„1. DETERMINAREA AMIDONULUI
METODA POLARIMETRICĂ
1. Obiectiv și domeniu de aplicare
Prin această metodă se pot determina nivelurile amidonului și produselor de degradare a amidonului cu masă moleculară mare din furaje pentru a se verifica conformitatea cu Directiva 86/174/CEE a Comisiei și Directiva 96/25/CE a Consiliului.
2. Principiu
Această metodă cuprinde două determinări. La prima, eșantionul este tratat cu acid clorhidric diluat atunci când este fierbinte. După limpezire și filtrare, rotația optică a soluției se măsoară prin polarimetrie.
La cea dea doua, eșantionul este extras cu 40 % etanol. După acidificarea filtratului cu acid clorhidric, după limpezire și filtrare, rotația optică se măsoară ca la prima determinare.
Diferența dintre cele două măsurători, înmulțită cu un anumit coeficient, dă conținutul de amidon al eșantionului.
3. Reactivi
3.1. 25 % (g/g) acid clorhidric, d: 1,126 g/ml.
3.2. 1,128 % (g/v) acid clorhidric.
Concentrația se verifică prin titrare folosind o soluție de hidroxid de sodiu 0,1 mol/litru în prezența a 0,1 % (g/v) roșu de metil în 94 % (v/v) etanol. 10 ml = 30.94 ml de NaOH 0.1 mol/litru.
3.3. Soluția Carrez I: se dizolvă 21,9 g de acetat de zinc
și 3 g de acid acetic glacial în apă. Se completează cu apă până la 100 ml.
3.4. Soluția Carrez II: se dizolvă 10,6 g de ferocianură de potasiu
în apă. Se completează cu apă până la 100 ml.
3.5. 40 %(v/v) etanol, d: 0,948 g/ml la 20 °C.
4. Aparatura
4.1. Un balon Erlenmeyer de 250 ml cu îmbinare de sticlă șlefuită și cu condensator cu reflux.
4.2. Polarimetru sau zaharimetru.
5. Procedura
5.1. Prepararea eșantionului
Se zdrobește eșantionul până când devine suficient de fin pentru a trece printr-o sită cu ochiuri rotunde de 0,5 mm.
5.2. Determinarea rotației optice totale (P sau S) (a se vedea observația 7.1)
Se cântăresc 2,5 g din eșantionul zdrobit și se pune într-un balon gradat de 100 ml. Se adaugă 25 ml de acid clorhidric (3.2), se agită pentru a obține o distribuție egală a eșantionului test și se adaugă încă 25 ml de acid clorhidric (3.2). Se introduce balonul într-o baie de apă care fierbe, agitând puternic și permanent în primele 3 minute pentru a împiedica formarea de aglomerări. Cantitatea de apă din baia de apă trebuie să fie suficientă pentru ca baia să rămână la punctul de fierbere atunci când se introduce balonul. Balonul nu trebuie scos din baie în timp ce este agitat. După exact 15 minute, se scoate din baie, se adaugă 30 ml de apă rece și se răcește imediat la 20 °C.
Se adaugă 5 ml de soluție Carrez I (3.3) și se agită timp de un minut. Apoi se adaugă 5 ml de soluție Carrez II (3.4) și se agită din nou timp de un minut. Se adaugă apă, se amestecă și se filtrează. Dacă filtratul nu este perfect limpede (ceea ce se întâmplă rar), se repetă procedura folosind o cantitate mai mare din soluțiile Carrez I și II, de exemplu 10 ml.
Se măsoară rotația optică a soluției într-un tub de 200 mm cu polarimetrul sau zaharimetrul.
5.3. Determinarea rotației optice (P′ sau S′) a substanțelor solubile în 40 % etanol
Se cântăresc până la ultimul mg 5 g din eșantion, se pune într-un balon gradat de 100 ml și se adaugă aproximativ 80 ml de etanol (3.5) (a se vedea observația 7.2). Se lasă balonul să stea timp de o oră la temperatura camerei; în acest timp se agită puternic de 6 ori, astfel încât eșantionul test să fie perfect amestecat cu etanolul. Se completează cu etanol (3.5), se amestecă și se filtrează. Se toarnă cu pipeta 50 ml din filtrat (= 2,5 g din eșantion) într-un balon Erlenmeyer de 250 ml, se adaugă 2,1 ml de acid clorhidric (3.1) și se agită puternic. Se adaptează un condensator cu reflux la balonul Erlenmeyer și se scufundă acesta din urmă într-o baie de apă în fierbere. După exact 15 minute, se scoate balonul Erlenmeyer din baie, se transferă conținutul într-un balon gradat de 100 ml, clătind cu puțină apă rece și se răcește la 20 °C. Se limpezește folosind soluțiile Carrez I (3.3) și II (3.4), se completează cu apă, se amestecă, se filtrează și se măsoară rotația optică așa cum se indică în al doilea și al treilea paragraf de la punctul 5.2.
6. Calcularea rezultatelor
Conținutul de amidon (%) se calculează după cum urmează:
6.1. Măsurarea cu polarimetrul
|
P |
= |
rotația optică totală în grade unghiulare |
||||||||||||||
|
P′ |
= |
rotația optică în grade unghiulare a substanțelor solubile în 40 % (V/V) etanol |
||||||||||||||
|
|
= |
rotația optică specifică a amidonului pur. Valorile numerice acceptate convențional ca factor sunt următoarele
|
6.2. Măsurători cu zaharimetrul
|
S |
= |
rotația optică totală în grade zaharimetrice |
||||||
|
S′ |
= |
rotația optică în grade zaharimetrice a substanțelor solubile în 40 % (V/V) etanol |
||||||
|
N |
= |
greutatea (g) zaharozei în 100 ml de apă provocând o rotație optică de 100 grade zaharimetrice dacă se măsoară folosind un tub de 200 mm
|
||||||
|
|
= |
rotația optică specifică a amidonului pur (a se vedea 6.1) |
6.3. Repetabilitatea
Diferența dintre rezultatele a două determinări paralele efectuate pe același eșantion nu trebuie să depășească 0,4 în valoare absolută pentru un conținut de amidon mai mic de 40 % și 1,1 % în cazul conținuturilor de amidon egale sau mai mari de 40 %
7. Observații
|
7.1. |
În cazul în care eșantionul conține peste 6 % carbonați, calculat sub formă de carbonat de calciu, aceștia trebuie distruși prin tratarea cu o cantitate absolut adecvată de acid sulfuric diluat înaintea procedurii de determinare a rotației optice totale. |
|
7.2. |
În cazul produșilor cu un conținut mare de lactoză, cum ar fi serul de lapte praf sau laptele praf degresat, se procedează după cum urmează după ce se adaugă 80 ml de etanol (3.5). Se adaptează un condensator cu reflux la balon și acesta se introduce într-o baie de apă la 50 °C pentru 30 de minute. Se lasă să se răcească și se continuă analiza, așa cum se indică la punctul 5.3. |
|
7.3. |
Se știe că, în cazul în care sunt prezente în cantități semnificative în furaje, următoarele materiale furajere sporesc interfrențele atunci când se determină conținutul de amidon prin metoda polarimetrică și de aceea pot fi obținute rezultate incorecte:
|