.1.1.   Tagħmir u reaġenti

It-tagħmir għall-estrazzjoni ta' l-etanol (Figura 1) jikkonsisti f':

Reaġenti għall-kalkolu ta' l-ilma bil-metodu Karl Fischer (e.ż. Merck 9241 u 9243).

3.1.2.   Proċedura

3.1.2.1.

Ikkalkula il-qawwa alkoħolika ta' l-inbid (tv) b',od aħjar minn sa l-eqreb 0,05 % vol.

3.1.2.2.

Estrazzjoni ta'l-etanol Introduċi kampjun omoġeneju ta' 500 ml ta' inbid ta' qawwa alkoħolika tv fil-flixkun fit-tagħmir ta' distillazjoni bi proporzjon ta' refluss kostanti ta'madwar 0,9. Poġġi flixkun ta' għamla konika ta' 125 ml, ikkalibrat minn qabel, sabiex jirċievi d-distillat. Iġbor il-likwidu jagħli bejn 78,0 u 78,2 °C, i.e. madwar 40 sa 60 ml. Jekk it-temperatura taqbeż it-78,5 °C, waqqaf l-ġabra għall-ħames minuti. Meta t-temperatura tmur lura għall-78 °C, erġa' ibda iġbor id-distillat sa 78,5 °C u irrepeti l-operazzjoni sakemm it-temperatura, wara li tkun waqqaft il-ġabra u tkun ħdimt f'ċirkwit magħluq, tibqa kostanti. Id-distillazzjoni sħiħa ddum madwar ħames siegħat. Din il-proċedura tippermetti li jiġi rkuprat madwar 98 u 98,5 % ta' l-alkoħol totali fl-inbid f'distillat b'qawwa bejn 92 u 93 % tal-massa (95 % vol), qawwa li għaliha jkunu ġew stabbiliti il-kundizzjonijiet NMR deskritti fit-taqsima 4. L-etanol miġbur jiġi mwieżen. Kampjun omoġenju ta' 60 ml tal-fdalijiet jinżamm fi flixkun ta' 60 ml u jirrapreżenta l-ilma fl-inbid. Ir-ratio ta' l-isotopju jista' jiġi kalkulat jekk dan ikun meħtieġ. Jekk spettromiter armat b'sonda ta' 10 mm ikun disponibbli (cf. taqsima 4), kampjun ta' l-eżami omoġenju ta' 300 ml inbid huwa biżżejjed.

3.1.2.3.

Kalkolu tal-qawwa alkoħolika ta' l-alkoħol estratt Il-kontenut ta' l-ilma (p2 g) jiġi kkalkulat permezz tal-metodu Karl Fischer waqt li jintuża kampjun ta' madwar 0,5 ml alkoħol ta' massa magħrufa b'mod preċiż p. Figura 1 Apparat ta' distillazzjoni għall-estrazzjoni ta' l-etanol Il-qawwa skond il-massa tin]adem hekk:

3.2.   Fermentazzjoni ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar, għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat u għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat

3.2.1.   Tagħmir u reaġenti

Jekk ir-ratio ta' l-isotopju ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikun magħruf il-ħmira tista' terġa tiġi attivata qabel l-użu għal ħmistax-il minuta f'ammont minimu ta' ilma fietel mhux distillat, sabiex r-ratio ta' l-isotopju jkun simili għal dak ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar.

Jekk r-ratio ta' l-isotopju ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar ma jkunx magħruf ikun aħjar jekk jintuża frisk/dirett.

Ġarra ta' fermentazzjoni li tesgħa 1,5 litri armata bi strument li jżomm l-arja milli tidħol u li jikkondensa l-fwar ta' l-alkoħol, minħabba li l-ebda telf ta' etanol matul il-fermentazzjoni m'għandu jkun tollerat. Ir-rata ta' konverżjoni ta' zokkor li jiffermenta f'etanol għandu jkun akbar minn 98 %.

3.2.2.   Proċedura

3.2.2.1.   

3.2.2.2.   Għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat

Poġġi V ml ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar li jkun fih ammont magħruf ta' zokkor (madwar 170 g) fil-ġarra ta' fermentazzjoni. Żid sa litru b' (1 000 - V) ml ilma mill-għajn minn fejn normalment jittieħed l-ilma ta' l-istess ratio ta' l-isotopju bħall-kampjuni naturali ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar. Żid (3.2.1) ħmira niexfa (1 g) u 3 g ta' DIFCO Ħmira Bakto b'Bażi ta' Nitroġenu mingħajr aċidi amino. Omoġenizza u proċedi bħal qabel.

3.2.2.3.   Għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat

Ipproċedi kif deskritt f' 3.2.2.2, żid sa litru b'(1 000V) ml ilma mill-għajn fejn normalment jittieħed l-ilma ta' l-istess ratio ta' l-isotopju iżda li jkun fih ukoll 3 g aċidu tartariku maħlul.

Żomm 50 ml tal-kampjun ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar jew għeneb magħsur qabel ma jiħmar trattat bil-kubrit diossid jew għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat jew għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat bil-għan li possibilment jiġi estratt l-ilma u jiġi stabbilit ir-ratio ta' l-isotopju tiegħu (D/H)W Q. L-estarzzjoni ta' l-ilma li jkunu jinsab fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar tista titwettaq b'mod sempliċiħafna permezz ta' distillazzjoni ażotropika billi tintuża t-toluene.

3.3.   Tħejjija ta' kampjun ta' l-alkoħol għall-kejl NMR

3.3.1.   Reaġenti

N, N-tetramethyl urea (TMU); uża kampjun tat-TMU standard b'ratio ta' isotopju partikolari u sorvelljat D/H. Dan il-kampjun jista' jiġi fornit mid-:

3.3.2.   Proċedura

3.4.   Tħejjija tal-kampjun ta' l-ilma għall-kejl NMR, għall-iskop ta' kalkolu possibbli tar-ratio ta' l-isotopju

3.4.1.   Reaġenti

N, N-tetramethyl urea (TMU): Ara 3.3.1.

3.4.2.   Proċedura

Poġġi 3 ml ilma miksuba bħal f' 3.1.2 jew 3.2 (nota) fi flixkun tarat u iżen sa l-eqreb 0,1 mg ((m2 E )). Poġġi 4 ml ta' l-istandard intern (TMU) u iżen sa l-eqreb 0,1 mg ((m2 st ). Omoġenizza billi tħawwad.

Nota:

Jekk il-laboratorju jkollu spettromiter tal-massa li jistabilixxi r-ratios ta' l-isotopji, l-kejl jista' jittieħed fuq dan l-istrument sabiex titnaqqas it-tagħbija fuq l-ispettromiter NMR. Huwa meħtieġ illi jiġi standarizzat r-ratio Trv (5.2) għal kull serje ta' inbejjed eżaminati.

4.   REĠISTRAZZJONI TA' 2H NMR SPETTRA TA' L-ALKOĦOL U L-ILMA

Kalkolu tal-paramteri ta' isotopju.

4.1.   Tagħmir

4.2.   Standarizzazjoni tal-ispettromiter u ta' l-eżaminazzjonijiet

4.2.1.   Standardizazzjoni

Segwi standardizazzjoni konswetudinarji għall-omoġenità u s-sensittività skond l-ispeċifikazzjonijiet tal-fabbrikant.

4.2.2.   Verifika tal-validità ta' l-istandardizzazjoni

Uża etanol standard, nominat bl-ittri C, V u B, li jkollhom konċentrazzjonijiet ta' isotopju illi huma differenti iżda standard b'mod preċiż. Dawn għandhom it-tifsira li ġejja:

Dawn il-kampjuni huma forniti mill-Bureau ta' Referenzi tal-Komunità.

Wara l-proċedura deskritta f' 4.3, stabbilixxi l-valuri isotopji ta' dawn l-alkoħol, u immarkhom bħala Cmeas, Vmeas, Bmeas (ara 5.3).

Qabbilhom mal-valuri standard korrispondenti mogħtija, immarkati bis-sottokritt Cst, Bst, Vst (ara 5.3).

Figura 2a

2H NMR spektrum ta' etanol mill-inbid bi standard intern (TMU: N, N-tetramethylurea)

Figura 2b

2H spektrum ta' etanol meħud taħt l-istess kundizzjonijiet bħal dawk fil-Figura 2a, iżda mingħajr l-multiplikazzjoni esponenzjali(LB = 0)

Id-devjazzjoni standard għar-Ripetibbiltà miksuba fuq medja ta' 10 repetizzjonijiet ta' kull spektrum għandha tkun inqas minn 0,01 għall-proporzjon R u inqas minn 0,3 ppm għall-(D/H)I u (D/H)II.

Il-valuri medji miksuba għad-diversi paramteri isotopiċi (R, (D/H)I, (D/H)II) għandhom ikunu fi ħdan l-istandard ta' devjazzjoni korrispondenti tar-repetibbiltà mogħtija għal dawk il-parametri għat-tlett alkoħol standard mill-Bureau ta' Referenzi tal-Komunità. Jekk ma jkunux, erġa wettaq il-kontrolli.

4.3.   Kundizzjonijiet sabiex jinkisbu NMR spectra

Poġġi kampjun ta' l-alkoħol ippreparat bħal fi 3.3 (jew il-kampjun ta' l-ilma, imħejji bħal fi 3.4) f' tubu ta' 15-mm jew 10-mm u introduċih fis-sonda.

Il-kundizzjonijiet sabiex tinkiseb spektra NMR huma dawn li ġejjin:

Għal kull spektrum, wettaq numru ta' kumulazzjonijiet NS suffiċjenti sabiex tikseb ir-ratio sinjal-għal-ħoss mogħti f' 4.1 u irrepeti dan is-sett ta' kumulazzjonijiet NS, NE = 10 darbiet. Il-valuri ta' l-NS jiddependu fuq it-tipi ta' Spettromiter u sonda wżati (cf. taqsima 4). Eżempji ta' l-għażliet possibbli huma:

5.   ESPRESSJONI TA' RIŻULTATI

5.1.   Etanol

Għal kull wieħed mill-ispettra 10 (ara NMR spektrum għall-etanol, Figura 2a), stabbilixxi:- mst u mA, ara 3.3.2.- tD, Ara 3.1.2.3.- (D/H)st = proporzjon isotopju ta' l-istandard intern (TMU) indikat fuq il-flixkun fornit mill-Bureau ta' Referenzi tal-Komunità.

bi

L-użu ta' quċċata ta' l-għoli minmflok quċċata taż-żona, li hija anqas preċisa, tissoponi li l-quċċata tal-wisgħa f'nofs l-għoli hija identika u hija approssimazzjoni raġonevoli jekk applikabbli (Figura 2b).

5.2.   Ilma

Meta r-ratio ta' l-isotopju ta' l-ilma jiġi stabbilit permezz ta' NMR mit-taħlita ta' ilma-TMU, ir-relazzjoni li ġejja tintuża:

bi

5.3.

Għal kull wieħed mill-parametri isotopji, ikkalkula l-medja ta' 10 kalkoli u l-intervall ta' kunfidenza. Software li jista' jintgħażel (e.ż. SNIF-NMR) adattat għall-kompjuter ta' l-ispettromiter jippermettu li dawn il-kalkoli jitwettqu on-line. Nota: Jekk, wara l-istandarizazzjoni ta' l-ispettromiter, ikun hemm differenza sistematika bejn l-valuri medji miksuba għall-isotopi karatteristiċi ta' l-alkoħol standard (4.2.2) u l-valuri ndikati mill-Bureau ta' Referenzi tal-Komunità, fil-limiti tad-devjazzjoni standard, il-korrezzjonijiet li ġejjin jistgħu japplikaw sabiex jinkiseb l-valur veru ta' kull kampjun X. L-interpolazzjoni għandha ssir billi tieħu l-valuri għall-kampjun standard li jimxu fuq dawk tal-kampjun X. Ħalli (D/H)i X meas ikun l-valur mkejjel u (D/H)i X corr ikun l-valur ikkoreġut. Dan jagħti: (D/H)i X corr = (D/H)i B st + α [(D/H)i X meas - (D/H)i B meas] fejn Eżempju: Kampjuni standard forniti u standarizzati mill-Bureau ta' Referenzi tal-Komunità: (D/H)I V st = 102,0 ppm (D/H)I B st = 91,95 ppm Kampjuni standard mkejjla mill-laboratorju: (D/H)I V meas = 102,8 ppm (D/H)I B meas = 93,0 ppm Kampjun suspett mhux ikkoreġut: (D/H)I X meas = 100,2 ppm a = 1,0255 u I X corr. = 99,3 ppm huma ikkalkolati.

6.   INTERPRETAZZJONI TAR-RIŻULTATI

Qabbel il-valur RX miksub għall-proporzjon R tal-kampjun suspettat bir-ratios miksuba għall-inbejjed kontrollati. Jekk RX tvarja b'aktar minn żewġ devjazzjonijiet standard mill-valur medju RT miksub għall-inbid ta' kontroll, tista' tiġi assunta adulterazzjoni.

6.1.   Żieda ta' zokkor mill-pittravi, zokkor tal-kannamieli jew glukożju tal-qamħirrum.

6.1.1.   Inbejjed

R X ogħla minn R T: zokkor mill-pittravi huwa preżunt li ġie miżjud.

R X inqas minn R T: zokkor tal-kannamieli jew zokkor tal-qamħirrum huwa preżunt li ġie miżjud.

Innota li (D/H) I X u (D/H)W QX huma miżjuda.

Qis (D/H)X I:

6.1.2.   Għeneb magħsur qabel ma jiħmar, għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat u inbid ġdid għadu mhux ifferementat rettifikat u ikkonċentrat

Il-valuri tal-parametri isotopiċi għall-alkoħol estratt kif deskritt f'3.1 mill-prodott iffermentat miksub (3.2) mill-għeneb magħsur qabel ma jiħmar, għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat u għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat huma eżaminati skond l-istruzzjonijiet mogħtija f' 6 taħt “interpretazzjoni ta' riżultati” (6.1.1) u mqabbla ma' l-alkoħol estratt mill-prodott ta' fermentazzjoni ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar.

L-arrikkiment, E % vol, jesprimi l-volum ta' alkoħol miżjud mal-prodott iffermentat. Meta tkun taf id-dilwizzjoni li setgħat seħħet qabel il-fermentazzjoni (għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat u għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u ikkonċentrat), waqt li tassumi li 16,83 g ta' zokkor jagħtu 1 % vol ta' alkoħol, ikkalkula l-ammont ta' zokkor (massa) miżjud għal kull litru ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar, għeneb magħsur qabel ma jiħmar ikkonċentrat u għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u ikkonċentrat.

6.2.   Żjieda ta' taħlita ta' zokkor mill-pitravi u zokkor tal-kannamieli jew glukożju tal-qamħirrum

Ir-ratios ta' l-isotopju (D/H)I u R huma mibdula anqas minn meta jiżdied tip wieħed biss ta' zokkor.

(D/H)II huwa ogħla, bħal kif inhu (D/H)W Q.

Dawn iż-żjidiet jistgħu jiġu kkonfermati billi tiġi jiġi stabbilit ir-ratio 13C/12C ta' etanol skond l-ispettrometrija tal-massa; f'dak il-każ ir-ratio huwa ogħla.

9.   KONTENUT TA' L-IRMIED

1.   DEFINIZZJONI

Il-kontenut ta' l-irmied huwa definit bħala dawk il-prodotti kollha li jibqgħu wara li jitqabbad il-fdal li jkun baqa wara l-evaporazzjoni ta' l-inbid. In-nar jingħata b'tali mod li l-cations kollha (ħlief l-cation ta' l-ammonju) jinqalbu f'karbonati jew mluħa oħra inorganiċi u anidrużi.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODU

L-estratt ta' l-inbid jiġi mqabbad f' temperatura ta' bejn 500 u 550 °C sakemm il-materjal organiku jinħaraq għal kollox (ossidazzjoni).

3.   TAGĦMIR

3.1.	banju ta' l-ilma jagħli;

3.2.	miżien sensittiv sa 0,1 mg;

3.3.	hot-plate jew evaportatur infra-red;

3.4.	forn ta' l-elettriku bit-temperatura kontrollata;

3.5.	tagħmir li jnixxef;

3.6.	platt tal-platinum b'qiegħ ċatt b'dijametru ta' 70 mm u ogħli 25 mm.

4.   PROĊEDURA

Għaddi minn pipetta 20 ml ta' inbid ġewwa platt tal-platinum tarat minn qabel (piż oriġinali Po g). Evapora fuq il-banju ta' l-ilma jagħli , u saħħan il-fdalijiet fuq il-hot-plate f'200 °C jew taħt l-evaporatur infra-red sakemm tibda l-karbonizzazzjoni. Meta ma jibqgħux jiġu prodotti l-fwar, poġġi l-platt fil-forn ta' l-elettriku f'temperatura ta' 525 ± 25 °C. Wara 15-il minuta ta' karbonizazzjoni, neħħi l-platt mill-forn, żid 5 ml ilma ddistillat, evapora fuq il-banju ta' l-ilma jew taħt l-evaportatur infra-red, u erġa saħħan il-fdalijiet sa 525 °C għal 10 minuti.

Jekk il-ħruq (ossidazzjoni) tal-partikoli karbonizzati ma jkunx seħħ għal kollox, irrepeti l-operazzjonijiet tal-ħasil tal-partikoli karbonizzati, evaporazzjoni ta' l-ilma u l-ħruq.

Għal inbid b'kontenut ta' zokkor ogħli, huwa ta' vantaġġ li żżid ftit qtar ta' żejt veġetali pur ma' l-estratt qabel ma' jsir l-ewwel irmied sabiex jiġi evitat li titrabba ragħwa eċċessiva.

Wara li jiġi mberred fit-tagħmir li jnixxef, il-platt jiġi miżun (P 1 g).

Il-piż ta' l-irmied fil-kampjun (20 ml) huwa mbagħad P = (P 1 - P o) g.

5.   ESPRESSJONI TA' RIŻULTATI

5.1.	Metodu tal-kalkolu Il-piż P ta' l-irmied fi grammi għal kull litru għandu jingħata sa żewġ postijiet deċimali bl-espressjoni: P = 50 p

10.   ALKALINITA TA' L-IRMIED

1.   DEFINIZZJONI

L-alkalinità tal-irmied hija definita bħala s-somma ta' cations, ħlief il-jone ta' l-aluminju, imħallat ma' aċidi organiċi fl-inbid.2.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODU

L-irmied jinħall f'ammont magħruf (eċċess) ta' soluzzjoni ta' soluzzjoni standardizzata ta' aċtu jaħraq; l-eċċess jiġi stabbilit permezz ta' titrazzjoni billi tuża metil oranġo bħala indikatur.

3.   REAĠENTI U TAGĦMIR

3.1.	0,05 M soluzzjoni aċtu sulfuriku (H2SO4);

3.2.	0,1 M soluzzjoni sodju idrossid (NaOH);

3.3.	metil oranġo, 0,1 % soluzzjoni fl-ilma distillat;

3.4.	banju ta' l-ilma jagħli.

4.   PROCEDURA

Żid 10 ml mill-0,05 M soluzzjoni ta' aċidu sulfuriku (3.1) ma' l-irmied minn 20 ml inbid miżmum fil-platt tal-platinum. Poġġi l-platt fuq il-banju ta' l-ilma jagħli għal madwar 15-il minuta, kisser u ħawwad l-fdal b'virga tal-ħġieġ sabiex tħaffef it-tidwib. Żid żewġt iqtar ta' soluzzjoni ta' metil oranġo u ttitra l-eċċess ta' l-aċtu sulfuriku kontra 0,1 M sodju idrossid (3.2) sakemm il-kulur ta' l-indikatur isir isfar.

5.   ESPRESSJONI TA' RIŻULTATI

Metodu tal-kalkolazzjoni

L-alkalinità ta' l-irmied, espress f'milliekwivalenti għal kull litru sa post deċimali wieħed, hija mogħtija permezz ta'

A = 5 (10 - n)

fejn n ml huwa l-volum ta' 0,1 M sodjum idrossid użat.

11.   KLORIDI

1.   PRINĊIPJU

Il-kloridi jiġu stabbiliti direttament fl-inbid bil-potenzjometrija permezz ta' elettrodu Ag/AgCl.

2.   TAGĦMIR

2.1.	Miter pH/mV gradat f' intervalli ta' mill-inqas 2 mV.

2.2.	Strument manjetiku li jħawwad.

2.3.	Elettrodu Ag/AcCl b'soluzzjoni saturata ta' potassju tan-nitrat bħala elettrolit.

2.4.	Mikroburetta gradata f' 1/100 ml.

2.5.	Kronometru.

3.   REAĠENTI

3.1.	Soluzzjoni ta' kloridu standard: 2,1027 g ta' klorid tal-potassju, KCl (max. 0,005 % Br), mnixxef qabel ma' jintuża billi jitħalla fit-tagħmir li jnixxef għal ftit jiem, jiġu dilwiti fl-ilma distillat u miżjuda sa litru. 1 ml ta' din is-soluzzjoni ikun fiha 1 mg Cl- .

3.2.	Soluzzjoni ta' nitrat tal-fidda li tintuża għat-titrazzjoni: 4,7912 g ta' nitrat tal-fidda ta' grad analitiku, AgNO3 jiġi dilwit f'soluzzjoni ta' alkoħol ta' 10 % (v/v) u miżjuda sa litru. 1 ml ta' din is-soluzzjoni tikkorrispondi għal 1 mg Cl– .

3.3.	Aċidu nitriku, b'purità ta' mill-inqas 65 % (ρ 20 = 1,40 g/ml).

4.   PROĊEDURA

4.1.

5,0 ml tas-soluzzjoni tal-klorid standard jiġu mkejla f'reċipjent ċilindriku ta' 150 ml mpoġġi fuq strument manjetiku li jħawwad, maħlula bl-ilma distillat għal madwar 100 ml u aċidifikata b' 1,0 ml aċtu nitriku (ta' mill-anqas 65 %). Wara li titfa l-elettrodu, ittitra billi żżid is-soluzzjoni ta' nitrat tal-fidda bil-mikroburetta, billi tħawwad b'mod moderat. Ibda billi żżid 1,00 ml għall-ewwel 4 ml u aqra l-valuri millivolt korrispondenti. Żid iż-2 ml li jmiss bi frazzjonijiet ta' 0,20 ml. Fl-aħħar, kompli żid fi frazzjonijiet ta' 1 ml sakemm ikun ġie miżjud total ta' 10 ml. Wara kull żjieda, stenna madwar 30 sekonda qabel ma taqra l-millivolti korrispondenti. Ittrasferixxi l-valuri hekk miksuba fuq karta tal-graff kontra l-millilitri korrispondenti tas-soluzzjoni tat-titrazzjoni u stabilixxi l-potenzjal tal-punt ta' ekwivalenza fuq bażi tal-punt singolari tal-kurvatura miksuba.

4.2.

5 ml tas-soluzzjoni tal-klorid standard jiġu mkejla f'reċipjent ċilindriku ta' 150 ml b'95 ml ta' ilma ddistillat u 1 ml ta' aċtu nitriku (mill-inqas 65 %). Għaddas l-elettrodu u ttitra, fil-waqt li tħawwad, sakemm il-potenzjal tal-punt ekwivalenti jiġi miksub. Dan il-kalkolu jiġi ripetut sakemm ikun hemm grad ta' qbil tajjeb fir-riżultati miksuba. Dan il-kontroll għandu jsir qabel kull serje ta' kejl ta' kloridi fil-kampjun.

4.3.	50 ml ta' inbid għall-analiżi huma mkejjla f'reċipjent ċilindriku ta' 150 ml. Żid 50 ml ta' ilma distillat u 1 ml ta'aċtu nitriku (mill-inqas 65 %) u ttitra billi tuża l-proċedura deskritta f'4.2.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.   Kalkoli

Jekk n tirrapreżenta in-numru ta' millilitri tas-soluzzjoni tat-titrazzjoni ta' nitrat tal-fidda, il-kontenut ta' klorid fil-likwidu eżaminat huwa:

5.2.   Ripetibbiltà (r):

r = 1,2 mg Cl kull litru

r = 0,03 meg kull litru

r = 2,0 mg NaCl kull litru

5.3.   Riproduċibbiltà (R):

R = 4,1 mg Cl kull litru

R = 0,12 meg kull litru

R = 6,8 mg NaCl kull litru

6.

Nota: Għal kalkolu preċiż ħafna. Irreferi għall-kurvatura tat-titrazzjoni sħiħa miksuba matul il-kalkolu tal-likwidu ta' l-eżami bis-soluzzjoni tan-nitrat tal-fidda. (a) Kejjel 50 ml ta' l-inbid li sejjer jiġi analizzat f'reċipjent cilindriku ta' 150 ml. Żid 50 ml ta' l-ilma ddistillat u 1 ml ta' aċtu nitriku (mill-inqas 65 %). Ittitra billi tuża s-soluzzjoni ta' nitrat tal-fidda, żid 0,5 ml f'daqqa u irreġistra l-potenzjal korrispondenti f' millivolti. Ikseb minn din l-ewwel titrazzjoni l-volum aprossimattiv tas-soluzzjoni ta' nitrat tal-fidda meħtieġa. (b) Erġa ibda l-kalkolu taħt l-istess kundizjonijiet. Ibda billi żżid 0,5 ml tas-soluzzjoni tat-titrazzjoni f'daqqa sakemm il-volum miżjud ikun bejn 1,5 u 2 ml inqas mill-volum kkalkulat f' (a). Minn hawn ‘il quddiem żid 0,2 ml f'daqqa. Kompli żid is-soluzzjoni ukoll meta taqbeż l-punt allokat b'mod approssimattiv bħala l-punt ekwivalenti b'mod simetriku , i.e. billi żżid 0,2 ml u mbagħad 0,5 ml f'daqqa. Il-punt ta' l-aħħar tal-kejl u l-volum eżatt tan-nitrat tal-fidda wżat huma miksuba: — jew billi tpinġi l-kurvatura u tistabilixxi l-punt ta' ekwivalenza, — jew permezz tal-kalkolu li ġej: —  — Fejn: —   V = volum tas-soluzzjoni tat-titrazzjoni fil-punt ta' ekwivalenza; V′ = volum tas-soluzzjoni tat-titrazzjoni qabel l-akbar tibdil potenzjali; Δ Vi = volum kostanti taż-żidiet tas-soluzzjoni titrating, i.e. 0,2 ml; ΔΔ E1 = it-tieni differenza fil-potenzjal qabel l-ikbar tibdil potenzjali; ΔΔ E2 = it-tieni differenza fil-potenzjal wara l-ikbar tibdil potenzjali. Eżempju: Volum ta’ soluzjoni ta’ titrazzjoni AgNO3 E potenżjal f’ mV Differenza ΔE Tieni differenza ΔΔ E 0 204         4   0,2 208   0     4   0,4 212   2     6   0,6 218   0     6   0,8 224   0     6   1,0 230   2     8   1,2 238   4     12   1,4 250   10     22   1,6 272   22     44   1,8 316   10     34   2,0 350   8     26   2,2 376   6     20   2,4 396     F'dan l-eżempju, l-aħħar punt tat-titrazzjoni huwa bejn 1,6 u 1,8 ml: l-akbar tibdil potenzjali (D E = 44 mV) iseħħ f'dan l-intervall. L-volum ta' soluzzjoni tat-titrazzjoni tan-nitrat tal-fidda wżat sabiex jiġu mkejjla l-kloridi fil-kampjun ta' l-eżami huwa:

12.   SULFATI

1.   PRINĊIPJU

1.1.   Metodu ta' referenza

Preċipitazzjoni ta' sulfat tal-barjum u wżin. Il-fosfat tal-barjum preċipitat taħt l-istess kundizzjonijiet jiġi eliminat billi jinħasel il-preċipitat f'aċtu idrokloriku.

Fil-każ ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar jew inbid b'kontenut għoli ta' diossid tal-kubrit, huwa rakkomandat illi jsir de-sulphiting minn qabel permez ta' togħlija f'reċipjent magħluq għall-arja.

1.2.   Metodu ta' eżami ta' malajr

L-imbejjed huma klassifikati f'diversi kategoriji li jużaw l-hekk msejjaħ metodu tal-limiti, ibbażat fuq il-preċipitazzjoni tal-barjum sulphat billi jintuża titrant jone tal-barjum.

2.   METODU TA' REFERENZA

2.1.   Reaġenti

2.1.1.

2 M soluzzjoni ta' aċtu idrokloriku.

2.1.2.

Soluzzjoni barjum klorid ta' 200 g/l ta' BaCl2. 2H2O.

2.2.   Proċedura

2.2.1.   Proċedura Ġenerali:

Kejjel 40 ml tal-kampjun ta' l-analiżi f'tubu ta' ċentrifugazzjoni ta' 50 ml; żid 2 ml ta' 2 M aċtu idrokloriku u 2 ml ta' soluzzjoni ta' barjum kloride f' 200 g/l. Ħawwad bi strument tal-ħġieġ li jħawwad; laħlaħ l-istrument li jħawwad bi ftit ilma distillat u ħallih joqgħod għal ħames minuti. Iċċentrifugah għal ħames minuti, u mbgħad b'attenzjoni ferra' bil-mod il-likwidu supernatant.

Imbgħad aħsel il-preċipitat ta' barjum sulfat kif ġej: żid 10 ml ta' 2 M aċtu idrokloriku, poġġi l-preċipitat f'sospensjoni u ċċentrifugah għal ħames minuti, imbgħad b'attenzjoni ferra' bil-mod il-likwidu supernatant. Irrepeti l-proċedura ta' ħasil darbtejn taħt l-istess kundizzjonijiet billi tuża 15 ml ilma distillat kull darba.

B'mod kwantitattiv ittrasferixxi l-preċipitat, billi tlaħlaħ b'ilma ddistillat, f'kapsula tarata tal-platinum u poġġi fuq banju ta' l-ilma f' 100 °C sakemm jevapora kollu. Il-preċipitat imnixxef jiġi kkalċinat diversi drabi fi żmien qasir fuq fjamma sakemm jinkiseb fdal abjad. Ħallih jibred f'tagħmir li jberred u iżnu.

Ħalli m = il-massa f'milligrammi ta' sulfat tal-barjum miksub.

2.2.2.

Proċedura speċjali: sgħeneb magħsur qabel ma jiħmar sulphited u inbid b'kontenut ogħli ta' kubrit diossid. Qabel xejn, elimina l-kubrit diossid. Kejjel 25 ml ilma u 1 ml aċtu idrokloriku pur (ρ 20 = 1,15 to 1,18 g/ml) fi flixkun koniku ta' 500 ml li jkun fih lembut li jqattar u tubu minn fejn jarmi. Għalli s-soluzzjoni sabiex tneħħi l-arja u introduċi 100 ml ta' inbid mill-lembut li jqattar. Kompli għalli sakemm il-volum tal-likwidu fil-flixkun ikun mnaqqas għal madwar 75 ml u ttrasferih kwantittativament, wara li jibred fi flixkun volumetriku ta' 100 ml. Żid sal-marka bl-ilma. Ikkalkula s-sulfati f'kampjun ta' 40 ml kif indikat f' 2.2.1.

2.3.   Espressjoni tar-riżultati

2.3.1.   Kalkoli:

Il-kontenut ta' sulfat, espress f'milligrammi għal kull litru ta' potassju sulfate, K2SO4 huwa:

18,67 × m

Il-kontenut ta' sulfat f'għeneb magħsur qabel ma jiħmar jew inbid huwa espress f'milligrammi għal kull litru ta' potassju sulfat, b'ebda punt deċimali.

2.3.2.   Ripetibbiltà

sa 1 000 mg/l: r = 27 mg/l

madwar 1 500 mg/l: r = 41 mg/l

2.3.3.   Riproduċibbiltà

sa 1 000 mg/l: R = 51 mg/l

madwar 1 500 mg/l: R = 81 mg/l

▼M8 —————

▼B

13.   AĊIDITÀ TOTALI

1.   DEFINIZZJONI

L-aċidità totali ta' l-inbid hija s-somma ta' l-aċiditajiet titrabbli meta jiġi titrat sa pH 7 kontra soluzzjoni standard alkalina.

Il-karbonju diossid mhux inkluż fl-aċidità totali.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Titrazzjoni potenzjometrika jew titrazzjoni bi bromotimol blu bħala indikatur u paragun ma' kulur standard end-point.

3.   REAĠENTI

3.1.	Soluzzjoni buffer pH 7,0: —  monopotassjum fosfat, onopotassium phosphate, (KH2PO4) … 107,3 g —  1 M sodjum idrossid (NaOH) solution… 500 ml —  ilma sa … 1 000 ml Alternattivament, soluzzjonijiet buffer lesti huma disponibbli fuq bażi kummerċjali.

3.2.	0,1 M soluzzjoni sodju idrossid (NaOH).

3.3.	4 g/l soluzzjoni ndikattiva bromotimol blu: —  bromotimol blu (C27H28Br2O5S) … 4 g —  etanol newtrali, 96 % vol… 200 ml Ħoll u żid —  ilma li ma' jkunx fih CO2 … 200 ml —  soluzzjoni sodju idrossid biżżejjed sabiex tipproduċi kulur blu-aĦdar (ph 7) … 7,5 ml approximately —  ilma sa … 1 000 ml

4.   TAGĦMIR

4.1.	Pompa ta' l-ilma bil-vakum.

4.2.	Flixkun vakum tal-500 ml.

4.3.	Potenzjomiter bi skala gradata f'valuri pH, u elettrodi. L-electtrodu tal-ħġieġ għandu jinżamm f'ilma ddistillat. L-elettrodu kalomel/potassju klorid saturat għandu jinżamm f' soluzzjoni saturata ta' potassju klorid. L-aktar li jintuża spiss huwa elettrodu magħqud: għandu jinżamm f'ilma distillat.

4.4.	Ċilindri għall-kejl 50 ml (inbid), 100 ml (għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat).

5.   PROĊEDURA

5.1.   Tħejjija tal-kampjun:

5.1.1.   Inbejjed

Eliminazzjoni tal-karbonju diossid. Poġġi madwar 50 ml ta' inbid fi flixkun vakum; oħloq vakum fil-flixkun permezz tal-pompa ta; l-ilma għal minuta jew tnejn, fil-waqt li tħawwad kontinwament.

5.1.2.   Għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat

Introduċi 200 g għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat u mwieżen b'reqqa. Żid sal-marka ta' l-400 ml bl-ilma. Omoġenizzah.

5.2.   Titrazzjoni potenzjometrika

5.2.1.   Kalibrazzjoni tal-miter pH

Il-miter pH issa jiġi kkalibrat għall-użu sa 20 °C, skond l-istruzzjonijiet tal-fabbrikant, bis-soluzzjoni buffer pH 7,00 f'20 °C.

5.2.2.   Metodu ta' kejl

F' ċilindru tal-kejl (4.4), introduċi volum tal-kampjun, imħejji kif deskritt f' 5.1, ugwali għal 10 ml fil-każ ta' inbid u 50 ml fil-każ ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat. Żid madwar 10 ml ilma ddistillat u mbagħad żid il-0,1 M soluzzjoni ta' sodju idrossid (3.2) mill-buretta sakemm il-pH tkun ugwali għal 7 f'20 °C. Is-sodju idrossid għandu jiġi miżjud bil-mod u s-soluzzjoni mħawwda kontinwament. Ħalli n ml ikun il-volum ta' 0,1 M NaOH miżjud.

