α) «ζώα», τα χερσαία θηλαστικά της τάξης των προβοσκιδοειδών και των αρτιοδακτύλων και οι διασταυρώσεις τους·

β) «εκμετάλλευση», το αγρόκτημα ή άλλη επίσημα ελεγχόμενη αγροτική, βιομηχανική ή εμπορική επιχείρηση, συμπεριλαμβανομένων ζωολογικών κήπων, πάρκων αναψυχής, πάρκων άγριων ζώων και ελεγχόμενων περιοχών κυνηγιού, όπου τα ζώα διατηρούνται ή εκτρέφονται κατά τον συνήθη τρόπο·

γ) «καθαρισμένα εντόσθια», τα εντόσθια από τα οποία έχουν αφαιρεθεί πλήρως τα οστά, οι χόνδροι, η τραχεία και οι μεγάλοι βρόγχοι, τα λεμφογάγγλια και ο προσκολλημένος συνδετικός ιστός, το λίπος και η βλέννα· στην περίπτωση του κρέατος κατοικίδιων βοοειδών, θεωρούνται επίσης καθαρισμένα εντόσθια οι μασητήριοι μύες βοοειδών ολόκληροι και χαραγμένοι σύμφωνα με την παράγραφο 41, στοιχείο α) του κεφαλαίου VIII του παραρτήματος I της οδηγίας 64/433/ΕΟΚ του Συμβουλίου.

i) τα ζώα που προορίζονται για άμεση σφαγή αποστέλλονται αμελλητί στο σφαγείο προορισμού, όπου σφάζονται εντός πέντε εργάσιμων ημερών·

ii) τα ζώα που προορίζονται για σκοπούς αναπαραγωγής, παραγωγής κρέατος και πάχυνσης και τα ζώα που προορίζονται για ζωολογικούς κήπους, πάρκα αναψυχής, πάρκα άγριων ζώων και ελεγχόμενες περιοχές κυνηγιού αποστέλλονται αμελλητί στην εκμετάλλευση προορισμού, όπου παραμένουν για διάστημα τουλάχιστον 30 ημερών πριν από οποιαδήποτε μετακίνηση εκτός της εκμετάλλευσης, με εξαίρεση την περίπτωση της άμεσης αποστολής σε σφαγείο.

α) σφάγια άγριων δίχηλων θηραμάτων που δεν έχουν υποστεί εκδορά και που προορίζονται για ανθρώπινη κατανάλωση, κατόπιν περαιτέρω επεξεργασίας·

β) καθαρισμένα εντόσθια κατοικίδιων βοοειδών που προορίζονται για ανθρώπινη κατανάλωση ως προϊόντα με βάση το κρέας, κατόπιν περαιτέρω θερμικής επεξεργασίας σε θερμοκρασία κέντρου μάζης τουλάχιστον 80 °C ή παστερίωσης σε ερμητικά κλειστό περιέκτη ώστε να επιτευχθεί τιμή Fo ≥ 3.

α) τις επωνυμίες και τις διευθύνσεις αφενός των εγκαταστάσεων που αναφέρονται στην παράγραφο 2 και αφετέρου της αρμόδιας τοπικής αρχής που είναι υπεύθυνη για την εποπτεία των εγκαταστάσεων αυτών και

β) τις κατηγορίες προϊόντων για τις οποίες οι ανωτέρω εγκαταστάσεις είναι εγκεκριμένες και καταχωρημένες.

α) προέρχονται από τρίτη χώρα ή περιοχή τρίτης χώρας οι οποίες περιλαμβάνονται στον κατάλογο του μέρους 1 του παραρτήματος ΙΙ της απόφασης για την εισαγωγή νωπού κρέατος του συγκεκριμένου είδους ζώου·

β) ικανοποιούν τους ειδικούς υγειονομικούς όρους για το εν λόγω είδος, οι οποίοι καθορίζονται στο αντίστοιχο υπόδειγμα υγειονομικού πιστοποιητικού που περιλαμβάνεται στο μέρος 2 του παραρτήματος ΙΙ·

γ) συνοδεύονται από υγειονομικό πιστοποιητικό που έχει συνταχθεί σύμφωνα με το υπόδειγμα του παραρτήματος ΙΙΙ και έχει υπογραφεί από επίσημο κτηνίατρο των αρμόδιων κτηνιατρικών αρχών της τρίτης χώρας προέλευσης·

δ) πιστοποιούνται ως αποδεκτές για διαμετακόμιση ή αποθήκευση (ανάλογα με την περίπτωση) στο κοινό κτηνιατρικό έγγραφο εισόδου από τον επίσημο κτηνίατρο του συνοριακού σταθμού ελέγχου όπου έγινε η είσοδος.

α) η αποστολή σφραγίζεται με σφραγίδα που φέρει αύξοντα αριθμό στο συνοριακό σταθμό ελέγχου όπου γίνεται η είσοδος στην ΕΚ από τις κτηνιατρικές υπηρεσίες της αρμόδιας αρχής·

β) τα έγγραφα που συνοδεύουν την αποστολή και αναφέρονται στο άρθρο 7 της οδηγίας 97/78/ΕΚ φέρουν σφραγίδα όπου αναγράφεται:«ONLY FOR TRANSIT TO RUSSIA VIA THE EC» (Μόνο για διαμετακόμιση στη Ρωσία μέσω της ΕΚ), σε κάθε σελίδα, από τον επίσημο κτηνίατρο της αρμόδιας προϊσταμένης αρχής του συνοριακού σταθμού ελέγχου·

γ) ικανοποιούνται οι διαδικαστικές απαιτήσεις που προβλέπονται στο άρθρο 11 της οδηγίας 97/78/ΕΚ·

δ) πιστοποιούνται ως αποδεκτές για διαμετακόμιση στο κοινό κτηνιατρικό έγγραφο εισόδου από τον επίσημο κτηνίατρο του συνοριακού σταθμού ελέγχου όπου έγινε η είσοδος.

I. να τελούν υπό τον έλεγχο επίσημου κτηνιάτρου·

II. να βρίσκονται στο κέντρο περιοχής διαμέτρου 20 km, στην οποία, σύμφωνα με επίσημες γνωματεύσεις, κατά τις 30 τουλάχιστον ημέρες πριν από τη χρήση τους ως εγκεκριμένων τόπων συγκέντρωσης δεν εκδηλώθηκε κρούσμα αφθώδους πυρετού·

III. πριν από κάθε χρήση τους ως εγκεκριμένων τόπων συγκέντρωσης, να καθαρίζονται και να απολυμαίνονται με απολυμαντική ουσία επίσημα εγκεκριμένη στη χώρα εξαγωγής για τον αποτελεσματικό έλεγχο της νόσου που αναφέρεται στον όρο II ανωτέρω·

IV. λαμβανομένης υπόψη της χωρητικότητας του κέντρου συγκέντρωσης, να έχουν: α) εγκατάσταση η οποία διατίθεται αποκλειστικά για το σκοπό αυτό· β) ενδεδειγμένες εγκαταστάσεις, που να καθαρίζονται και να απολυμαίνονται εύκολα, για φόρτωση, εκφόρτωση και ικανοποιητική στέγαση κατάλληλου επιπέδου για τα ζώα, για το πότισμα και το τάισμα, και για οποιαδήποτε αγωγή κριθεί αναγκαία· γ) ενδεδειγμένες εγκαταστάσεις επιθεώρησης και απομόνωσης· δ) ενδεδειγμένο εξοπλισμό για τον καθαρισμό και την απολύμανση αιθουσών και φορτηγών· ε) ενδεδειγμένο χώρο αποθήκευσης για ζωοτροφές, αχυροστρωμνές και κόπρο· στ) ενδεδειγμένο σύστημα συλλογής των λυμάτων· ζ) γραφείο για τον επίσημο κτηνίατρο·

V. κατά τη λειτουργία τους, να έχουν επαρκή αριθμό κτηνιάτρων για την εκτέλεση όλων των καθηκόντων·

VI. να δέχονται μόνον ζώα που έχουν ταυτοποιηθεί ατομικώς ώστε να παρέχονται εγγυήσεις για την ανιχνευσιμότητα της προέλευσής τους. Για το σκοπό αυτό, όταν εισέρχονται ζώα, ο ιδιοκτήτης ή ο υπεύθυνος κέντρου εξασφαλίζει ότι τα ζώα έχουν ταυτοποιηθεί σωστά και συνοδεύονται από τα υγειονομικά έγγραφα ή πιστοποιητικά που ενδείκνυνται για τα συγκεκριμένα είδη και κατηγορίες. Επιπλέον, ο ιδιοκτήτης ή ο υπεύθυνος του κέντρου τηρεί μητρώο σε βιβλίο ή σε βάση δεδομένων, και διατηρεί επί τρία τουλάχιστον έτη το όνομα του κατόχου, την προέλευση, την ημερομηνία εισόδου και εξόδου, τον αριθμό και την ταυτοποίηση των ζώων ή τον αριθμό μητρώου του ποιμνίου προέλευσης και τον προορισμό του, και τον αριθμό μητρώο του μεταφορέα και τον αριθμό κυκλοφορίας του φορτηγού παράδοσης ή παραλαβής των ζώων από τις εγκαταστάσεις·

VII. όλα τα ζώα που διέρχονται από τα κέντρα πρέπει να πληρούν τους υγειονομικούς όρους για την εισαγωγή της συγκεκριμένης κατηγορίας ζώου στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα·

VIII. τα ζώα που προορίζονται για εξαγωγή προς την Ευρωπαϊκή Κοινότητα και διέρχονται από τα κέντρα πρέπει, εντός έξι ημερών, να φορτώνονται και να αποστέλλονται άμεσα στα σύνορα της χώρας εξαγωγής: α) χωρίς να έλθουν σε επαφή με δίχηλα ζώα που δεν πληρούν τους υγειονομικούς όρους για την εισαγωγή της συγκεκριμένης κατηγορίας ζώων στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα· β) να χωρίζονται σε παρτίδες ώστε καμία παρτίδα να μην περιέχει τόσο ζώα που προορίζονται για αναπαραγωγή ή παραγωγή όσο και ζώα που προορίζονται για άμεση σφαγή· γ) να μεταφέρονται σε οχήματα ή εμπορευματοκιβώτια που έχουν καθαρισθεί και απολυμανθεί με απολυμαντική ουσία επίσημα εγκεκριμένη στη χώρα εξαγωγής για τον αποτελεσματικό έλεγχο της νόσου που αναφέρεται στον όρο II ανωτέρω και που είναι κατασκευασμένα κατά τρόπο ώστε τα περιττώματα, τα ούρα, τα απορρίμματα ή οι ζωοτροφές να μην είναι δυνατό να εκρέουν ή να πέφτουν έξω από όχημα ή το εμπορευματοκιβώτιο κατά τη διάρκεια της μεταφοράς·

IX. όταν οι όροι εξαγωγής των ζώων προς την Κοινότητα προβλέπουν την πραγματοποίηση δοκιμής εντός συγκεκριμένης περιόδου πριν από τη φόρτωση, η εν λόγω χρονική περίοδος περιλαμβάνει το διάστημα της συγκέντρωσης, έως έξι ημέρες, μετά τη διέλευση των ζώων από τα εγκεκριμένα κέντρα·

X. η χώρα εξαγωγής ορίζει τα εγκεκριμένα κέντρα που είναι εγκεκριμένα για ζώα που προορίζονται για αναπαραγωγή και παραγωγή και εκείνα που είναι εγκεκριμένα για ζώα που προορίζονται για άμεση σφαγή, και κοινοποιεί στην Επιτροπή και στις αρμόδιες κεντρικές αρχές των κρατών μελών την επωνυμία και τη διεύθυνση των εγκαταστάσεων αυτών και μεριμνά για την τακτική ενημέρωση των στοιχείων αυτών·

XI. η χώρα εξαγωγής καθορίζει τη διαδικασία επίσημης επιθεώρησης των εγκεκριμένων κέντρων και διασφαλίζει την πραγματοποίηση της εν λόγω επιθεώρησης·

XII. τα κέντρα επιθεωρούνται τακτικά ώστε να εξακριβώνεται ότι εξακολουθούν να πληρούν τις προϋποθέσεις της έγκρισής τους. Σε περίπτωση μη πλήρωσης των όρων και αναστολής της λειτουργίας του κέντρου, η έγκριση είναι δυνατό να αποκατασταθεί μόνον όταν η αρμόδια αρχή θεωρήσει ότι το κέντρο συμμορφώνεται πλήρως με όλες τις προαναφερθείσες διατάξεις.