5.3.   Titrazzjoni b'indikatur (bromotimol blu)

5.3.1.   Eżami preliminari: kalkolu tal-kulur tat-tarf.

Fiċ-ċilindru tal-kejl (4.4) poġġi 25 ml ilma ddistillat mgħolli, 1 ml soluzzjoni bromotimol blu (3.3) u volum ippreparat bħal f' (5.1) ugwali għal 10 ml fil-każ ta' inbid u 50 ml fil-każ ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat. Żid il-0,1 M soluzzjoni ta' sodju idrossid (3.2) sakemm il-kulur jinbidel fi blu-aħdar. Imbagħad żid 5 ml tas-soluzzjoni buffer pH 7 (3.7).

5.3.2.   Kejl

Fiċ-ċilindru tal-kejl (4.4) poġġi 30 ml ilma distillat mgħolli, 1 ml ta' soluzzjoni bromotimol blu (3.3) u volum tal-kampjun, imħejji bħal f' 5.1 ugwali għal 10 ml fil-każ ta' inbid u 50 ml fil-każ ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat i kkonċentrat. Żid 0,1 M soluzzjoni sodju idrossid (3.2) sakemm jinkiseb l-istess bħal fl-eżami preliminari hawn fuq (5.3.1). Ħalli n ml ikun il-volum ta' 0,1 M sodju idrossid miżjud.

6.   ESPRESSJONI TAR-RIZULTATI

6.1.   Metodu tal-kalkolu

6.1.1.   Inbejjed

L-aċidità totali espressa f'milliekwivalenti kull litru hija mogħtija permezz ta':

A = 10 n.

Huwa reġistrat sa post wieħed deċimali.

L-aċidità totali espressa fi grammi ta' aċtu tartariku hija mogħtija permezz ta':

A′ = 0,075 A

Hija reġistrata sa post deċimali wieħed.

6.1.2.   Għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat

6.2.   Ripetibbiltà (r) għat-titrazzjoni bl-indikatur:

r = 0,9 meq/litru

r = 0,07 g aċtu tartariku /litru

għall-inbejjed bojod, rosé u ħomor.

6.3.   Riproduċibbiltà (R) għal titrazzjoni bl-indikatur (5.3):

Għall-inbejjed bojod u rosé:

R = 3,6 meq/litru

R = 0,3 g aċtu tartariku/litru

Għall-inbejjed ħomor:

R = 5,1 meq/litru

R = 0,4 g aċtu tartariku/litru

14.   AĊIDITÀ VOLATILI

1.   DEFINIZZJONI

L-aċidità volatili hija ffurmata mill-aċidi tas-serje aċetiċi preżenti fl-inbid fl-istat liberu u mħallat bħala melħ.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Titrazzjoni ta' l-aċidi volatili mifruda mill-inbid permezz ta' distillazzjoni bil-fwar u titrazzjoni tad-distillat.

Il-karbonju diossid l-ewwel jitneħħa mill-inbid.

L-aċidità tal-kubrit diossid liberu u mgħaqqad distillat taħt dawn il-kondizzjonijiet għandha tiġi mnaqqsa mill-aċidità tad-distillat.

L-aċidità ta' kull aċtu sorbiku li seta' ġie miżjud ma' l-inbid għandha wkoll tiġi mnaqqsa.

Nota:

Parti mill-aċtu saliċiliku wżata f'xi pajjiżi sabiex jistabilizza l-inbid qabel l-analiżi huwa preżenti fid-distillat. Dan għandu jiġi stabbilit u mnaqqas mill-aċidità. Il-metodu ta' kif jiġi stabbilit huwa mogħti fit-taqsima 7 ta' dan il-Kapitolu.

3.   REAĠENTI

3.1.	Aċtu tartariku kristallin (C4H6O6).

3.2.	0,1 M soluzzjoni sodju idrossid (NaOH).

3.3.	1 % soluzzjoni phenolphthalein f' 96 % vol alkoħol newtrali.

3.4.	Aċtu idrokloriku (ρ20 = 1,18 to 1,19 g/ml) mħallat 1/4 (v/v).

3.5.	Soluzzjoni 0,005 M jodju (I2).

3.6.	Potassju jodid kristallin (KI).

3.7.	5 g/1 soluzzjoni tal-lamtu. Ħawwad 5g lamtu ma' madwar 500 ml ilma. Għalli, ħawwad il-ħin kollu, u għalli għal 10 minuti. Żid 200 g sodju klorid. Meta jibred, żid sa litru.

3.8.	Soluzzjoni saturata ta' sodju borat (Na2B4O7 . 10H2O), i.e. madwar 55 g/l f'20 °C.

4.   TAGĦMIR

4.1.

Tagħmir ta' distillazzjoni bil-fwar jikkonsisti f': 1. ġeneratur tal-fwar; il-fwar għandu jkun liberu mill-karbonju diossid; 2. Flixkun b' pajp tal-fwar; 3. Kolonna ta' distillazzjoni; 4. Kondensatur. Dan l-Tagħmir għandu jgħaddi minn dawn it-tlett eżamijiet li ġejjin: (a) Poġġi 20 ml ilma jagħli fi flixkun. Iġbor 250 ml tad-distillat u żid miegħu 0,1 ml ta' 0,1 M soluzzjoni sodju idrossid (3.2) u żewġ taqtiriet tas-soluzzjoni phenolphthalein (3.3). Il-kulur roża għandu jkun stabbli għal mill-inqas 10 sekondi (i.e. il-fwar għandu jkun liberu mill-karbonju diossid). (b) Poġġi 20 ml ta' 0,1 M soluzzjoni ta' aċtu aċetiku fil-flixkun. Iġbor 250 ml tad-distillat. Ittitra b' 0,1 M soluzzjoni sodju idrossid (3.2): Il-volum użat minn dan għandu jkun mill-inqas 19,9 ml (i.e. mill-inqas 99,5 % ta' l-aċtu aċetiku fil-fwar). (ċ) Poġġi 20 ml ta' 1 M soluzzjoni aċtu latiku fil-flixkun. Iġbor 250 ml tad-distillat u ttitra l-aċtu b'0,1 M soluzzjoni ta' sodju idrossid (3.2). Il-volum ta' soluzzjoni sodju idrossid miżjud għandu jkun inqas minn jew ugwali għal 1,0 ml (i.e. mhux aktar minn 0,5 % ta' l-aċtu lattiku jiġi ddistillat). Kull tagħmir jew proċedura li tgħaddi minn dawn l-eżamijiet b'mod sodisfaċenti tissodisfa r-rekwiżiti ta' tagħmir jew proċeduri internazzjonali uffiċjali.

4.2.	Pompa ta' l-ilma.

4.3.	Flixkun bil-vakum.

5.   PROĊEDURA

5.1.	Tħejjija tal-kampjun: eliminazzjoni tal-karbonju diossidPoġġi madwar 50 ml inbid fi flixkun bil-vakum; oħloq vakum fil-flixkun bil-pompa ta' l-ilma għal minuta jew tnejn, fil-waqt li tħawwad kontinwament.

5.2.	Distillazzjoni bil-fwar. Poġġi 20 ml inbid, liberu mill-karbonju diossid bħal f' 5.1, fil-flixkun. Żid madwar 0,5 g aċtu tartariku (3.1). Iġbor mill-inqas 250 ml tad-distillat.

5.3.

Titrazzjoni Ittitra bis-soluzzjoni 0,1 M ta' sodju idrossid (3.2) billi tuża żewġ taqtiriet ta' phenolphthalein (3.3) bħala indikatur. Ħalli n ml ikun il-volum tas-sodju idrossid użat. Żid erba' qatriet ta' 1/4 aċtu idrokloriku dilwit (3.4), 2 ml soluzzjoni tal-lamtu (3.3) u ftit kristalli tal-potassju jodid (3.6). Ittitra il-kubrit diossid liberu bis-soluzzjoni 0,005 M tal-jodju (3.5). Ħalli n” ml ikun il-volum użat. Żid is-soluzzjoni sodju borat saturizzata (3.8) sakemm il-kulur roża jerġa' jidher. Ittitra l-kubrit diossid magħqud b'0,005 M soluzzjoni jodju (3.5). Ħalli n “ml ikun il-volum użat.”

6.   ESPRESSJONI TA' RIŻULTATI

6.1.   Metodu ta' kalkolu

L-aċidità volatili, espressa f'milliekwivalenti kull litru sa post deċimali wieħed, hija mogħtija permezz ta':

A = 5 (n - 0,1 n′ - 0,05 n″).

L-aċidità volatili, espressa fi grammi ta' aċtu aċetiku għal kull litru sa żewġ postijiet deċimali, hija mogħtija permezz ta':

0,300 (n - 0,1 n′ - 0,05 n″).

6.2.   Repetibbiltà (r):

r = 0,7 meq/litru

r = 0,04 g aċtu aċetiku/litru.

6.3.   Riproduċibbiltà (R)

R = 1,3 meq/litru

R = 0,08 g aċtu aċetiku /litru.

6.4.   Inbid bil-preżenza ta' aċtu sorbiku

Minħabba li 96 % ta' l-aċtu sorbiku huwa ddistillat bil-fwar b'volum ta' distillat ta' 250 ml, l-aċidità tiegħu għandha titnaqqas mill-aċidità volatili, meta wieħed ikun jaf li 100 mg ta' aċtu sorbiku tikkorrispondi għal aċidità ta' 0,89 milliekwivalenti jew 0,053 g ta' aċtu aċetiku u meta wieħed ikun jaf il-konċentrazzjoni ta' l-aċtu sorbiku f' mg/l kif stabbiliti b'metodi oħra.

7.   KALKOLU TA' L-AĊTU SALIĊILIKU LI JKUN JINSAB FID-DISTILLAT MILL-AĊIDITÀ VOLATILI

7.1.   Prinċipju

Wara l-kalkolu ta' l-aċidità volatili u l-korrezzjoni għall-kubrit diossid, il-preżenza ta' l-aċtu Saliċiliku hija ndikata, wara l-aċidifikazzjoni, bil-kulur vjola li jidher meta melħ tal-ħadid (III) jiġi miżjud.

iIl-kalkolu ta' l-aċtu saliċikliku li jkun jinsab fid-distillat bl-aċidità volatili titwettaq fuq it-tieni distillat li jkollu l-istess volum bħal dak li fuqu jkun sar il-kalkolu ta' l-aċidità volatili. F'dan id-distillat, l-aċtu saliċikliku jiġi stabbilit permezz ta' metodu komparattiv kolorimetriku u jiġi mnaqqas mill-aċidità tad-distillat ta' aċidità volatili.

7.2.   Reaġenti

7.2.1.

Aċtu idrokloriku (HCl) (ρ20 = 1,18 to 1,19 g/l).

7.2.2.

Sodju tiosulfat, (Na2S2O3 . 5H2O) f'soluzzjoni 0,1 M.

7.2.3.

10 % (m/v) soluzzjoni ta' ħadid (III) ammonjum sulfat (Fe2(SO4)3 · (NH4)2SO4 · 24H2O).

7.2.4.

0,01 M soluzzjoni ta' sodju saliċilat. Soluzzjoni li jkun fiha 1,60 g/l ta' sodju saliċilat (NaC7H5O3).

7.3.   Proċedura

7.3.1.   Identifikazzjoni ta' l-aċtu saliċiliku fid-distillat ta' aċidità volatili.

Immedjatament wara l-kalkolu ta' l-aċidità volatili u l-korrezzjoni għal kubrit diossidu liberu u mgħaqqad, introduċi fi flixkun koniku 0,5 ml aċtu idrokloriku (7.2.1), 3 ml tas-soluzzjoni 0,1 M sodju tiosulfat (7.2.2) u 1 ml tas-soluzzjoni ħadid (III) ammonju sulfat (7.2.3).

Jekk ikun preżenti aċtu saliċikliku, jidher kulur vjola.

7.3.2.   Kalkolu ta' l-aċtu saliċikliku

Fuq il-flixkun koniku hawn fuq imsemmi, indika l-volum tad-distillat permezz ta' marka ta' referenza. Żvojta u laħlaħ il-flixkun.

Issoġġetta kampjun ta' eżami ġdid ta' 20 ml inbid għad-distillazzjoni bil-fwar u iġbor id-distillat fil-flixkun koniku sal-marka ta' referenza. Żid 0,3 ml aċtu idrokloriku pur (7.2.1), u 1 ml tas-soluzzjoni ħadid (III) ammonju sulfat (7.2.3). Il-kontenuti tal-flixkun koniku isiru vjola.

Fi flixkun koniku identiku għal dak li jkollu fuqu l-marka ta' referenza, introduċi ilma ddistillat sa l-istess livell bħal dak tad-distillat. Żid 0,3 ml aċtu idrokloriku pur (7.2.1), u 1 ml tas-soluzzjoni ħadid (III) ammonju sulfat (7.2.3). Mill-buretta itfa l-0,01 M soluzzjoni sodju saliċilat (7.2.4) sakemm il-kulur vjola miksub ikollu l-istess intensità bħal dak tal-flixkun koniku li jkun fih id-distillat ta' l-inbid.

Ħalli n' ml ikun il-volum tas-soluzzjoni miżjuda mill-buretta.

7.3.3.   Korrezzjoni għall-aċidità volatili

Naqqas il-volum 0,1 × n4 ml mill-volum n ml ta' 0,1 M soluzzjoni sodju idrossid użata sabiex isir it-titrazzjoni ta' l-aċidità tad-distillat matul il-kalkolu ta' l-aċidità volatili.

15.   AĊIDITÀ FISSA

1.   PRINĊIPJU

L-aċidità fissa hija kalkolata mid-differenza bejn l-aċidità totali u l-aċidità volatili.

2.   ESPRESSJONI TA' RIŻULTATI

L-aċidità fissa hija espressa f':

16.   AĊTU TARTARIKU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODI

1.1.   Metodu ta' referenza

L-aċtu tartariku jiġi preċipitat fil-forma ta' kalċju (±)tartrat u kkalkulat gravimetrikament. Dan il-kalkolu jista' jiġi komplut permezz ta' proċedura volumetrika għal paragun. Il-kundizzjonijiet għall-preċipitazzjoni (pH, volum totali wżat, konċentrazzjonjiet ta' joni li jippreċipitaw) huma tali li l-preċipitazzjoni tal-kalċju (±)tartrat hija kompleta fil-waqt li l-kalċju D( ) tartrat jibqa' fis-soluzzjoni.

Meta ma' l-inbid jkun ġie miżjud meżo aċtu tartariku, li jwassal biex il-preċipitazzjoni tal-kalċju (±)tartrat ma tkunx kompluta, għandu l-ewwel jiġi idrolizzat.

1.2.   Metodu tas-soltu

L-aċtu tartariku, isseparat permezz ta' kolonna ta' skambju tal-joni,jiġi stabbilit kolorimetrikament fl-eluate bil-kejl tal-kulur aħmar prodott b'reazzjoni ma' aċtu vanadiku. L-eluate fih ukoll aċti lattiċi u maliċi li ma' jfixklux.

2.   METODU TA' REFERENZA

2.1.   Metodu gravimetriku

2.1.1.   Reaġenti

2.1.1.1.

Soluzzjoni kalċju aċetat li jkun fiha 10 g kalċju kull litru: kalċju karbonat (CaCO3) … 25 g aċtu aċetiku glaċjali (CH3COOH) (ρ20 = 1,05 g/ml) … 40 ml ilma sa … 1 litre

2.1.1.2.

Kalċju (±)tartrat, kristalizzat: CaC4O6H4 · 4H2O: Poġġi 20 ml ta' L(+) soluzzjoni aċtu tartariku (5 g/l) fi flixkun ta' 400 ml. Żid 20 ml soluzzjoni ammonju D( ) tartrat (6,126 g/l) u 6 ml ta' soluzzjoni kalċju aċetat li jkun fiha 10 g kalċju kull litru (2.1.1.1). Ħallih joqgħod għal sagħtejn sabiex jippreċipita. Iġbor dak li jippreċipita fi griġjol tal-ħġieġ magħmul mit-trab ta' porożità Nru 4, u aħslu tlett darbiet b' madwar 30 ml ilma ddistillat. Nixxef sa piż kostanti fil-forn f' 70 °C. Jekk jintużaw il-kwantitajiet ta' reaġenti ndikati hawn fuq, jinkisbu madwar 340 mg kalċju (±)tartrate kristalizzat. Erfa fi flixkun bit-tapp.

2.1.1.3.

Soluzzjoni ta' preċipitazzjoni (pH 4,75): —  D(-) aċtu tartariku … 122 mg —  25 % (v/v) soluzzjoni ammonju idrossid (r20 = 0,97 g/ml) … 0,3 ml —  Soluzzjoni ta' kalċju aċetat (10 g kalċju/litru) … 8,8 ml —  ilma sa … 1 000 ml Ħoll id-D( ) aċtu tartariku, żid l-ammonju idrossid u żid sa madwar 900 ml; żid 8,8 ml soluzzjoni ta' kalċju aċetat (2.1.1),żid sa litru u aġġusta l-pH għal 4,75 bl-aċtu aċetiku. Minħabba li l-kalċju (±)tartrat jinħall ftit f'din is-soluzzjoni, żid 5 mg kalċju (±)tartrat għal kull litru, ħawwad għal 12-il siegħa u ffiltra.

2.1.2.   Proċedura

2.1.2.1.   Inbejjed b'ebda mesoaċtu tartariku miżjud

Poġġi 500 ml tas-soluzzjoni preċipitanti u 10 ml inbid f'tazza biż-żennunata' 600 ml. Ħawwad u agħti bidu għall-preċipitazzjoni billi togħrok il-ġnub tal-kontenitur bil-ponta ta' lasta tal-ħġieġ. Ħallih jippreċipita għal 12-il siegħa (matul il-lejl).

Iffiltra l-likwidu u preċipita minn griġjol mwieżen tal-ħġieġ magħmul mit-trab ta' porożità Nru 4 li tkun mwaħħla ma' flixkun bil-vakum nadif. Laħlaħ il-kontenitur li fih tkun saret il-preċipitazzjoni bil-filtrat sabiex tiżgura li l-preċipitat kollu ġie trasferit.

Nixxef sa piż kostanti f'forn f' 70 °C. Iżen. Ħalli p ikun l-piż tal-kalċju (±)tartrat kristalizzat (CaC4O6H4 · 4H2O) miksub. Inbejjed li magħhom ikun ġie miżjud il-mesoaċtu tartariku

2.1.2.2.   Inbejjed li jew miżjuda b’aċtu meżotartariku

Meta tkun qiegħed tanalizza l-inbid li miegħu ikun ġie miżjud il-mesoaċtu tartariku jew ikun hemm suspett li dan ġie miżjud, ipproċedi billi l-ewwel tidrolizza dan l-aċtu kif ġej:

Poġġi 10 ml inbid u 0,4 ml aċtu aċetiku glaċjali (CH3COOH, ρ20 = 1,05 g/ml) fi flixkun koniku ta' 50-ml. Poġġi kondensur refluss fuq il-flixkun u għalli għal 30 minuta. Ħallih jibred u mbagħad ittrasferixxi s-soluzzjoni fil-flixkun koniku għal flixkun ta' 600-ml. Laħlaħ il-flixkun darbtejn billi tuża 5 ml ilma kull darba u mbagħad kompli kif deskritt hawn fuq.

Il-mesoaċtu tartariku huwa kkalkolat u nkluż bħala aċtu tartariku fir-riżultat finali.

2.1.3.   Espressjoni tar-riżultati

Molekula waħda ta' kalċju (±)tartrat tikkorrispondi għal nofs mollekola ta' L(+) aċtu tartariku fl-inbid.

Il-kwantità ta' aċtu tartariku għal kull litru inbid, espressa f'milliekwivalenti hija ugwali għal 384,5 p.

Din hija kwotata sa post deċimali wieħed.

Il-kwantità ta' aċtu tartariku għal kull litru inbid, espressa fi grammi ta' aċtu tartariku hija ugwali għal 28,84 p.

Din hija kkwotata sa post deċimali wieħed.

Il-kwantità ta' aċtu tartariku għal kull litru ta' inbid, espressa fi grammi ta' potassju aċtu tartrat hija ugwali għal 36,15 p.

Hija kkwotata sa post deċimali wieħed.

2.2.   Analiżi volumetrika komparattiva

2.2.1.   Reaġenti

2.2.1.1.

Aċtu idrokloriku (HCl) (1:5 v/v) (ρ20 = 1,18 sa 1,19 g/ml)

2.2.1.2.

Soluzzjoni EDTA, 0,05 M: EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt:     (C10H14N2O8Na2 · 2H2O) … 18,61 g ilma distillat sa … 1 000 ml

2.2.1.3.

Soluzzjoni sodju idrossid, 40 % (m/v): sodju idrossid (NaOH) … 40 g ilma distillat sa … 100 ml

2.2.1.4.

Indikatur komplessometriku: 2-hydroxy-1-(2-hydroxy-4-sulpho-1-naphthylazo)- 3-naphthoic acid (C21H14N2O7S · 3H2O) … 1 g soju sulfat anidruż (Na2SO4) … 100 g

2.2.2.   Proċedura

Wara l-użin, biddel il-griġjol tal-ħġieġ magħmul mit-trab li jkun fih il-preċipitat tal-kalċju (±)tartrate fuq il-flixkun bil-vakum u ħoll il-preċipitat b'10 ml aċtu idrokloriku dilwit (2.2.1.1). Aħsel il-griġjol tal-ħġieġ magħmul mit-trab b' 50 ml ilma ddistillat.

Żid 5 ml soluzzjoni ta' 40 % sodju idrossid (2.2.1.3) u madwar 30 mg ta' indikatur (2.2.1.4). Ittitra b' 0,05 M EDTA (2.2.1.2). Ħalli n-numru ta' ml użat ikun n.

2.2.3.   Espressjoni tar-riżultati

Il-kwantità ta' aċtu tartariku għal kull litru ta' inbid, espressa f'milliekwivalenti hija ugwali għal 5 n.

Hija kkwotata sa post deċimali wieħed.

Il-kwantità ta' aċtu tartariku għal kull litru ta' inbid, espressa fi grammi ta' aċtu tartariku hija ugwali għal 0,375 n.

Hija kkwotata sa post deċimali wieħed.

Il-kwantità ta' aċtu tartariku għal kull litru ta' inbid, espressa fi grammi ta' potassju aċtu tartrat hija ugwali għal 0,470 n.

Hija kkwotata sa post deċimali wieħed.

▼M8 —————

▼B

17.   AĊTU ĊITRIKU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

L-aċtu ċitriku għandu jinqeleb f'oxaloacetate u aċetat f'reazzjoni katalizzata permezz ta' citrate-lyase (CL):

citrateoxaloacetate + acetate

Fil-preżenza ta' malate dehydrogenase (MDH) u lactate dehydrogenase (LDH), l-oxaloacetate u d-derivat tad-decarboxylation, pyruvate, huma ridotti għal L-malate u L-lactate billi jitnaqqas n-nicotinamide adenine dinucleotide (NADH):

oxaloacetate + NADH + H+ L-malate + NAD+

pyruvate + NADH + H+ L-lactate + NAD+

L-ammont ta' NADH ossidizzat għal NAD+ f' dawn ir-reazzjonijiet huwa proporzjonat ma' l-ammont ta' ċitrat preżenti. L-ossidazzjoni ta' NADH hija mkejjla bit-tnaqqis li jirriżulta f'assorbenza fi frekwnza ta' 340 nm.

2.   REAĠENTI

2.1.

Soluzzjoni buffer pH 7,8. (0,51 M glycylglycine; pH 7,8; Zn2+ (0,6 × 10 -3M): ħoll 7,13 g ta' glycylglycine f'madwar 70 ml ilma ddistillat darbtejn. Aġġusta l-pH għal 7,8 b'madwar 13 ml ta' soluzzjoni 5 M sodju idrossid, żid 10 ml tas-soluzzjoni żingu klorid (ZnCl2 80 mg in 100 ml H2O) u żid sa 100 ml b'ilma distillat darbtejn.

2.2.	Soluzzjoni nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) mnaqqsa (madwar 6 × 10 - 3 M): ħoll 30 mg NADH u 60 mg NaHCO3 f' 6 ml ta' ilma distillat darbtejn.

2.3.	Immalata soluzzjoni dehydrogenase/lactate dehydrogenase (MDH/LDH, 0,5 mg MDH/ml, 2,5 mg LDH/ml): ħallat flimikien 0,1 ml MDH (5 mg MDH/ml), 0,4 ml soluzzjoni ammonju sulfat (3,2 M u 0,5 ml LDH (5 mg/ml). Din is-sospensjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal sena f' 4 °C.

2.4.	Citrate-lyase (CL, 5 mg proteina/ml): ħoll 168 mg lyophilisate f'1 ml ilma kiesaħ silġ. Din is-soluzzjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal ġimgħa f' 4 °C u mill-inqas għal erba' ġimgħat jekk tkun iffriżata. Huwa rakkomandat li, qabel il-kalkolu, l-attività ta' l-enżimi għandha tiġi eżaminata.

2.5.	Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) Nota: Ir-reaġenti kollha ta' hawn fuq huma disponibbli kummerċjalment.

3.   TAGĦMIR

3.1.

Spettrofotomiter li jippermetti li jittieħed kejl f'340 nm, il-frekwenza li fiha l-asssorbiment permezz ta' NADH jkun fil-massimu. Fin-nuqqas ta' dan, jista' jintuża spettrofotomiter, b'sors ta' spektrum mhux kontinwu li jippermetti li jittieħed il-kejl f' 334 nm jew 365 nm. Minħabba li huma nvoluti kejl ta' assorbiment assolut (i.e. m'humiex involuti kurvaturi ta' kalibrazzjoni imma issir standardizazzjoni permezz ta' konsiderazzjoni tal-koeffiċjent ta' estinzjoni ta' NADH), l-miżien tal-frekwenza u l-assorbiment spettrali tat-tagħmir għandu jiġi verifikat.

3.2.	Ċelloli tal-ħġieġ b' tulijiet ta' passaġġi ottiċi ta' 1 cm jew ċelloli b'użu wieħed.

3.3.	Micropipetti sabiex jiġu pipettjati volumi fil-marġni ta' 0,02 sa 2 ml.

4.   TĦEJJIJA TAL-KAMPJUN

Il-kalkolu taċ-ċitrat normalment issir direttament fuq l-inbid, mingħajr ma jitneħħa l-kolorizzant min qabel u mingħajr ma jiġi mħallat bl-ilma sakemm il-kontenut ta' aċtu ċitriku jkun inqas minn 400 mg/l. Jekk dan ma jkunx hekk, ħallat l-inbid sakemm l-konċentrazzjoni taċ-ċitrat tkun tinsab bejn 20 u 400 mg/l (i.e. bejn 5 u 80 μg ta' ċitrat fil-kampjun ta' l-eżami).

Ma' inbejjed ħomor li huwa rikki f' komponenti ta' fenoliċi, huwa rakkomandat trattament preliminari b' PVPP:

Ifforma sospensjoni ta' madwar 0,2 g PVPP fl-ilma u ħalliha toqgħod għal 15-il minuta. Iffiltra billi tuża filtru bil-flawt.

Poġġi 10 ml inbid fi flixkun koniku ta' 50 ml, żid il-PVPP umdu li jkun ġie mneħħi mill-filtru bi spatula. Ħawwad għal żewġ minuti jew tlieta. Iffiltra.

5.   PROĊEDURA

Bl-ispettrofotomiter aġġustat għal frekwenza ta' 340 nm, ikkalkula l-assorbiment billi tuża ċelloli ta' 1 ċm, u uża l-arja bħala l-istandard ta' assorbiment żero (referenza) (ebda ċellola fil-passaġ ottiku). Poġġi dan li ġej fiċ-ċelloli ta' 1 ċm:

Ħallat, u wara madwar ħames minuti aqra l-assorbiment tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun (A 1).

Żid:

Ħallat, stenna sakemm ir-reazzjoni tkun lesta (madwar ħames minuti) u aqra l-assorbiment tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun (A 2).

Ikkalkola d-differenza ta' l-assorbiment (A 2 - A 1) għaċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun, Δ A R u Δ A S.

Fl-aħħar, ikkalkula d-differenza bejn dawn id-differenzi:

Δ A = Δ A s - Δ A R

Nota:

Il-ħin meħtieġ sabiex tkun kompluta l-attività ta' l-enżimi jista' jvarja minn grupp wieħed għall-ieħor. Il-valur mogħti hawn fuq huwa moghti biss bħala gwida u huwa rakkomandat illi jiġi stabbilit għal kull grupp.

6.   ESPRESSJONI TA' RIŻULTATI

Konċentrazzjoni ta' aċtu ċitriku hija mogħtija f'milligrammi għal kull litru sa l-eqreb numru sħiħ.

6.1.   Metodu tal-kalkolu

Il-formola ġenerali sabiex tiġi kkalkulata l-konċentrazzjoni f'mg/l hija:

fejn V = volum ta' soluzzjoni ta' l-eżami f'ml (hawn 3,14 ml)

v = volum tal-kampjun f' ml (hawn 0,2 ml)

M =

massa molekulari ta' sustanza li trid tiġi kkalkulata

(hawn, għall-aċtu anidruż ċitriku, M = 192,1)

d = passaġġ ottiku fiċ-ċelola f'ċm (hawn, 1 ċm)

e = koeffiċjent ta' assorbiment ta' NADH, (f' 340 nm, ε = 6,3 mmol - 1 × l × ċm - 1),

sabiex

C = 479 × Δ A

Jekk il-kampjun ġie dilwit matul it-tħejjija tiegħu, immoltiplika r-riżultat bil-fattur ta' dilwazzjoni.

Nota:

F'334 nm: C = 488 × Δ A (= 6,2 m mol -1 × l × cm -1).

F' 365 nm: C = 887 × Δ A (= 3,4 m mol -1 × l × cm -1).

6.2.   Ripetibbiltà (r):

Konċentrazzjoni ta' aċtu ċitriku anqas minn 400 mg/l: r = 14 mg/l.

Konċentrazzjoni ta' aċtu ċitriku akbar minn 400 mg/l: r = 28 mg/l.

6.3.   Riproduċibbiltà (R)

Konċentrazzjoni aċtu ċitriku anqas minn 400 mg/l: R = 39 mg/l.

Konċentrazzjoni ta' aċtu ċitriku akbar minn 400 mg/l: R = 65 mg/l.

18.   AĊTU LATTIKU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Aċtu lattiku totali (L-lactate and D-lactate) huwa ossidizzat permezz ta' nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) sabiex jiġi pyruvate f'reazzjoni katalizzata permezz ta' L-lactate dehydrogenase (L-LDH) u D-lactate dehydrogenase (D-LDH).

L-ekwilibriju tar-reazzjoni normalment ikun ixaqleb aktar lejn il-lactate. It-tneħħija ta' pyruvate mit-taħlita ta' reazzjoni tressaq l-ekwilibriju aktar lejn il-formazzjoni ta' pyruvate.

Fil-preżenza ta' L-glutamate, il-pyruvate jiġi trasformat f'L-alanine f'reazzjoni katalizzata permezz ta' glutamate pyruvate transaminase (GPT):

(1)	L-lactate + NAD+ pyruvate + NADH + H+

(2)	D-lactate + NAD+ pyruvate + NADH + H+

(3)	Pyruvate + L-glutamateL-alanine + a-ketoglutarate

L-ammont ta' NADH iffurmat, mkejjel biż-żjieda ta' assorbiment fil-frekwenza ta' 340 nm, huwa proporzjonat mal-kwantità ta' lactate oriġinarjament preżenti.

Nota:

Aċtu lattiku L jista' jiġi stabbilit b'mod indipendenti billi jintużaw ir-reazzjonijiet (1) u (3), fil-waqt li aċtu lattiku D jista' jiġi stabbilit b'mod simili billi jintużaw r-reazzjonijiet (2) u (3).

1.2.	Metodu tas-soltu L-aċtu lattiku, isseparat billi jiġi mgħoddi minn kolonna ta' skambju tar-raża, jiġi ossidizzat għal etanol u kkalkulat permezz ta' kolorimetrija wara li jirreaġixxi ma' sodju nitroprussid u piperidin.

2.   METODU TA' REFERENZA

2.1.   Reaġenti

2.1.1.

Soluzzjoni buffer, pH 10 (glycylglycine 0,6 mol/l; L-glutamate 0,1 mol/l): ħoll 4,75 g ta' glycylglycine u 0,88 g ta' aċtu glutamiku L f'madwar 50 ml ilma ddistillat darbtejn; irranġa l-pH għal 10 bi ftit millilitri ta' 10 M sodju idrossid u żid għal 60 ml b'ilma ddistillat darbtejn. Din is-soluzzjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal tnax-il ġimgħa f' 4 °C.

2.1.2.

Soluzzjoni nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), madwar 40 × 10 -3 M: ħoll 900 mg ta' NAD f' 30 ml ilma ddistillat darbtejn. Din is-soluzzjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal erba' ġimgħat f' 4 °C.

2.1.3.

Sospensjoni glutamat pyruvate transaminase (GPT), 20 mg/ml. Din is-sospensjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal sena f' 4 °C.

2.1.4.

Sospensjoni L-lactate dehydrogenase (L-LDH), 5 mg/ml. Din is-sospensjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal sena f' 4 °C.

2.1.5.

Sospensjoni D-lactate dehydrogenase (D-LDH), 5 mg/ml. Din is-sospensjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal sena f' 4 °C. Huwa rakkomandat li, qabel ma jsir il-kalkolu, l-attività ta' l-enżimi għandha tiġi eżaminata. Nota: Ir-reaġenti kollha jinsabu kummerċjalment.

2.2.   Tagħmir.

2.2.1.

Spectrophotometer li jippermetti li jittieħed kejl sa 340 nm, il-frekwenza li fiha l-assorbiment permezz ta' NADH tkun fil-massimu. Fin-nuqqas ta' dan, jista' jintuża spettrofotomiter b'sors ta' spektrum mhux kontinwu li jippermetti li jittieħed il-kejl f' 334 jew 365 nm. Minħabba li huwa nvolut kejl ta' assorbiment assolut (i.e.m'humiex involuti kurvaturi ta' kalibrazzjoni, imma ssir standardizzazzjoni permezz ta' konsiderazzjoni tal-koeffiċjent ta' tneħħija ta' NADH), il-miżien tal-frekwenza u l-assorbiment spetrali tat-tagħmir għandu jiġi eżaminat.

2.2.2.

Ċelloli tal-ħġieġ b' tulijiet ta' passaġġ ottiku ta' 1 cm jew ċelloli b'użu wieħed.

2.2.3.

Mikropipetti sabiex volumi tal-kampjun jiġu pipettati fil-marġni 0,02 sa 2 ml.

2.3.   Tħejjija tal-kampjun

Nota preliminari: L-ebda parti ta' l-oġġetti tal-ħġieġ li jiġu f'kuntatt mat-taħlita ta' reazzjoni m'għandhom jintmissu bis-swaba, minħabba li dan jista' jintroduċi aċtu lattiku L u b'hekk jagħti riżultati żbaljati.

Il-kalkolu tal-lattat normalment titwettaq direttament fuq l-inbid, mingħajr ma titneħħa minn qabel l-kolorazzjoni u mingħajr ma jkun dilwit sakemm il-konċentrazzjoni ta' aċtu lattiku tkun anqas minn 100 mg/l. Jekk, madankollu, il-konċentrazzjoni ta' aċtu lattiku tkun tinsab bejn:

2.4.   Proċedura

2.4.1.   Kalkolu ta' l-aċtu lattiku totali

Is-soluzzjoni buffer għandha tkun f'temperatura bejn 20 u 25 °C qabel ma tgħaddi għall-kejl.

Bl-ispecttrofotomiter aġġustat għal frekwenza ta' 340 nm, ikkalkula l-assorbiment billi tuża ċelloli b'passaġġi ottiċi ta' 1 ċm, billi tuża l-arja bħala l-standard ta'assorbiment żero (referenza) (l-ebda ċellola fil-passaġġ ottiku) jew bl-ilma bħala standard.