Α. Η παρεμποδιστική ή ανταγωνιστική δοκιμή ELISA διενεργείται σύμφωνα με το ακόλουθο πρωτόκολλο:

Υλικά και αντιδραστήρια:

Σχέδιο δοκιμής

Cc: μάρτυρας συζευτικού (χωρίς ορό / χωρίς μονοκλωνικό αντίσωμα)· C++: ισχυρός θετικός έλεγχος ορού· C++: ασθενής θετικός έλεγχος ορού· C++: αρνητικός θετικός έλεγχος ορού· Cm: έλεγχος μονοκλωνικού αντισώματος (χωρίς ορό).

Πρωτόκολλο δοκιμής:

Μάρτυρας συζευτικού (Cc)

:

Οι στήλες 1A και 1B συνιστούν τον μάρτυρα αναφοράς που αποτελείται από αντιγόνο BTV και συζευτικό. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να ουδετεροποιήσει το τρυβλίο ανάγνωσης ELISA.

Έλεγχος Mab (Cm)

:

Οι στήλες 1 και 2, γραμμές Ζ και Η, είναι ο έλεγχος του μονοκλωνικού αντισώματος και περιέχουν αντιγόνο BTV, μονοκλωνικό αντίσωμα και συζευτικό. Οι στήλες αυτές αποτελούν το μέγιστο χρώμα. Ο μέσος όρος των τιμών οπτικής πυκνότητας από τον έλεγχο αυτό αποτελεί 0 % της τιμής αναστολής.

Θετικός έλεγχος (C++, C+)

:

Οι στήλες 1 και 2, γραμμές Γ-Δ-Ε-ΣΤ περιέχουν αντιγόνο BTV, ισχυρό και ασθενή θετικό αντιορό BTV αντίστοιχα, Mab και συζευτικό.

Αρνητικος έλεγχος (C++, C+)

:

Οι στήλες 2Α και 2Β είναι οι αρνητικοί έλεγχοι που περιέχουν αντιγόνο BTV, αρνητικό αντιορό BTV, Mab και συζευκτικό.

Δοκιμαστικός ορός

:

Για ορολογικές μελέτες μεγάλης κλίμακας και γρήγορο διαχωρισμό, ο ορός θα μπορούσε να εξετασθεί σε μία μόνον αραίωση 1/5 (προσάρτημα 1). Εναλλακτικώς, μπορούν να εξετασθούν 10 οροί σε λόγους αραίωσης από 1/5 έως 1/640 (προσάρτημα 2). Αυτό θα δώσει κάποια ένδειξη του τίτλου του αντισώματος στο δοκιμαστικό ορό.

Διαδικασία:

Ανάλυση των αποτελεσμάτων:

Με τη βοήθεια λογισμικού, εκτυπώνονται οι τιμές οπτικής πυκνότητας (OD), καθώς και το επί τοις εκατό ποσοστό αναστολής (PI) για τους ορούς δοκιμής και τους ορούς μάρτυρες, με βάση τη μέση τιμή που έχει καταγραφεί για τις κοιλότητες που αντιστοιχούν στους μάρτυρες αντιγόνου. Τα εκφραζόμενα σε τιμές OD και PI δεδομένα χρησιμοποιούνται για να προσδιοριστεί εάν τα αποτελέσματα της δοκιμής περικλείονται εντός αποδεκτών ορίων. Τα ανώτατα όρια ελέγχου (UCL) και τα κατώτατα όρια μάρτυρα (LCL) για το μάρτυρα Mab (αντιγόνο συν Mab, ελλείψει δοκιμαστικού ορού) βρίσκονται μεταξύ των τιμών OD 0,4 και 1,4. Οποιοδήποτε τρυβλίο δεν πληροί τα κριτήρια αυτά, πρέπει να απορρίπτεται.

Εάν δεν υπάρχει λογισμικό, εκτυπώνονται οι τιμές OD με τη βοήθεια εκτυπωτή ELISA. Υπολογίζεται ο μέσος όρος των μετρήσεων OD για τις κοιλότητες ελέγχου αντιγόνου, ο οποίος ισοδυναμεί με 100 % της τιμής. Καθορίζεται το 50 % της τιμής OD και υπολογίζεται διά χειρός η θετικότητα και η αρνητικότητα κάθε δείγματος.

Ποσοστό τιμής παρεμπόδισης = 100 - (OD κάθε ελέγχου δοκιμής / μέσος όρος OD του Cm) × 100.

Οι δύο κοιλότητες που περιέχουν αρνητικό ορό μάρτυρα και οι δύο κοιλότητες που περιέχουν το τυφλό διάλυμα θα πρέπει να δίδουν τιμές PI μεταξύ + 25 % και -25 % και μεταξύ + 95 και + 105 %, αντίστοιχα. Η λήψη τιμών εκτός αυτών των ορίων δεν ακυρώνει το τρυβλίο, αλλά αποτελεί ένδειξη ανάπτυξης προϋπάρχοντος χρώματος. Ο ισχυρός και ο ασθενής θετικός ορός ελέγχου πρέπει να δίδουν τιμές PI μεταξύ +81 % και +100 % και μεταξύ +51 % και +80 %, αντίστοιχα.

Το όριο διάγνωσης για τους ορούς δοκιμής είναι 50 % (PI 50 % ή OD 50 %). Τα δείγμα που εμφανίζουν τιμές > 50 % καταγράφονται ως αρνητικά. Τα δείγματα που εμφανίζουν τιμές PI μεγαλύτερες ή μικρότερες από το όριο για τις διπλές κοιλότητες θεωρούνται αμφίβολα. Τα εν λόγω δείγματα μπορούν να υποβάλλονται σε νέα δοκιμή κηλίδας και δοκιμή τιτλοδότησης. Τα θετικά δείγματα μπορούν επίσης να τιτλοδοτηθούν, για να παράσχουν μια ένδειξη του βαθμού θετικότητας.

Οπτική ανάγνωση: Τα θετικά και αρνητικά δείγματα διακρίνονται εύκολα με γυμνό μάτι· τα ασθενή θετικά ή τα ισχυρά αρνητικά δείγματα ενδέχεται να διακρίνονται δυσκολότερα με γυμνό μάτι.