Poġġi dan li ġej fiċ-ċelloli li għandhom passaġġi ottiċi ta' 1 ċm:

Hallat billi tuża strument tal-ħġieġ biex tħawwad jew virga ta' materjal sintetiku b'tarf ċatt; wara madwar ħames minuti, kejjel l-assorbenzi tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun (A1).

Żid 0,02 ml tas-soluzzjoni 2.1.4 u 0,05 ml tas-soluzzjoni 2.1.5, omoġenizza, stenna sabiex tkun kompluta r-reazzjoni (madwar 30 minuta) u kejjel l-assorbenzi tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun (A2).

Ikkalkula d-differenzi (A2 A1) fl-assorbimenti tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun, Δ AR u Δ AS.

Fl-aħħar, ikkalkula d-differenza bejn dawk id-differenzi:

Δ A = Δ A S – Δ A R

2.4.2.   Kalkolu ta' l-aċtu L-lattiku u aċtu D-lattiku

Kalkoli ta' l-aċtu L-lattiku jew aċtu D-lattiku jistgħu jitwettqu b'mod indipendenti billi tapplika l-proċedura għall-aċtu lattiku totali sal-kalkolu ta' A 1 u mbagħad issokta kif ġej:

Żid 0,02 ml ta' soluzzjoni 2.1.4, omoġenizza, stenna sakemm ir-reazzjoni tkun kompluta (madwar 20 minuta) u kejjel l-assorbenzi tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun (A 2).

Żid 0,05 ml tas-soluzzjoni 2.1.5, omoġenizza, stenna sakemm ir-reazzjoni tkun kompleta (madwar 30 minuta) u kejjel l-assorbenzi tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun (A 3).

Ikkalkula d-differenzi (A 2 - A 1) għall-aċtu L-lattiku u (3 - A 2) għall-aċtu D-lattiku bejn l-assorbenzi tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun, Δ A R u Δ A S.

Fl-aħħar, ikkalkula d-differenza bejn dawk id-differenzi:

Δ A = Δ A S – Δ A R

Nota:

Il-ħin meħtieġ sabiex tkun kompluta l-attività ta' l-enzima jista' jvarja minn grupp wieħed għall-ieħor. Il-valur ta' hawn fuq huwa moghti biss bħala gwida u huwa rakkomandat illi jiġi kkalkulat għal kull grupp. Meta jkun qiegħed jiġi kkalkulat l-aċtu L-lattiku waħdu, l-ħin ta' l-inkubazzjoni jista' jonqos b' 10 minuti.

2.5.   Espressjoni tar-riżultati

Il-konċentrazzjoni ta' l-aċtu lattiku hija mogħtija fi grammi kull litru sa post deċimali wieħed.

2.5.1.   Metodu tal-kalkolu

Il-formola ġenerali sabiex tiġi kkalkulata l-konċentrazzjoni f' g/l hija:

fejn

V

=

il-volum tas-soluzzjoni ta' l-eżami f'ml (V = 2,24 ml għall-aċtu L-lattiku, V = 2,29 ml għall-aċtu D-lattiku u aċtu lattiku totali)

v

=

il-volum tal-kampjun f'ml (hawn 0,2 ml)

M

=

massa mollekulari tas-sostanza li trid tiġi kkalkulata (hawn, għall-aċtu lattiku DL, M = 90,08

d

=

passaġġ ottiku fiċ-ċellola f' ċm (hawn, 1 ċm)

ε

=

koeffiċjent ta' assorbiment ta' NADH, (f’ 340 nm, ε = 6,3 mmol - 1 × l × ċm - 1),

2.5.1.1.   Aċtu lattiku totali u aċtu D-lattiku

C = 0,164 × Δ A

Jekk il-kampjun kien dilwit matul il-tħejjija, immoltiplika ir-riżultat bil-fattur ta' dilwizzjoni.

Kejl f' 334 nm: C = 0,167 × ΔA, (ε = 6,2 m mol - 1× l × ċm - 1).

Kejl f' 365 nm: C = 0,303 × ΔA, (ε = 3,4 m mol - 1 × l × ċm - 1).

2.5.1.2.   Aċti L-lattiku

C = 0,160 × ΔA

Jekk il-kampjun kien dilwit matul it-tħejjija tiegħu, immoltiplika ir-riżultat bil-fattur ta' dilwizzjoni.

Kejl f'334 nm: C = 0,163 ΔA, (ε = 6,2 m mol - 1 × l × ċm - 1).

Kejl f' 365 nm: C = 0,297 ΔA, (e = 3,4 m mol - 1 × l × ċm - 1).

2.5.2.   Ripetibbiltà (r)

r = 0,02 + 0,07 xi g/l

xi hija l-konċentrazzjoni ta' aċtu lattiku fil-kampjun f' g/l.

2.5.3.    Riproduċibbiltà (R):

R = 0,05 + 0,125 xi g/l

xi hija l-konċentrazzjoni ta' aċtu lattiku fil-kampjun f' g/l.

▼M8 —————

▼B

19.   AĊTU L-MALIC

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Aċtu L-maliku (L-malate) huwa ossidizzat permezz ta' nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) sabiex ikun hemm oxaloacetate fir-reazzjoni katalizzata permezz ta' L-malate dehydrogenase (L-MDH).

L-ekwilibriju tar-reazzjoni normalment ikun ixaqleb aktar lejn l-malate. It-tneħħija ta' l-oxaloacetate mit-taħlita ta' reazzjoni tressqq l-ekwilibriju lejn il-formazzjoni ta' oxaloacetate. Fil-preżenza ta' L-glutamate, l-oxaloacetate huwa mibdul f' L-aspartate f'reazzjoni katalizzata permezz ta' glutamate oxaloacetate transaminase (GOT):

(1)	L-malate + NAD+ oxaloacetate + NADH + H+

(2)	Oxaloacetate + L-glutamateL-aspartate + α-ketoglutarate

L-ammont ta' NADH iffurmat, mkejjel biż-żjieda fl-assorbiment fil-frekwenza ta' 340 nm, hija proporzjonata mal-kwantità ta' L-malate oriġinarjament preżenti.

2.   REAĠENTI

2.1.

Soluzzjoni buffer, pH 10 (glycylglycine 0,6 M; L-glutamate 0,1 M): ħoll 4,75 g ta' glycylglycine u 0,88 g ta' Aċtu L-glutamiku f' madwar 50 ml ta' ilma ddistillat darbtejn; irranġa l-pH għal 10 b'madwar 4,6 ml ta' 10 M sodju idrossid u żid għal 60 ml b'ilma ddistillat darbtejn. Din is-soluzzjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal tnax-il ġimgħa f' 4 °C

2.2.	Soluzzjoni nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), madwar 47 × 10 –3 M: ħoll 420 mg ta' NAD f' 12 ml ta' ilma ddistillat darbtejn. Din is-soluzzjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal erba' ġimgħat f' 4 °C.

2.3.	Sospensjoni glutamate oxaloacetate transaminase (GOT), 2 mg/ml. Din is-sospensjoni tibqa' stabbli mill-inqas għal sena f' 4 °C.

2.4.	Soluzzjoni L-malate dehydrogenase (L-MDH), 5 mg/ml. Din is-soluzzjoni tibqa stabbli mill-inqas għal sena f' 4 °C. Nota: Ir-reaġenti kollha hawn fuq imsemmija jinsabu kummerċjalment.

3.   TAGHMIR

3.1.

Spettrofotomiter li jippermetti li jittieħed kejl f'340 nm, il-frekwenza li fiha l-assorbiment permezz ta' NADH tkun fil-massimu. Fin-nuqqas ta' dan, jista' jintuża spettrofotomiter, b'sors ta' spektrum mhux kontinwu li jippermetti li jittieħed kejl f' 334 jew 365 nm. Minħabba li huwa nvolut kejl ta' assorbiment massimu (i.e. kurvaturi ta' kalibrazzjoni m'humiex użati, imma l-istandardizzazzjoni ssir permezz ta' konsiderazzjoni tal-koeffiċjent ta' estinzjoni NADH), il-miżien tal-frekwenza u l-assorbiment spettrali tat-tagħmir għandhom jiġu eżaminati.

3.2.	Ċelloli tal-ħġieġ b' tulijiet ta' passaġġ ottiku ta' 1 ċm jew ċelloli b'użu wieħed.

3.3.	Micropipetti sabiex jiġu pipettjati volumi bħala kampjuni fil-marġni ta' bejn 0,01 u 2 ml.

4.   TĦEJJIJA TAL-KAMPJUN

Il-kalkolu ta' L-malate normalment issir direttament fuq l-inbid, mingħajr ma' titneħħa minn qaqel il-kolorazzjoni u mingħajr dilwazzjoni kemm-il darba l-konċentrazzjoni ta' aċtu L-maliku tkun inqas minn 350 mg/l (mkejjla f' 365 mg/l). Jekk dan ma jkunx hekk, ħallat l-inbid b'ilma ddistillat darbtejn sakemm il-konċentrazzjoni ta' L-malate tkun bejn 30 u 350 mg/l (i.e. ammont ta' L-malate fil-kampjun ta' l-eżami jinsab bejn 3 u 35 μg).

Jekk il-konċentrazzjoni tal-malate fl-inbid tkun inqas minn 30 mg/l, il-volum tal-kampjun ta' l-eżami jista' jiżdied sa 1 ml. F'dan il-każ, il-volum ta' l-ilma li għandu jiġi miżjud huwa mnaqqas b'tali mod li l-volumi totali fiż-żewġ ċelloli ikunu ugwali.

5.   PROĊEDURA

Bl-ispettrofotomiter aġġust għal frekwenza ta' 340 nm, ikkalkula l-assorbenza billi tuża ċelloli b'passaġġi ottiċi ta' 1 ċm, billi tuża l-arja bħala l-istandard ta' assorbiment żero (referenza) (l-ebda ċellola fil-passaġġ ottiku) jew bl-ilma bħala standard.

Poġġi dan li ġej fiċ-ċelloli li għandhom passaġġi ottiċi ta' 1 ċm:

Ħallat; wara madwar tlett minuti, kejjel l-assorbenzi tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun (A1).

Żid:

Ħallat; stenna sabiex ir-reazzjoni tkun lesta (madwar ħames sa għaxar minuti) u kejjel l-assorbenzi tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun (A2).

Ikkalkula d-differenzi (A2 A1) fl-assorbiment tas-soluzzjonijiet fiċ-ċelloli ta' referenza u tal-kampjun, ΔAR u ΔAS.

Fl-aħħar, ikkalkula d-differenza bejn dawk id-differenzi: ΔA = ΔAS ΔAR

Nota:

Il-ħin meħtieġ sabiex tkun kompluta l-attività ta' l-enżima jista' jvarja minn grupp wieħed għall-ieħor. Il-valur ta' hawn fuq huwa moghti biss bħala gwida u huwa rakkomandat illi jiġi kkalkulat għal kull grupp.

6.   ESPRESSJONI TA' RIŻULTATI

Il-konċentrazzjoni ta' aċtu L-maliku hija mogħtija fi grammi għal kull litru sa post deċimali wieħed.

6.1.   Metodu tal-kalkolu

Il-formola ġenerali sabiex tiġi kkalkolata l-konċentrazzjoni f' g/l hija:

fejn

V = volum tas-soluzzjoni ta' l-eżami f'ml (hawn 2,22 ml)

v = volum tal-kampjun f'ml (hawn 0,1 ml)

M = massa mollekulari tas-sostanza li għandha tiġi stabbilita (hawn, għall-aċtu L-maliku, M = 134,09)

d = passaġġ ottiku fiċ-ċellola f'ċm (hawn, 1 ċm)

ε = koeffiċjent ta' assorbiment ta' NADH, (f' 340 nm, ε = 6,3 m mol -1 × l × ċm -1),

sabiex għall-L-malate:

C = 0,473 × ΔA g/l

Jekk il-kampjun ġie dilwit matul it-tħejjija tiegħu, immoltiplika r-riżultat bil-fattur ta' dilwazzjoni.

Nota:

Kejl f'334 nm: C = 0,482 × Δ A

Kejl f' 365 nm: C = 0,876 × Δ A

6.2.    Ripetibbiltà (r)

r = 0,03 + 0,034 xi

xi is hija l-konċentrazzjoni ta' aċtu maliku fil-kampjun f' g/l.

6.3.    Riproduċibbiltà (R)

R = 0,05 + 0,071 xi

xi hija l-konċentrazzjoni ta' aċtu maliku fil-kampjun f' g/l.

▼M7

20.   AĊIDU D-MALIC

1.   PRINĊIPJU

Fil-preżenza tad-D-Malate dehydrogenase (D-MDH), l-aċidu D-malic (D-Malate) jiġi ossidat bin-nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) għal oxaloacetate. L-oxaloacetate li jifforma jinqasam f’pyruvate u carbon dioxide.

Il-kwantità ta’ NADH li jifforma irid ikun proporzjonalimal-konċentrazzjoni ta’ aċidu D-malic u jitkejjel fuq wavelength ta’ 334, 340 jew 365 nm.

2.   REAGENTI

Kumbinazzjoni ta’ analiżi għal madwar 30 determinazzjonijiet:

Preparazzjoni tas-soluzzjonijiet

Stabbilità tas-soluzzjonijiet

Il-kontenut tar-reċipjent 1 ikun stabbli għal madwar sena jekk dan jitqiegħed f’temperatura ta’ +4 °C; soluzzjoni 2 tkun stabbli għal tliet ġimgħat jekk titqiegħed f’temperatura ta’ +4 °C, u għal xahrejn f’temperatura ta’ - 20 °C; soluzzjoni 3 tkun stabbli għal ħamest ijiem jekk titqiegħed f’temperatura ta + 4 °C.

3.   APPARAT

4.   IL-PREPARAZZJONI TAL-KAMPJUN

L-analiżi tad-D-Malate normalment issir direttament fuq l-inbid, mingħajr l-ebda dekolorizzazzjoni minn qabel.

L-ammont ta’ D-Malate fil-cuvette għandu jkun bejn iż-2 u l-50 μg. Għalhekk, l-inbid għandu jkun mħallat bl-ilma biex iħalli l-konċentrazzjoni ta’ D-Malate bejn iż-0,02 u ż-0,5 g/l jew iż-0,02 u ż-0,3 g/l, rispettivament (jiddependi mill-apparat li jintuża).

Tabella tal-proċess tat-taħlita:

5.   IL-PROĊEDURA

B’spectrophotometer aġġustat għal wavelength ta’ 340 nm, kejjel l-assorbiment billi tuża il-cuvettes ta’ 1 ċm, jew billi tuża l-arja ħalli tikseb zero absorbance (ma jkunx hemm cuvette fl-optical path) jew billi tuża l-ilma.

Pipette ġol-cuvettes:

Ħallat, u wara madwar sitt minuti kejjel l-assorbiment tas-soluzzjonijiet tat-test bir-referenza (A1).

Żid:

Ħallat; stenna sakemm ir-reazzjoni tkun kompluta (madwar 20 minuta) u kejjel l-assorbimenti tas-soluzzjonijiet tat-test u tar-referenza (A2).

Ikkalkula d-differenza ta’ l-assorbiment (A2 - A1) għas-soluzzjonijiet ta’ referenza (ΔAT) u tat-test (ΔAE). Fl-aħħar, ikkalkula d-differenza bejn dawk id-differenzi: ΔA = ΔAE – ΔAT

Nota:

Il-ħin meħtieġ għat-tkomplija ta’ l-attivita enżimatika tista’ tvarja minn grupp għal ieħor. Il-ħin t’hawn fuq qed jingħata biss bħala gwida, u hu rrakkomandat li dan ikun stabbilit għal kull grupp. L-aċidu D-malic jirreaġixxi malajr. L-enżima tbiddel ukoll l-aċidu L-tartaric, għalkemm ħafna aktar bil-mod. Dan jispjega għaliex ikun hemm reazzjoni kollaterali ħafifa, li tista’ tkun korretta permezz ta’ estapolazzjoni (Ara l-Appendiċi A).

6.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

Il-formula ġenerali biex tikkalkula il-konċentrazzjoni f’mg/l hi:

C =

V

il-volum tas-soluzzjoni tat-test f’ml (2,95 ml)

=

ν

il-volume tal-kampjun f’ml (0,1 ml)

=

PM

il-massa molekulari tas-sustanza li għandha tiġi stabbilita

=

(għall-l-aċidu D-malic, PM = 134,09)

d

=

l-optical path tal-cuvette f’ċm (1 ċm)

ε

=

il-fattur ta’ l-assorbiment tal-NADH: sa 340 nm = 6,3 (1 mmol-1 cm-1) sa 365 nm = 3,4 (1 mmol-1 cm-1) sa 334 nm = 6,18 (1 mmol-1 cm-1).

Jekk il-kampjun kien imħallat bl-ilma matul il-preparazzjoni tiegħu, mela mmultiplika r-riżultat bil-fattur tat-taħlita.

Il-konċentazzjoni ta’ l-d-aċidu D-malic għandha tidher f’termini ta’ milligrammi għal kull litru (mg/l), mingħajr l-ebda ċifri deċimali.

7.   PREĊIŻJONI

Dettalji tal-prova interlaboratorju dwar il-preċiżjoni tal-metodu jidhru fil-qosor fl-Appendiċi B. Ir-riżultati miksuba mill-esperiment interlaboratorju jistgħu ma japplikawx għal sensiela ta’ analyte concentration u matriċijiet barra minn dawk spjegati fl-Appendiċi B.

7.1.    Ripetibbilità

Id-differenza assoluta bejn żewġ riżultati individwali miksuba mill-istess materja li jkunu ġew analizzati minn operatur li qed iħaddem l-istess apparat, fl-iqsar intervall ta’ ħin, m’għandhiex teċċedi l-valur ta’ ripettibbilità r f’aktar minn 5 % tal-każijiet.

r = 11 mg/l.

7.2.    Riproduċibbilità

Id-differenza assoluta bejn żewġ riżultati individwali miksuba mill-istess materja li jkunu ġew analizzati f’żewġ laboratorji differenti, m’għandhiex teċċedi l-valur tar-riproduċibbilità R f’aktar minn 5 % tal-każi.

r = 20 mg/l.

▼M10

8.   ID-DOSAĠĠ TA’ L-AĊIDU D-MALIKU (D(+)-AĊIDU MALIKU) F’INBEJJED B’LIVELLI BAXXI

8.1.   QASAM TA’ L-APPLIKAZJONI

Il-metodu deskritt huwa applikat għad-dosaġġ, b’meżżi enżimatiċi, ta’ l-aċidu D-maliku ta’ nbejjed b’livelli taħt il-50 mg/l.

8.2.   IL-PRINĊIPJU

Il-prinċipju tal-metodu huwa deskritt fil-punt 1. Il-formazzjoni ta’ NADH wara l-introduzzjoni fil-cuvette ta’ 50 mg/l ta’ aċidu D-maliku hija proporzjonali għall-kwantità ta’ D-malate preżenti u hija mkejjla fuq il-bażi taż-żieda ta’ l-assorbenza f’wavelength ta’ 340 nm.

8.3.   REAĠENTI

Soluzzjoni ta’ 0,199 g/l aċidu D-maliku flimkien mar-reaġent indikat fil-punt 2.

8.4.   APPARAT

L-apparat indikat fil-punt 3.

8.5.   PREPARAZJONI TAL-KAMPJUN

Kif indikat fil-punt 4.

8.6.   PROĊEDURA

Il-proċedura hija kif indikata fil-punt 5, imma bl-introduzzjoni fil-cuvette tal-kejl ta’ 50 mg/l ta’ aċidu D-maliku. (Introduzzjoni ta’ 0,025 ml ta’ soluzzjoni 0,199 g/l aċidu D-maliku, li twarrab volum ekwivalenti ta’ ilma); il-valuri akwistati huma mnaqqsa bi 50 mg/l.

8.7.   VALIDAZZJONI NTERNA

It-tabella ta’ hawn taħt tagħti sommarju tal-file tal-validazzjoni nterna dwar il-metodu għad-determinazzjoni tad-doża ta’ D(+)-aċidu maliku wara ż-żieda ta’ 50 mg/l ta’ l-iżomeru.

▼M7

APPENDIĊI A

X’tagħmel f’każ ta’ reazzjonijiet kollaterali

Ġeneralment, reazzjonijiet kollaterali jiġru minħabba reazzjoniet sekondarji ta’ l-enżima, jew minħabba l-preżenza ta’ enżimi oħra fil-matriċi tal-kampjun, jew inkella minħabba interazzjoni ta’ wieħed mill-elementi jew aktar tal-matriċi b’ko-fattur fir-reazzjoni enżimatika.

F’reazzjoni normali, l-assorbiment tilħaq valur kostanti wara ċertu ħin, ġeneralment bejn 10 u 20 minuta, jiddependi mill-velocità tar-reazzjoni enżimatika speċifika. Iżda, meta jkun hemm reazzjonijiet sekondarji, l-assorbiment ma jilħaqx valur kostanti, imma jiżdied regolarment mal-ħin. Dan it-tip proċess huwa magħruf bħala “reazzjoni kollaterali”.

Meta jkun hemm reazzjoni kollaterali, l-assorbiment tas-soluzzjoni għandha titkejjel f’intervalli regolari (bejn żewġ u ħames minuti) wara li jkun skada l-ħin meħtieġ biex is-soluzzjoni bażika tkun laħqet l-assorbiment finali tagħha. Jekk l-assorbiment jiżdied regolarment, għandhom jittieħdu ħames jew sitt qisien, u jkunu estrapolati lura permezz ta’ grafika jew kalkulazzjoni, biex b’hekk jiġi stabbilit l-assorbiment li seta’ jiġi osservat meta l-enżima finali kienet tiżdied (T0). Il-konċentrazzjoni ta’ substrat tiġi kkalkulata fuq il-bażi tad-differenza fl-assorbiment f’dak il-ħin (Af - Ai).

Figura 1.: Reazzjoni kollaterali

APPENDIĊI B

Tipi ta’ kampjuni:

A : inbid aħmar;

B : inbid aħmar;

C : inbid abjad;

D : inbid abjad;

E : inbid abjad;

▼B

21.   AĊTU MALIKU TOTALI

1.   PRINĊIPJU

L-aċtu maliku, isseparat permezz ta' kollonna ta skambju ta' anjoni, għandu jiġi kkalkulat kolorimetrikament fis-sustanza miksuba mill-elużjoni billi jitkejjel il-kolorant isfar li din tifforma b'aċtu kromotropiku fil-preżenza ta' aċtu sulfuriku kkonċentrat. Korrezjoni għas-sustanzi li jinterferixxu issir billi jitnaqqas l-assorbiment, miksuba billi jintuża 86 % aċtu sulfuriku u kromotropiku rispettivament (l-aċtu maliku ma jirreaġixxix f'dawn il-konċentrazzjonijiet ta' l-aċtu), mill-assorbenza miksuba meta jintużaw aċti b'qawwa ta' 96 %.

2.   TAGĦMIR

2.1.	Kolonna tal-ħġieġ b'tul ta' madwar 250 mm u diametru intern ta' 35 mm, mgħammar b'tapp tad-drejn.

2.2.	Kolonna tal-ħġieġ b'tul ta' madwar 300 mm u 10 sa 11 mm diamteru intern, mgħammar b'tapp tad-drejn.

2.3.	Banju ta' l-ilma ikkontrollat termostatikament f' 100 °C.

2.4.	Spettrofotomiter issettjat sabiex ikejjel assorbenzi ta'420 nm li juża ċelloli ta' 10 mm.

3.   REAĠENTI

3.1.	Raża ta' l-iskambju tal-joni bażika qawwija (e.g. Merck III).

3.2.	Sodju idrossid 5 % (m/v).

3.3.	Aċtu aċetiku 30 % (m/v).

3.4.	Aċtu aċetiku 0,5 % (m/v).

3.5.	Soluzzjoni sodju sulfat 10 % (m/v).

3.6.	Aċtu sulfuriku kkonċentrat bejn 95 sa 97 % (m/m).

3.7.	Aċtu sulfuriku 86 % (m/m).

3.8.	Aċtu kromotropiku 5 % (m/v) Ipprepara soluzzjoni friska qabel kull kalkolu billi tħoll 500 mg sodju kromotropat, (C10H6Na2O8S2.2H20) f' 10 ml ilma ddistillat.

3.9.	Soluzzjoni aċtu DL-Maliku 0,5 g/l. Ħoll 250 g aċtu maliku (C4H6O5) f'soluzzjoni sodju sulfat (10 %), żid sa 500 ml b'soluzzjoni sodju sulfat (10 %) (3.5).

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija ta' raża ta' l-iskambju tal-joni

Poġġi tapp tat-tajjar imxarrab bl-ilma ddistillat fil-qiegħ tal-kolonna (35×250 mm) fuq il-vit. Ferra' sospensjoni ta' raża ta' skambju ta' l-anjoni fil-kolonna tal-ħġieġ. Il-livell tal-likwidu għandu jkun 50 mm “il fuq mill-quċċata tar-raża. Laħlaħ b' 1 000 ml ilma ddistillat. Aħsel il-kolonna b'soluzzjoni ta' sodju idrossid (5 %), ħalliha tqattar sa madwar 2 sa 3 mm mill-quċċata tar-raża u irrepeti b'żewġ ħasliet oħra ta' sodju idrossid 5 % u ħalliha għal siegħa. Aħsel il-kolonna b' 1 000 ml ilma ddistillat. Erġa' imla l-kolonna b'aċtu aċetiku (30 %), ħalliha toqtor sa madwar 2 u 3 mm mill-quċċata tal-kolonna u rrepeti b'żewġ ħasliet oħra ta' aċtu aċetiku (30 %). Ħalli għal mill-inqas 24 siegħa qabel l-użu. Żomm ir-raża ta' l-iskambju tal-joni f' aċtu aċetiku (30 %) għall-analiżi sussegwenti.”

4.2.   Tħejjija tal-kolonna ta' l-iskambju tal-joni

Poġġi tapp tat-tajjar fil-qiegħ tal-kolonna (11 × 300 mm) fuq il-vit. Ferra' s-sospensjoni fir-raża ta' l-iskambju tal-joni (ippreparat f' 4.1) sa ogħli ta' 10 ċm. Iftaħ it-tapp u ħalli s-soluzzjoni ta' l-aċtu aċetiku (30 %) tqattar sa madwar 2 sa 3 mm mill-quċċata tar-raża. Aħsel b'porzjon ta' 50 ml aċtu aċetiku (0,5 %).

4.3.   Separazzjoni ta' l-aċtu D L-maliku

Ferra' fuq il-kolonna (preparata f' 4.2) 10 ml inbid jew għeneb magħsur qabel ma jiħmar. Ħallih iqattar qatra qatra (rata medja ta' qatra kull sekonda) u waqqaf iċ-ċirkolazzjoni 2 sa 3 mm mill-quċċata tar-raża. Aħsel il-kolonna b'50 ml aċtu aċetiku (0,5 %) u imbagħad b' 50 ml ilma ddistillat u ħalliha tqattar bl-istess rata bħal qabel, waqt li twaqqaf iċ-ċirkolazzjoni 2 sa 3 mm mill-quċċata tar-raża.

Agħmel elużjoni ta' l-aċidi assorbiti fuq ir-raża ta' skambju b'soluzzjoni ta' 10 % sodju sulfat (3.5). Iġbor is-sustanza mneħħija bl-elużjoni fi flixkun b'volum ta' 100 ml.

Il-kolonna tista' tiġi riġenerata billi tuża l-proċedura deskritta f' (4.1).

4.4.   Kalkolu ta' l-aċtu maliku

Agħmel tikketti A u B fuq żewġ tubi bl-għonq wiesgħa ta' 30-ml (mgħammra b'tappijiet tondi tal-ħġieġ). F'kull tubu żid 1,0 ml ta' l-eluent (4.3) u 1 ml aċtu kromotropiku (5 %). Żid 10 ml aċtu sulfuriku (86 %) (referenza) fit-tubu A u 10 ml (96 %) aċtu sulfuriku fit-tubu B (kampjun). Agħlaq bit-tapp u ħawwad sabiex tomoġenizzah, waqt li tieħu ħsieb li ma xxarrabx it-tapp tal-ħġieġ. Għaddas it-tubi f'banju ta' ilma jagħli eżattament għal 10 minuti. Berred it-tubi fid-dlam f' 20 °C eżattament għal 90 minuta. Minnufih kejjel l-assorbenza relattiva mal-kontroll f' 420 nm f'ċellola ta' 10 mm.4.5.

4.5.   Tpinġijja tal-kurvatura ta' kalibrazzjoni

Għaddi minn pipetta 5,0, 10,0, 15,0 u 20 ml aliquots rispettivament fi fliexken volumetriċi ta' 4 × 50 ml. Żid sal-marka b'soluzzjoni ta' sodju sulfat (10 %).

Dawn is-soluzzjonijiet jikkorrispondu ma' l-eluates miksuba mill-inbid li jkun fihom 0,5, 1,0, 1,5 u 2,0 g/l aċtu maliku.

Kompli bħal f' 4.4.

Il-graff ta' l-assorbenzi ta' dawn is-soluzzjonijiet hija funzjoni tal-konċentrazzjoni ta' aċtu maliku rappreżentata bħala linja dritta li tgħaddi mill-oriġini.

L-intensità tal-kulur prodott tiddependi fil-biċċa l-kbira fuq il-qawwa ta' l-aċtu sulfuriku wżat, huwa neċessarju li l-kurvatura ta' kalibrazzjoni tiġi eżaminata b'ta' mill-inqas punt għal kull serje ta' qari sabiex jiġi kontrollat jekk il-konċentrazzjoni ta' l-aċtu sulfuriku tkunx inbidlet.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

L-konċentrazzjoni ta' l-eluent jinstab billi wieħed juża l-graff tal-kalibrazzjoni billi jinħareġ il-valur ta' assorbiment mkejjel sabiex jagħti l-konċentrazzjoni korrispondenti ta' aċtu maliku f' g/l. Ir-riżultat huwa espress sa post deċimali wieħed.

Ripetibbiltà:

Kontenuti < 2 g/l: r = 0,1 g/l.

Kontenuti > 2 g/l: r = 0,2 g/l.

Riproduċibbiltà:

R = 0,3 g/l.

22.   AĊTU SORBIKU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODI

1.1.   Kalkolu permezz ta' spettrofotometrija ta' l-assorbiment ultraviolet

Aċtu sorbiku (trans, trans, 2,4-aċtu hexadienoic) estratt permezz ta' distillazzjoni bil-fwar jiġi kkalkulat fid-distillat ta' l-inbid permezz ta' spettrofotometrija ta' l-assorbiment ultraviolet. Is-sustanzi li jinterferixxu fl-ultraviolet jitneħħew permezz ta' evaporazzjoni għan-nixfa billi jintuża kalċju idrossid, ftit alkali. Għall-konferma ta' livelli (1mg/1) ta' inqas minn 20 mg/l tintuża kromatografija ta' saff irqiq.

l.1.2.   Kalkolu permezz ta' kromatografija bil-gass

L-aċtu sorbiku estratt f' etere Etile jiġi kkalkulat permezz ta' kromatogrofija tal-gass bi standard intern.

1.3.   Identifikazzjoni tat-traċċi permezz ta' kromotagrafija fuq saff irqiq

Aċtu sorbiku estratt f'etere Etile jiġi sseparat permezz ta' kromatografija fuq saff irqiq u l-konċentrazzjoni tiegħu tiġi evalwata b'mod semi-kwantitattiv.

2.   KALKOLU PERMEZZ TA' SPETTROFOTOMETRIJA TA' L-ASSORBIMENT TA' ULTRAVIOLET

2.1.   Reaġenti

2.1.1.

Aċtu tartariku kristallin, C4H6O6.

2.1.2.

Kalċju idrossid, Ca(OH2, soluzzjoni, madwar 0,02 M.

2.1.3.

Soluzzjoni ta' referenza aċtu sorbiku, 20 mg/l: Ħoll 20 mg aċtu sorbiku, C6H8O2, f'madwar 2 ml ta' soluzzjoni 0,1 M sodju idrossid. Ferra' fi flixkun volumetriku ta' 1 000 ml, u żid sal-marka bl-ilma. Huwa possibli wkoll li tħoll 26,8 mg potassju sorbat, C6H7KO2, fl-ilma u żid sa 1 000 ml bl- ilma.

2.2.   Tagħmir

2.2.1.

Tagħmir għad-distillazzjoni bil-fwar (ara l-kapitolu “aċidità volatili”).

2.2.2.

Banju ta' l-ilma f'100 °C.

2.2.3.

Spettrofotomiter li jippermetti li l-kejl ta' l-assorbiment jsir fuq frekwenza ta' 256 nm, u li jkollu ċellola tal-kwartz b'passaġġ ottiku ta' 1 ċm.

2.3.   Proċedura

2.3.1.   Distillazzjoni

Poġġi fil-flixkun tat-tagħmir tad-distillazzjoni bil-fwar 10 ml inbid u żid 1 sa 2 g aċtu tartariku (2.1.1) Iġbor 250 ml tad-distillat.

2.3.2.   Tħejjija tal-kurvatura ta' kalibrazzjoni

Ipprepara, bid-dilwizzjoni tas-soluzzjoni ta' referenza (2.1.3),erba' soluzzjonijiet ta' dilwizzjoni ta' referenza b' 0,5, 1,0, 2,5 u 5 mg ta' aċtu sorbiku għal kull litru. Kejjel l-assorbenzi tagħhom bi spettrofotomiter f' 256 nm billi tuża dak ta' l-ilma ddistillat bħala vojt. Pinġi kurvatura li turi l-varjazzjoni ta' l-assorbenzi bħala funzjoni tal-konċentrazzjoni.Il-varjazzjoni hija lineari.

2.3.3.   Kalkolu

Poġġi 5 ml tad-distillat fi platt ta' l-evaporazzjoni b'dijametru ta' 55 mm, żid 1 ml soluzzjoni ta' kalċju idrossid (2.1.2). Evapora sakemm jinxef f'banju ta' l-ilma.

Ħoll il-fdal f'diversi ml ta' ilma ddistillat, ittrasferixxi kompletament fi flixkun volumetriku ta' 20 ml u żid sal-marka bl-ilma tat-tlaħliħ. Kejjel l-assorbenza f' 256 nm billi tuża l-ispettrofotomiter kontra vojt li jikkonsisti f'soluzzjoni miksuba billi tħoll 1 ml ta' soluzzjoni kalċju idrossid (2.1.2) sa 20 ml bl-ilma.

Pinġi l-valur ta' l-assorbenza mkejjla fuq il-kurvatura ta' kalibrazzjoni u minn din sib l-konċentrazzjoni Cta' l-aċtu sorbiku fis-soluzzjoni.

Nota:

F'dan il-metodu t-telf minħabba l-evaporazzjoni tista' tiġi njorata u l-assorbenza mkejjla fuq id-distillat dilwit trattat ¼ b'ilma ddistillat.

2.4.   Espressjoni tar-riżultati

2.4.1.   Kalkolu

Il-konċentrazzjoni ta' aċtu sorbiku fl-inbid espressa f' mg għal kull litru hija mogħtija b'100 × C

fejn

C = konċentrazzjoni ta' aċtu sorbiku fis-soluzzjoni analizzata permezz ta' spettrofotometrija espressa f'mg għal kull litru.

3.   KALKOLU PERMEZZ TA' KROMATOGRAFIJA TAL-GASS

3.1.   Reaġenti

3.1.1.

Etere Etile, (C2H5)2O, distillat eżattament qabel l-użu.

3.1.2.

Soluzzjoni ta' referenza interna: soluzzjoni ta' aċtu undecanoic, C11H22O2, f' 95 % vol etanol b'qawwa ta' 1 g/l.

3.1.3.

Soluzzjoni akwuża ta' aċtu sulfuriku, H2SO4 (ρ20 = 1,84 g/ml) dilwita 1:3 (v/v).

3.2.   Tagħmir

3.2.1.

Kromatografu tal-gass mgħammar bi strument li jiskopri il-jonizzazzjoni tal-fjamma u kolonna ta' l-azzar li ma jittebgħax (4 m × 1/8 inch) trattata minn qabel bil-dimethyldichlorosilane u ppakjata b'fażi stazzjonarja li tikkonsisti f'taħlita ta' diethyleneglycol succinate (5 %) u aċtu fosforiku (1 %) (DEGS - H3PO4) jew minn taħlita ta' diethyleneglycol adipate (7 %) u aċtu fosforiku (1 %) (DEGA - H3PO4) mħallta fmalja tal-Gaschrom Q 80- 100. Trattament tal-kolonna b' DMDCS - għaddi mill-kolonna soluzzjoni li jkun fiha 2 sa 3 g ta' DMDCS fit-toluene. Aħsel minnufih bil-metanol, imbagħad bin-nitroġenu u mbagħad aħsel bil-hexane segwit b'aktar nitroġenu. Issa huwa lest sabiex jiġi ppakkjat. Kundizzjonijiet ta' l-operazzjoni: Temperatura tal-forn: 175 °C. Temperatura ta' l-injettur u l-istrument li jiskopri: 230 °C. Gass li jġorr: nitroġenu (rata taċ-ċirkolazzjoni = 200 ml/min).

3.2.2.

Mikrosiringa, kapaċità ta' 10 μl gradata f' 0,1 μl. Nota: Tipi oħra ta' kolonni li jagħtu separazzjoni tajba jistgħu jintużaw, b'mod partikolari kolonni kapillari (e.ż. FFAP). Il-metodu tal-ħidma deskritt huwa mogħti bħala eżempju.

3.3.   Proċedura

3.3.1.   Tħejjija tal-kampjun li jrid jiġi analizzat

F'test tube tal-ħġieġ b'kapaċità ta' madwar 40 ml u li hu mgħammar b'tapp tal-ħġieġ mitħun, introduċi 20 ml inbid, żid 2 ml tas-soluzzjoni ta' referenza nterna (3.1.2) u 1 ml ta' l-aċtu sulfuriku dilwit (3.1.3).

Wara li tħawwad is-soluzzjoni billi ddawwar it-tubu b'mod ripetut, żid mal-kontenut tiegħu 10 ml etere Etile (3.1.1). Oħroġ l-aċtu sorbiku fil-fażi organika billi tħawwad it-tubu għal ħames minuti.Ħallih joqgħod.

3.3.2.   Tħejjija tas-soluzzjoni ta' referenza

Agħżel inbid li għalih il-kromatogram ta' l-estratt ta' l-etere ma juri l-ebda quċċata li tikkorrispondi ma' l-elużjoni ta' aċtu sorbiku. Għabbi dan l-inbid b' aċtu sorbiku b' konċentrazzjoni ta' 100 mg għal kull litru. Ittratta 20 ml tal-kampjun ippreparat b' dan il-mod skond il-proċedura deskritta f' 3.3.1.

3.3.3.   Kromatografija

Permezz ta' mikrosiringa, itfa fil-kromatografu wara xulxin 2 μl tal-fażi ta' l-estratt ta' l-etere miksub f' 3.3.2 u 2 μl tal-fażi ta' l-estratt ta' l-etere miksub f' 3.3.1.

Irreġistra il-kromatogrammi rispettivi: Ivverifika l-identità taż-żmien ta' retenzjoni rispettivi ta' l-Aċtu sorbiku u l-istandard intern.Kejjel l-ogħli (jew iż-żona) ta' kull quċċata irreġistrata.

3.4.   Espressjoni tar-riżultati

3.4.1.   Kalkolu

Il-konċentrazzjoni ta' aċtu sorbiku fl-inbid analizzat, espress f'mg għal kull litru, hija mogħtija permezz ta':

fejn

H = ogħli tal-quċċata ta' l-aċtu sorbiku fis-soluzzjoni ta' referenza

h = ogħli tal-quċċata ta' l-aċtu sorbiku fil-kampjun għall-analiżi

I = ogħli tal-quċċata standard fis-soluzzjoni ta' referenza

i = ogħli tal-quċċata standard interna fil-kampjun għall-analiżi

Nota:

Il-konċentrazzjoni ta' aċtu sorbiku tista' tiġi stabbilita bl-istess mod minn kejl taż-żoni taħt il-quċċati rispettivi.

4.   IDENTIFIKAZZJONI TA' TRAĊĊI TA' AĊTU SORBIKU PERMEZZ TA' KROMATOGRAFIJA B'SAFF IRQIQ

4.1.   Reaġenti

4.1.1.

Etere Etile, (C2H5)2O.

4.1.2.

Soluzzjoni akwuża ta' aċtu sulfuriku, H2SO4 (ρ20 = 1,84 g/ml), dilwita 1:3 (v/v).

4.1.3.

Soluzzjoni ta' referenza ta' aċtu sorbiku f' madwar 10 % vol etanol/ilma taħlita li jkun fiha 20 mg kull litru.

4.1.4.

Fażi mobbli: hexane-pentane-aċtu aċetiku (20:20:3) (C6H14/C5H12/CH3COOH, ρ20 = 1,05 g/ml).

4.2.   Tagħmir

4.2.1.

Platti 20 × 20 ċm miksijin minn qabel għall-kromatografija ta' saff irqiq miksija b'ġel polyamide (bi ħxuna ta' 0,15 mm) biż-żjieda ta' indikatur florexxenti.

4.2.2.

Ċellola għall-kromatografija ta' saff irqiq.

4.2.3.

Għaddi minn mikropipetta jew mikrosiringa sabiex tilħaq volumi ta' 5 μl sa ± 0,1 μl.

4.2.4.

Lampa ultraviolet (254 nm).

4.3.   Proċedura

4.3.1.   Tħejjija tal-kampjun li jkun ser jiġi analizzat

F'test tube tal-ħġieġ b'kapaċità ta' madwar 25 ml u mgħammar b'tapp tal-ħġieġ mitħun, introduċi 10 ml inbid, żid 1 ml aċtu sulfuriku dilwit (4.1.2) u 5 ml etere Etile (4.1.2). Ħawwad b'mod ripetut billi ddawwar it-tubu. Ħallih joqgħod.

4.3.2.   Tħejjija tad-dilwit tas-soluzzjonijiet ta' referenza

Ipprepara ħames taħlitiet ta' soluzzjonijiet ta' referenza mis-soluzzjoni f' 4.1.3 li jkun fiha 2, 4, 6, 8 u 10 mg aċtu sorbiku kull litru.

4.3.3.   Kromatografija

Billi tuża mikrosiringa jew mikropipetta, itfa 5 μl tal-fażi ta' etere estratt miksub f' 4.3.1 u 5 μl ta' kull taħlita tas-soluzzjonijiet ta' referenza (4.3.2) f'punti ta' 2 ċm mit-tarf t'isfel tal-platt u 2 ċm “il bogħod minn xulxin.”

Poġġi l-fażi mobbli (4.1.4) fit-tank kromatografu sa ogħli ta' madwar 0,5 ċm u ħalli l-atmosfera fit-tank tiġi mxarrba bil-fwar solventi. Poġġi l-platt fit-tank. Ħalli l-kromatogram jiżviluppa fuq 12 sa 15 ċm (ħin ta' l-iżvilupp madwar 30 minuta). Nixxef il-platt f'kurrent ta' arja friska. Eżamina l-kromatogram taħt lampa ultraviolet 254 nm.

It-tikek li jindikaw il-presenza ta' aċtu sorbiku jidhru vjola skur kontra l-isfond isfar jgħajjat tal-platt.

4.4.   Espressjoni tar-riżultati

Paragun ta' l-intensitàjiet tat-tikek prodotti mill-kampjun li għandu jiġi analiżżat u bis-soluzzjonijiet ta' referenza jippermetti li jsir eżami semi-kwantitattiv tal-konċentrazzjoni ta' aċtu sorbiku bejn 2 u 10 mg kull litru. Konċentrazzjoni ta' 1 mg kull litru tista tiġi stabbilita bid-deposizzjoni ta' 10 μl tas-soluzzjoni tal-kampjun li tkun sejra tiġi analizzata.

Konċentrazzjonijiet “l fuq minn 10 mg kull litru jistgħu jiġu stabbiliti bid-deposizzjoni ta' inqas minn 5 μl tas-soluzzjoni li tkun ser tiġi analizzata (mkejjla permezz ta' mikrosiringa).”

23.   AĊTU SORBIKU L

1.   PRINĊIPJU TAL-METODI

Il-metodi proposti jippermettu li jiġu stabbiliti l-aċtu asorbiku L u l-aċtu dehydroascorbic preżenti fl-inbid jew fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar.

1.1.   Metodu ta' referenza (florimetrija)

L-aċtu asorbiku L huwa ossidizzat fuq karbonju attivat f' aċtu dehydroascorbic. Dan ta' l-aħħar jifforma komponent florixxenti billi jirreaġixxi ma' l-orthophenylenediamine (OPDA). Eżami ta' kontroll fil-preżenza ta' aċtu boriku jippermetti li tiġi kkalkulata l-florixxenza mhux awtentika (permezz tal-formazzjoni ta' aċtu boriku/aċtu dehydroascorbic kumpless) u jippermetti wkoll li jsir il-kalkolu florimetriku.

1.2.   Metodu tas-soltu (kolorimetrija)

L-aċtu asorbiku L huwa ossidiżżat permezz ta' iodine għal aċtu dehydroascorbic li mbagħad jiġi preċipitat permezz ta' 2,4-dinitrophenylhydrazine sabiex tipproduċi bis (2,4-dinitrophenylhydrazone). Wara s-separazzjoni permezz ta' kromatografija ta' saff irqiq u d-dilwizzjoni f'aċtu aċetiku medju il- kulur aħmar miksub jiġi kkalkulat permezz ta' spettrofotometrija f'500 nm.

2.   METODU TA' REFERENZA (metodu florimetriku)

2.1.   Reaġenti

2.1.1.

Soluzzjoni orthophenylenediamine dihydrochloride, C6H10Cl2N2, 0,02 g kull 100 ml, ippreparat eżatt qabel l-użu.

2.1.2.

Soluzzjoni sodju aċetat trihydrate, CH3COONa . 3H2O, 500 g/litru.

2.1.3.

Soluzzjoni mħallta ta' aċtu boriku u sodju aċetat: ħoll 3 g ta' aċtu boriku, H3BO3, f' 100 ml ta' soluzzjoni sodju aċetat (2.1.2). Din is-soluzzjoni għandha tkun preparata eżatt qabel l-użu.

2.1.4.

Soluzzjoni ta' aAċtu aċetiku glaċjali, CH3COOH ( ρ20 = 1,05 g/ml), mħallta sa 56 % (v/v) b' pH viċin ta' 1,2.

2.1.5.

Soluzzjoni ta' referenza ta' aċtu L-asorbiku, 1 g/litru: Eżatt qabel l-użu, ħoll 50 mg ta' l-aċtu L-asorbiku, C6H8O6, li jkun qabel tneħħilu l-ilma f' nixxiefa protett kontra d-dawl, f' 50 ml soluzzjoni ta' aċtu aċetiku (2.1.4).

2.1.6.

Karbonju ta' grad analitiku attivat pur ħafna ( 15 ) Fi flixkun koniku ta' 2 litri, poġġi 100 g ta' karbonju attivat u żid 500 ml soluzzjoni ta' 10 % (v/v) aċtu idrokloriku (HCl) (ρ20 = 1,19 g/ml. Għalli, iffiltra billi tuża filtru tal-ħġieġ tat-trab b'porożità 3. Iġbor il-karbonju trattat b'dan il-mod fi flixkun koniku ta' 2 litri, żid 1 litru ilma, ħawwad u ffiltra billi tuża filtru tal-ħġieġ tat-trab b'porożità 3. Irrepeti din l-operazzjoni darbtejn oħra. Poġġi l-fdal f' forn kontrollat sa 115 ± 5 °C għal 12-il siegħa (bil-lejl).

2.2.   Tagħmir

2.2.1.

Fluorimeter. Uża spettroflorimeter mgħammar b'lampa li tagħti spettru kontinwu billi tużaha b'saħħa minima. Il-frekwenzi ta' eċitazzjoni u emissjoni ottimi għall-eżami għandhom jiġu stabbiliti minn qabel u jiddependu fuq it-tagħmir użat. Bħala gwida, il-frekwenza ta' eċitazzjoni għandha tkun madwar 350 nm u l-frekwenza ta' emissjoni madwar 430 nm. Ċelloli b'tul tal-mogħdija ta' 1 ċm.

2.2.2

Wieħed mill-ismijiet kummerċjali huwa “Norite'2.2.2.” Filtru tal-ħġieġ tat-trab b'porożità 3.

2.2.3.

Test tubes (dijametru madwar 10 mm).

2.2.4.

Vireg li jintużaw biex wieħed iħawwad

2.3.   Proċedura

2.3.1.   Tħejjija tal-kampjun ta' l-inbid jew l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar

Ħu volum ta' l-inbid jew għeneb magħsur qabel ma jiħmar u ħallat sa 100 ml fi flixkun gradat bis-soluzzjoni ta' aċtu aċetiku ta' 56 % (2.1.4) sabiex tikseb soluzzjoni b' konċentrazzjoni ta' aċtu L-assorbiku ta' bejn 0 u 60 mg/litru. Omoġenizza il-kontenut tal-flixkun billi tħawwad. Żid 2 g ta' karbonju attivat (2.1.6) u ħallih joqgħod għal 15 il- minuta, waqt li tħawwad kultant. Iffiltra billi tuża karta tal-filtru, armi l-ewwel ftit millilitri tal-filtrat.

F' żewġt iflixken gradati ta' 100 ml, introduċi 5 ml tal-filtrat u , fl-ewwel wieħed, 5 ml tas-soluzzjoni mħallta ta' aċtu boriku u soluzzjoni ta' sodju aċetat (2.1.3) (kampjun vojt) u, fit-tieni, 5 ml tas-soluzzjoni ta' sodju aċetat (2.1.2) (kampjun). Ħallih joqgħod għal 15 il- minuta, waqt li tħawwad kultant. Żid sa 100 ml b'ilma ddistillat.

Ħu 2 ml mill-kontenut ta' kull flixkun u żid 5 ml ta' soluzzjoni orthophenylenediamine (2.1.1), u ħawwad; ħalli r-reazzjoni tipproċedi għal 30 minuta sakemm is-soluzzjoni tiskura u mbagħad ħu il-kejl spettroflorimetriku.

2.3.2.   Tħejjija tal-kurvatura ta' kalibrazzjoni

Fi tlett ifliexken gradati ta' 100 ml poġġi 2, 4 u 6 ml rispettivament tas-soluzzjoni ta' referenza aċtu asorbiku L (2.1.5), żid sa 100 ml b'soluzzjoni ta' aċtu aċetiku (2.1.4) u omoġenizza billi tħawwad. Is-soluzzjonijiet ta' referenza ippreparati b'dan il-mod jkun fihom 2, 4 u 6 mg kull 100 ml.

Żid 2 g ta' karbonju attivat (2.1.6) ma' kull wieħed mill-fliexken u ħallih joqgħod għal 15 il- minuta, waqt li ħawwad kultant. Iffiltra minn karta tal-filtru ordinarja, armi l-ewwel ftit millilitri. Introduċi 5 ml ta' kull filtrat miġbura fi tlett ifliexken gradati ta' 100-ml (l-ewwel serje). Irrepeti l-operazzjoni u ikseb it-tieni serje ta' tlett ifliexken gradati. Ma' kull flixkun fl-ewwel serje (li jikkorrispondi ma' l-eżami vojt) żid 5 ml tas-soluzzjoni mħallta ta' aċtu boriku u sodju aċetat (2.1.5), u ma' kull flixkun fit-tieni serje żid 5 ml tas-soluzzjoni ta' sodju aċetat (2.1.2).

Ħallih joqgħod għal 15 il- minuta, u ħawwad kultant. Żid sa 100 ml b'ilma ddistillat. Ħu 2 ml tal-kontenut ta' kull flixkun , żid 5 ml soluzzjoni ta' orthophenylenediamine (2.1.1), u ħawwad; ħalli r-reazzjoni tipproċedi għal 30 minuta sakemm is-soluzzjoni tiskura u imbagħad ħu l-kejl spettroflorimetriku.

2.3.3.   Kalkolu florimetriku

Għal kull soluzzjoni li tikkontribwixxi għall-kurvatura ta' kalibrazzjoni u għas-soluzzjoni li tkun sejra tiġi kkalkulata poġġi ż-żero fuq l-iskala tal-qisien billi tuża l-kampjun ta' l-eżami ta' kontroll korrispondenti. Imbagħad kejjel l-intensità tal-florexxenza għal kull soluzzjoni fuq medda ta' kalibrazzjoni u għas-soluzzjoni li tkun sejra tiġi kkalkulata.

Pinġi l-kurvatura ta' kalibrazzjoni, li għandha tkun linja dritta li tgħaddi mill-oriġini. Fuq din il-linja, sib il-valur relattiv għall-kalkolu u b'hekk ikkalkula l-konċentrazzjoni ta' aċtu asorbiku C L + aċti dehydroascorbic fis-soluzzjoni li tkun sejra tiġi analiżżata.

2.3.4.   Espressjoni tar-riżultati

Il-konċentrazzjoni ta' l-aċtu L assorbiku u l-aċtu dehydroascorbic fl-inbid f'milligrammi għal kull litru hija mogħtija b' C × F, fejn F huwa l-fattur ta' dilwizzjoni.

▼M8 —————

▼B

24.   pH

1.   PRINĊIPJU

Id-differenza fil-potenzjal bejn żewġ elettrodi mgħaddsa fil-likwidu li jkun qiegħed jiġi eżaminat għandha tiġi mkejjla. Wieħed minn dawn iż-żewġ elettrodi għandu potenzjal li huwa funzjoni tal-pH tal-likwidu, fil-waqt li l-ieħor għandu potenzjal fiss u magħruf u jikkonstitwixxi l-elettrodu ta' referenza.

2.   TAGĦMIR

2.1.	Miter tal-pH meter bi skala kalibrata f'unitajiet ta' pH u li tipperemtti li jsir il-kejl sa mill-inqas unità ta' ±0,05 pH.

2.2.	Elettrodi: 2.2.1. Elettrodu tal-ħġieġ, miżmum f'ilma distillat. 2.2.2. Elettrodu ta' referenza tal-potassju klorid saturat bil-kalomel, miżmum f' soluzzjoni saturata ta' potassju klorid. 2.2.3. Jew elettrodu mgħaqqad, miżmum f'ilma ddistillat.

3.   REAĠENTI

3.1.   Soluzzjonijiet buffer

3.1.1.

Soluzzjoni saturata ta' potassju idroġenu tartrat, li jkun fiha mill-inqas 5,7 g ta' potassju idroġenu tartrat kull litru (C4H5KO6) f' 20 °C. (Din is-soluzzjoni tista' tinżamm sa xahrejn billi jiġi miżjud 0,1 g thymol għal kull 200 ml.) pH 3,57 f' 20 °C 3,56 f' 25 °C 3,55 f' 30 °C

3.1.2.

Soluzzjoni ta' potassju idroġenu phthalate, 0,05 M, li jkun fiha 10,211 g ta' potassju idroġenu phthalate (C8H5KO4) kull litru f' 20 °C. (Perjodu massimu li tista tinżamm, xahrejn.) pH 3,999 f' 15 °C 4,003 f' 20 °C 4,008 f' 25 °C 4,015 f' 30 °C

3.1.3.

Soluzzjoni li jkun fiha: monopotassium phosphate, KH2PO4 … 3,402 g dipotassium phosphate, K2HPO4 … 4,354 g water to … 1 000 ml (Perjodu massimu li tista tinżamm, xahrejn.) pH 6,90 f' 15 °C 6,88 f' 20 °C 6,86 f' 25 °C 6,85 f' 30 °C Nota: Soluzzjonijiet buffer ta' referenza kummerċjali jistgħu jintużaw ukoll.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija tal-kampjun għall-analiżi

4.1.1.

Għall-għeneb magħsur qabel ma jiħmar u inbid: uża l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar jew l-inbid direttament.

4.1.2.

Għall-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat: ħallat l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat bl-ilma sabiex tipproduċi konċentrazzjoni ta' 25 ± 0,5 % (m/m) taz-zokkor totali (25 o Brix). Jekk P huwa l-perċentwal ta' konċentrazzjoni (m/m) ta' zokkor totali fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat, iżen massa ta' u żid sa 100 g bl-ilma. L-ilma wżat għandu jkollu konduttività taħt 2 microsiemens għal kull ċm.

4.2.   Iż-zeroing tat-tagħmir

Iż-zeroing għandu jitwettaq qabel ma jittieħed xi kejl, skond l-istruzzjonijiet mogħtija mat-tagħmir użat.

4.3.   Kalibrazzjoni tal-miter tal-pH

Ikkalibra l-miter tal-pH f' 20 °C billi tuża soluzzjonijiet buffer ta' pH 6,88 u 3,57 f' 20 °C.

Uża s-soluzzjoni buffer ta' pH 4,00 f' 20 °C sabiex tikkontrolla l-kalibrazzjoni ta' l-iskala.

4.4.   Kalkolu

Bill l-elettrodu fil-kampjun li jkun ser jiġi analiżżat, li t-temperatura tiegħu għandha tkun bejn 20 u 25 °C u kemm jista jkun qrib l-20 °C. Aqra valur tal-pH direttament mill-iskala.

Wettaq ta' mill-inqas żewġ kalkoli fuq l-istess kampjun.

Ir-riżultat finali għandu jittieħed li huwa l-medju aritmetiku ta' żewġ kalkoli.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

L-pH ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar, ta' l-inbid jew tas-soluzzjoni ta' 25 % (m/m) (25 o Brix) għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat għandu jiġi kwotat sa żewġ postijiet deċimali.

25.   KUBRIT DIOSSID

1.   DEFINIZZJONIJIET

Kubrit diossid liberu huwa definit bħala il-kubrit diossid preżenti fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar jew l-inbid fil-forom li ġejjin: H2SO3, HSO3 —

L-ekwilibriju bejn dawn il-forom huwa funzjoni ta' pH u temperatura:

H2SO3 H+ + HSO3 —

H2SO3 jirrapreżentaw kubrit diossid molekolari.

Kubrit diossid totali huwa definit bħala t-total tal-forom kollha diversi ta' kubrit diossid preżenti fl-inbid, jew fl-istat liberu jew mħallat mal-kostitwenti tiegħu.

2.   KUBRIT DIOSSID LIBERU U TOTALI

2.1.   Prinċipju tal-metodi

2.1.1.   Metodu ta' referenza

2.1.1.1.   Għall-inbejjed u għeneb magħsur qabel ma jiħmar

Il-kubrit diossid jinġarr permezz ta' kurrent ta' arja jew nitroġenu; jiġi ffissat u ossidizzat billi jiġi jingħadda f'forma ta' bżieżaq ta' l-arja soluzzjoni ta' idroġenu perossidu dilwita u newtrali. L-aċtu sulfuriku ffurmat huwa kkalkulat permezz ta' titazzjoni b' soluzzjoni standard ta' sodju idrossid. Il-kubrit diossid liberu jiġi mnaddaf mill-inbid permezz ta' entrainment f'temperatura baxxa (10 °C).

Il-kubrit diossid totali jiġi mnaddaf mill-inbid permezz ta' entrainment f'temperatura għolja (madwar 100 °C).

2.1.1.2.   Għall-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat

Il-kubrit diossid totali jiġi estratt mill-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat li jkun ġie dilwit qabel permezz ta' entrainment f'temperatura għolja (madwar 100 °C).

2.1.2.   Metodu rapidu tal-kalkolu (għal inbid u għeneb magħsur qabel ma jiħmar)

Il-kubrit diossid liberu jiġi kkalkulat permezz ta' titrazzjoni jodometrika diretta.

Il-kubrit diossid magħqud jiġi sussegwentement ikkalkulat permezz ta' titrazzjoni jodometrika wara idroliżi alkalina. Meta jiġi miżjud mal-kubrit diossid liberu, dan jagħti il-kubrit diossid totali.

2.2.   Metodu ta' referenza

2.2.1.   Tagħmir

2.2.1.1.

It-tagħmir użat għandu jkun konformi mad-graff li jidher hawn taħt, b'mod partikolari għar-rigward tal-kondensatur. Id-dimensjonijiet mogħtija huma f' millimetri. Id-dijametri interni ta' l-erba' tubi konċentriċi li jiffurmaw il-kondensatur huma 45, 34, 27 u 10 mm. It-tubu minn fejn jidħol il-gass ġewwa l-bubbler B jispiċċa fi sfera żgħira b'dijametru ta' 1 ċm b'toqob ta' dijametru ta' 20 0,2-mm madwar l-akbar ċirkonferenza orizzontali tagħha. Alternattivament, dan it-tubu jista' jispiċċa fi pjanċa tal-ħġieġ frit li tipproduċi numru kbir ta' bżieżaq żgħar ħafna u b'hekk tiżgura kuntatt tajjeb bejn il-likwidu u l-fażijiet gassużi. Iċ-ċirkolazzjoni tal-gass minn ġewwa l-apparat għandha tkun ta' madwar 40 litru s-siegħa. Il-flixkun fuq il-lemin tad-graff huwa maħsub sabiex jirrestrinġi t-tnaqqis tal-pressa kkawżata mill-pompa ta' l-ilma għal 20 sa 30 ċm ilma. Sabiex tirregola l-vakum għall-valur korrett tiegħu, miter taċ-ċirkolazzjoni b'tubu taċ-ċirkolazzjoni semikapillari għandu jiġi nstallat bejn il-bubbler u l-flixkun.

2.2.1.2.

Mikroburetta.

2.2.2.   Reaġenti

2.2.2.1.

Aċtu fosforiku, 85 % (H3PO4, ρ20 = 1,71 g/ml).

2.2.2.2.

Soluzzjoni ta' idroġenu perossidu, 9,1 g H2O2/litru (tlett volumi).

2.2.2.3.

Reaġent indikatur: metil aħmar … 100 mg methylene blu … 50 mg alkoħol,50 % vol … 100 ml

2.2.2.4.

Soluzzjoni ta' sodju idrossid, NaOH, 0,01 M

2.2.3.   Proċedura

2.2.3.1.   Kalkolu tal-kubrit diossidu liberu

L-inbid għandu jinżamm fi flixkun mimli u magħluq b'tapp f' 20 °C għal jumejn qabel il-kalkolu.

Poġġi 2 sa 3 ml soluzzjon ita' idroġenu perossid (2.2.2.2) u żewġ qatriet ta'reaġent indikatur fil-bubbler B u nnewtralizza s-soluzzjoni ta' idroġenu perossid bis-soluzzjoni ta' sodju idrossid 0,01M (2.2.2.4).

Qabbad il-bubbler mat-tagħmir. Introduċi 50 ml tal-kampjun u 15 ml ta' l-aċtu fosforiku (2.2.2.1) fil-flixkun A tat-tagħmir ta' l-entrainment. Qabbad il-flixkun mat- tagħmir. Għaddi bżieżaq ta' l-arja (jew tan-nitroġenu) minnu għal 15-il minuta. Il-kubrit diossid liberu mgħoddi jiġi ossidizzat f'aċtu sulfuriku. Neħħi l-bubbler mit-tagħmir u ttitra l-aċtu li jkun ifforma kontra s-soluzzjoni ta' sodju idrossid 0,01 M (2.2.2.4. Ħalli n ml ikun il-volum użat.

2.2.3.2.   Espressjoni tar-riżultati

Il-kubrit diossid liberat huwa espress f'mg/l sa l-eqreb numru sħiħ.

2.2.3.2.1.

Kalkolu Il-kubrit diossid liberu f'milligrammi għal kull litru huwa 6,4 n.

2.2.3.3.   Kalkolu ta' kubrit diossid totali

2.2.3.3.1.

Għal għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat, uża s-soluzzjoni miksuba billi tħallat il-kampjun li għandu jiġi analizzat sa 40 % (m/v) kif indikat fil-kapitolu “Aċidità totali”, taqsima 5.1.2. Introduċi 50 ml ta' din is-soluzzjoni u 5 ml ta' l-aċtu fosforiku (2.2.2.1) fil-flixkun ta' 250 ml A tat-tagħmir ta' l-entrainment. Qabbad il-flixkun mat-tagħmir.

2.2.3.3.2.

Inbejjed u għeneb magħsur qabel ma jiħmar Jekk il-konċentrazzjoni stmata fil-kampjun ma tkunx akbar minn 50 mg tat-total ta' SO2 għal kull litru, poġġi 50 ml tal-kampjun u 15 ml ta' l-aċtu fosforiku (2.2.2.1) fil-flixkun ta' 250ml A tat-tagħmir ta' l-entrainment. Qabbad il-flixkun mat-tagħmir. Madankollu, sa mhux aktar tard mill- ►M5  31 ta’ Awissu 1996 ◄ , għandu jintuża 5 ml ta' soluzzjoni ta' 25 % (m/v) ta' aċtu fosforiku (2.2.2.1) sabiex jiġi analizzat il-kontenut ta' kubrit diossid tal-meraq ta' l-għeneb. Jekk il-konċentrazzjoni stmata fil-kampjun tkun akbar minn 50 mg ta' l-SO2 totali ghal kull litru, poġġi 20 ml tal-kampjun u 5 ml ta' l-aċtu fosforiku (2.2.2.1) fil-flixkun ta' 100-ml A tat-tagħmir ta' l-entrainment. Qabbad il-flixkun mat-tagħmir. Poġġi 2 sa 3 ml ta' soluzzjoni ta' idroġenu perossid (2.2.2.2) fil-bubbler B, innewtralizzat bħal qabel, u għalli l-inbid fil-flixkun A billi tuża fjamma żgħira għolja bejn 4 u 5 ċm li għandha tmiss direttament mal-qiegħ tal-flixkun. Tpoġġix il-flixkun fuq platt tal-ħadid iżda fuq diska b'toqba b'dijametru ta' madwar 30 mm. Dan huwa sabiex tevita li ssaħħan iżżejjed sustanzi estratti mill-inbid li huma depożitati mal-ħitan tal-flixkun. Ħallih jagħli waqt li tgħaddi kurrent ta' l-arja (jew nitroġenu). Fi 15-il minuta il-kubrit diossid totali ikun għadda u ġie ossidiċizzat. Ikkalkula l-aċtu sulfuriku li jkun ifforma permezz ta' titrazzjoni bis-soluzzjoni ta' 0,01 M sodju idrossid (2.2.2.4). Ħalli n ml ikun il-volum użat.

2.2.3.4.   Espressjoni tar-riżultati

Għeneb magħsur qabel ma jiħmar u nbejjed: Il-kubrit diossid totali huwa espress f' mg/l.

Għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat: Il-kubrit diossid totali huwa espress f' mg/kg tat-total ta' zokkor.

2.2.3.4.1.

Kalkolu Għall-inbejjed: Kubrit diossid totali f'milligrammi għal kull litru: — kampjuni baxxi fil-kubrit diossid (50 ml kampjun ta' l-eżami): 6,4 n — kampjuni oħra (20 ml kampjun ta' l-eżami): 16 n Għall-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat Kubrit diossid totali f'milligrammi għal kull kilogramma ta' total taz-zokkor (kampjun tat-test preparat ta' 50ml (2.2.3.3.1)): fejn P = perċentwali tal-konċentrazzjoni (m/m) ta' zokkor totali

2.2.3.4.2.

Ripetibbiltà (r) 50 ml kampjun ta' l-eżami 50 mg/l; r = 1 mg/l.20 ml kampjun ta' l-eżami 50 mg/l; r = 6 mg/l.

2.2.3.4.3.

Riproduċibbiltà (R) 50 ml kampjun ta' l-eżami 50 mg/l; R = 9 mg/l. 20 ml kampjun ta' l-eżami 50 mg/l; R = 15 mg/l.

▼M8 —————

▼B

3.   KUBRIT DIOSSID MOLEKULARI

3.1.   Prinċipju tal-metodu

Il-perċentwal ta' kubrit diossid molekulari, H2SO3, f'kubrit diossid liberu huwa kkalkolat bħala funzjoni ta' pH, qawwa alkoħolika u temperatura.

Għal tempertaura u qawwa alkoħolika partikolari:

H2SO3 H+ + HSO3 –,

b'

p KM =

L =

fejn

I = qawwa jonika,

A u B = koeffiċjenti li jvarjaw b'temperatura u qawwa alkoħolika,

KT = diżassoċjazzjoni termodinamika kostanti: Il-valuri ta' pKT huma mogħtija fit-Tabella 1 għal-diversi qawwiet alkoħoliċi u temperaturi,

KM = kostanti ta' dissoċjazzjoni mħallta.

Jekk tieħu valur medju ta' 0,038 għall-qawwa jonika I, it-Tabella 2 tagħti valuri ta' pKM għal diversi temperaturi u qawwiet alkoħoliċi.

Il-kontenut ta' kubrit diossid mollekolari kkalkulat permezz ta' l-espressjoni (1) hija mogħtija fit-Tabella 3 għad-diversi valuri ta' pH, temperatura u qawwa alkoħolika.

3.2.   Kalkolu

Mill-għarfien tal-pH ta' l-inbid u l-qawwa alkoħolika tiegħu, il-perċentwal ta' kubrit diossid mollekolari huwa mogħti fit-Tabella 3 għat-temperatura T °C. Ħalli din tkun X %.

Il-kontenut ta' kubrit diossid mollekolari f' mg/l huwa:

X × C

fejn

C = il-kontenut ta' kubrit diossid liberu f' mg/l.

26.   SODJU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODI

1.1.   Metodu ta' referenza: spettrometrija ta' assorbiment atomiku

Is-sodju huwa kkalkulat direttament fl- inbid permezz ta' spettrometrija ta' assorbiment atomiku wara ż-żjieda ta' aġent soppressanti tal-jonizzazzjoni (ċesju klorid) sabiex tipprevjeni il-jonizzazzjoni tas-sodju.

1.2.   Metodu tas-soltu: fotometrija tal-fjamma

Is-sodju jiġi kkalkulat direttament f'inbid dilwit (mill-inqas 1:10) permezz ta' fotometrija tal-fjamma.

2.   METODU TA' REFERENZA

2.1.   Reaġenti

2.1.1.   Soluzzjoni li jkun fiha 1 g sodju kull litru:

Uża soluzzjoni kummerċjali standard li jkun fiha 1 g sodju kull litru. Din is-soluzzjoni tista tiġi mħejjija billi tħoll 2,542 g ta' sodju klorid anidruż, NaCl, f'ilma ddistillat u ż-żid sa volum ta' 1 litru.

Żomm din is-soluzzjoni fi flixkun tal-polyethylene.

2.1.2.   Soluzzjoni matriċi (mudell):

2.1.3.   Soluzzjoni ċesju klorid li jkun fiha 5 % ċesju:

ħoll 6,330 g ta' ċesju klorid, CsCl, f' 100 ml ilma ddistillat.

2.2.   Tagħmir

2.2.1.

Spettrofotomiter ta' l-assorbiment atomiku mgħammar b' air-acetylene burner.

2.2.2.

Sodju hollow cathode lamp.

2.3.   Proċedura

2.3.1.   Tħejjija tal-kampjun

Għaddi minn pipetta 2,5 ml ta' inbid fi flixkun volumetriku ta' 50 ml, żid 1 ml tas-soluzzjoni ta' ċesju klorid (2.1.3) u żid sal-marka b'ilma ddistillat.