Παρασκευή αντιγόνου για δοκιμή ELISA BTV:

Τιτλοδότηση του αντιγόνου BTV για Elisa:

Αντιγόνο BTV για Elisa τιτλοδοτείται με την έμμεση Elisa. Διπλασιαζόμενες αραιώσεις του αντιγόνου τιτλοδοτούνται εναντίον μιας σταθερής αραίωσης (1/50) του μονοκλωνικού αντισώματος 3-17-Α3. Ο κανόνας εκτέλεσης είναι ο ακόλουθος:

Κατά την ανταγωνιστική μέθοδο, το μονοκλωνικό αντίσωμα πρέπει να βρίσκεται σε περίσσεια, για αυτό επιλέγεται μια αραίωση του αντιγόνου που βρίσκεται πάνω στην καμπύλη τιτλοδότησης (όχι στην περιοχή οριζοντιοποίησης) που δίνει περίπου 0,8 OD από 10 λεπτά.

Β. Η δοκιμή ανοσοδιάχυσης σε πήγμα αγαρόζης πρέπει να εκτελείται σύμφωνα με την ακόλουθη πρότυπη διαδικασία:

Αντιγόνο:

Παρασκευάζεται κατακαθιζόμενο αντιγόνο σε κάθε σύστημα κυτταροκαλλιέργειας που υποστηρίζει τον ταχύ πολλαπλασιασμό μιας φυλής αναφοράς του ιού της κυανής γλώσσας. Συνιστώνται κύτταρα Vero ή ΒΗΚ. Το αντιγόνο υπάρχει στο υπερκείμενο υγρό στο τέλος της καλλιέργειας του ιού, αλλά απαιτείται 50 έως 100πλάσια συγκέντρωσης για να είναι αποτελεσματικό. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί με κάθε τυποποιημένη διαδικασία συμπύκνωσης πρωτεΐνης· ιός μέσα στο αντιγόνο μπορεί να αδρανοποιηθεί με την προσθήκη 0,3 % (ο/ο) β-προπιολακτόνης.

Γνωστός θετικός ορός αναφοράς:

Χρησιμοποιώντας τον ορό και αντιγόνο παγκόσμιας αναφοράς, παράγεται ένας ορός εθνικού τύπου, τυποποιημένος στη βέλτιστη αναλογία έναντι του ορού παγκόσμιας αναφοράς, λυοφιλιμένος και χρησιμοποιούμενος όπως ο γνωστός ορός αναφοράς σε κάθε δοκιμή.

Δοκιμαστικός ορός

Διαδικασία

:

1 % αγαρόζη παρασκευασμένη σε ρυθμιστικό διάλυμα βορικού οξέος ή βαρβιτολικού νατρίου pH 8,5 με 9,0, εκχύεται σε τρυβλία με ελάχιστο βάθος 3,0 mm. Ένα σχέδιο δοκιμής επτά κοιλοτήτων ελεύθερων υγρασίας, η καθεμία με διάμετρο 5,0 mm, κόβεται μέσα στο άγαρ. Το σχέδιο αποτελείται από μια κεντρική κοιλότητα και έξι κοιλότητες διευθετημένες γύρω της σε ένα κύκλο ακτίνας 3 cm. Η κεντρική κοιλότητα πληρούται με το τυποποιημένο αντιγόνο. Οι περιφερειακές κοιλότητες 2, 4 και 6 πληρούνται με γνωστό θετικό ορό, οι κοιλότητες 1, 3 και 5 πληρούνται με δοκιμαστικό ορό. Το σύστημα επωάζεται έως 72 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου σε κλειστό υγρό θάλαμο.

Ερμηνεία

:

Ένας ορός υπό δοκιμή είναι θετικός όταν σχηματίζει μια ειδική γραμμή ιζήματος με το αντιγόνο και όταν σχηματίζει πλήρη γραμμή ταυτοποίησης με τον ορό ελέγχου. Ο δοκιμαστικός ορός είναι αρνητικός εάν δεν σχηματίζει μια ειδική γραμμή με το αντιγόνο και δεν κάμπτει τη γραμμή του ορού αναφοράς. Τα τρυβλία πρέπει να εξετάζονται σε σκούρο φόντο και χρησιμοποιώντας έμμεσο φωτισμό.

Α. Η δοκιμή αδρανοποίησης ορού πρέπει να εκτελείται σύμφωνα με την ακόλουθη πρότυπη διαδικασία:

Ορός

:

Όλοι οι οροί αδρανοποιούνται με θέρμανση στους 56 °C επί 30 λεπτά πριν χρησιμοποιηθούν.

Διαδικασία

:

Η δοκιμή ουδετεροποίησης σταθερού ιού-μεταβλητού ορού σε τρυβλία μικροτιτλοδότησης χρειάζεται MDBK ή άλλα ευαίσθητα κύτταρα. Η φυλή του Κολοράντο, Οξφόρδης ή οποιαδήποτε άλλη φυλή αναφοράς του ιού χρησιμοποιείται σε 100 TCID50 ανά 0,025 ml· δείγματα αδρανοποιημένου, μη αραιωμένου ορού αναμειγνύονται με ίσο όγκο (0,025 ml) αιωρήματος ιού. Τα μείγματα ιού/ορού επωάζονται επί 24 ώρες στους 37 °C στα τρυβλία μικροτιτλοδότησης πριν προστεθούν τα κύτταρα MDBK. Τα κύτταρα χρησιμοποιούνται σε συγκέντρωση τέτοια, ώστε να σχηματίζεται μία πλήρης μονοκυτταρική στοιβάδα ύστερα από 24 ώρες.

Έλεγχοι

:

i) δοκιμή μολυσματικότητας ιού, ii) έλεγχοι τοξικότητας ορού, iii) έλεγχοι μη εμβολιασμένης κυτταροκαλλιέργειας, iv) αντιοροί αναφοράς.

Ερμηνεία

:

Τα αποτελέσματα της δοκιμής ουδετεροποίησης και ο τίτλος του ιού που χρησιμοποιείται στη δοκιμή καταγράφονται ύστερα από επώαση τριών έως επτά ημερών στους 37 °C. Οι τίτλοι των ορών θεωρούνται αρνητικοί εάν δεν υπάρχει ουδετεροποίηση σε αραίωση 1/2 (μη αραιωμένος ορός).