2.3.2.   Kalibrazzjoni

Poġġi 5,0 ml tas-soluzzjoni matriċi f'kull wieħed minn set ta' fliexken volumetriċi ta' 100 ml u żid 0, 2,5, 5,0, 7,5 u 10 ml rispettivament tas-soluzzjoni tas-sodju 1 g/l (2.1.1) imħallat minn qabel b' 1:100. Żid 2 ml tas-soluzzjoni ta' ċesju klorid (2.1.3) ma' kull flixkun u żid sa 100 ml b'ilma ddistillat.

Is-soluzzjonijiet standard ippreparati b'dan il-mod ikun fihom 0, 0,25, 0,50, 0,75 u 1,00 mg ta' sodju għal kull litru rispettivament u kull waħda jkun fiha 1 g ta' ċesju kull litru. Żomm dawn is-soluzzjonijiet fi fliexken tal-polyethylene.

2.3.3.   Kalkolu

Iffissa l-frekwenza fuq 589,0 nm. Ġib żero l-iskala ta' l-assorbiment billi tuża soluzzjoni matriċi li jkun fiha 1 g ta' ċesju kull litru (2.3.2). Tella' l-inbid mħallat direttament f' burner ta' l-ispettrofotomiter, segwit bis-soluzzjonijiet standard waħda wara l-oħra (2.3.2). Aqra l-assorbenzi. Irrepeti kull kejl.

2.4.   Espressjoni tar-riżultati

2.4.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi graff li tagħti l-assorbenzi bħala funzjoni tal-konċentrazzjoni tas-sodju fis-soluzzjonijiet standard.

Irreġistra l-assorbenza miksuba bl-inbid dilwit fuq din il-graff u kkalkula l-konċentrazzjoni tas-sodju tiegħu C f'milligrammi għal kull litru.

Il-konċentrazzjoni tas-sodju f'milligrammi għal kull litru ta' inbid għandha mbagħad tkun ta' 20C, espressa sa l-eqreb numru sħiħ.

2.4.2.   Ripetibbiltà (r):

r

=

1 + 0,024 xi mg/l.

xi

=

konċentrazzjoni ta' sodju fil-kampjun f' mg/l.

2.4.3.   Riproduċibbiltà (R)

R

=

2,5 + 0,05 xi mg/l.

xi

=

konċentrazzjoni ta' sodju fil-kampjun f' mg/l.

▼M8 —————

▼B

27.   POTASSJU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODI

1.1.   Metodu ta' referenza

Il-potassju jiġi kkalkulat direttament fl-inbid imħallat permezz ta' spettrometrija ta' assorbiment atomiku wara ż-żjieda ta' aġent sopprassanti tal-jonizzazzjoni (ċesju klorid) sabiex tipprevjeni l-jonizzazzjoni tal-potassju.

1.2.   Metodu tas-soltu:

Il-potassju jiġi kalkulat direttament fl-inbid mħallat permezz ta' fotometrija tal-fjamma.

2.   METODU TA' REFERENZA

2.1.   Reaġenti

2.1.1.   Soluzzjoni li jkun fiha 1 g ta' potassju kull litru:

Uża soluzzjoni kummerċjali standard li jkun fiha 1 g ta' potassju kull litru. Din is-soluzzjoni tista tiġi mħejjija billi tħoll 4,813 g ta' potassju idroġenu tartrat (C4H5KO6) f'ilma ddistillat u billi żżid il-volum sa 1 litru.

2.1.2.   Soluzzjoni matriċi (mudell):

2.1.4.   Soluzzjoni ta' ċesju klorid li jkun fiha 5 % ċesju:

ħoll 6,33 g ta' ċesju klorid, CsCl, f' 100 ml ta' ilma ddistillat.

2.2.   Tagħmir

2.2.1.

Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku, mgħammar b' air-acetylene burner.

2.2.2.

Potassium hollow cathode lamp.ot

2.3.   Proċedura

2.3.1.   Tħejjija tal-kampjun

Għaddi minn pipetta 2,5 ml ta' inbid (imħallat minn qabel b' 1:10) fi flixkun volumetriku ta' 50 ml, żid 1 ml tas-soluzzjoni ta' ċesju klorid (2.1.3) u żid sal-marka b'ilma ddistillat.

2.3.2.   Kalibrazzjoni

Introduċi 5,0 ml tas-soluzzjoni matriċi (2.1.2) f'kull wieħed mis-sett ta' fliexken volumetriċi ta' 100-ml u żid 0, 2,0, 4,0, 6,0 u 8,0 ml rispettivament ta' soluzzjoni tal-potassju 1 g/l (2.1.1) (imħallat minn qabel b' 1:10). Żid 2 ml tas-soluzzjoni ta' ċesju klorid (2.1.3) ma' kull flixkun u żid sa 100 ml b'ilma ddistillat.

Is-soluzzjonijiet standard ippreparati b'dan il-mod ikun fihom 0, 2, 4, 6 u 8 mg ta' potassju kull litru rispettivamnet u kull waħda jkun fiha 1 g ta' ċesju kull litru. Żomm dawn is-soluzzjonijiet fi flixken tal-polyethylene.

2.3.3.   Kalkolu

Stabilixxi l-frekwenza f'769,9 nm. Ġib żero l-iskala ta' assorbenza li tuża s-soluzzjoni matriċi li jkun fiha 1 g ta' ċesju kull litru (2.3.2). Tella' l-inbid mħallat (2.3.1) direttament f'burner ta' l-ispettrofotomiter, segwit bis-soluzzjonijiet standard waħda wara l-oħra. Aqra l-assorbenzi. Irrepeti kull kejl.

2.4.   Espressjoni tar-riżultati

2.4.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi graff li tagħti l-varjazzjoni fl-assorbenza bħala funzjoni tal-konċentrazzjoni tal-potassju fis-soluzzjonijiet standard.

Irreġistra l-valur medju ta' l-assorbiment miksuba bil-kampjun ta' l-inbid mħallat fuq din il-graff u kkalkula l-konċentrazzjoni tal-potassju C f' milligrammi kull litru.

Il-konċentrazzjoni ta' potassju espressa f' milligrammi għal kull litru ta' inbid sa l-eqreb numru sħiħ għandu mbagħad ikun F×C, fejn F huwa l-fattur ta' dilwizzjoni (hawn 200).

2.4.2.   Ribetibbiltà (r):

r = 35 mg/l.

2.4.3.   Riproduċibbiltà (R)

R = 66 mg/l.

2.4.4.   Metodi oħra kif tesprimi r-riżultati

F'milliekwivalenti għal kull litru: 0,0256 × F × C.

F' mg potassu idroġenu tartat kull litru: 4,813 × F × C.

▼M8 —————

▼B

28.   MANJESJU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Il-manjesju jiġi kkalkulat direttament fuq l-inbid, mħallat b'mod adegwat, permezz ta' spettrometrija ta' assorbiment atomiku.

2.   REAĠENTI

2.1.   Soluzzjoni standard konċentrata li jkun fiha 1 g ta' manjesju kull litru

Uża soluzzjoni ta' manjesju kummerċjali standard (1 g/l). Din is-soluzzjoni tista tiġi mħejjija billi tħoll 8,3646 g ta' manjesju klorid (MgCl2.6H2O) f'ilma ddistillat u żid sa 1 litru.

2.2.   Ħallat soluzzjoni standard li jkun fiha 5 mg manjesju kull litru.

Nota:

Żomm is-soluzzjonijiet ta' manjesju standard fi fliexken tal-polyethylene.

3.   TAGĦMIR

3.1.	Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku mgħammar b'air-acetylene burner.

3.2.	Hollow cathode lamp tal-manjesju.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija tal-kampjun

Ħallat l-inbid b' 1:100 b'ilma ddistillat.

4.2.   Kalibrazzjoni

Poġġi 5, 10, 15, u 20 ml tas-soluzzjoni ta' manjesju standard mħallta (2.2) f'kull wieħed minn sett ta' fliexken volumetriċi ta' 100 ml u żid sa 100 ml b'ilma ddistillat. Is-soluzzjonijiet standard ippreparati b'dan il-mod jkun fihom 0,25, 0,50 0,75 u 1,0 mg ta' manjesju kull litru rispettivament. Dawn is-soluzzjonijiet għandhom jinżammu fi flixken tal-polyethylene.

4.3.   Kalkolu

Stabilixxi l-frekwenza għal 285 nm. Ġib fuq żero l-iskala ta' assorbiment billi tuża ilma ddistillat. Tella' l-inbid mħallat direttament f' burner ta' l-ispettrofotomiter, segwit bis-soluzzjonijiet standard waħda wara l-oħra (4.2).

Aqra l-assorbenzi. Irrepeti kull kejl.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi graff tal-varjazzjoni fl-assorbenza bħala funzjoni tal-konċentrazzjoni tal-manjesju fis-soluzzjonijiet standard. Irreġistra l-valur medju ta' l-assorbiment miksuba bil-kampjun ta' l-inbid mħallat fuq dan il-graff u kkalkula l-konċentrazzjoni tal-manjesju C f' milligrammi kull litru.

Il-konċentrazzjoni tal-manjesju f'milligrammi kull litru ta' inbid sa l-eqreb numru sħiħ tkun 100 C.

5.2.   Ribetibbiltà (r):

r = 3 mg/l.

5.3.   Riproduċibbiltà (R)

R = 8 mg/l.

29.   KALĊJU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Il-kalċju huwa kkalkulat direttament fuq l-inbid, li għand jkun dilwit b'mod xieraq, permezz ta' spettrometrija ta' assorbiment atomiku, wara ż-żjieda ta' aġent soppressanti tal-jonizzazzjoni.

2.   REAĠENTI

2.1.   Soluzzjoni standard li jkunu fiha 1 g ta' kalċju kull litru

Uża soluzzjoni ta' kalċju standard kummerċjali 1 g/l. Din is-soluzzjoni tista' tiġi mħejjija billi tħoll 2,5 g ta' kalċju karbonat, CaCO3, fi kwantità ta' 1:10 (v/v) HCl biżżejjed sabiex tħollha kompletament u żżid sa litru b'ilma ddistillat.

2.2.   Ħallat soluzzjoni standard li jkun fiha 50 mg kalċju kull litru

Nota:

Żomm is-soluzzjonjiet ta' kalċju standard fi flixken tal-polyethylene.

2.3.   Soluzzjoni lantanum klorid li jkun fiha 50 g lantanum kull litru

Ħoll 13,369 g ta' lantanum kloride, LaCl3 . 7H2O, f'ilma ddistillat; żid 1 ml ta' HCl mħallat 1:10 (v/v) u żid sa 100 ml.

3.   TAGĦMIR

3.1.	Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku mgħammar b' air-acetylene burner.

3.2.	Hollow cathode lamp tal-kalċju.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija tal-kampjun

Poġġi 1 ml inbid, 2 ml tas-soluzzjoni lantanum kloride (2.3) fi flixkun volumetriku ta' 20 ml u żid sal-marka b'ilma ddistillat. L-inbid, mħallat b' 1:20, ikun fih 5 g lantanum kull litru.

Nota:

Għall-inbejjed ħelwin, il-konċentrazzjoni ta' 5 g lantanum kull itru hija biżżejjed kemm-il darba d-dilwizzjoni ma ġġibx l-kontenut ta' zokkor għal inqas minn 2,5 g kull litru. Għal inbejjed f'konċentrazzjonijiet aktar għoljin ta' zokkor, il-konċentrazzjonijiet ta' lantanum għandhom jiżdiedu għal 10 g kull litru.

4.2.   Kalibrazzjoni

Poġġi 0, 5, 10, 15, u 20 ml tas-soluzzjoni ta' kalċju standard mħallta (2.2) rispettivamnet f'sett ta' fliexken volumetriċi ta' 100 ml, żid ma' kull flixkun 10 ml ta' soluzzjoni lantanum klorid (2.3) u żid sa 100 ml b'ilma ddistillat. Is-soluzzjonijiet ippreparati b'dan il-mod ikun fihom 0, 2,5, 5,0, 7,5 u 10 mg ta' kalċju kull litru u kull wieħed ikun fih 5 g ta' lantanum kull litru. Dawn is-soluzzjonijiet għandhom jinżammu fi fliexken tal-polyethylene.

4.3.   Kalkolu

Iffissa l-frekwenza għal 422,7 nm. Ġib fuq żero l-iskala ta' assorbiment billi tuża is-soluzzjoni li jkun jinsab fiha 5 g ta' lantanum kull litru (4.2). Tella' l-inbid mħallat direttament f' burner ta' l-ispettrofotomiter, segwit bil-ħames soluzzjonijiet standard waħda wara l-oħra (4.2). Aqra l-assorbenzi. Irrepeti kull kejl.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi graff li tagħti l-varjazzjoni fl-assorbiment bħala funzjoni tal-konċentrazzjoni tal-kalċju fis-soluzzjonijiet standard.

Irreġistra l-valur medju ta' l-assorbiment miksub bil-kampjun ta' inbid mħallat fuq dan il-graff u kkalkula l-konċentrazzjoni tal-Kalċju C. Il-konċentrazzjoni tal-Kalċju f' milligrammi kull litru ta' inbid sa l-eqreb numru sħiħ tkun 20 C.

5.2.   Ripetibbiltà (r)

Konċentrazzjoni 60 mg/l: r = 2,7 mg/l.

Konċentrazzjoni > 60 mg/l: r = 4 mg/l.

5.3.   Riproduċibbiltà (R)

R

=

0,114 xi 0,5.

xi

=

konċentrazzjoni fil-kampjun f' mg/l.

30.   ĦADID

1.   PRINĊIPJU TAL-METODIMETODU TA' REFERENZA

Metodu tas-soltu

Wara d-dilwizzjoni sodisfaċenti ta' l-inbid u t-tneħħija ta' l-alkoħol, il-ħadid jiġi kkalkulat direttament permezz ta' spettrometrija ta' assorbiment atomiku.

Wara diġestjoni f'soluzjoni ta' idroġenu perossidu ta' 30 %, il-ħadid totali, issa fl-istat ta' Fe(III), jiġi mnaqqas għall-istat ta' Fe(II) stat u jiġi kkalkulat permezz tal- kolorazzjoni prodotta permezz ta' orthophenanthroline.

2.   METODU TA' REFERENZA

2.1.   Reaġenti

2.1.1.

Soluzzjoni tal-ħadid standard konċentrata li jkun fiha 1 g Fe(III) kull litru Uża soluzzjoni kummerċjali standard (1 g/l). Din is-soluzzjoni tista tiġi preparata billi tħoll 8,6341 g ta' sulfat ta' l-ammonju ferriku (FeNH4(SO4)2.12H2O) f'ilma ddistillat u aċidifikat ftit b' 1 M aċtu idrokloriku u li jkun jammonta għal litru.

2.1.2

Ħallat soluzzjoni tal-ħadid standard li jkun fiha 100 mg ħadid kull litru.

2.2.   Tagħmir

2.2.1

Evaporatur li jdur b' banju ta' l-ilma kkontrollat termostatikament.

2.2.2.

Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku mgħammar b' air-acetylene burner.

2.2.3.

Hollow cathode lamp tal-ħadid.

2.3.   Proċedura

2.3.1   Tħejjija tal-kampjun

Neħħi l-alkoħol mill-inbid billi tnaqqas il-volum tal-kampjun sa nofs il-volum oriġinali tiegħu billi tuża evaporatura li jdur (50 sa 60 °C). Żid sal-volum oriġinali b'ilma ddistillat.

Jekk ikun hemm bżonn, ħallat qabel ma jsir il-kalkolu.

2.3.2.   Kalibrazzjoni

Poġġi 1, 2, 3, 4 u 5 ml tas-soluzzjoni li jkun fiha 100 mg ħadid kull litru (2.1.2) rispettivament f' sett ta' fliexken volumetriċi ta' 100 ml u żid sa 100 ml b'ilma ddistillat. Dawn is-soluzzjonijiet preparati b'dan il-mod ikun fihom 1, 2, 3, 4 u 5 mg ta' ħadid kull litru rispettivament.

Dawn is-soluzzjonijiet għandhom jinżammu fi flixken tal-polyethylene.

2.3.3.   Kalkolu

Stabbilixxi l-frekwenza għal 248,3 nm. Ġib fuq żero l-iskala ta' assorbiment billi tuża ilma ddistillat. Tella' l-kampjun mħallat direttament f' burner ta' l-ispettrofotomiter, segwit b'ħames soluzzjonijiet standard waħda wara l-oħra (2.3.2). Aqra l-assorbenzi. Irrepeti kull kejl.

2.4.   Espressjoni tar-riżultati

2.4.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi graff li tagħti l-varjazzjoni fl-assorbenza bħala funzjoni tal-konċentrazzjoni tal-ħadid fis-soluzzjonijiet standard. Irreġistra l-valur medju ta' l-assorbiment miksuba bil-kampjun ta' l-inbid mħallat fuq din il-graff u kkalkula l-konċentrazzjoni tal-ħadid C.

Il-konċentrazzjoni ta' ħadid f'milligrammi kull litru ta' inbid sa post deċimali wieħed għandha tkun F.C, fejn F huwa l-fattur ta' dilwizzjoni.

▼M8 —————

▼B

31.   RAM

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Il-metodu huwa bbażat fuq l-użu ta' spettrometrija ta' assorbiment atomiku.

2.   TAGĦMIR

2.1.	Platt tal-platinum dish.

2.2.	Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku.

2.3.	Hollow cathode lamp tar-ram.

2.4.	Provisti ta' gass: air-acetylene jew nitrous oxide/acetylene.

3.   REAĠENTI

3.1.	Ram metalliku.

3.2.	Aċtu nitriku, HNO3, ikkonċentrat 65 %, ρ20 = 1,38 g/ml.

3.3.	Aċtu nitriku dilwit, 1:2 (v/v).

3.4.

Soluzzjoni li jkun fiha ram f' 1 g/l. Uża soluzzjoni tar-ram kummerċjali standard. Din is-soluzzjoni tista tiġi preparata billi tiżen 1 000 g ta' ram metalliku u titrasferixxi dan mingħajr l-ebda telf fi flixkun volumetriku ta' 1 000 ml. Żid 1:2 (v/v) aċtu nutriku dilwit (3.3) fi kwantità suffiċjenti sabiex tħoll il-metall, żid 10 ml ta' aċtu nitriku kkonċentrat (3.2) u żid sal-marka b'ilma ddistillat darbtejn.

3.5.	Soluzzjoni li jkun fiha r-ram f' 100 mg/l. Introduċi 10 ml tas-soluzzjoni preparata bħal f'3.4 fl flixkun volumetriku ta' 100 ml u żid sal-marka b'ilma ddistillat darbtejn.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija tal-kampjun u kalkolu tar-ram

Jekk meħtieġ, ipprepara soluzzjoni mħallta b'mod sodisfaċenti b'ilma ddistillat darbtejn.

4.2.   Kalibrazzjoni

Għaddi minn pipetta 0,5, 1 u 2 ml ta' soluzzjoni 3.5 (100 mg ta' ram kull litru) fl flixkun volumetriku ta' 100 ml u żid sal-volum b'ilma ddistillat darbtejn: is-soluzzjonijiet hekk miksuba ikun fihom 0,5, 1 u 2 mg ta' ram kull litru rispettivament.

4.3.	Kejjel l-assorbenza f' 324,8 nm. Iffissa ż-żero b'ilma ddistillat darbtejn. Kejjel direttament l-assorbiment ta' soluzzjonijiet standard suċċessivi preparati f' 4.2. Wettaq darbtejn.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi graff li tagħti l-varjazzjonijiet fl-assorbiment bħala funzjoni tal-konċentrazzjonijiet tar-ram fis-soluzzjonijiet standard.

Waqt li tuża l-assorbenzi mkejjla tal-kampjuni, aqra l-konċentrazzjoni C f' mg/l mill-kurvatura ta' kalibrazzjoni.

Jekk F huwa l-fattur ta' dilwizzjoni, il-konċentrazzjoni ta' ram preżenti hija mogħtija f'milligrammi kull litru f' F × C. Huwa kwotat sa żewġ postijiet deċimali.

Noti:

32.   KADMJU

1.   Prinċipju

Il-kadmju huwa kkalkulat direttament fl-inbid permezz ta' spettrometrija mingħajr fjamma ta' assorbiment atomiku.

2.   TAGĦMIR

L-affarijiet kollha tal-ħġieġ għandhom jinħaslu qabel l-użu f' aċtu nitriku kkonċentrat msaħħan sa 70 sa 80 °C u mlaħalħa f'ilma ddistillat darbtejn.

2.1.	Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku mgħammar b' forn tal-grafita, korrezjoni ta' l-isfond u multipotentiometer.

2.2.	Hollow cathode lamp tal-kadmju.

2.3.	Mikropipetti ta' 5 μl bi truf speċjali għall-kejl ta' asorbiment atomiku.

3.   REAĠENTI

L-ilma wżat għandu jiġi ddistillat darbtejn billi jintuża tagħmir tal-ħġieġ borosilicate, jew ilma ta' purità simili. Ir-reaġenti kollha għandhom ikunu ta' grad analitiku ta' reaġent magħruf u, b'mod partikolari, liberi mill-kadmju.

3.1.	85 % aċtu fosforiku (ρ20 = 1,71 g/ml).

3.2.	Soluzzjoni ta' aċtu fosforiku miksuba bit-taħlit ta' 8 ml ta' aċtu fosforiku bl-ilma sa sa 100 ml.

3.3.	Soluzzjoni A 0,02 M ta' melħ disodju ta' l-ethylene diamine tetra-aċtu aċetiku (EDTA).

3.4.	pH 9 soluzzjoni buffer: ħoll 5,4 g ta' ammonju klorid fi ftit millilitri ta' ilma fl flixkun volumetriku ta' 100 ml, żid 35 ml soluzzjoni ta' ammonju idrossid (ρ20 = 0,92 g/ml) dilwit sa 25 % (v/v) u żid sa 100 ml bl-ilma.

3.5.	Eriochrome iswed T: 1 % (w/w) soluzzjoni solida f' sodju klorid.

3.6.

Kadmju sulfat (CdSO4.8H2O). It-titre tal-kadmju sulfat għandu jiġi verifikat billi tuża l-metodu li ġej: Iżen eżatt 102,6 mg tal-kampjun tal-kadmju sulfat f'reċipjent ċilindriku bi ftit ilma u ħawwad sakemm jinħall; żid 5 ml tal-pH 9 soluzzjoni buffer u madwar 20 mg ta' eriochrome iswed T. Ittitra bis-soluzzjoni EDTA sakemm l-indikatur jibda jsir blu. Il-volum ta' EDTA miżjud għandu jkun ugwali għal 20 ml. Jekk il-volum ikun ftit differenti, ikkorreġi il-porzjon tat-test mwieżen tal-kadmju sulfat użat fit-tħejjija tas-soluzzjoni ta' referenza kif xieraq.

3.7.	Soluzzjoni ta' referenza kadmju ta' 1g f'kull litru. Uża soluzzjoni ta' grad kummerċjali standard. Din is-soluzzjoni tista' tinkiseb billi tħoll 2,2820 g ta' kadmju sulfat fl-ilma u żżid sa litru. Żomm is-soluzzjoni fi flixkun tal-ħġieġ borosilicate b'tapp tal-ħġieġ mitħun.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija tal-kampjun

Ħallat l-inbid sa 1: 2 (v/v) b'soluzzjoni ta' aċtu fosforiku.

4.2.   Tħejjija tal-marġni ta' kalibrazzjoni tas-soluzzjonijiet

Ħejji dilwizzjonijiet suċċessivi b'titres ta' 2,5, 5, 10 u 15 μg ta' kadmju kull litru rispettivament billi tuża s-soluzzjoni ta' referenza tal-kadmju.

4.3.   Kalkolu

4.3.1.   Programmar tal-forn (bħala gwida biss):

Tnixxif f' 100 °C għal 30 sekonda

Mineralizazzjoni f' 900 °C għal 20 sekonda

Atomizzazzjoni f' 2 250 °C għal 2 jew 3 sekondi

Ċirkolazzjoni ta' nitroġenu (flushing gas): 6 litri/minuta

Nota:

Fit-tmiem tal-proċedura, żid it-temperatura għal 2 700 °C sabiex tnaddaf il-forn.

4.3.2.   Kejl ta' assorbiment atomiku:

Agħżel il-frekwenza 228,8 nm. Ġib fuq iż-żero il-miżien ta' l-assorbenza b'ilma ddistillat darbtejn. Permezz ta' mikropipetta, introduċi fil-forn tlett porzjonijiet ta' 5-μl għal kull waħda mis-soluzzjonijiet fil-marġni tal-kalibrazzjoni u tas-soluzzjoni tal-kampjun li għandha tiġi analizzata. Irreġistra l-assorbenzi mkejla. Ikkalkula l-valur medju ta' l-assorbenza mir-riżultati għat-tlett porzjonijiet.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi l-kurvatura tal-varjazzjoni ta' l-assorbiment bħala funzjoni tal-konċentrazzjonijiet tal-kadmju fis-soluzzjonijiet fil-marġni tal-kalibrazzjoni. Il-varjazzjoni hija linejari. Daħħal il-valur ta' assorbenza medju tas-soluzzjoni tal-kampjun fuq il-kurvatura ta' kalibrazzjoni, u ikseb minnha l-konċentrazzjoni tal- kadmju C. Il-konċentrazzjoni ta' kadmju espressa f'mikrogrammi għal kull litru ta' inbid hija ugwali għal:

2 C

33.   FIDDA

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Il-metodu huwa bbażat fuq l-użu ta' spettrometrija ta' assorbiment atomiku wara li l-kampjun ikun ġie mfarfar mill-irmied.

2.   TAGĦMIR

2.1.	Platt tal-platinum.

2.2.	Banju ta' l-ilma, ikkontrollat b'mod termostatiku għal 100C.

2.3.	Forn ikkontrollat għal 500 għal 525 C.

2.4.	Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku.

2.5.	Hollow cathode lamp tal-fidda.

2.6.	Provvisti ta' gass: arja, acetylene.

3.   REAĠENTI

3.1.	Nitrat tal-fidda, AgNO3.

3.2.	Aċtu nitriku, HNO3, ikkonċentrat 65 %, ρ20 = 1,38 g/ml.

3.3.	Aċtu nitriku dilwit, 1:10 (v/v).

3.4.	Soluzzjoni li jkun fiha l-fidda f'1 g/l. Uża soluzzjoni tal-fidda kummerċjali standard. Din is-soluzzjoni tista tiġi mħejjija billi tħoll 1,575 g ta' nitrat tal-fidda f'aċtu nitriku dilwit u żid sa volum ta' 1 000 ml b' aċtu nitriku dilwit (3.3).

3.5.	Soluzzjoni li jkun fiha l-fidda f' 10 mg/l. 10 ml tas-soluzzjoni preparata bħal f' 3.4 għandhom jiġu mħallta sa 1 000 ml b'aċtu nitriku dilwit.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija tal-kampjun

Poġġi 20 ml tal-kampjun fi platt tal-platinum u evaporah sakemm jinxef fuq banju ta' l-ilma jagħli. Farfar l-irmied fil-forn f' 500 sa 525 C. Xarrab l-irmied abjad b' 1 ml ta' aċtu nitriku kkonċentrat Evapora fuq banju ta' l-ilma jagħli, erġa żid 1 ml aċtu nitriku (3.2) u evapora għat-tieni darba. Żid 5 ml ta' l-aċtu nitriku dilwit (3.3) u saħħan bil-mod sakemm jinħall.

4.2.   Kalibrazzjoni

Għaddi minn pipetta 2, 4, 6, 8, 10 u 20 ml tas-soluzzjoni 3.5 (10 mg fidda kull litru) rispettivament f'sett ta' fliexken volumetriċi ta' 100 ml u żid sal-marka b' aċtu nitriku dilwit (3.3): is-soluzzjonijiet hekk miksuba jkun fihom 0,20, 0,40, 0,60, 0,80, 1,0 u 2,0 mg ta' fidda kull litru rispettivament.

4.3.	Stabbilixxi l-frekwenza fuq 328,1 nm. Stabbilixxi ż-żero billi tuża ilma ddistillat darbtejn. Kejjel l-assorbenza direttament tas-soluzzjonijiet standard suċċessivi preparati f' 4.2. Wettaq darbtejn.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi graff li tagħti l-varjazzjonijiet fl-assorbenza bħala funzjoni tal-konċentrazzjonijiet tal-fidda fis-soluzzjonijiet standard.

Waqt li tuża l-assorbenzi mkejjla tal-kampjun, aqra l-konċentrazzjoni C f' mg/l mill-kurvatura ta' kalibrazzjoni.

Il-konċentrazzjoni tal-fidda fl-inbid hija mogħtija f'milligrammi għal kull litru b' 0,25C. Hija kwotata sa żewġ postijiet deċimali.

Nota:

Agħżel il-konċentrazzjoni tas-soluzzjonijiet għat-tħejjija tal-kurvatura ta' kalibrazzjoni, il-volum tal-kampjun meħud u l-volum finali tal-likwidu li għandhom ikunu approprjati għas-sensittività tat-tagħmir li għandu jintuża.

34.   ŻINGU

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Wara tneħħijha tal-alkoħol, ż-żingu huwa kkalkulat direttament bi spettrometrija ta' assorbiment atomiku.

2.   REAĠENTI

L-ilma wżat fit-tagħmir tal-ħġieġ borosilicate għandu jiġi ddistillat drabtejn jew għandu jkun ta' grad ta' purità ekwivalenti.

2.1.	Soluzzjoni standard li jkun fiha 1 g żingu kull litru: Uża soluzzjoni taż-żingu kummerċjali standard. Din is-soluzzjoni tista' tiġi mħejjija billi tħoll 4,3975 g ta' żingu sulfat. (ZnSO4 × 7H2O) fl-ilma u żid l-volum sa litru.

2.2.	Soluzzjoni standard ta' dilwizzjoni li jkun fiha 100 mg żingu kull litru.

3.   TAGĦMIR

3.1.	Evaporatur li jdur b' banju ta' l-ilma kontrollat termostatikament.

3.2.	Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku mgħammar b' air-acetylene burner.

3.3.	Hollow cathode lamp taż-żingu.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija tal-kampjun

Neħħi l-alkoħol minn 100 ml ta' l-inbid billi tnaqqas il-volum tal-kampjun sa nofs il-volum oriġinali tiegħu billi tuża evaporatur li jdur (50 sa 60 C). Żid sal-volum oriġinali ta' 100 ml b'ilma ddistillat darbtejn.

4.2.   Kalibrazzjoni

Poġġi 0,5, 1, 1,5, u 2 ml tas-soluzzjoni li jkun fiha 100 mg żingu kull litru (2.2) f'kull wieħed minn sett ta' fliexken volumetriċi ta' 100 ml u żid sal-marka b'ilma ddistillat darbtejn. Is-soluzzjonijiet preparati b'dan il-mod ikun fihom 0,5,1,1,5 u 2 mg żingu kull litru rispettivament

4.3.   Kalkolu

Stabbilixxi l-frekwenza fuq 213,9 nm. Ġib fuq żero l-iskala ta' assorbiment billi tuża ilma ddistillat darbtejn. Tella' l-inbid direttament f' burner ta' l-ispettrofotomiter, u issokta bl-erba' soluzzjonijiet standard waħda wara l-oħra. Aqra l-assorbenzi. Irrepeti kull kejl.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi graff li tagħti l-varjazzjoni fl-assorbiment bħala funzjoni tal-konċentrazzjoni taż-żingu fis-soluzzjonijiet standard. Irreġistra l-valur medju ta' l-assorbiment miksub bil-kampjun ta' l-inbid dilwit fuq dan il-graff u kkalkula l-konċentrazzjoni taż-żingu sa post deċimali wieħed.

35.   ĊOMB

1.   PRINĊIPJU

Iċ-ċomb huwa kkalkulat direttament fl-inbid permezz ta' spettrometrija mingħajr fjamma ta' assorbiment atomiku.

2.   TAGĦMIR

L-affarijiet kollha tal-ħġieġ għandhom jinħaslu qabel l-użu f' aċtu nitriku kkonċentrat msaħħan sa 70 sa 80 C u mlaħalħa f'ilma ddistillat darbtejn.

2.1.	Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku mgħammar b'forn tal-grafita, korrezzjoni ta' l-assorbiment mhux speċifika u multipotentiometer.

2.2.	Hollow cathode lamp taċ-ċomb.

2.3.	Mikropipetti ta' 5 μl bi truf speċjali għall-kejl ta' l-assorbiment atomiku.

3.   REAĠENTI

Ir-reaġenti kollha għandhom ikunu ta' grad analitiku ta' reaġent rikonoxxut u, b'mod partikolari, ħielsa miċ-ċomb. L-ilma wżat għandu jkun distillat darbtejn billi tuża tagħmir tal-ħġieġ borosilicate, jew ilma b'purità simili.

3.1.	Aċtu fosforiku 85 % (ρ20 = 1,71 g/ml).

3.2.	Soluzzjoni ta' aċtu fosforiku miksuba billi tħoll 8 ml ta' aċtu fosforiku bl-ilma sa 100 ml.

3.3.	Aċtu nitriku (ρ20 = 1,38 g/ml).

3.4.

Soluzzjoni taċ-ċomb f'1 g kull litru. Uża soluzzjoni ta' grad kummerċjali standard. Din is-soluzzjoni tista' tinkiseb billi tħoll 1,600 g ta' ċomb (II) nitrat, Pb(NO3)2 f' aċtu nitriku mħallat sa 1 % (v/v) u miżjud sa litru. Żomm is-soluzzjoni fi flixkun tal-ħġieġ borosilicate b'tapp tal-ħġieġ mitħun.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija tal-kampjun

Ħallat l-inbid sa 1:2 jew 1:3 bis-soluzzjoni ta' aċtu fosforiku, skond il-konċentrazzjoni taċ-ċomb presupposta.

4.2.   Tħejjija tal-marġni ta' kalibrazzjoni tas-soluzzjonijiet

Waqt li tuża s-soluzzjoni ta' referenza taċ-ċomb, ħejji soluzzjonijiet suċċessivi b'titres ta' 2,5, 5, 10 u 15 μg ta' ċomb kull litru rispettivament, billi tħoll bl-ilma ddistillat darbtejn.

4.3.   Kalkolu

4.3.1   Programmar tal-forn (bħala gwida biss):

Nixxef f' 100 C għal 30 sekonda

Mineralizazzjoni f' 900 C għal 20 sekonda

Atomizazzjoni f' 2 250 C għal 2 sa 3 sekondi

Ċirkolazzjoni ta'nitroġenu (flushing gas): 6 litri/minuta.

Nota:

Fl-aħħar tal-proċedura, żid it-temperatura għal 2 700 C sabiex tnaddaf il-forn.