Β. Οποιαδήποτε άλλη δοκιμή αναγνωρίζεται στο πλαίσιο της απόφασης 93/42/ΕΚ της Επιτροπής για συμπληρωματικές εγγυήσεις όσον αφορά την μολυσματική ρινοτραχειίτιδα των βοοειδών για τα βοοειδή που προορίζονται για κράτη μέλη ή περιοχές αυτών απαλλαγμένες από τη νόσο.

Α. Η συλλογή οισοφαγικών/φαρυγγικών δειγμάτων και η δοκιμή πρέπει να εκτελούνται σύμφωνα με την ακόλουθη πρότυπη διαδικασία:

Αντιδραστήρια

:

Πριν από τη δειγματοληψία, παρασκευάζεται μέσο μεταφοράς. Όγκοι 2 ml διανέμονται σε τόσα δοχεία συλλογής όσα και τα ζώα δειγματοληψίας. Τα χρησιμοποιούμενα δοχεία πρέπει να αντέχουν στην ψύξη με στερεό CO2 ή υγρό άζωτο. Τα δείγματα λαμβάνονται χρησιμοποιώντας ένα ειδικά σχεδιασμένο συλλέκτη σιέλου ή «probang». Για να ληφθεί ένα δείγμα, το κύπελλο του probang διέρχεται μέσα από το στόμα, πάνω από τη ράχη της γλώσσας και προς τα κάτω, μέσα στο πάνω τμήμα του οισοφάγου. Καταβάλλεται προσπάθεια να αποξεσθεί το επιφανειακό επιθήλιο του πάνω οισοφάγου και φάρυγγα με κινήσεις κατευθυνόμενες εγκαρσίως και επιμήκως. Κατόπιν το probang αποσύρεται, προτιμότερα αφού το ζώο καταπιεί. Το κύπελλο πρέπει να είναι γεμάτο και να περιέχει ένα μείγμα βλέννας, σιέλου, οισοφαγικού υγρού και κυτταρικών υπολειμμάτων. Πρέπει να λαμβάνεται μέριμνα ώστε να εξασφαλιστεί ότι κάθε δείγμα περιέχει κάποια ποσότητα ορατού κυτταρικού υλικού Πρέπει να αποφεύγεται η ιδιαίτερα σκληρή μεταχείριση, που προκαλεί αιμορραγία. Τα δείγματα μερικών ζώων μπορεί να είναι σοβαρά μολυσμένα με περιεχόμενα μηρυκασμού. Τέτοια δείγματα πρέπει να απορρίπτονται και το στόμα των ζώων να ξεπλένεται με νερό, ή κατά προτίμηση φυσιολογικό ορό (αλατούχο διάλυμα), πριν επαναληφθεί η δειγματοληψία.

Μεταχείριση των δειγμάτων

:

Κάθε δείγμα που συλλέγεται στο κύπελλο του probang εξετάζεται ποιοτικά και 2 ml προστίθενται σε ίσο όγκο μέσου μεταφοράς σε δοχείο που μπορεί να αντέξει σε ψύξη. Τα δοχεία συλλογής κλείνονται σφιχτά, σφραγίζονται, απολυμαίνονται και καταχωρούνται με ετικέτες. Τα δείγματα διατηρούνται δροσερά (+ 4 °C) και εξετάζονται μέσα σε τρεις έως τέσσερις ώρες ή τοποθετούνται πάνω σε ξηρό πάγο (- 69 °C) ή υγρό άζωτο και διατηρούνται παγωμένα μέχρι να εξεταστούν. Από ζώο σε ζώο το probang απολυμαίνεται και πλένεται τρεις φορές με καθαρό νερό.

Δοκιμή για ιό FMD

:

Τα δείγματα επωάζονται σε καλλιέργειες πρωτογενών κυττάρων θυρεοειδούς βοοειδούς χρησιμοποιώντας τουλάχιστον τρεις σωλήνες ανά δείγμα. Άλλα ευαίσθητα κύτταρα π.χ. πρωτογενή κύτταρα νεφρού βοοειδών ή χοιρινών μπορούν να χρησιμοποιηθούν, αλλά πρέπει να λαμβάνεται υπόψη ότι για ορισμένες φυλές του ιού του αφθώδους πυρετού είναι λιγότερο ευαίσθητα. Οι σωλήνες επωάζονται στους 37 °C σε συσκευή περιστροφής και εξετάζονται καθημερινά επί 48 ώρες ως προς κυτοπαθολογικό σύμπτωμα (ΚΠΣ). Εάν αποδειχθούν αρνητικές, οι καλλιέργειες περνούνται χωρίς δοκιμή σε νέες καλλιέργειες και επανεξετάζονται επί 48 ώρες. Η εξειδίκευση κάθε ΚΠΣ πρέπει να επιβεβαιώνεται.

Συνιστώμενα μέσα μεταφοράς:

Β. Η δοκιμή ουδετεροποίησης ιού πρέπει να εκτελεσθεί σύμφωνα με την ακόλουθη πρότυπη διαδικασία:

Αντιδραστήρια

:

Παρασκευάζεται προς αποθήκευση αντιγόνο ΙΑΠ σε κυτταροκαλλιέργειες ή πάνω σε γλώσσες κατοικίδιων βοοειδών και διατηρείται στους -70 °C ή χαμηλότερα ή στους -20 °C μετά από προσθήκη γλυκερίνης 50 %. Αυτό είναι το αποθηκευμένο αντιγόνο. Ο ιός του αφθώδους πυρετού είναι σταθερός υπό τις συνθήκες αυτές και οι τίτλοι λίγο μεταβάλλονται για μία περίοδο μηνών.

Διαδικασία

:

Η δοκιμή εκτελείται σε τρυβλία μικροτιτλοδότησης βαθμού ιστοκαλλιέργειας, επίπεδου πυθμένα, χρησιμοποιώντας ευαίσθητα κύτταρα όπως IBRS-2, ΒΗΚ-21 ή κύτταρα νεφρού μοσχαριού. Οροί για δοκιμή αραιώνονται στο 1/4 με μέσο κυτταροκαλλιέργειας απηλλαγμένο ορού με την προσθήκη 100 IU/ml νεομυκίνης ή άλλων κατάλληλων αντιβιοτικών. Οι οροί αδρανοποιούνται στους 56 °C επί 30 λεπτά και ποσότητες των 0,05 ml χρησιμοποιούνται για την παρασκευή μίας διπλής σειράς σε τρυβλία μικροτιτλοδότησης χρησιμοποιώντας επαναληπτικές αραιώσεις των 0,05 ml. Κατόπιν προστίθεται σε κάθε κοιλότητα προτιτλοδοτημένος ιός επίσης αραιωμένος με μέσο καλλιέργειας απηλλαγμένο ορού και περιέχον 100 TCID50/0,05 ml. Ακολουθώντας επώαση στους 37 °C επί μία ώρα για να επέλθει ουδετεροποίηση, προστίθενται σε κάθε κοιλότητα 0,05 ml κυττάρων αιώρησης περιέχοντα 0,5-1,0 x 106 κύτταρα ανά 1 ml σε μέσο κυτταροκαλλιέργειας περιέχον ορό απηλλαγμένο αντισώματος αφθώδους πυρετού και τα τρυβλία σφραγίζονται. Τα τρυβλία επωάζονται στους 37 °C. Οι μονοκυτταρικές στοιβάδες είναι κανονικά σύγχρονες μέσα σε 24 ώρες. Το ΚΠΣ έχει συνήθως εξελιχθεί αρκετά σε 48 ώρες για μια μικροσκοπική ανάγνωση της δοκιμής. Κατά το χρόνο αυτόν μπορεί να γίνει μία τελική μικροσκοπική ανάγνωση ή τα τρυβλία μπορούν να στερεωθούν και να χρωματισθούν για μακροσκοπική ανάγνωση, για παράδειγμα χρησιμοποιώντας αλατούχο διάλυμα φορμόλης 10 % και κυανό του μεθυλενίου 0,05 %.

Έλεγχοι

:

Οι έλεγχοι σε κάθε δοκιμή περιλαμβάνουν ομόλογο αντιορό γνωστού τίτλου, έναν κυτταρικό έλεγχο, έναν έλεγχο τοξικότητας ορού, έναν έλεγχο μέσου και μια τιτλοδότηση ιού από την οποία υπολογίζεται η πραγματική ποσότητα ιού στη δοκιμή.

Ερμηνεία

:

Κοιλότητες με ένδειξη ΚΠΣ θεωρούνται μολυσμένες και οι τίτλοι ουδετεροποίησης εκφράζονται ως το αμοιβαίο της τελικής αραίωσης του ορού παρόντος στα μείγματα ορού/ιού στο 50 % τελικό σημείο, υπολογιζόμενο σύμφωνα με τη μέθοδο Spearman-Karber. (Karber, G., 1931, Archiv fuer Experimentelle Pathologie und Pharmakologie, 162, 480). Οι δοκιμές θεωρούνται έγκυρες όταν η πραγματική ποσότητα του ιού που χρησιμοποιείται ανά κοιλότητα στη δοκιμή είναι μεταξύ 101,5 και 102,5 TCID50 και όταν ο τίτλος του ορού αναφοράς βρίσκεται μέσα στο διπλάσιο του αναμενόμενου τίτλου του, υπολογιζόμενου από την πορεία των αποτελεσμάτων προηγουμένων τιτλοδοτήσεων. Όταν οι έλεγχοι βρίσκονται εκτός των ορίων αυτών, οι δοκιμές επαναλαμβάνονται. Τίτλος τελικού σημείου 1/11 ή λιγότερο θεωρείται αρνητικός.

Γ. Η ανίχνευση και ποσοτική αξιολόγηση αντισώματος με Elisa πρέπει να εκτελείται σύμφωνα με την ακόλουθη πρότυπη διαδικασία:

Αντιδραστήρια

:

Αντιορός κουνελιού στο αντιγόνο 146S 7 τύπων ιού αφθώδους πυρετού (ΙΑΠ) χρησιμοποιούμενος σε προκαθορισμένη βέλτιστη συγκέντρωση σε ρυθμιστικό διάλυμα ανθρακικού/διττανθρακικού, pH 9,6. Τα αντιγόνα παρασκευάζονται από επιλεγμένες φυλές του ιού ανεπτυγμένες πάνω σε μονοκυτταρική στοιβάδα κυττάρων ΒΗΚ-21. Χρησιμοποιούνται τα ακαθάριστα υπερκείμενα και προτιτλοδοτούνται σύμφωνα σε την πρότυπη διαδικασία, αλλά χωρίς ορό, ώστε να δώσουν μια αραίωση, η οποία, μετά την προσθήκη ίσου όγκου PBST (αλατούχο ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού περιέχον 0,05 % Tween-20 και δείκτη ερυθρό φαινόλης ), θα έδινε μία τιμή οπτικής πυκνότητας μεταξύ 1,2 και 1,5. Οι ιοί μπορούν να χρησιμοποιηθούν αδρανοποιημένοι. Το PBST χρησιμοποιείται ως αραιωτικό. Παρασκευάζεται αντιορός ινδικού χοιριδίου με εμβολιασμό ινδικών χοιριδίων με αντιγόνο 146S κάθε οροτύπου. Παρασκευάζεται μία προκαθορισμένη βέλτιστη συγκέντρωση σε PBST περιέχοντας 10 % φυσιολογικό ορό βοοειδούς και 5 % φυσιολογικό ορό κουνελιού. Χρησιμοποιείται ανοσογλοβουλίνη αντιινδικού χοιριδίου από κουνέλι συζευγμένο με υπεροξειδάση αγριοραπανιού σε προκαθορισμένη βέλτιστη συγκέντρωση σε PBST περιέχοντας 10 % φυσιολογικό ορό βοοειδούς και 5 % φυσιολογικό ορό κουνελιού. Οι δοκιμαστικοί οροί αραιώνονται σε PBST.

Διαδικασία:

Τα τρυβλία αναγιγνώσκονται φασματοφωτομετρικά στα 492 nm πάνω σε όργανο ανάγνωσης Elisa συνδεδεμένο με μικροϋπολογιστή.

Έλεγχοι

:

Για κάθε αντιγόνο που χρησιμοποιείται, 40 κοιλότητες δεν περιέχουν ορό αλλά αντιγόνο αραιωμένο σε PBST. Μια διπλή διπλασιαζόμενη σειρά αραίωσης ομόλογου αντιορού αναφοράς από βοοειδές. Μια διπλή διπλασιαζόμενη σειρά αραίωσης αρνητικού ορού βοοειδούς.