4.3.2.   Qisien

Agħżel il-frekwenza 217 nm. Stabbilixxi ż-żero fuq il-miżien ta' l-assorbiment b'ilma ddistillat darbtejn. B'li tuża mikropipetta, introduċi fil-forn programmat tlett porzjonijiet ta' 5-μl għal kull soluzzjoni fil-marġni ta' kalibrazzjoni u tas-soluzzjoni tal-kampjun li għandha tiġi analizzata. Irreġistra l-assorbenzi mkejla. Ikkalkula l-valur medju ta' assorbiment mir-riżultati għat-tlett porzjonijiet.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.   Metodu tal-kalkolu

Pinġi l-kurvatura tal-varjazzjoni ta' l-assorbiment bħala funzjoni tal-konċentrazzjonijiet taċ-ċomb fil-marġni tal-kalibrazzjoni. Il-varjazzjoni hija linejari. Ħu l-valur medju ta' l-assorbiment tas-soluzzjoni tal-kampjun fuq il-kurvatura ta' kalibrazzjoni, ħu minnha l-konċentrazzjoni taċ-ċomb C. Il-konċentrazzjoni taċ-ċomb espressa f'mikrogrammi għal kull litru ta' inbid hija ugwali għal:

C × F

fejn

F = il-fattur ta' dilwizzjoni. 2 C

36.   FLORIDI

1.   PRINĊIPJU

Il-kontenut tal-florid fl-inbid, miżjud ma' soluzzjoni buffer, huwa kkalkulat billi tuża eletrodu solidu ta' membrana selettiva. Il-potenzjal mkejjel huwa proporzjonat għall-logaritmu ta' l-attività tal-joni tal-florid fil-mezz li jkun qiegħed jiġi analizzat, b'mod konformi ma' l-ekwazzjoni li ġejja:

(1)

Fejn

E

=

potenzjal ta' l-elettrodu selettiv tal-joni mkejjel kontra l-elettrodu ta' referenza fil-mezz li jkun qiegħed jiġi analizzat;

o

=

potenzjal standard tas-senser;

S

=

slope ta' l-elettrodu selettiv tal-joni (fattur Nernst). 2. F' 25 C is-slope teoretika hija ugwali għal 59,2 mV;

a F

=

attività tal-joni tal-florid fis-soluzzjoni li tkun qiegħda tiġi analizzata.

2.   TAGĦMIR

2.1.	Elettrodu tal-kristall tal-membrana selettiv għar-rigward tal-joni tal-florid.

2.2.	Elettrodu ta' referenza (kalomel jew Ag/AgCl).

2.3.	Millivoltmiter (miter pH bi skala estiża f'millivolti), bi preċiżjoni sa 0,1 mV.

2.4.	Strument manjetiu li jħawwad bi pjanċa ta' insulazzjoni sabiex tipproteġi s-soluzzjoni ta' l-analiżi mis-sħana tal-mutur. Reċipjent tat-taħwid mgħotti bil-plastik (polythene jew materjal ekwivalenti).

2.5.	Buqara tal-plastik b'kapaċita ta' 30 jew 50 ml, u fliexken tal-plastik (polythene jew materjal ekwivalenti).

2.6.	Pipetti ta' preċisjoni (pipetti gradwati f'mikrolitri jew pipetti oħrajn ekwivalenti).

3.   REAĠENTI

3.1.

Soluzzjoni tal-florid ta' l-istokk ta' 1 g/l. Uża soluzzjoni ta' kwalità standard kummerċjali ta' 1 g/l. Din is-soluzzjoni hija preparata billi tħoll 2,210 g ta' sodju florid (mnixxef għal tlieta sa erba' siegħat f' 105 C) f' ilma ddistillat. Żid sa litru b'ilma ddistillat. Din is-soluzzjoni għandha tinżamm fi flixkun tal-plastik.

3.2.	Soluzzjonijiet standard tal-florid ta' konċentrazzjoni approprjata għandhom jiġu mħejjija bil-dilwizzjoni tas-soluzzjoni ta' l-istokk b'ilma ddistillat u għandhom jinżammu fil-fliexken tal-plastik. Soluzzjonijiet li l-kontenut ta' florid tagħhom huwa f' mg/l m'għandhomx jiġu mħejjija minn qabel.

3.3.

Soluzzjoni buffer, pH 5,5 10 g ta' trans-1,2-dicmiaocyclohexane tetra-aċtu aċetiku (CDTA) għandhom jiġu miżjuda ma' l-ilma (madwar 50 ml); żid soluzzjoni li jkun fiha 58 g ta' sodju klorid u 29,4 g ta' trisodju ċitrat f' 700 ml ilma ddistillat. Is-CDTA jinħall billi żżid madwar 6 ml ta' soluzzjoni ta' 32 % (m/v) sodju idrossid. Fl-aħħar, żid 57 ml aċtu aċetiku (ρ20 = 1,05 g/ml) u ġib l-pH sa 5,5 b'soluzzjoni ta' 32 % sodju idrossid (madwar 45 ml). Ħallih jibred u żid sa litru b'ilma ddistillat.

4.   PROĊEDURA

Kumment preliminari:

Wieħed għandu joqgħod attent sabiex jiġi żgurat illi s-soluzzjonijiet kollha jibqgħu f'temperatura ta' 25 °C (± 1 °C) matul il-kejl. (Devjazzjoni ta' aktar minn 1 C toħloq modifika ta' madwar 0,2 mV.)

4.1.   Metodu dirett

Poġġi volum definit ta' inbid f' buqar tal-plastik b'volum ugwali tas-soluzzjoni buffer.

Din is-soluzzjoni għandha tiġi mħawda b'mod ugwali u moderat. Meta l-indikatur ikun stabbli (l-istabbilita tintlaħaq meta l-potenzjal ivarja b'mhux aktar minn 0,2 sa 0,3 mV/tlett minuti), aqra l-valur tal-potenzjal f' mV.

4.2.   Il-metodu taż-żjidiet magħrufa

Waqt li tħawwad mingħajr waqfien, żid volum magħruf ta' soluzzjoni ta' florid standard mal-mezz ta' l-analiżi billi tuża pipetta ta' preċisjoni. Meta l-indikatur ikun stabbli, aqra l-volum tal-potenzjal f' mV.

Il-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni standard li għandha tiġi miżjuda hija magħżula kif ġej:

Il-konċentrazzjoni approssimattiva tal-mezz ta' l-analiżi tinqara fuq linja ta' kalibrazzjoni mpinġija fuq skala semi logaritmika bis-soluzzjonijiet ta' florid standard b'titres ta' 0,1, 0,2, 0,5, 1,0, 2,0 mg/l.

Nota:

Jekk il-konċentrazzjoni approssimattiva tal-mezz ta' l-analiżi tinsab “il barra mill-marġni ta' konċentrazzjoni tas-soluzzjonijiet standard, ħallat il-kampjun bl-ilma.”

Eżempju:

Jekk il-kontenut ta' florid approssimattiv tal-mezz ta' l-analiżi (20 ml volum) huwa 0,25 mg/l F—, il-konċentrazzjoni għandha tiżdied b' 0,25 mg/l. Sabiex tagħmel dan, uża l-pipetta ta' kunsinna xierqa sabiex iżżid, per eżempju, 0,20 ml (= 1 %) ta' soluzzjoni standard li jkun fiha 25 mg/l F—or 0,050 ml ta' soluzzjoni standard b' 100 mg/l F —.

5.   KALKOLI

Il-kontenut ta' florid tal-mezz ta' l-analiżi espressa f' mg/l huwa miksub billi tapplika l-formola li ġejja:

CF

=

konċentrazzjoni floride tal-mezz ta' l-analiżi (mg/l);

Ca

=

konċentrazzjoni tal-floride miżjud (mg/l) mal-mezz ta' l-analiżi (Va);

Vo

=

volum inizzjali tal-mezz ta' l-analiżi qabel ma' jitgħabba ż-żejjed (ml);

Va

=

volum tas-soluzzjoni mgħobbija ż-żejjed (ml);

DE

=

differenza bejn potenzjali E1 u E2 miksuba f' 4.1 u 4.2 (mV);

S

=

slope ta' l-electrode fis-soluzzjoni ta' l-analiżi.

Jekk Va hija qrib ħafna ta' Vo (Ara 4.2), il-formula simplifikata li ġejja għandha tiġi applikata:

Il-valur miksub għandu jiġi multiplikat bil-fattur ta' dilwizzjoni li joħroġ miż-żjieda tas-soluzzjoni buffer.

37.   KARBONJU DIOSSIDU DIOXIDE

▼M13

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

▼B

1.1.   Metodu ta' referenza

1.1.1.   Inbid bla gass (CO2 fuq pressa ta' E 0,5 × 105Pa) ( 16 )

Il-volum ta' inbid meħud mill-kampjun huwa mkessaħ għal madwar 0 °C u mħallat bi kwantit suffiċjenti ta' sodju idrossid sabiex jagħti pH ta' 10 sa 11. It-titrazzjoni titwettaq b'soluzzjoni aċidika fil-presenza ta' carbonic anhydrase. Il-kontenut ta' karbonju diossidu huwa kkalkolat mill-volum ta' aċtu meħtieġ sabiex ibiddel il-pH minn 8,6 (forma bicarbonate) għal 4,0 (aċtu karboniku). Titrazzjoni vojta isseħħ fl-istess kondizzjonijiet fuq inbid dikarbonat sabiex jitqies il-volum tas-soluzzjoni ta' sodju meħuda mill-aċidi ta' l-inbid.

1.1.2.   Inbid bil-gass u inbid nofsu bil-gass

Il-kampjun ta' l-inbid li għandu jiġi analizzat għandu jiġi mberred sakemm ikun kważi friżat. Wara li titneħħa kwantità li għandha tintuża bħala vojt wara d-dikarbonizazzjoni, il-bqija tal-flixkun għandu jsir alkaline sabiex jirranġa l-karbonju diossid kollu fil-forma ta' Na2CO3. It-titrazzjoni titwettaq b'soluzzjoni tal-aċtu fil-presenza ta' carbonic anhydrase. Il-kontenut ta' karbonju diossid huwa kkalkolat mill-volum ta' soluzzjoni ta' aċtu meħtieġ biex ibiddel il-pH minn 8,6 (forma bicarbonate) għal 4,0 (aċtu karboniku). Titrazzjoni vojta titwettaq fl-istess kondizzjonijiet fuq inbid dikarbonat sabiex jitqies il-volum ta' sodju idrossid meħuda mill-aċidi ta' l-inbid.

▼M13 —————

▼B

2.   METODU TA' REFERENZA

2.1.

Inbid bla gass (CO2 fuq pressa d 0,5 × 105 Pa) 2.1.1.   Tagħmir 2.1.1.1. Strument manjetiku li jħawwad. 2.1.1.2. miter tal-pH. 2.1.2.   Reaġenti 2.1.2.1. Soluzzjoni ta' sodju idrossid, NaOH, 0,1 M. 2.1.2.2. Soluzzjoni ta' aċtu sulfuriku, H2SO4, 0,05 M. 2.1.2.3. Soluzzjoni ta' carbonic anhydrase, 1 g/l. 2.1.3.   Proċedura Berred il-kampjun ta' l-inbid għal madwar 0 °C flimkien mal- pipetta ta' 10 ml użata għall-kampjun. Poġġi 25 ml ta' soluzzjoni ta' sodju idrossid (2.1.2.1) f' buqar ta' 100 ml; żid żewġ taqtiriet ta' soluzzjoni akwuża ta' carbonic anhydrase (2.1.2.3). Introduċi 10 ml ta' inbid billi tuża l-pipetta mberrda għal 0 °C. Poġġi l-buqar fuq l-istrument manjetiku li jħawwad, qiegħed l-elettrodu tal-pH u ħawwad b'mod moderat. Meta l-likwidu jkun laħaq it-temperatura tal-kamra, ittitra bil-mod bis-soluzzjoni ta' aċtu sulfuriku (2.1.2.2) sakemm il-pH tilħaq 8,6. Innota l-qari tal-buretta. Kompli t-titrazzjoni bl-aċtu sulfuriku (2.1.2.2) sakemm il-pH tilħaq 4,0. Ħalli nml ikun il-volum użat bejn pH 8,6 u 4,0. Neħħi CO2 minn madwar 50 ml tal-kampjun ta' l-inbid billi tħawwad f'vakum għal tlett minuti, waqt li l-flixkun jiġi msaħħan f'banju ta' l-ilma għal madwar 25 °C. Wettaq il-proċedura msemmija hawn fuq 10 ml ta' inbid dikarboniżżat. Ħalli n2 ml ikun il-volum użat. 2.1.4.   Espressjoni tar-riżultati 1 ml tas-soluzzjoni 0,1 M sodju idrossid titrata tikkorrispondi għal 4,4 mg ta' CO2. Il-kwantità ta' CO2 fi grammi kull litru ta' inbid hija mogħtija bil-formola: 0,44 (n - n'). Għandha tiġi kwotata sa żewġ postijiet deċimali Nota: Meta l-inbejjed ikun fihom ftit CO2 (CO2 1 g/l), iż-żjieda ta' carbonic anhydrase sabiex tikkatalizza l-idrattazzjoni ta' CO2 m'hijiex meħtieġa.

2.2.

Inbid bil-gass u inbid nofsu bil-gass 2.2.1.   Tagħmir 2.2.1.1. Strument manjetiku li jħawwad. 2.2.1.2. pH meter. 2.2.2.   Reaġenti 2.2.2.1. Sodju idrossid, NaOH, 50 % (m/m). 2.2.2.2. Soluzzjoni ta' aċtu sulfuriku, H2SO4, 0,05 M. 2.2.2.3. Soluzzjoni ta' carbonic anhydrase, 1 g/l. 2.2.3.   Proċedura Immarka l-livell ta' inbid fil-flixkun u ħallih jibred sakemm jibda jiffriża. Ħalli l-flixkun jisħon ftit, waqt li tħawwad, sakemm il-kristalli tas-silġ jisparixxu. Neħħi t-tapp malajr u poġġi 45 sa 50 ml inbid f'ċilindru tal-kejl għal titrazzjoni vojta. Il-volum eżatt mneħħi, v ml, huwa kkalkulat billi taqra fuq iċ-ċilindru wara li jkun reġa lura għat-temperatura tal-kamra. Immedjatament wara li l-kampjun vojt jkun tneħħa, żid 20 ml tas-soluzzjoni ta' sodju idrossid (2.2.2.1) fil-flixkun b'kapaċità ta' 750 ml. Stenna sakemm l-inbid ikun laħaq it-temperatura tal-kamra. Poġġi 30 ml ta' ilma ddistillat mgħolli u żewġ taqtiriet ta' soluzzjoni ta' carbonic anhydrase (2.2.2.3) f' buqar ta' 100 ml. Żid 10 ml ta' inbid li jkun sar alkalin. Poġġi l-buqar fuq l-istrument manjetiku li jħawwad, qiegħed l-elettrodu u l-virga manjetika u ħawwad b'mod moderat. Ittitra bil-mod bis-soluzzjoni ta' aċtu sulfuriku (2.2.2.2) sakemm il-pH tilħaq 8,6. Innota l-qari tal-buretta. Kompli t-titrazzjoni bil-mod bl-aċtu sulfuriku (2.2.2.2) sakemm il-pH tilħaq 4,0. Ħalli n ml ikun il-volum użat bejn pH 8,6 u 4,0. Neħħi CO2 mill-v ml ta' l-inbid mpoġġi fuq naħa waħda għat-titrazzjoni fil-vojt billi tħawwad taħt vacuum għal tlett minuti, il-flixkun li jkun qiegħed jisħon f' banju ta' l-ilma f'madwar 25 °C. Neħħi 10 ml ta' inbid dikarbonizzat u żid sa 30 ml bl-ilma ddistillat mgħolli, żid bejn tnejn u tlett taqtiriet soluzzjoni ta' sodju idrossid (2.2.2.1) sabiex iġġib il-pH sa 10 sa 11. Imbagħad segwi l-proċedura ta' hawn fuq. Ħalli n2 ml ikun il-volum ta' 0,5 M aċtu sulfuriku miżjud. 2.2.4.   Espressjoni tar-riżultati 1 ml ta' 0,05 M aċtu sulfuriku jikkorrispondi għal 4,4 mg ta' CO2. Żvojta l-flixkun ta' l-inbid li jkun sar alkalin u kkalkula sa 1 ml il-volum inizzjali billi żżid sal-marka bl-ilma, per eżempju V ml. Il-kwantità ta' CO2 fi grammi kull litru ta' inbid hija mogħtija bil-formola li ġejja: Ir-riżultat huwa kwotat sa żewġ postijiet deċimali.

2.3.

►M13  Kalkolu tal-pressjoni żejda teoretika ◄ Il-pressa żejda f' 20 °C (Paph20) espressa f' pascals hija mogħtija bil-formola: fejn Q = CO2 kontenut fi g/l ta' inbid, A = l-qawwa alkoħolika ta' l-inbid f' 20 °C, S = il-kontenut taz-zokkor ta' l-inbid fi g/l, Patm = l-pressa atmosferika, espressa f' pascals.

▼M13 —————

▼M13

37 bis.   IL-KEJL TAL-PRESSJONI ŻEJDA FL-INBEJJED SPUMANTI U DAWK LI JFEXFXU

1.   IL-PRINĊIPJU

Wara li tkun ġiet stabilizzata t-temperatura u l-flixkun ikun tqanqal, il-pressjoni żejda titkejjel bl-afrometru (gejġ tal-pressjoni). Hija titkejjel f'Pascals (Pa) (metodu tat-tip I). Il-metodu japplika wkoll għall-inbejjed spumanti bil-gass miżjud u għal dawk ifexfxu bil-gass miżjud.

2.   L-APPARAT

L-apparat li jkejjel il-pressjoni żejda fil-fliexken tal-inbejjed spumanti u dawk li jfexfxu jissejjaħ afrometru. Dan għandu għamliet differenti skont it-tappijiet li jintużaw biex jingħalaq il-flixkun (kapsula tal-metall, kapsula forma ta' ras, tapp tas-sufra jew tal-plastik).

2.1.   Fliexken li għandhom il-kapsuli

Huwa magħmul minn tliet partijiet (dijagramma 1):

2.2.   Fliexken li għandhom it-tapp

Huwa magħmul minn żewġ partijiet (dijagramma 2):

Rimarki rigward il-manometri li jinsabu ma' dawn iż-żewġ tipi ta' apparat:

3.   IL-PROĊEDURA

Il-kejl irid isir fuq fliexken li tagħhom it-temperatura tkun ilha stabbli tal-anqas għal 24 siegħa. Wara li jiġu minfuda, ir-ras, it-tapp tas-sufra jew tal-plastik, il-flixkun irid jitqanqal bil-qawwi sakemm tintlaħaq pressjoni kostanti, sabiex ikun jista' jseħħ il-qari.

3.1.   Fliexken bil-kapsuli

L-ixprun tal-morsa jiżżerżaq taħt iċ-ċirku tal-flixkun. L-iskorfina tiġi ssikkata sakemm l-apparat kollu jkun sod fuq il-flixkun. Il-parti ta' fuq imbagħad tiġi ssikkata fl-iskorfina. Sabiex ma jkunx hemm telf ta' gass it-titqib tal-kapsula għandu jsir malajr kemm jista' jkun, sabiex il-ġonta tiġi tmiss mal-kapsula. Il-flixkun imbagħad irid jitħallat tajjeb ħafna sakemm tintlaħaq pressjoni kostanti u sabiex iseħħ il-qari.

3.2.   Fliexken bit-tapp

Il-ponta titpoġġa f'tarf il-labra. Dan kollu jitqiegħed fuq it-tapp. Jiġu ssikkati l-erba' viti fuq it-tapp. Tiġi ssikkata l-parti ta' fuq (il-labra tidħol fit-tapp). Il-ponta trid taqa' fil-flixkun sabiex il-pressjoni tkun tista' tgħaddi għall-manometru. Il-qari jsir wara li l-flixkun jitħallat tajjeb sakemm tintlaħaq pressjoni kostanti. Il-ponta tinġabar wara l-qari.

4.   L-ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

Il-pressjoni żejda li tilħaq l-20 °C (Paph20) tiġi espressa f'pascals (Pa) jew f'kilopascals (kPa). Dan irid ikun skont il-preċiżjoni tal-manometru (per eżempju: 6,3 × 105 Pa jew 630 kPa u mhux 6,33 × 105 Pa jew 633 kPa għal manometru ta' klassi 1 b'qari ta' skala sħiħa ta' 1 000 kPa).

Meta l-kejl tat-temperatura jkun differenti minn 20 °C ikun hemm bżonn korrezzjoni billi l-pressjoni mkejla tiġi multiplikata bil-koeffiċjent xieraq (ara t-tabella 1).

5.   IL-KONTROLL TAR-RIŻULTATI

Il-metodu tad-determinazzjoni diretta tal-parametri fiżiċi (metodu tal-kriterji tat-tip I)

L-iċċekkjar tal-afrometri

L-afrometri jridu jiġu ċċekkjati regolarment (għallinqas darba fis-sena).

L-iċċekkjar isir permezz ta' kejl ta' kalibrazzjoni. Dan iqabbel il-manometru għall-ittestjar ma' manometru ta' referenza, ta' kwalità għolja mkejjel bl-istandards nazzjonali, immuntat b'mod parallel. L-iċċekkjar isir biex jitqabblu l-valuri indikati miż-żewġ apparati għal-livelli ta' pressjonijiet li jitilgħu u jinżlu. Jekk ikun diferenza bejn dawn it-tnejn, il-manometru jista' jiġi rregolat permezz ta' vit.

Il-laboratorji u l-entitajiet awtorizzati huma kollha mgħammra b'dan il-kejl ta' kalibrazzjoni; jinsabu wkoll disponibbli mingħand il-manifatturi tal-manometri.

▼M7

38.   DERIVATTIVI TAS-CYANIDE

(Attenzjoni: ħares sew il-miżuri ta’ sigurtà dwar l-użu tal-kimiċi chloramine T, pyridine, potassium cyanide, hydrochloric acid, u phosphoric acid. Iddisponi sew minn prodotti użati, f’konformità mar-regoli ambjentali fis-seħħ. Attenzjoni partikolari mal-hydrocyanic acid li joħroġ waqt id-distillazzjoni ta’ l-inbid aċidifikat.)

1.   IL-PRINĊIPJU

Il-hydrocyanic acid kollu fl-inbid joħroġbil-hydrolysis ta’ l-aċidu u jiġi sseparat permezz tad-distillazzjoni. Wara li jirreaġixxi ma’ chloramine-T u pyridine, il-glutaconic dialdehyde li jifforma jiġi stabbilit b’analiżi kolorimetrika, meta ma’ 1,3-dimethyl-barbituric acid danjagħti kolorazzjoni blu.

2.   APPARAT

2.1.   L-apparat ta’ distillazzjoni

Uża l-apparat ta’ distillazzjoni deskritt biex tistabbilixxi l-kontenut ta’ alkoħol fl-inbid

2.2.	Flixkun bil-qiegħ tond ta’ 500-ml b’ground joints standardizzati

2.3.	Banju ta’ l-ilma kkontrollat termostatikament għal 20 °C

2.4.	Spectrophotometer li jista’ jkejjel l-assorbiment fuq wavelength ta’ 590 nm

2.5.	Ċelloli tal-ħġieġ jew ċelloli li jintużaw darba biss b’optical paths ta’ 20 mm

3.   REAĠENTI

3.1.	Phosphoric acid (H3PO4) b’25 % (m/v)

3.2.	Soluzzjoni ta’ Chloramine-T (C7H7ClNNa O2S, 3H2O) 3 % (m/v)

3.3.	Soluzzjoni ta’ 1,3-dimethyl-barbituric acid: ħoll 3,658 g 1,3-dimethyl-barbituric acid(C6H8N2O3) fi 15 ml ta’ pyridine u 3 ml ta’ hydrochloric acid (ρ20=1,19 g/ml) u żid 50 ml ilma distillat

3.4.	Potassium cyanide (KCN)

3.5.	Soluzzjoni ta’ Potassium iodide (KI) b’10 % (m/v)

3.6.	Soluzzjoni ta’ Silver nitrate (AgNO3), 0,1 M

4.   IL-PROĊEDURA

4.1.   Distillazzjoni

Poġġi 25 ml inbid, 50 ml ilma distillat, 1 ml phosphoric acid (3.1) u ftit żibeġ tal-ħġieġ fir-reċipjent tal-500-ml (2.2). Poġġi mill-ewwel ir-reċipjent fuq l-apparat tad-distillazzjoni. Uża tapering tube biex id-distillat imur ġo reċipjent ikkalibrat ta’ 50-ml li jkun fih 10 ml ilma. Għarraq ir-reċipjent ikkalbirat f’ilma ffriżat. Iġbor bejn 30 u 35 ml ta’ distillat (jew madwar 45 ml ta’likwidu b’kollox) mir-reċipjent ikkalibrat.

Naddaf it-tapering tube tal-condenser permezz ta’ ftit millilitri ta’ ilma distillat, ġib id-distillat għal 20 °C, u imla bl-ilma distillat sal-linja tal-kalibrazzjoni.

4.2.   Kejl

Għamel 25 ml ta’ distillat f’conical flask ta’ 50-ml bi stopper tal-ħġieġ, żid 1 ml soluzzjoni ta’chloramine-T solution (3.2), u ssiġilla bl-istopper. Wara eżattament 60 sekonda żid 3 mlsoluzzjoni ta’ 1,3-dimethyl-barbituric acid (3.3), issiġilla bl-istopper u ħalli għal 10 minuti.Imbagħad f’cells b’optical paths ta’ 20 mm kejjel l-assorbiment kontra kontroll (25 ml ilmadistillat minflok 25 ml ta’ distillat) fuq wavelength ta’ 590 nm.

5.   KIF TISTABBILIXXI IL-CALIBRATION CURVE

5.1.   Argentometric titration fil-potassium cyanide

Ħoll daqs 0,2 g KCN (3.4), imkejla b’attenzjoni, f’100 ml ilma distillat f’reċipjent ikkalibrat ta’ 300-ml. Żid 0,2 ml soluzzjoni ta’ potassium iodide (3.5) u t-titrate mas-soluzzjoni ta’ 0,1 M silver nitrate (3.6) sakemm jinkiseb kulur safrani stabbli.

Ħu 1 ml ta’ soluzzjoni ta’ 0,1 M silver nitrate bħala li jikkorrispondi għal 13,2 mg KCN, u kkalkula l-konċentrazzjoni tal-kampjun KCN.

5.2.   L-istandard curve

5.2.1.    Preparazzjoni għal soluzzjonijiet bażiċi

Wara li tkun stabbilejt il-konċentrazzjoni tal-KCN skond il-proċedura mfassla f’5.1, ippreparasoluzzjoni bażika li jkun fiha 30 ml/l hydrocyanic acid (30 ml HCN 72,3 ml KCN). Ħallatbl-ilma għal 1/10.

Introduċi 1,0 ml, 2,0 ml, 3,0 ml, 4,0 ml u 5,0 ml tas-soluzzjoni tal-kampjun imħallat fir-reċipjenti kkalibrati ta’ 100-ml il-wieħed, u imla bl-ilma distillat sal-linja ta’ kalibrazzjoni. Is-soluzzjonijiet ippreparati ikollhom 30 μg, 60 μg, 90 μg, 120 μg u 150 μg ta’ hydrocyanic acid għal kull litru rispettivament.

5.2.2.    It-Titration

Ħu 25-ml kampjuni mis-soluzzjoniet miksuba u kompli kif indikat fuq f’4.1 u 4.2.

Il-valuri ta’ l-assorbiment miksuba, fejn is-soluzzjonijiet bażiċi bħala funzjoni tal-kontentut korrispondenti tal-hydrocyanic acid huma kkonċernati, għandhom jipproduċu linja dritta li tgħaddi mis-sors ta’ oriġini.

6.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

Il-hydrocyanic acid jiġi espress f’mikrogrammi għal kull litru (μg/l), mingħajr l-ebda ċifri deċimali.

6.1.   Metodu tal-kalkulazzjoni

Aqra l-kontenut ta’ hydrocyanic acid minn fuq il-calibration curve. Jekk il-kampjun ikuntħallat, immultipplika r-riżultat mal-fattur tat-taħlita.

Inbid abjad

=

r = 3,1 μg/l jew madwar 6 %• xi R = 12 μg/l jew madwar 25 %• xi

Inbid aħmar

=

r = 6,4 μg/l jew madwar 8 %• xi R = 23 μg/l jew madwar 29 %• xi

xi

=

konċentrazzjoni medja ta’ HCN fl-inbid

xi

=

48,4 μg/l għal inbid abjad

xi

=

80,5 μg/l għal inbid aħmar.

▼B

39.   ALLYL ISOTHIOCYANATE

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Kull allyl isothiocyanate preżenti fl-inbid għandu jinġabar bid-distillazzjoni u jiġi identifikat bil-kromatografija tal-gass.

2.   REAĠENTI

2.1.	Etanol, assolut.

2.2.	Soluzzjoni standard: soluzzjoni ta' allyl isothiocyanate f'alkoħol assolut li jkun fiha 15 mg ta' allyl isothiocyanate kull litru.

2.3.	Taħlita friżata li tikkonsisti f'etanol u silġ niexef (temperatura 60 °C).

3.   TAGĦMIR

3.1.	Tagħmir ta' distillazzjoni kif muri fid-disinn fil-paġna li jmiss. Tnixxija ta' nitroġenu jiġi mgħoddi kontinwament mit-tagħmir.

3.2.	Forn tat-tisħin, ikkontrollat termostatikament.

3.3.	Miter taċ-ċirkolazzjoni.

3.4.	Kromatografu tal-gass mgħammar b' flame spectrophotometer detector mgħammar b'filtru selettiv għall-taħlit tal-kubrit (frekwenza = 394 nm) jew xi detector ieħor adattat.

3.5.	Kromatografu ta' l-azzar li ma jittebbax b'dijametru intern ta' 3 mm u tul ta' 3 m mimli b' Carbowax 20M f' 10 % fuq Kromosorb WHP, b'malja ta' bejn 80 sa 100.

3.6.	Mikrosiringa, 10μl.

4.   PROĊEDURA

Poġġi żewġ litri ta' inbid fil-flixkun tad-distillazzjoni, introduċi ftit millilitri ta' etanol (2.1) fiż-żewġ tubi ta' kollezzjoni sabiex il-partijiet porużi tal-vireg tat-tixrid tal-gass ikunu mgħaddsa għal kollox. Berref iż-żewġ tubi minn barra bit-taħlita friżata. Qabbad il-flixkun mat-tubi tal-ġbir u ibda laħlaħ t-tagħmir bin-nitroġenu bir-rata ta' tlett litri kull siegħa. Saħħan l-inbid sa 80 °C bil-forn tat-tisħin, iddistilla u iġbor 45 sa 50 ml tad-distillat.

Stabbilizza l-kromatografu. Huwa rakkomandat li jintużaw il-kondizzjonijiet li ġejjin:-

Bil-mikrosiringa, introduċi volum tas-soluzzjoni standard hekk li t-tarf jikkorrispondi ma' l-allyl isothiocyanate ikun jista' jiġi identifikat malajr fuq il-kromatogram tal-gass.

B'mod simili introduċi alikwot tad-distillat fil-kromatografu. Ivverifika li l-ħin ta' żamma tal-quċċata miksuba jikkorrispondi ma' dak tal-quċċata ta' l-allyl isothiocyanate.

Taħt il-kondizzjonijiet deskritti hawn fuq, taħlita li tkun preżenti fl-inbid b'mod naturali ma tipproduċix quccati li jfixxklu fuq il-kromatogram tal-kampjun tas-soluzzjoni.

Tagħmir għad-distillazzjoni taħt kurrent ta' nitroġenu

40.   PROPRJETAJIET KROMATIĊI

1.   INBID U GHENEB MAGHSUR QABEL MA JIHMAR

1.1.   Definizzjonijiet

Il-proprjetajiet kromatiċi ta' l-inbid huma definiti bħala l-luminożità u l-kromatiċità tieghu.

Il-luminożità hija rappreżentata bit-trasmittenza u tvarja b'mod invers ma' l-intensità tal-kulur ta' l-inbid.

Il-kromatiċità hija rappreżentata bil-frekwenza dominanti (li tikkaratterizza il-lewn) u il-purità tal-kulur.

Skond il-konswetudini, u għal raġunijiet ta' konvenjenza, il-proprjetajiet kromatiċi ta' l-inbid aħmar u rosé huma mogħtija bħala l-intensità tal-kulur u l-lewn, skond proċedura adottata bħala l-metodu tas-soltu.

1.2.   Prinċipju tal-metodi

1.2.1.   Metodu ta' referenza

Dan huwa metodu ta' spettrofotometriku li jagħmilha possibli li jiġu stabbiliti l-valuri tristimulus u tlett koordinati kromatiċi mehtiega għall-ispeċifikazzjoni tal-kulur kif imfassla mill-Kummissjoni Internazzjonali ta' l-Illuminazzjoni (CIE).

1.2.2.   Metodu tas-soltu (japplika għal inbid aħmar u rosé )

Dan huwa metodu spettrofotometriku li permezz tieghu il-proprjetajiet kromatiċi huma espressi skond il-konswetudini kif gej:

L-intensità tal-kulur hija mogħtija bis-somma ta' l-assorbenzi fi frekwenzi ta' 420, 520 u 620 nm għar-radjazzjoni li taqsam passagg ottiku ta' 1 ċm fil-kampjun.

Il-lewn huwa espress bl-iskala ta' l-assorbenzi f' 420 nm u 520 nm.

1.3.   Metodu ta' referenza

1.3.1.   Tagħmir

1.3.1.1.

Spettrofotomiter li jippermetti li jittieħed kejl ta' bejn 300 u 700 nm.

1.3.1.2.

Ċelloli tal-ħġieġ f'pari, b' passaġġi ottiċi, b, ugwali għal 0,1, 0,2, 0,5, 1,2 u 4 ċm.

1.3.2.   Proċedura

1.3.2.1.   Tħejjija tal-kampjun

Inbid mdardar ghandu jigi ċċarat permezz ta' ċentrifugazzjoni. Il-parti l-kbira tal-karbonju diossid f'inbejjed żgħar u bil-gass għandha titneħħa billi tħawwad f'vakum.

1.3.2.2.   Qisien

Il-passagg ottiku, b, fiċ-ċellola tal-ħġieġ għandha tkun magħżula sabiex l-assorbiment mkejjla tkun bejn 0,3 u 0,7.

Il-gwida li ġejja hija mogħtija għal-għażla xierqa tal-passagg ottiku: uża ċelloli ta' 2 (jew 4) ċm passagg ottiku għal inbid abjad, b'1 ċm għal inbid rosé u b' 0,1 ċm (jew 0,2 ċm) għal inbid aħmar.

Il-qisien spettrofotometrici għandhom jittieħdu billi jintuża ilma ddistillat, f'ċellola bl-istess passagg ottiku, b, bħala likwidu ta' referenza sabiex tistabbilixxi ż-żero tal-kejl ta' l-assorbiment fi frekwenzi ta' 445, 495, 550 u 625 nm.

L-erba' assorbenzi li jikkorrispondu għall-inbid għandhom mbagħad jigu mkejjla sa tlett postijiet deċimali għall-passagg ottiku, b. Ħalli dawn ikunu A445, A495, A550, A625.

1.3.3.   Kalkoli

Flimkien mat-Tabella I, uża dawn il-valuri ta' l-assorbenzi għall-passagg ottiku, b ċm sabiex tikseb it-transmittenzi korrispondenti (T %). Ħalli dawn iku T445, T495, T550 u T625.

1.3.4.   Espressjoni tar-riżultati

1.3.4.1.

Il-luminożità relattiva hija mogħtija bil-valur ta' Yespress bħala perċentwal. (Għal dlam totali, Y = 0 %; għal likwidi bla kulur, Y = 100 %.)

1.3.4.2.

Il-kromatiċità hija espressa bil-frekwenza dominanti u l-purità. Il-kalkolu ta' dawn iż-żewġ kwantitajiet tagħmel użu tal-graff ta' kromatiċità mdawwar bil-lokus spettrali kif mogħti fil-Figura 1. Il-punt O li jidher f'din il-graff jirrapreżenta s-sors ta' dawl abjad użat u għandu l-koordianti ta' sors standard, C,xo = 0,3101 u yo = 0,3163, li jirrapreżentaw id-dawl tal-ġurnata ta' luminosità medja. —  Frekwenza dominanti — Pinġi l-punt C bil-koordinati x, y fuq il-graff ta' kromatiċità. — Jekk C jkun barra mit-triangolu AOB, pinġi l-linja d-dritta li tgħaqqad O ma C u estendiha sabiex taqta' l-lokus spettrali fil-punt S, li jikkorrispondi mal-frekwenza dominanti. — Jekk C jkun ġewwa t-triangolu AOB, pinġi l-linja d-dritta minn C sa O u estendiha sabiex tintersetta l-lokus spettrali f'punt li jikkorrispondi mal-frekwenza tal-kulur kumplimentari ma' dak ta' l-inbid. Din il-frekwenza hija murija bil-valur tagħha segwit bl-ittra C. —  Purità — Jekk il-punt C ikun barra mit-triangolu AOB, l-purità tingħata bħala perċentwal bl-iskala: —  — Jekk il-punt C huwa ġewwa t-triangolu AOB, l-purità tingħata bħala perċentwal bl-iskala: —   ( 17 ) — fejn P huwa l-punt fejn l-linja dritta OC taqta' l-linja ta' vjola (linja AB). — Il-purità tinghata wkoll direttamet bid-disinnji kromatiċi mill-valuri magħrufa ta' x u y (Figuri 2, 3, 4, 5 u 6).

1.3.4.3.

Riżultati Il-kulur ta' inbid huwa kompletament definit bil-luminożità tiegħu, il-kromatiċità tiegħu (espressa mill-frekwenza dominanti) u l-purità tiegħu. Dawn għandhom jiġu indikati fir-rapport ta' l-analiżi bil-valur tal-passagg ottiku li fih ittieħdu l-qisien.

▼M8 —————

▼B

TABELLA 1

Trasformazzjoni ta' assorbenzi fi transmittenzi (T %)

Metodu ta' l-użu

Sib l-ewwel figura deċimali ta' l-assorbiment fl-ewwel kolonna vertikali, u semmi r-ringeila tagħha R. Sib it-tieni figura deċimali ta' l-assorbiment fir-ringiela orizzontali ta' fuq u semmi l-kolonna tagħha C. Aqra l-figura fil-kaxxa fl-intersezzjoni tar-ringiela R u l-kolonna C. Sabiex tikkalkula t-trasmittenza, iddividi din il-figura b' 10 jekk l-assorbiment ikun inqas minn 1, b' 100 jekk taqa' bejn 1 u 2, u b' 1 000 jekk taqa' bejn 2 u 3.

Nota:

Il-figura fil-kantuniera ta' fuq tal-lemin ta' kull kaxxa tippermetti li t-tielet figura deċimali ta' l-assorbiment tigi meqjusa permezz ta' interpolazzjoni.

Eżempju:

It-trasmittenzi T % għandhom jigu espressi sa l-eqreb 0,1 %.

FIGURA 1

Disinn tal-kromatiċità li jinkludi l-kuluri kollha fl-ispettru

FIGURA 2

Disinn ta' kromatiċità għall-aħmar unadulterat (aħmar jgħajjat) inbid u inbid aħmar fil-kannella (aħmar kulur il-briks)

FIGURA 3

Disinn ta' kromatiċità għall-inbejjed homor mhux adulterati (aħmar jgħajjat) u inbejjed homor fil-kannella (aħmar kulur il-briks)

FIGURA 4

Disinn ta' kromatiċità għall-inbejjed homor mhux adulterati (aħmar jgħajjat) u inbejjed vjola

FIGURA 5

Disinn ta' kromatiċità għall-inbejjed homor mhux adulterati (aħmar jgħajjat) u inbejjed vjola

FIGURA 6

Disinn tal-kromatiċità għall-inbejjed ħomor fil-kannella (kulur il-briks) u inbejjed vjola

2.   GHENEB MAGHSUR QABEL MA JIHMAR RETTIFIKAT U IKKONCENTRAT

2.1.   Prinċipju tal-metodu

L-assorbenza ta' l-gheneb maghsur qabel ma jihmar rettifikat u konċentrat hija mkejjla f' 425 nm minn ħxuna ta' 1 ċm wara dilwizzjoni sabiex iġġib l-konċentrazzjoni taz-zokkor għal 25 % (m/m) (25o Brix).

2.2.   Tagħmir

2.2.1.

Spettrofotomiter li jippermetti li jittieħed kejl bejn 300 u 700 nm.

2.2.2.

Ċelloli tal-ħġieġ b'passaġġi ottiċi ta' 1 ċm.

2.2.3.

Filtru tal-membrana b'dijametru tal-pori ta' 0,45 μm.

2.3.   Proċedura

2.3.1   Tħejjija tal-kampjun

Uża s-soluzzjoni bil-konċentrazzjoni taz-zokkor ta' 25 % (m/m) (25o Brix) imhejjija kif deskritt fil-kapitolu “pH”, taqsima 4.1.2. Iffiltra minn filtru tal-membrana b' dijametru tal-pori ta' 0,45 μm.

2.3.2.   Kalkolu ta' l-assorbenza

Gib fuq żero l-kejl ta' l-assorbenza fi frekwenza ta' 425 nm billi tuża ċellola b'passagg ottiku ta' 1 ċm li jkun fiha ilma ddistillat.

Kejjel l-assorbenza A fl-istess frekwenza tas-soluzzjoni li jkun fiha 25 % zokkor (25o Brix) imħejjija bħal f'2.3.1 u mqieghda f'ċellola b'passagg ottiku ta' 1 ċm.

2.4.   Espressjoni tar-riżultati

L-assorbenza f'425 nm ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u kkonċentrat f' soluzzjoni b' 25 % zokkor (25o Brix) hija kkwotatat sa żewġ postijiet deċimali.

41.   INDIĊI FOLIN-CIOCALTEU

1.   DEFINIZZJONI

L-indiċi ta' Folin-Ciocalteu huwa r-riżultat miksub mill-applikazzjoni tal-metodu deskritt hawn taħt.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Il-komponenti fenoliċi kollha li jkunu jinsabu fl-inbid li huwa ossidiċizzat mir-reaġent Folin-Ciocalteu. Dan ir-reaġent jifforma minn taħlità ta' aċtu phosphotungstic (H3PW12O40) u aċtu phosphomolybdic (H3PMo12O40) li, wara l-ossidazzjoni tal-fenoli, huwa mnaqqas għal taħlità ta' ossidi blu ta' tungsten (W8O23) u molybdenum (Mo8O2 3).

Il-kolorazzjoni blu prodotta għandja assorbiment massimu fir-reġjun ta' 750 nm, u hija proporzjonata mall-kwantità totali ta' komponenti fenoliċi preżenti oriġinarjament.

3.   REAGENTI

Dawn għangom ikunu ta' kwalità ta' reaġenti analitiċi. L-ilma wżat għandu jkun distillat jew ilma ta' purità ekwivalenti.

3.1.   Reaġent Folin-Ciocalteu

Dan ir-reaġent jista' jinsab kummerċjalment f'forma lesta għall-użu. Jista' jiġi mhejji kif ser jingħad: ħoll 100 g ta' sodju tungstate (Na2WO4 . 2H2O) u 25 g ta' sodju molybdate (Na2MoO4 . 2H2O) f'700 ml ilma ddistillat. Żid 50 ml ta' 85 % aċtu fosforiku (ρ20 20 = 1,71 g/ml) u 100ml ta' aċtu idrokloriku ikkonċentrat (ρ20 = 1,19 g/ml). Għalli u ħalliħ jagħli għal 10 siegħat taħt kondizzjonijiet reflussi. Imbagħad żid 150 g ta' litju sulfat (Li2SO4 . H2O) u ftit qtar ta' bromu u erġa' għalli għal 15-il minuta. Ħallih jibred u żid sa litru b'ilma ddistillat.

3.2.	Anhydrous Sodju karbonat anidruż, Na2CO3, miżjud sa m/v soluzzjoni 20 %.

4.   TAGHMIR

Tagħmir normali tal-laboratorju, b' mod partikolari:

4.1.	fliexken volumetriċi ta' 100 ml.

4.2.	Spettrofotomiter li huwa kapaċi jaħdem f' 750 nm.

5.   PROĊEDURA

5.1.   Inbid aħmar

Introduċi dan li ġej fl flixkun volumetriku ta' 100 ml (4.1) strettament fl-ordni mogħtija:

Żid sa 100 ml b'ilma ddistillat.

Ħawwad sabiex tomoġenizza. Stenna 30 minuta sabiex ir-reazzjoni tistabilizza. Ikkalkula l-assorbiment f' 750 nm minn passaġġ tul ta' 1 ċm rigward vojt preparat b'ilma ddistillat minnflok l-inbid.

Jekk l-assorbenza ma tkunx madwar 0,3 ghandha ssir dilwizzjoni xierqa.

5.2.   Inbid abjad

Wettaq l-istess proċedura b'1 ml ta' inbid mhux imħallat.

5.3.   Għeneb magħsur qabl ma jiħmar rettifikat u konċentrat

5.3.1.   Tħejjija tal-kampjun

Uża s-soluzzjoni bil-konċentrazzjoni taz-zokkor ta' 25 % (m/m) (25o Brix) ippreparata kif deskritt fil-kapitolu “pH”, taqsima 4.1.2.

5.3.2.   Kejl

Ipproċedi kif deskritt fil-każ ta' inbid aħmar (5.1) uża kampjun ta' 5 ml ippreparat kif deskritt f' 5.3.1 waqt li tkejjel l-assorbiment rigward kontroll preparat b' 5 ml ta' 25 % (m/m) soluzzjoni taz-zokkor invers.

6.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

6.1.   Metodu tal-kalkolu

Ir-riżultat huwa espress fil-forma ta' indiċi miksub billi timmoltiplika b' 100 għall-inbid aħmar mħallat 1:5 (jew bil-fattur korrispondenti għal dilwizzjonijiet oħra) u b' 20 għal inbid abjad. Għal għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat, immoltiplika b' 16.

6.2.   Ripetibbiltà

Id-differenza bejn ir-riżultati ta' żewġ kalkoli mwettqa fl-istess ħin jew malajr wara xulxin mill-istess analista m'għandhiex tkun akbar minn 1.

Ripetibbiltà tajba tar-riżultati tinkiseb billi tuża tagħmir li jkun perfettament nadif (fliexken volumetriċi u ċelloli ta' l-ispettrofotomiter).

42.   METODI SPEĊJALI TA' L-ANALIŻI GĦALL-GĦENEB MAGĦSUR QABEL MA JIĦMAR RETTIFIKAT U KONĊENTRAT

(a)   CATIONS TOTALI

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Il-kampjun ta' l-eżami huwa trattat b' cation exchanger ta' aċidità qawwija. Il-cations huma mibdula b' H+. Il-cations totali huma espressi bid-differenza bejn l-aċidità totali ta' l-effluent u dik tal-kampjun ta' l-eżami.

2.   TAGĦMIR

2.1.	Kolonna tal-ħġieġ ta' 10 sa 11 mm dijametru intern u madwar 300 mm tul mgħammar b'vit tad-drejn.

2.2.	miter tal-pH meter bi skala gradata f'unitajiet ta' mill-inqas 0,1 pH.

2.3.	Elettrodi: — elettrodu tal-hġieġ, miżmum f'ilma ddistillat, — elettrodu ta' referenza tal-kalomel/potassju klorid, miżmum f' soluzzjoni saturata ta' potassju klorid, — jew elettrodu magħqud, miżmum f'ilma ddistillat.

3.   REAĠENTI

3.1.	Raża aċituża ta' l-iskambju tal-cation f'forma H+ minfuħa minn qabel permezz ta' tghaddis fl-ilma matul il-lejl.

3.2.	soluzzjoni 0,1 M ta' sodju idrossid.

3.3.	Indikatur tal-karta tal-pH.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Tħejjija tal-kampjun

Uża s-soluzzjoni miksuba meta tħallat l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat għal 40 % (m/v) kif deskritt fil-kapitolu “Aċidità totali”, taqsima 5.1.2.

4.2.   Tħejjija tal-kolonna ta' l-iskambju tal-joni

Introduċi fil-kolonna madwar 10 ml ion exchanger minfuħ minn qabel fil-forma H+. Laħlaħ il-kolonna b'ilma distillat sakemm l-aċidità kollha titneħħa, uża l-indikatur tal-karta sabiex issegwi dan.

4.3.   Skambju ta' ijoni

Għaddi 100 ml tas-soluzzjoni ta' l-Gheneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat konċentrat ippreparata bħal f' 4.1 mill-kolonna b'rata ta' qatra kull sekonda. Iġbor l-afluwent f'buqar. Laħlaħ il-kolonna b' 50 ml ta' ilma distillat. Titrate l-aċidità fl-affluwent (inkluż l-ilma tat-tlaħliħ) b' 0,1 M sodju idrossid soluzzjoni sakemm il-pH hija 7 f' 20 °C. Is-soluzzjoni alkaline għandha tiġi miżjuda bil-mod u s-soluzzjoni mħawwda kontinwament. Ħallin ml ikun il-volum ta' 0,1 M sodju idrossid soluzzjoni użata.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

Il-cations totali huma espressi f' milliekwivalenti kull kilogramm ta' zokkor totali sa post deċimali wieħed.

5.1.

Kalkoli —  Aċidità ta' l-affluwent espressa f' milliekwivalenti kull kilogramm ta' Gheneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat konċentrat: — E = 2,5n — Aċidità totali ta' l-Gheneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat konċentrat f' milliekwivalenti kull kilogramm (Ara “Aċidità Totali”, taqsima 6.1.2): — Cations totali f' milliekwivalenti kull kilogramm ta' zokkor totali: —  — fejn —  P = perċentwal ta' konċentrazzjoni (m/m) ta' zokkor totali.

(b)   KONDUTTIVITÀ

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

L-konduttività elettrika ta' kolonna tal-likwidu definità b'żewġ platinum electrodes paralleli fit-tarf tagħha hija mkejjla billi tiġI inkorporata f' id waħda ta' Wheatstone bridge.

Il-konduttività tvarja bit-temperatura u hija għalhekk espressa f' 20 °C.

2.   TAGĦMIR

2.1.	Metru ta' konduttività li jippermetti li jittieħed il-kejl tal-konduttività fuq mhedda minn 1 sa 1 000 microsiemens kull ċm (μS ċm-1).

2.2.	Banju ta' l-ilma sabiex iġġib it-temperatura tal-kampjuni li jkunu ser jiġu analizzati għal madwar 20 °C (20 ± 2 °C).

3.   REAĠENTI

3.1.	Ilma dimineralizzat b'konduttibvità speċifika taħt 2 μS ċm-1 f' 20 °C.

3.2.

Soluzzjoni ta' referenza ta' potassium klorid. Ħoll 0,581 g ta' potassium klorid, KCl, li jkun qabel ġie mnixxef għal massa kostanti f'temperatura ta' 105 °C, f'ilma dimineralizzat (3.1). Żid sa litru b'ilma dimineralizzat (3.1). Din is-soluzzjoni għandha konduttività ta' 1 000 μS ċm-1 f' 20 °C. M'għandhiex tinżamm għal aktar minn tlett xhur.

4.   Proċedura

4.1.   Tħejjija tal-kampjun li jkun ser jiġi analiżżat

Uża s-soluzzjoni bil-konċentrazzjoni taz-zokkor ta' 25 % (m/m) (25o Brix) kif deskritta fil-kapitolu “pH”, taqsima 4.1.2.

4.2.   Kalkolu ta' konduttività

Ġib il-kampjun li jkun ser jiġI analizzat għal 20 °C billi tgħaddas f'banju ta' l-ilma. Żomm it-temperatura għal madwar ± 0,1 °C.

Laħlaħ iċ-ċellola ta' konduttività darbtejn bis-soluzzjoni li tkun ser tiġi eżaminata.

Kejjel il-konduttività u esprimi r-riżultat f' μS ċm-1.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

Ir-riżultat huwa espress f'microsiemens għal kull ċm (μS ċm-1) f' 20 °C sa l-eqreb numru sħiħ għall-25 % (m/m) (25o Brix) soluzzjoni ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat.

5.1.   Kalkoli

Jekk it-tagħmir ma jkollux mezz sabiex jikkontrolla t-temperatura, ikkorreġi l-konduttività mkejla billi tuża t-Tabella I. Jekk it-temperatura hija taħt 20 °C, żid il-korrezzjoni; jekk it-temperatrura tkun ogħla minn 20 °C, naqqas il-korrezzjoni.

(c)   HYDROXYMETHYLFURFURAL (HMF)

1.   PRINĊIPJU TAL-METODI

1.1.   Metodu kolorimetriku

Aldehydes miksuba minn furan, l-ewlieni huwa hydroxymethylfurfural, irreaġixxi b'aċtu barbituriku u paratoluidine sabiex tagħti komponent aħmar li huwa kkalkulat b'kolorimetrija f' 550 nm.

1.2.   Likwidu kromotografiku b'għemil ogħli (HPLC)

Separazzjoni minn kolonna bi kromatografija ta' fażi maqluba u kalkolu f' 280 nm.

2.   METODU KOLOROMETRIKU

2.1.   Tagħmir

2.1.1.

Spettrofotomiter sabiex tieħu l-kejl bejn 300 u 700 nm.

2.1.2.

Ċelloli tal-ħġieġ b' passaġġi ottiċi ta' 1 ċm.

2.2.   Reaġenti

2.2.1.   Aċtu barbituriku, 0,5 % soluzzjoni (m/v).

Ħoll 500 mg ta' aċtu barbituriku, C4O3N2H4, f'ilma distillat u saħħan ftit fuq banju ta' l-ilma f' 100 °C. Żid sa 100 ml b'ilma ddistillat. Is-soluzzjoni żżomm għal madwar ġimgħa.

2.2.2.   Soluzzjoni paratoluidine 10 % (m/v).

Poġġi 10 g ta' paratoluidine, C6H4(CH3)NH2, fl flixkun volumetriku ta' 100 ml; żid 50 ml ta' isopropanol, CH3CH(OH)CH3, u 10 ml ta' aċtu aċetiku glaċjali, CH3COOH (ρ20 = 1,05 g/ml). Żid sa 100 ml b' isopropanol. Din is-soluzzjoni għandha tkun imġedda kuljum.

2.2.3.   Etanal (acetaldehyde), CH3CHO, 1 % (m/v) soluzzjoni akwuża.

Ipprepara eżatt qabel l-użu.

2.2.4.   Hydroxymethylfurfural, C6O3H6, 1 g/l soluzzjoni akwuża.

Ipprepara dilwizzjonijiet suċċessivi li jkun fihom 5, 10, 20, 30 u 40 mg/l. Il-1 g/l u s-soluzzjonijiet dilwiti għanhom ikunu preparati friski.

2.3.   Proċedura

2.3.1.   Tħejjija tal-kampjun

Uża s-soluzzjoni miksuba billi tħoll l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat sa 40 % (m/v) kif deskritt fil-kapitolu “Aċidità totali”, taqsima 5.1.2. Wettaq il-kalkolu fuq 2 ml ta' din is-soluzzjoni.

2.3.2.   Kalkolu kolorimetriku

F'kull wieħed miż-żewġt ifliexken ta' 25 ml a u b mgħammra b'tappijiet tal-ħġieġ mitħun poġġi 2 ml tal-kampjun preparat bħal f' 2.3.1. Poġġi f'kull flixkun 5 ml ta' soluzzjoni paratoluidine (2.2.2); ħawwad. Żid 1 ml ta' ilma distillat mal-flixkun b (kontroll) u 1 ml aċtu barbituriku (2.2.1) mal-flixkun a. Ħawwad sabiex tomoġenizza. Ittrasferixxi l-kontenut tal-fliexken f'ċelloli ta' spettrofotomiter b'passaġġi ottiċi ta' 1 ċm. Ġib fuq żero l-iskala ta' l-assorbenza billi tuża l-kontenut tal-flixkun b għal frekwenza ta' 550 nm. Segwi l-varjazzjoni fl-assorbiment tal-kontenut tal-flixkun a; irreġistra l-valur massimu A, li jintlaħaq bejn żewġ sa ħames minuti wara.

Kampjuni b'konċentrazzjonijiet ta' hydroxymethylfurfural “il fuq minn 30 mg/l għandhom ikunu dilwiti qabel l-analiżi.”

2.3.3.   Tħejjija tal-kurvatura ta' kalibrazzjoni

Poġġi 2 ml ta' kull waħda mis-soluzzjonijiet hydroxymethylfurfural b' 5, 10, 20, 30 u 40 mg/l (2.2.4) f'żewġ settijiet ta' flixken ta' 25 ml a u b u tratthom kif deskritt f' 2.3.2.

Il-graff li tirrapreżenta l-varjazzjoni ta' l-assorbenza bil-konċentrazzjoni ta' hydroxymethylfurfural f' mg/l hija linja dritta li tgħaddi mill-oriġini.

2.4.   Espressjoni tar-riżultati

Il- konċentrazzjoni hydroxymethylfurfural f' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat hija espressa f'milligrammi għal kull kilogramma ta' zokkor totali.

2.4.1.   Metodu tal-kalkolu

Il- konċentrazzjoni hydroxymethylfurfural C mg/l fil-kampjun li għandu jiġi analiżżat hija dik il-konċentrazzjoni fuq il-kurvatura ta' kalibrazzjoni li tikkorrispondi għall-assorbiment A mkejjla fuq il-kampjun.

Il-konċentrazzjoni hydroxymethylfurfural f'milligrammi għal kull kilogramma ta' total taz-zokkor hija mogħtijha b':

fejn

P = perċentwal (m/m) tal-konċentrazzjoni ta' zokkor totali fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat.

3.   KROMOTOGRAFIJA B'LIKWIDU TA' PRESTAZZJONI GĦOLJA

3.1.   Tagħmir

3.1.1.   Kromotografu b'likwidu ta' prestazzjoni għolja armat b':

Rata ta' ċirkolazzjoni ta' fażi mobbli: 1,5 ml/minuta.

3.1.2.

Tagħmir ta' filtrazzjoni tal-membrana, dijametru tal-pori 0,45 μm.

3.2.   Reaġenti

3.2.1.

Ilma ddistillat darbtejn.

3.2.2.

Metanol, CH3OH, distillat jew HPLC kwalità.

3.2.3.

Aċtu aċetiku CH3COOH, (r = 1,05 g/ml).

3.2.4.

Fażi mobbli: ilma-metanol (3.2.2)-aċtu aċetiku (3.2.3) li jkun qabel ġie ffiltrat minn filtru tal-membrana (0,45 μm), (40:9:1 v/v). Din il-fażi mobbli għandha tkun mħejjija kuljum u jinħarġilha l-gass qabel ma' tintuża.

3.2.5.

Soluzzjoni ta' referenza ta' hydroxymethylfurfural, 25 mg/l (v/v). Fi flixkun volumetriku ta' 100-ml, poġġi 25 mg ta' hydroxymethylfurfural, C6H3O6, mwieżen b'reqqa, u żid sal-marka bil-metanol (3.2.2). Ħallat din is-soluzzjoni 1:10 b' metanol (3.2.2) u iffiltra minn filtru tal-membrana (0,45 μm). Jekk miżmuma fi flixkun tal-ħġieġ kannella fir-refrigerator, din is-soluzzjoni żżomm għal xahrejn jew tlieta.

3.3.   Proċedura

3.3.1.   Tħejjija tal-kampjun

Uża s-soluzzjoni miksuba billi tħallat l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u ikkonċentrat sa 40 % (m/v) kif deskritt fil-kapitolu “Aċidità totali”, taqsima 5.1.2., u iffiltraha minn filtru tal-membrana 0,45 μm.

3.3.2.   Kalkolu kromotografiku

Injetta 5 (jew 10) μl tal-kampjun ippreparat kif deskritt f' 3.3.1. u 5 (jew 10) μl tar-referenza hydroxymethylfurfural soluzzjoni (3.2.5) fil-kromatografu. Irreġistra il-kromatogram.

Il-ħin ta' ritenzjoni ta' hydroxymethylfurfural huwa madwar sitta sa seba' minuti.

3.4.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

Il-konċentrazzjoni hydroxymethylfurfural f' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat hija espressa f'milligrammi għal kull kilogramma ta' zokkor totali.

3.4.1.   Metodu tal-kalkolu

Ħalli il-konċentrazzjoni hydroxymethylfurfural fil-40 % (m/v) soluzzjoni ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat konċentrat tkun C mg/l.

Il-konċentrazzjoni hydroxymethylfurfural f' milligrammi għal kull kilogramma ta' zokkor totali hija mogħtija b':

fejn

P = perċentwal (m/m) tal-konċentrazzjoni taz-zokkor totali fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat.

(d)   METALLI TQAL

1.   PRINĊIPJU TAL-METODI

I.   Metodu rapidu għall-evalwazzjoni tal-metalli tqal

Il-metalli tqal jigu żvelati fl-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat mħallat kif xieaq bil-kolorazzjoni prodotta bil-formazzjoni ta' sulfidi. Dawn jiġu evalwati b'paragun mas-soluzzjoni taċ-ċomb standard li tikkorrispondi mal-konċentrazzjoni massima ammissibli.

II.   Kalkolu tal-kontenut taċ-ċomb bi spettrometrija ta' assorbiment atomiku

Iċ-ċelat mogħti miċ-ċomb b' ammonju pyrrolidinedithiocarbamate huwa estratt bil-methylisobutylketone u l-assorbenza mkejjla f' 283,3 nm. Il-kontenut taċ-ċomb huwa kkalkulat billi tuża ammonti addizzjonali magħrufa ta' ċomb f'sett tas' soluzzjonijiet ta' referenza.

2.   METODU TA' MALAJR GĦALL-EVALWAZZJONI TA' METALLI TQAL

2.1.   Reaġenti

2.1.1.   Aċtu idrokloriku dilwit, 70 % (m/v).

Ħu 70 g aċtu idrokloriku, HCl (ρ20 = 1,16 sa 1,19 g/ml), u żid sa 100 ml bl- ilma.

2.1.2.   Aċtu idrokloriku dilwit, 20 % (m/v).

Ħu 20 g aċtu idrokloriku, HCl (ρ20 = 1,16 sa 1,19 g/ml), u żid sa 100 ml bl- ilma.

2.1.3.

Ammonju dilwit.Ħu 14 g ammonju, NH3 (ρ20 = 0,931 sa 0,934 g/ml) u żid sa 100 ml bl-ilma.

2.1.4.

pH 3,5 soluzzjoni buffer. Ħoll 25 g ta' ammonju aċetat CH3COONH4, f'25 ml ilma u żid 38 ml aċtu idrokloriku dilwit (2.1.1). Aġġusta il-pH jekk hemm bżonn b'aċtu idrokloriku dilwit (2.1.2) jew l-ammonju dilwit (2.1.3) u żid sa 100 ml bl-ilma.

2.1.5.

Soluzzjoni thioacetamide C2H5 SN, 4 % (m/v).

2.1.6.

Soluzzjoni glycerol, C3H8O3, 85 % (m/v), (D 20 °C = 1,449 sa 1,455).

2.1.7.

Reaġent thioacetamide. Ma' 0,2 ml ta' soluzzjoni thioacetamide (2.1.5) żid 1 ml ta' taħlità ta' 5 ml ilma, 15 ml soluzzjoni ta' 1 M sodju idrossid u 20 ml glycerol (2.1.6). Saħħan fuq banju ta' l-ilma f' 100 °C għal 20 sekonda. Ħejji eżatt qabel l-użu.

2.1.8.

Soluzzjoni li jkun fiha 0,002 g/l ċomb. Ipprepara 1 g/l soluzzjoni taċ-ċomb billi tħoll 0,400 g ta' ċomb nitrat, Pb(NO3)2, fl-ilma u żid sa 250 ml bl-ilma. Fil-ħin ta' l-użu, ħallat din is-soluzzjoni bl-ilma f'żewġ partijiet f' 1 000 (v/v) sabiex tikseb soluzzjoni 0,002 g/l.

2.2.   Proċedura

Ħoll il-kampjun ta' l-eżami ta' 10 g ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat f'10 ml ilma. Żid 2 ml tas-soluzzjoni soluzzjoni buffer pH 3,5 (2.1.4); ħawwad. Żid 1,2 ml tar-reaġent thioacetamide (2.1.7). Ħawwad minnufih. Ipprepara l-kontroll taħt l-istess kondizzjonijiet billi tuża 10 ml tas-soluzzjoni taċ-ċomb 0,002 g/l

Wara żewġ minuti, xi kolorazzjoni kannella tas-soluzzjoni ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat m'għandhiex tkun aktar intensa minn dik tal-kontroll.

2.3.   Kalkoli

Taħt il-kondizzjonijiet tal-proċedura msemmija hawn fuq, il-kampjun ta' kontroll jikkorrispondi għall-konċentrazzjoni massima ta' metalli tqal ammissibli espressa bħala ċomb ta' 2 mg/kg ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat.

3.   KALKOLU TAL-KONTENUT TA' ĊOMB BI SPETTROMETRIJA TA' ASSORBIMENT ATOMIKU

3.1.   Tagħmir

3.1.1.

Spettrofotomiter ta' assorbiment atomiku mgħammar b' air-acetylene burner.

3.1.2.

Hollow cathode lamp taċ-ċomb.

3.2.   Reaġenti

3.2.1.   Aċtu aċetiku dilwit.

Ħu 12 g ta' aċtu aċetiku glaċjali (r = 1,05 g/ml) u żid sa 100 ml bl-ilma.

3.2.2.

Soluzzjoni ta' ammonju pyrrolidinedithiocarbamate, C5H12N2S2, 1 % (m/v).

3.2.3.

Methylisobutylketone, (CH3)2CHCH2COCH3.

3.2.4.

Soluzzjoni li jkun fiha 0,010 g/l ċomb. Ħoll 1 g/l soluzzjoni taċ-ċomb (ta' 2.1.8) sa 1 % (v/v).

3.3.   Proċedura

3.3.1.   Tħejjija tas-soluzzjoni li tkun ser tiġi eżaminata

Ħoll 10 g ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat f'taħlità ta' volumi ugwali ta' aċtu aċetiku dilwit (3.2.1) u ilma, u żid sa 100 ml b'din it-taħlità.

Żid 2 ml soluzzjoni ta' ammonju pyrrolidinedithiocarbamate (3.2.2) u 10 ml methylisobutylketone (3.2.3). Ħawwad għal 30 sekonda waqt li tipproteġi minn dawl qawwi. Ħalli ż-żewġ saffi sabiex jisseparaw. Uża is-saff ta' methylisobutylketone.

3.3.2.   Tħejjija tas-soluzzjonijiet ta' referenza

Ipprepara tlett soluzzjonijiet ta' referenza li jkun fihom, flimkien ma' 10 g għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat, 1, 2 u 3 ml rispettivament tas-soluzzjoni li jkun fiha 0,010 g/l ċomb (3.2.4). Itratta dawn bl-istess mod bħas-soluzzjoni li tkun ser tiġi eżaminata.

3.3.3.   Kontroll

Ipprepara kontroll billi tipproċedi taħt l-istess kondizzjonijiet bħal f' 3.3.1, iżda mingħajr iż-żjieda ta' l-għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat.

3.3.4.   Kalkolu

Stabilixxi l-frekwenza għal 283,3 nm.

Atomizza il-methylisobutylketone mill-kampjun ta' kontroll fil-fjamma u ġib għal xejn l-iskala ta' l-assorbenza.

Billi topera bl-estratti solventi rispettivi tagħhom, ikkalkula l-assorbenzi tas-soluzzjoni li tkun ser tiġi eżaminata u s-soluzzjonijiet ta' referenza.

3.4.   Espressjoni tar-riżultati

Esprimi l-kontenut taċ-ċomb f'milligrammi għal kull kilogramma ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat sa post deċimali wieħed.

3.4.1.   Kalkoli

Pinġi l-kurvatura li tagħti l-varjazzjoni fl-assorbiment bħala funzjoni tal-konċentrazzjoni taċ-ċomb miżjud mas-soluzzjoni ta' referenza, konċentrazzjoni żero tikkorrispondi mas-soluzzjoni li tkun ser tiġi eżaminata.

Estrapola il-linja dritta li tgħaqqad ill-ponot sakemm taqta' l-parti negattiva ta' l-assi ta' konċentrazzjoni. Id-distanza tal-ponta ta' intersezzjoni mill-oriġini tagħti il-konċentrazzjoni taċ-ċomb fis-soluzzjoni li tkun ser tiġi eżaminata.

(e)   KALKOLU KIMIKU TA' L-ETANOL

Dan il-metodu jintuża għall-kalkolu tal-qawwa alkoħolika ta' likwidi bi ftit alkoħol bħal għeneb magħsur qabel ma jiħmar u għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat.

1.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Distillazzjoni sempliċi tal-likwidu. Ossidazzjoni ta' l-etanol fid-distillat b' potassju dikromat. Titrazzjoni ta' l-eċċess ta' dikromat b' soluzzjoni tal-ħadid (II).

2.   Tagħmir

2.1.	Uża t-tagħmir ta' distillazzjoni deskritt fil-Kapitolu “Qawwa alkoħolika bil-volum”, taqsima 3.2.

3.   REAĠENTI

3.1.   Soluzzjoni ta' potassju dikromat.

Ħoll 33,600 g ta' potassju dikromat, K2Cr2O7, fi kwantità suffiċjenti ta' ilma sabiex tagħmel litru tas-soluzzjoni f' 20 °C.

Millilitru ta' din is-soluzzjoni jossidizza 7,8924 mg ta' alkoħol.

3.2.   Soluzzjoni ta' ħadid (II) ammonju sulfat.

Ħoll 135 g ta' ħadid (II) ammonju sulfat, FeSO4 . (NH4)2SO4 . 6 H2O, fi kwantità suffiċjenti ta' ilma sabiex tagħmel soluzzjoni ta' litru żid 20 ml ta' aċtu sulfuriku konċentrat, H2SO4 (ρ20 = 1,84 g/ml). Din is-soluzzjoni xi ftit jew wisq tikkorrispondi għal nofs il-volum tagħha ta' soluzzjoni dikromat meta tkun għadha kif ġiet preparata. Sussegwentement, din tossidizza bil-mod.

3.3.   Soluzzjoni ta' potassju permanganat.

Ħoll 1,088 g ta' potassju permanganat, KMnO4, fi kwantità suffiċjenti ta' l-ilma sabiex tagħmel soluzzjoni ta' litru.

3.4.   Aċtu sulfuriku dilwit, 1:2 (v/v).

Żid 500 ml ta' aċtu sulfuriku, H2SO4 (ρ20 = 1,84 g/ml), ftit ftit u waqt li tħawwad il-ħin kollu, ma' 500 ml ilma.

3.5.   Reaġent ferruż orthophenanthroline.

Ħoll 0,695 g ta' sulfat ferruż, FeSO4 . 7 H2O, f'100 ml ilma, u żid 1,485 g ta' orthophenanthroline monohydrate, C12H8N2 . H2O. Saħħan sabiex tgħin it-tidwib. Din is-soluzzjoni ħamra tgħajjat iżżomm tajjeb.

4.   PROĊEDURA

4.1.   Distillazzjoni

Poġġi 100 g ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat u 100 ml ilma fil-flixkun ta' distillazzjoni. Iġbor id-distillat fl flixkun volumetriku ta' 100 ml u żid sal-marka bl-ilma.

4.2.   Ossidazzjoni

Ħu flixkun b'tapp tal-ħġieġ mitħun b'għonqu wiesgħa li jippermetti li l-għonq jitlaħlaħ mingħajr telf. Fil-flixkun, poġġi 20 ml tas-soluzzjoni titranti potassju dikromat (3.1) u 20 ml ta' l-aċtu sulfuriku dilwit 1:2 (v/v) (3.4) u ħawwad. Żid 20 ml tad-distillat. Agħlaq il-flixkun b'tapp, ħawwad u stenna mill-inqas 30 minuta, waqt li tħawwad kultant. Dan huwa l-flixkun tal-“kejl.)”