Ερμηνεία

:

Οι αντισωματικοί κύκλοι εκφράζονται ως η τελική αραίωση του δοκιμαστικού ορού που δίνει 50 % της μέσης τιμής απορρόφησης (OD) που καταγράφεται στις κοιλότητες ελέγχου του ιού όταν δεν υπάρχει δοκιμαστικός ορός. Τίτλοι μεγαλύτεροι από 1/40 θεωρούνται θετικοί. Αναφορές: Hamblin C.

Παραπομπές

:

Barnett ITR and Hedger RS (1986): «A new enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies against foot-and-mouth disease virus. Journal of Immunological Methods, 93», 115 έως 121.11.

A. Η δοκιμή αδρανοποίησης ορού πρέπει να εκτελείται σύμφωνα με την ακόλουθη πρότυπη διαδικασία:

Ορός

:

Όλοι οι οροί αδρανοποιούνται με θέρμανση στους 56 °C επί 30 λεπτά πριν χρησιμοποιηθούν.

Διαδικασία

:

Η δοκιμή ουδετεροποίησης σταθερού ιού-μεταβλητού ορού χρειάζεται Vero ή άλλο ευαίσθητο κυτταρικό σύστημα. Ο ιός της ασθένειας του Aujesky χρησιμοποιείται σε 100 TCID50 ανά 0,025 ml. δείγματα αδρανοποιημένου, μη αραιωμένου ορού αναμειγνύονται με ίσο όγκο (0,025 ml) αιωρήματος ιού. Τα μείγματα ιού/ορού επωάζονται επί δύο ώρες στους 37 °C στα τρυβλία μικροτιτλοδότησης πριν προστεθούν τα κατάλληλα κύτταρα. Τα κύτταρα χρησιμοποιούνται σε συγκέντρωση τέτοια, ώστε να σχηματίζεται μία πλήρης μονοκυτταρική στοιβάδα ύστερα από 24 ώρες.

Έλεγχοι

:

i) δοκιμή μολυσματικότητας ιού, ii) έλεγχοι τοξικότητας ορού, iii) έλεγχοι μη εμβολιασμένης κυτταροκαλλιέργειας, iv) αντιοροί αναφοράς.

Ερμηνεία

:

Τα αποτελέσματα της δοκιμής ουδετεροποίησης και ο τίτλος του ιού που χρησιμοποιείται στη δοκιμή καταγράφονται ύστερα από επώαση τριών έως επτά ημερών στους 37 °C. Τίτλοι ορού μικρότεροι από 1/2 (μη αραιωμένος ορός) θεωρούνται αρνητικοί.

Β. Οποιαδήποτε άλλη δοκιμή αναγνωρίζεται στο πλαίσιο της απόφασης 2001/618/ΕΚ της Επιτροπής για παροχή συμπληρωματικών εγγυήσεων όσον αφορά τη νόσο Aujeszky's για χοιροειδή που προορίζονται για ορισμένες περιοχές της επικράτειας της Κοινότητας.

1. Τα ζώα που εισάγονται στο Σαιν Πιερ και Μικελόν πρέπει να παραμείνουν σε εγκεκριμένο σταθμό καραντίνας για διάστημα τουλάχιστον 60 ημερών πριν από την εξαγωγή στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα. Η περίοδος αυτή μπορεί να αυξηθεί λόγω των απαιτήσεων δοκιμών για μεμονωμένα είδη. Επιπλέον τα ζώα πρέπει να ικανοποιούν τις ακόλουθες απαιτήσεις:

2. Οι εγκαταστάσεις καραντίνας πρέπει τουλάχιστον να ικανοποιούν τα ελάχιστα πρότυπα που ορίζονται στο παράρτημα Β της οδηγίας 91/496/ΕΟΚ και τους ακόλουθους όρους:

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: συγκριτική ενδοδερμική δοκιμή αντίδρασης χρησιμοποιώντας PPD Μ. bovis (παράγωγο κεκαθαρμένης πρωτεΐνης βοείου τύπου) και PPD Μ. avium σύμφωνα με τα πρότυπα για την παρασκευή φυματινών βοείου τύπου και avium όπως περιγράφεται στο παράρτημα Β της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ του Συμβουλίου. Η δοκιμή πρέπει να εκτελείται πίσω από την ωμοπλάτη (μασχαλιαία χώρα) σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται στο παράρτημα Β της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ.

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Ερμηνεία των δοκιμών:

η αντίδραση πρέπει να θεωρηθεί:

δ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές:

Αν ένα ζώο παρουσιάζει θετικό αποτέλεσμα στην ενδοδερμική αντίδραση σε PPD Μ. bovis, το ζώο αυτό πρέπει να απομακρυνθεί από την ομάδα και τα υπόλοιπα ζώα πρέπει να υποβληθούν εκ νέου σε δοκιμή τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη θετική δοκιμή: αυτή πρέπει να θεωρηθεί ως η πρώτη δοκιμή που περιγράφεται στο σημείο β).

Αν περισσότερα από ένα ζώα της ομάδας παρουσιάζουν θετικό αποτέλεσμα, ολόκληρη η ομάδα απορρίπτεται για εξαγωγή στην ΕΚ.

Αν ένα ή περισσότερα ζώα της ίδιας ομάδας παρουσιάζουν ασαφή αντίδραση, ολόκληρη η ομάδα υποβάλλεται εκ νέου σε δοκιμή τουλάχιστον ύστερα από 42 ημέρες, θεωρώντας τη δοκιμή αυτή ως την πρώτη δοκιμή που περιγράφεται στο στοιχείο β).

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται:

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Ερμηνεία των δοκιμών:

Θετική αντίδραση στις δοκιμές είναι αυτή που περιγράφεται στο παράρτημα Γ της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ.

δ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές:

Τα ζώα που παρουσιάζουν θετικό αποτέλεσμα σε μία από τις δοκιμές πρέπει να απομακρυνθούν από την ομάδα και τα υπόλοιπα ζώα πρέπει να υποβληθούν εκ νέου σε δοκιμή τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη θετική δοκιμή: αυτή πρέπει να θεωρηθεί ως η πρώτη δοκιμή που περιγράφεται στο στοιχείο β).

Μόνο τα ζώα που παρουσιάζουν αρνητικό αποτέλεσμα σε δύο διαδοχικές δοκιμές που εκτελούνται όπως περιγράφεται στο στοιχείο β) επιτρέπεται να εξαχθούν στην ΕΚ.