Wettaq it-titrazzjoni tas-soluzzjoni ta' ħadid (II) ammonju sulfat (3.2) fir-rigward tas-soluzzjoni ta' potassju dikromat billi tpoġġi fi flixkun identiku l-istess kwantitàjiet ta' reaġenti iżda ibdel l-20 ml tad-distillat b' 20 ml ta' ilma ddistillat. (Dan huwa l-flixkun tal-kontroll.)

4.3.   Titrazzjoni

Żid erba' taqtiriet tar-reaġent orthophenanthroline (3.5) mal-kontenut tal-flixkun tal-kejl. Ittitra id-dikromat eċċessiv billi żżid miegħu s-soluzjzoni ta' ħadid (II) ammonju sulfat (3.2). Ieqaf żid is-soluzzjoni ferruża meta it-taħlita tinbidel minn aħdar fil-blu għall-kannella.

Sabiex tiġġudika l-ponta tat-tmiem b'iktar preċizzjoni, ibdel il-kulur tat-taħlità lura minn kannella għal aħdar fil-blu bis-soluzzjoni ta' potassju permanganat (3.3). Naqqas wieħed minn għaxra tal-volum ta' din is-soluzzjoni wżata mill-volum tas-soluzzjoni ta' ħadid (II) miżjuda. Ħalli d-differenza tkun n ml.

Ipproċedi bl-istess mod bil-flixkun ta' “kontroll”. Ħalli n' ml tkun id-differenza hawnhekk.

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

L-etanol huwa espress fi grammi għal kull kilogramma ta' zokkor u huwa kwotat sa post deċimali wieħed.

5.1.   Metodu tal-kalkolu

n' ml ta' soluzjzoni ferruża tnaqqas 20 ml ta' soluzzjoni dikromat li tossidizza 157,85 mg ta' etanol pur.

Millilitru ta' soluzzjoni ta' ħadid (II) għandha l-istess poter ta' tnaqqis bħal

n' n-n” ml ta' iron (II) soluzzjoni għandha l-istess poter li tnaqqas bħal

Konċentrazzjoni ta' etanol f'g/kg ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat mogħti b':

Konċentrazzjoni ta' etanol f'g/kg ta' total taz-zokkor mogħti b':

fejn

P = perċentwal tal-konċentrazzjoni (m/m) tat-total taz-zokkor.

(f)   MESO-INOSITOL, SCYLLO-INOSITOL U SUKROŻJU

1.   PRINĊIPJU

Kromatografija tal-gass ta' silylated derivatives.

2.   REAĠENTI

2.1.	Standard intern: xylitol (soluzzjoni akwuża ta' madwar 10 g/l li miegħu ikun miżjud ponta ta' spatula ta' sodju azide)

2.2.	Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide - BSTFA - (C8H18F3NOSi2)

2.3.	Trimethylchlorosilane (C3H9ClSi)

2.4.	Pyridine p.A. (C5H5N)

2.5	Meso-inositol (C6H12O6)

3.   TAGĦMIR

3.1.	Kromatografu tal-gass armat b':

3.2.

Kolonna kapillarja (e.g. fi fused silica, miksija b' OV 1, ħxuna tal-kisi ta' 0,15 μm, tul 25 m u dijametru intern ta' 0,3 mm) Kondizzjonijiet ta' l-operazzjoni: — gass li jġorr: idroġenu jew elju, — rata taċ-ċirkolazzjoni tal-gass li jġorr: madwar 2 ml/minuta, — temperatura ta' l-injettur u tad-detector: 300 °C, — programmar tat-temperatura: 1 minuta f' 160 °C, 4 °C kull minuta sa 260 °C, temperatura kostanti ta' 260 °C għal 15 minuta, — ratio ta' l-isplitter: madwar 1:20.

3.3.	Integratur.

3.4.	Mikrosiringa, 10 μl.

3.5.	Mikropipetti, 50, 100 u 200 μl.

3.6.	2 ml flixkun b'tapp tat-Teflon.

3.7.

Forn.

4.   METODU TA' OPERAZZJONI

Kampjun mwieżen bi preċiżjoni ta' madwar 5 g ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar rettifikat u konċentrat jitqiegħed fi flixkun ta' 50 ml. 1 μl tas-soluzzjoni standard ta' xylitol (2.1) hija miżjuda u jiżdied l-ilma sal-kapaċità. Wara li tħawwad, 100 μl tas-soluzzjoni hija meħuda u mqiegħda fi flixkun (3.6) fejn tiġi mnixxfa taħt serbut ġentili ta' l-arja. 100 μl ta' alkoħol etile assolut jista' jiġi miżjud jekk ikun meħtieġ sabiex jgħin l-evaporazzjoni.

Il-fdal huwa maħlul b'attenzjoni f' 100 μl ta' pyridine (2.4) u 100 μl ta' bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide (2.2) u 10 μl ta' trimethylchlorosilane (2.3) huma miżjuda. Il-flixkun huwa magħluq b'tapp tat-Teflon u msaħħan f' 60 °C għal siegħa.

Aqta' 0,5 μl ta' likwidu ċar u injetta billi tuża labra vojta minn ġewwa msaħħna skond ir-ratio ta' l-isplitter mogħtija.

5.   KALKOLU TAR-RIŻULTATI

5.1.

Tiġi mħejjija soluzzjoni li jkun fiha: 60 g/l ta' glukożju, 60 g/l ta' fruttożju, 1 g/l ta' meso-inositol u 1 g/l ta' sukrożju. 5 g tas-soluzzjoni hija mwieżna u l-proċedura f'4 segwità. Ir-riżultati għall-meso-inositol u s-sukrożju rigward il-xylitol huma ikkalkolati mill-kromatogram. Fil-każ ta' scyllo-inositol, li m'huwiex disponibbli kummerċjalment u għandu ħin ta' ritensjoni li jinsab bejn l-aħħar fażi tal-forma anomerika tal-glukożju u l-fażi tal-meso-inositol (ara l-graff hawn wara), l-istess riżultat bħal dak għall-meso-inositol huwa meħud.

6.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

6.1.	Meso-inositol u scyllo-inositol huma espressi f'milligrammi għal kull kilogramma ta' zokkor. Is-sukrożju huwa espress fi grammi għal kull kilogramma ta' għeneb magħsur qabel ma jiħmar. Kromatogramma fil-fażi gassuża ta' meso-inositol, scyllo-inositol u sukrożju

▼M6

43.   KIF JIĠI STABBILIT IL-PROPORZJON ISOTOPIKU 18O/16O TAL-KONTENUT TA’ L-ILMA FL-INBEJJED

I.   ID-DESKRIZZJONI TAL-METODU

1.   Il-Mira tal-metodu

Il-mira tal-metodu preżenti huwa li jkejjel il-proporzjon isotopiku 18O/16O ta’ l-ilmijiet ta’ oriġini differenti. Il-proporzjon isotopiku 18O/16O jista’ jiġi espress fid-devjazzjoni fil-proporzjoni tal-valur isotopiku tar-referenza internazzjonali V.SMOW:

2.   Il-Principju

Il-proporzjon isotopiku 18O/16O jiġi stabbilit bl-ispektrometrija bil-massa tal-proporzjonijiet isotopiċi (SMPI) mill-kurrenti joniċi m/z 46 (12C16O18O) u m/z 44 (12C16O2), prodotti mid-dijossidu tal-karbonju miksub skambju ma’ l-ilma fl-inbid skond ir-reazzjoni:

Id-dijossidu tal-karbonju fil-fażi ġassuża jintuża għall-analiżi.

3.   Ir-Reagenti

4.   It-tagħmir tal-laboratorju

5.   Il-mod sperimentali kif jiġu stabbilizzati

5.1.   Il-Metodu manuali

L-Introduzzjoni tal-kampjun

Iż-żewġ rampi jiġu mkessħa bin-nitroġenu likwidu, u mbagħad is-sistema kollha tiġi ppurgata sa 0,1 mm Hg billi jinfetħu il-valvoli.

Wara, agħlaq il-valvoli u ħalli kollox jisħon. Iċ-ċiklu tat-tneħħija tal-gass jiġi mtenni sakemm ma tibqa’ l-ebda varjazzjoni fil-pressa.

Kessaħ ir-rampi tax-xogħol għal -70 °C (nitrogenu likwidu u taħlita ta’ l-alkoħol) għalbiex tiffriża l-ilma u qiegħdu kollu f’vakwu. Wara li l-vakwu jistabbilizza ruħu, iżola r-rampa billi tħaddem il-valvola u tippurga s-sistema ta’ l-introduzzjoni tal-CO2. Daħħal il-CO2 gassuż fir-rampa tax-xogħol u, wara li tkun iżolajtha mil-bqija tas-sistema, daħħal ir-rampa fil-banju ttermostatizzat f’temperatura ta’ 25 °C (± 0,5 °C) għal 12-il siegħa (lejl wieħed). Biex tottimizza l-ħin meħtieġ għall-ekwilibrazzjoni, huwa tal-parir li l-kampjuni jiġu mħejjija fl-aħħar tal-jum sabiex il-bilanċ joqgħod matul il-lejl.

Jiġi addattat apparat li jżomm il-kampjun li jappoġġja kemm ċelloli tal-kejl daqs il-fliexken bużżieqa li jkun fihom il-CO2 skambjat fuq il-linja vojta maġenb ir-rampa tax-xogħol. Iċ-ċelloli vojta jiġu ppurgati bl-attenzjoni u il-gassijiet skambjati li jkunui fil-fliexken bużżieqa jiġu ttrasferiti wieħed wara l-ieħor, għal ġoċ-ċelluli tal-kejl li jkunu ġew imkessħa bin-nitrogenu likwidu. Imbagħad iċ-ċelloli tal-kejl jitħallew jisħnu għal temperatura ambjentali.

5.2.   L-użu ta’ l-apparat ta l-iskambju awtomatiku

Sabiex titwettaq l-ekwilibrazzjoni, il-kunjetti kampjun jiġu mimlijin b’2 ml inbid jew b’2 ml ilma (referenza tax-xogħol tal-laboratorju) u ffriżati għal -18 °C. Il-ħġiġiet kampjun li jkun fihom il-prodotti ffriżati jiġu addattati għas-sistema ta’ l-ekwilibrazzjoni, u wara li jkunu ħolqu vakwu fis-sistema, jiġi introdott id-dijossidu tal-karbonju bi pressa ta’ 800 hPa.

Il-bilanċ jintlaħaq f’temperatura ta’ 22 ± 0,5 °C wara perjodu minimu taż-żmien ta’ ħames sigħat u b’aġitazzjoni moderata. Ġaladarba t-tul taż-żmien ta’ l-ekwilibrazzjoni jiddependi mill-geometrija tal-kunjett, it-tul taż-żmien ottimu għandu jiġi l-ewwel stabilit għas-sistema wżata.

Id-djossidu tal-karbonju li jkun fil-kunjetti jiġi mbagħad ittransferit lejn il-kamra ta’ introduzzjoni ta’ l-ispettrometru bil-massa b’tubu kapillaju u jitwettaq il-kejl skond protokoll speċifiku għall-kull tip ta’ tagħmir.

6.   Il-kalkolu u l-espressjoni tar-riżultati

Id-differenza relattiva δ’ ta’ l-intensitajiet tal-proporzjon tal-joni m/z 46 u 44 (l46/l44) bejn il-kampjun u ir-referenza jiġi espress fi ‰ permezz ta’ l-ekwazzjoni li ġejja:

It-180 kotent tal-kampjun pparagunat mar-referenza V.SMOW fuq l-iskala V.SMOW/SLAP, jiġi mogħti bir-relazzjoni:

Il-valur aċċettat għas-SLAP huwa egwali għal -55,5 ‰ pparagunat mal-V.SMOW. Il-proporzjon isotopiku tar-referenza jrid jiġi stabbilit wara kull serja ta’ 10 kejlijiet fuq kampjuni mhux magħrufa.

7.   Il-fedeltà

▼M7

44.   KIF JIĠI STABBILIT L-ETHYL CARBAMATE FL-INBID: METODU TA’ INVESTIGAZZJONI SELETTIVA BILLI TUŻA GAS CHROMATOGRAPHY/MASS SPECTROMETRY

(Dan hu applikabbli biex jiġi stabbilit l-ethyl carbamate għal konċentrazzjonijiet ta’ bejn l-10 u il-200 μg/l)

(Attenzjoni: segwi sew il-miżuri ta’ sigurtà dwar kif tuża l-kimiċi, ethanol, acetone u prodotti kanċeroġeniċi (ethyl carbamate u dichloromethane). Iddisponi sew mis-solventi, f’konformità mar-regoli ambjentali fis-seħħ).

A.   Il-Prinċipju

Propyl carbamate jiżdied ma’ kampjun biex iservi bħala bażi interna. Is-soluzzjoni titħallat bl-ilma u titpoġġa f’solid phase extraction column ta’ 50 ml. Ethyl carbamate propylcarbamate jiġu mnaddfa bid-dichloromethane.

Il-likwidu tat-tindif li jifforma jiġi kkonċentrat ġo vacuum rotary evaporator. Il-konċentrat jiġi analizzat permezz ta’ gas chromatography (GC). Id-determinazzjoni ssir permezz ta’ mass spectrometry billi tuża il-frammentometrija fil-mod SIM (selected ion monitoring).

B.   Apparat u kondizzjonijiet kromatografiċi (eżempju)

C.   Reaġenti

D.   Preparazzjoni tal-kampjun ta’ analiżi

Poġġi dawn il-volumi tal-materjal ta’ analiżi li ġejjin f’żewġ beakers separati ta’ 100 ml:

Għal kull beaker, żid l ml ta’ soluzzjoni bażika interna PC C(e)(3) u ilma, biex tikseb volum totali ta’ 40 ml (jew 40 g).

E.   Estrazzjoni

L-estrazzjoni għandha ssir taħt extractor hood apposta, b’ventilazzjoni adegwata.

Ittrasferixxi l-kampjun ippreparat taħt l-intestatura D għal extraction column.

Laħlaħ il-beaker b’10 ml ilma u ttrasferixxi l-ilma tat-tlaħliħ għal extraction column.

Ħalli l-likwidu għal erba’ minuti ħa jassorbi. Naddaf permezz ta’ 2 x 80 ml ta’ dichloromethane. Iġbor il-likwidu tat-tlaħliħ li tkun għadek kif użajt f’conical flask ta’ 300 ml.

Evapora minn 2 sa 3 ml ta’ dan il-likwidu f’bath rotary evaporator tal-ilma f’temperatura ta’ 30 °C. (NB: tħallihx jagħli ħafna.)

Ittrasferixxi l-fdal konċentrat għal ġo graduated tube ta’ 4 ml permezz ta’ Pasteur pipette.

Laħlaħ ir-reċipjent b’1 ml ta’ dichloromethane u ttrasferixxi l-likwidu li tkun laħlaħt bih għal ġot-tubu. Ikkonċentra l-kampjun għal 1 ml taħt emissjoni dgħajfa ta’ nitroġenu.

Jekk ikun hemm bżonn, ittrasferixxi l-konċentrat għal ġo auto sampler flask għall-analiżi GC/MS.

F.   L-analiżi GC/MS

G.   Analiżi kollaborattiva

It-tabella turi riżultati individwali għall-mod prattiku kif ġie mnissel il-kampjun u għaż-żewġ tipi ta’ inbid.

Il-Cochran test wassal għall-eliminazzjoni ta’ par wieħed biss ta’ riżultati, għal inbid ta’ qawwa ta’ volum alkoħoliku ta’ aktar minn 14 %, u għal inbid ta’ qawwa ta’ volum alkoħoliku ta’ 14 % jew anqas, minn żewġ laboratorji differenti.

Ir-riproduċibbilità relattiva (RSDR) għandha t-tendenza li titnaqqas hekk kif tiżdied il-konċentrazzjoni ta’ ethyl carbamate.

▼M10

45.   ID-DETERMINAZZJONI BIL-MASSA TA’ L-ISPEKTROMETRIJA TA’ L-IŻOTOPU TAR-RELATTIVITÀ TA’ 13C/12C FL-ETANOL TA’ L-INBID JEW TA’ ĊETANOL AKWISTAT BIL-FERMENTAZZJONI TA’ MASTI, MASTI KKONĊENTRATI JEW IL-MASTI KKONĊENTRATI RATTIFIKATI

1.   QASAM TA’ L-APPLIKAZJONI

Il-metodu jiffaċilita il-kejl tar-relattività ta’ l-iżotopju 13C/12C fl-etanol ta’ l-inbid u fl-etanol akwistat mill-fermentazzjoni ta’ prodotti tad-dwieli (masti, masti kkonċentrati, masti kkonċentrati rattifikati).

2.   IN-NORMI TAR-REFERENZA

3.   TERMINI U DEFINIZZJONIJIET

4.   IL-PRINĊIPJU

Matul il-fotosintesis, l-assimilazzjoni tad-diossidu tal-karbonju mill-pjanti jseħħ permezz ta’ żewġ forom ewlenija ta’ metaboliżmu, il-metaboliżmu C3 (Iċ-ċiklu ta’ Calvin) u l-metaboliżmu C4 (Hatch u Slack). Dawn iż-żewġ mekkaniżmi ta’ fotosintesi jippreżentaw tip differenti tal-frazjonizzazzjoni tal-iżotopu. Il-prodotti tal-pjanti C4, bħal ma huwa z-zokkor u l-alkoħol akwistati bil-fermentazzjoni, għandhom livell għola tal-karbonju 13 milli minn prodotti simili tal-pjanti C3. Bosta mill-pjanti, inklużi d-dwieli u l-pitravi taz-zokkor, jappartieni għall-grupp C3. Il-kannamieli taz-zokkor u l-qamħ-ir-rum jappartieni għall-grupp C4. Il-kejl tal-kontenut tal-karbonju 13 jiffaċilta s-sejbien u l-evalutazzjoni taz-zokkrijiet ta’ l-oriġini C4 (l-iżoglukożju tal-kannamieli taz-zokkor jew tal-qamħ-ir-rum) miżjud ma prodotti ta’ l-għeneb (masti ta’ l-għeneb, inbejjed, eċċ.). L-informazzjoni dwar il-kontenut tal-karbonju 13 flimkien ma dak akwistat mill-SNIF-NMR tiffaċilita li l-kwantitajiet miżjuda ta’ taħlitiet ta’ zokkrijiet u alkoħol derivati mill-pjanti C3 u C4 li jkunu ddetterminati.

Il-kontenut tal-karbonju 13 huwa ddeterminat fuq id-diossidu tal-karbonju prodott matul il-kombustjoni sħiħa tal-kampjun. L-abbundanza tal-prinċipju ta’ l-iżotopomeri ta’ masses 44 (12C16O2), 45 (13C16O2 u 12C17O16O) u 46 (12C16O18O), li jirriżultaw mid-differenti tgħaqqid possibli ta’ l-iżotopi 18O, 17O, 16O, 13C u 12C, huma ddeterminati mill-kurrenti joniċi mkejla minn dawn it-tlett ġbir differenti tal-ispektometri tal-massa ta’ l-iżotopiċi. Il-kontribuzzjonijiet ta’ l-iżotopomeri 13C17O16O u 12C17O2 jistgħu jkunu mwarrba minħabba l-livelli baxxi tagħhom. Il-kurrent joniki għal m/z = 45 huwa kkorreġut għall-kontribuzzjoni ta’ 12C17O16O, li hija kkalkolata skond l-intensità tal-kurrent imkejla għal m/z = 46, waqt li tittieħed f’akkont l-abbundanza relattiva ta’ 18O u 17O (il-korrezzjoni Craig). It-tqabbil ma kalibrazzjoni ta’ referenza kontra r-referenza internazzjonali V-PDB tippermetti l-kalkolazzjoni tal-kontenut tal-karbonju 13 fuq l-iskala relattiva δ13C.

5.   REAĠENTI

Il-materjali u l-konsumabbli jiddependu mill-apparat (il-punt 6) użat mill-laboratorju. Is-sistemi ġeneralment użati huma bbażati fuq l-analizzaturi elementali. Dawn is-sistemi jistgħu jkunu mgħammra sabiex jippermetti l-introduzzjoni ta’ kampjunu mqiegħda f’kapsoli ssiġillati tal-metal jew l-injezzjoni ta’ kampjuni likwidi permezz ta’ septum bl-użu ta’ siringa.

Jiddependi mit-tip ta’ l-istrument użat, dawn il-materjali ta’ referenza, reaġenti, u konsumabbli li ġejjin jistgħu jkunu wżati:

6.   APPARAT U TGĦAMIR

6.1.   Spektrometru tal-massa relattiva ta’ l-iżotopju (IRMS)

L-ispektrometru tal-massa relattiva ta’ l-iżotopju (IRMS) kapaċi li jiddetermina r-relattività tal-kontenut 13C ta’ gass CO2 li jseħħ b’mod naturali b’eżattezza nterna ta’ 0,05 %O jew aħjar espressa bħala valur relattiv (il-punt 9). Eżattezza nterna hija hawn definita bħala d-differenza bejn iż-żewġ kejlijiet ta’ l-istess kampjun ta’ CO2. L-ispektrometru tal-massa wżat għall-kejl tar-relattività ta’ l-iżotopi huwa ġeneralment mgħammar b’kollettur tripplu sabiex simultanjament ikejjel l-intensitajiet għal m/z = 44, 45 u 46. L-ispektrometru tar-relattività tal-massa ta’ l-iżotopju għandu jew ikun mgħammar bi dħul doppju, sabiex alternattivament ikejjel il-kampjun mhux magħruf u kampjun ta’ referenza, jew użat bħala sistema integra li twettaq kombustjoni kwantittativa tal-kampjuni u tissepara d-diossidu tal-kabonju mill-prodotti l-oħrajn tal-kombustjoni qabel ma jsir il-kejl fl-ispektrometru tal-massa.

6.2.   Apparat tal-kombustjoni

Apparat tal-kombustjoni kapaċi li kwantitattivament jikkonverti l-etanol f’diossidu tal-karbonju u jelimina l-prodotti l-oħrajn kollha tal-kombustjoni, inkluż l-ilma, mingħajr frazjonizzazzjoni iżotopika. L-apparat jista jew ikun ta’ sistema integrata ta’ nixxija kontinwa b’apparat tal-ispektrometrija tal-massa (il-punt 6.2.1) jew sistema ta’ kombustjoni seperata (il-punt 6.2.2). L-appart għandu jippermetti eżattezza ta’ mill-anqas dik indikata fil-(punt 11).

6.2.1.   Sistemi ta’ nixxija kontinwa

Dawn jinkludu jew analizzatur elementali jew inkella kromatografiku tal-gass b’sistema ta’ kombustjoni online.

Dan l-apparat tal-laboratorju li ġej huma meħtieġ għal sistemi mgħammra għall-introduzzjoni ta’ kampjuni li jkunu f’kapsoli tal-metall:

Nota:

sabiex ikun imnaqqas ir-riskju ta’ l-evaporazzjoni tal-kampjun u ta’ l-etanol, materjal assorbenti (per eżempju Chromosorb W 45-60 mesh) jista jkun imqiegħed fil-kapsoli, imma l-ewwel ikun ġie vverifikat permezz ta’ kejl mingħajr kampjun sabiex ikun aċċertat li ma jkunx fih kwantitsinifikanti ta’ karbonju li aktar li jaffettwa r-riżultati.

Dan it-tgħamir tal-laboratorju li ġej huwa meħtieġ meta jkun użat l-analizzatur elementali mgħammar b’injettur likwidu jew fil-każ ta’ sistema preparatorja ta’ kombustjoni kromatografika:

It-tgħamir tal-laboratorju indikat fil-listi ta’ hawn fuq huma eżempji u jistgħu jkunu mibdula b’apparat ieħor ta’ mġieba ekwivalenti, jiddependi mit-tip ta’ l-apparat tal-kombustjoni u tal-ispektrometru tal-massa wżat mil-laboratorju.

6.2.2.   Sistema ta’ preparazzjoni separata

Il-kampjuni tad-diossidu tal-karbonju li jirriżultaw mill-kombustjoni tal-kampjuni li għandhom ikunu analizzati u l-kampjun ta’ referenza huma miġbura b’bozoz li huma mbgħad imqiegħda fid-dħul doppju tal-ispektrometru għall-analiżi ta’ l-iżotopiċi. Ħafna mill-apparat tal-kombustjoni deskritt fil-letteratura jista jkun wżat:

7.   PREPARAZZJONI TAL-KAMPJUNU GĦAT-TESTIJIET

L-etanol għandu jkun estratt mill-inbid qabel ma jsir l-ittestjar ta’ l-iżotopi. Dan huwa mwettaq bid-distillazzjoni ta’ l-inbid kif deskritt fil-punt 3.1 tal-metodu Nru 8 (SNIF-NMR).

Fil-każ ta’ masti ta’ l-għeneb, il-masti kkonċentrati ta’ l-għeneb u l-masti kkonċentrati rettifikati ta’ l-għeneb, iz-zokkrijiet għandhom ikunu ffermentati l-ewwel fl-etanol kif deskritt fil-punt 3.2 tal-metodu Nru 8.

8.   PROĊEDURA

Il-passi kollha tal-preparazzjoni għandhom jitwettqu mingħajr xi telf sinifikanti ta’ l-etanol minħabba l-evaporazzjoni li tkun tista tbiddel il-kompożizzjoni iżotopika tal-kampjun.

Din id-deskrizzjoni li ġejja tirreferi għall-proċeduri ġeneralment wżat għall-kombustjoni tal-kampjun ta’ l-etanol bl-użu tas-sistemi ta’ kombustjoni awtomatika kommerċjali. Il-metodi l-oħrajn kollha li jassiguraw li l-kampjun kollu ta’ l-etanol ikun ikkonvertit f’diossidu tal-karbonju mingħajr xi telf ta’ l-etanol minħabba l-evaporazzjoni jistgħu jkunu wżati għall-preparazzjoni tad-diossidu tal-karbonju għal analiżi iżotipika.

Proċedura esperimentali bbażata fuq l-użu ta’ l-analizzatur elementali:

9.   KALKOLAZJONI

L-iskop ta’ dan il-metodu huwa li jkejjel ir-relattivitta’ iżotopju 13C/12C ta’ l-etanol estratt mill-inbid jew mill-prodotti derivati mill-għeneb wara l-fermentazzjoni. Ir-relattività ta’ l-iżotopu 13C/12C tista tkun espressa bid-derivattiv tagħha mir-referenza tax-xogħol. Id-devjazzjoni iżotopika tal-karbonju 13 (δ13C) hija mbagħad ikkalkolata fuq skala delta kull elf (δ/1 000) bit-tqabbil tar-riżultati akwistati mill-kampjuni li għandhom ikun mkejjla ma dawk mir-referenza tax-xogħol preċedentament ikkalibrata fuq il-bażi tar-referenza internazzjonali primarja (V-PDB). Il-valuri δ13C huma espressi b’relattività tar-referenza tax-xogħol kif ġej:

δ13C sam/ref %O = 1000 × (Rsam-Rref)/Rref

meta Rsam u Rref huma rispettivament ir-relattivitta’ l-iżotopi 13C/12C tal-kampjun u tad-diossidu tal-karbonju wżat fil-kas ta’ referenza.

Il-valuri δ13C huma espressi b’relattività mal-V-PDB kif ġej:

δ13C sam/V-PDB %O = δ13C sam/ref + δ13C ref/V-PDB + δ13C sam/ref × δ13C ref/V-PDB)/1000,

meta δ13C ref/V-PDB hija d-devjazzjoni iżotipika preċedentament determinata tar-referenza tax-xogħol mill-V-PDB.

Varjazzjonijiet żgħar jistgħu iseħħu waqt il-kejl on-line minħabba kambjamenti fil-kondizzjonijiet strumentali. F’dan il-każ tal-valuri δ13C tal-kampjuni għandu jkun ikkorreġut skond id-differenza fil-valur δ13C imkejjel tal-kampjun tax-xogħol standard u l-valur vera tiegħu, preċedentament ikkalibrat kontra V-PDB bit-tqabbil ma wieħed mill-materjali ta’ referenza internazzjonali. Bejn iż-żewġ kejl tal-kampjun tax-xogħol standard, il-varjazzjoni, u għalhekk il-korrezzjoni li għandha tkun applikata għar-riżultati akwistati mill-kampjuni, tista tkun presunta li hija lineari. Kampjun tax-xogħol standard għandu jkun imkejjel fil-bidu u fit-tmiem tas-serje tal-kampjuni kollha. Korrezzjoni tista mbagħad tkun ikkalkolata fuq kull kampjun bl-użu ta’ l-interpolazzjoni lineari.

10.   ASSIGURAZZJONI U KONTROLL TAL-KWALITÀ

Ivverifika li l-valur 13C għar-referenza tax-xogħol ma jkunx jiddifferixxi b’aktar minn 0,5 %O mill-valur ammessibbli. Jekk le, is-settings ta’ l-apparat tal-ispktrometrija għandhom ikunu vverifikati u, jekk meħtieġ, aġġustati.

Għal kull kampjun, ivverifika li d-differenza fir-riżultati għaż-żewġ kapsoli mkejjla suċċessivament tkun anqas minn 0,3 %O. Ir-riżultat finali għal kampjun partikolari huwa l-medja tal-valur għaż-żewġ kapsoli. Jekk id-devjazzjoni hija akbar minn 0,3 %O il-kejl għandu jkun imtenni.

Verifiki fuq il-kejl korrett jistgħu jkunu bbażati fuq il-kurrent joniku meta m/z = 44, li hija proporzjonali mal-kwantità ta’ karbonju njettat fl-analizatur elementali. Permezz ta’ kondizzjonijiet standard, il-kurrent joniku għandu jkun kważi kostanti għal-kampjuni analizzati. Devjazzjoni sinifikanti tista tkun indikattiva ta’ l-evaporazzjoni ta’ l-etanol (per eżempju siġill mhux perfett fuq kapsola) jew instabbilità ta’ l-analizzatur elementali jew ta’ l-ispektrometru tal-massa.

11.   L-IMĠIEBA TAL-KARTTERISTIĊI TAL-METODU (Eżattezza)

Studju kollaborattiv inizjali (il-punt 11.1) kien imwettaq fuq distillati li kien fihom l-alkoħol ta’ oriġini mill-inbid u l-alkoħol mill-kannamieli u mill-pitravi, kif ukoll taħlitiet differenti ta’ alkoħol ta’ dawk it-tlett oriġini. Minħabba li dan l-istudju ma ħax akkont tal-proċedura tad-distillazzjoni, aktar informazzjoni minn studji intra-laboratorji oħrajn fuq l-inbid (il-punt 11.2) u, partikolarment, serje ta’ testijiet ta’ profiċjenza (il-punt 11.3) għal kejl iżotropiku kienu wkoll ikkunsidrati. Ir-riżultati juru li permezz ta’ kondizzjonijiet sodisfaċenti, u partikolarment dawk għall-kejl li jużaw SNIF-NMR, is-sistemi differenti tad-distillazzjoni ma jipproduċux varjazzjoni sinifikanti fid-determinazzjoni tal-valur δ13C ta’ l-etanol ta’ l-inbid. L-eżatezza tal-parametri osservati għall-inbid huma kważi identiċi għal dawk osservati fl-istudju konġunt fuq id-distillati (il-punt 11.1).

11.1.   Studju konġunt fuq id-distillati

11.2.   L-istudju intra-laboratorju fuq żewġ imbejjed u alkoħol wieħed

Sistemi differenti ta’ distillazzjoni kienu wżati mil-laboratorju parteċipanti. Id-determinazzjonijiet iżotopiċi (δ13C) imwettqa f’laboratorju wieħed fuq in-numru kollu ta’ distillati mibgħuta lura mill-parteċipanti ma jiżvelaw l-ebda valuri aberrenti jew valuri li jiddifferixxu sinifikament mill-valuri medji. Il-varjazzjoni fir-riżultati (S2 = 0,0059) hija komparabbli mal-varjanzi tar-repettabbilità Sr2 fl-istudju konġunt fuq distillati (il-punt 11.1).

11.3.   Riżulati minn eżerċizzji mwettqa għal monitoraġġ tal-profiċjnza fl-imġieba tat-testijiet iżotopiċi

Sa minn Diċembru 1994, testijiet internazzjonali ta’ profiċjenza għad-determinazzjoni ta’ kejl iżotopiku għall-inbid u l-alkoħol (distillati ta’ 96 % ASV) kienu regolarment organizzati. Ir-riżultati jiffaċilitaw lil-laboratorji parteċipanti li jivverifikaw il-kwalità ta’ l-analiżi tagħhom. Riżultati statistiċi jippermettu l-apprezzament tal-varjazzjoni fil-kejl permezz ta’ kondizzjonijiet ta’ riproduċċibbilità u għalhekk estimi tal-parametri tal-varjanza u l-limiti tar-reproduċċibbilità. Ir-riżultati akwistati għad-determinazzjoni ta’ δ13C għall-inbid u d-distillat ta’ l-etanol huma riassunti fit-tabella li ġejja:

11.4.   Limiti tar-repettabbilità u r-riproduċċibbilità

Fuq il-bażi ta’ l-informazzjoni minn testijiet differenti intra-laboratorji mogħtija fit-tabelli ta’ hawn fuq, dawn il-limiti li ġejjin ta’ repettabbilità u riproduċċibilità jistgħu jkunu stabbiliti għal dan il-metodu, inkluż l-istadju tad-distillazzjoni:

---

( 1 ) ĠU No L 84, 27.3.1987, p. 1.

( 2 ) ĠU Nru L 132, 23.5.1990, p. 19

( 3 ) ĠU Nru L 133, 14.5.1982, p. 1.

( 4 ) Kull piknometru b'karatteristiċi ekwivalenti jista' jintuża.

( 5 ) Eżempju numeriku huwa mogħti fit-taqsima 6 ta' dan il-kapitolu.

( 6 ) Eżempju numeriku huwa mogħti fit-taqsima 6 ta' dan il-Kapitolu

( 7 ) Eżempju numeriku huwa mogħti fit-taqsima 6 ta' dan il-Kapitolu

( 8 ) .

( 9 ) Il-konċentrazzjoni taz-zokkor hija espresso bħala zokkor maqlub.

( 10 ) Il-konċentrazzjoni taz-zokkor hija espresso bħala zokkor maqlub

( 11 ) Per eżemplu, għal saħħa alkoholika b’piż ta’ 12 %, p=0,12

( 12 ) Qabel ma jsir dan il-kalkolu, il-gravità speĊifika (jew id-densità) ta' l-inbid imkejjel kif specifikat hawn fuq gĦandha tiĠi koreĠuta kif speĊifikat hawn fuq gĦall-effett ta' l-aċidità volatili permezz tal-formola:

d v = d 20o C 20o C - 0,0000086 a or ρ v = ρ 20 - 0,0000086 a

Fejn a hija l-aċidità volatili espressa bħala milliekwivalenti għal kull litru.

( 13 ) Dawn il-valuri huma mogħtija sakemm jinħoloq data bank tal-Komunità ta' dawn il-valuri.

( 14 ) Dawn il-valuri huma mogħtija sakemm jinħoloq data bank tal-Komunità ta' dawn il-valuri.

( 15 ) Wieħed mill-ismijiet kummerċjali huwa “Norite”

( 16 ) 105 pascal (Pa) = 1 bar.

( 17 ) Din id-distanza ghandha tinghata f’direzjzoni li tmur minn O sa C

( 18 ) Għal ċerti inbejjed ta’ kwalità għonja ħafna, tista’ tkun meħtieġa capillary column ta’ 50 m.

( 19 ) Għal ċerti inbejjed partikolari ta’ kwalità għolja ħafna, jista’ jkun meħtieġ programm ta’ temperatura ta’ 2 °C/minuta.