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: δοκιμή AGID όπως περιγράφεται στο μέρος 3 Γ του παραρτήματος Ι της απόφασης 79/542/ΕΟΚ.

Σε περίπτωση θετικής αντίδρασης, τα ζώα πρέπει να υποβληθούν σε δοκιμή με ανταγωνιστική δοκιμή ELISA όπως περιγράφεται στο μέρος 3 Γ του παραρτήματος Ι της απόφασης 79/542/ΕΟΚ για να γίνει διάκριση μεταξύ των δύο ασθενειών.

β) Χρονοδιάγραμμα:

Τα ζώα πρέπει να υποβληθούν σε δύο δοκιμές, με αρνητικά αποτελέσματα: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 21 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές:

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: διαγνωστικές δοκιμές (probang και ορολογικές εξετάσεις) χρησιμοποιώντας μεθόδους ELISA και NV σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στο μέρος 3 Γ του παραρτήματος Ι της απόφασης 79/542/ΕΟΚ.

β) Χρονοδιάγραμμα: τα ζώα πρέπει να υποβληθούν σε δύο δοκιμές, με αρνητικά αποτελέσματα: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Αν κάποιο ζώο παρουσιάζει θετικό αποτέλεσμα σε δοκιμή για ιό FMD, τότε όλα τα ζώα που βρίσκονται στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρούνται επιλέξιμα για εισαγωγή στην ΕΚ.

Σημείωση: Τυχόν ανίχνευση αντισωμάτων σε δομικές ή μη δομικές πρωτεΐνες του ιού FMD θα θεωρηθεί ως αποτέλεσμα προηγούμενης μόλυνσης από FMD ανεξάρτητα από την κατάσταση εμβολιασμού.

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: η ανταγωνιστική δοκιμή ELISA όπως περιγράφεται στο εγχειρίδιο του ΔΓΕ είναι η προβλεπόμενη δοκιμή για το διεθνές εμπόριο και είναι επιλεγμένη δοκιμή. Μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν η δοκιμή αδρανοποίησης ορού, ή άλλες αναγνωρισμένες δοκιμές σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα αντίστοιχα τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται δύο φορές: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Αν κάποιο ζώο παρουσιάζει θετικό αποτέλεσμα σε δοκιμή για ιό πανώλης των βοοειδών, τότε όλα τα ζώα που βρίσκονται στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρούνται επιλέξιμα για εισαγωγή στην ΕΚ.

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: ELISA, δοκιμή αδρανοποίησης ορού, ή άλλη αναγνωρισμένη δοκιμή σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα αντίστοιχα τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται δύο φορές: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Αν κάποιο ζώο παρουσιάζει θετικό αποτέλεσμα σε δοκιμή για ιό φυσαλιδώδους στοματίτιδας, τότε όλα τα ζώα που βρίσκονται στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρούνται επιλέξιμα για εισαγωγή στην ΕΚ.

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: ELISA, δοκιμή αδρανοποίησης ορού, ή άλλη αναγνωρισμένη δοκιμή σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα αντίστοιχα τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται δύο φορές: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Αν κάποιο ζώο εμφανίζει σύμπτωμα έκθεσης σε φορέα πυρετού της κοιλάδας του Rift, τότε όλα τα ζώα που βρίσκονται στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρούνται επιλέξιμα για εισαγωγή στην ΕΚ.

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: ορολογικές εξετάσεις χρησιμοποιώντας ELISA, δοκιμή αδρανοποίησης ορού, ή άλλη αναγνωρισμένη δοκιμή σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα αντίστοιχα τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται δύο φορές: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Αν κάποιο ζώο εμφανίζει σύμπτωμα έκθεσης σε λοιμώδη οζώδη δερματίτιδα, ολόκληρη η ομάδα απορρίπτεται για εξαγωγή στην ΕΚ.

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: ELISA, δοκιμή ουδετεροποίησης ιού, δοκιμή ανοσοφθορισμού, ή άλλη αναγνωρισμένη δοκιμή.

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται δύο φορές: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Αν κάποιο ζώο εμφανίζει σύμπτωμα έκθεσης σε φορέα αιμορραγικού πυρετού της Κριμαίας/του Κονγκό, το εν λόγω ζώο πρέπει να απομακρυνθεί από την ομάδα.

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: το παράσιτο μπορεί να εντοπιστεί σε συμπυκνωμένα δείγματα αίματος σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα αντίστοιχα τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται δύο φορές: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Αν ανιχνευθεί Τρυπανόσωμα evansi σε κάποιο ζώο, το εν λόγω ζώο πρέπει να απομακρυνθεί από την ομάδα. Η υπόλοιπη ομάδα πρέπει στη συνέχεια να υποβληθεί σε εσωτερική και εξωτερική αντιπαρασιτική αγωγή χρησιμοποιώντας κατάλληλους παράγοντες οι οποίοι είναι αποτελεσματικοί κατά του Τρυπανοσώματος evansi.

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: Η ανίχνευση ιικού DNA είναι η προτιμώμενη μέθοδος, βάσει εντοπισμού με ανοσοφθορισμό ή ανοσοκυτταροχημεία χρησιμοποιώντας τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα αντίστοιχα τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται δύο φορές: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Αν κάποιο ζώο εμφανίζει σύμπτωμα έκθεσης σε MCF, ολόκληρη η ομάδα απορρίπτεται για εξαγωγή στην ΕΚ.

α) Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: AGID ή παρεμποδιστική ELISA, σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στο εγχειρίδιο του ΔΓΕ.

β) Χρονοδιάγραμμα: οι δοκιμές στα ζώα πραγματοποιούνται δύο φορές: η πρώτη εντός δύο ημερών μετά την άφιξή τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την πρώτη δοκιμή.

γ) Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: τα ζώα που παρουσιάζουν θετικό αποτέλεσμα στη δοκιμή πρέπει να απομακρυνθούν από την ομάδα και τα υπόλοιπα ζώα πρέπει να υποβληθούν εκ νέου σε δοκιμή τουλάχιστον 21 ημέρες μετά την πρώτη θετική δοκιμή: αυτή πρέπει να θεωρηθεί ως η πρώτη δοκιμή που περιγράφεται στο στοιχείο β).