ANNESS

tar-Regolament ta' l-Kummissjoni tal-11 ta’ Frar 2008 li jistabbilixxi l-valuri fissi ta' l-importazzjoni għad-determinazzjoni tal-prezz ta' dħul ta' ċertu frott u ħaxix

(EUR/100 kg)
Kodiċi NM	Kodiċi tal-pajjiż terz (1)	Valur fiss ta' l-importazzjoni
0702 00 00	IL	143,2
	MA	45,8
	MK	36,8
	TN	111,3
	TR	91,9
	ZZ	85,8
0707 00 05	EG	208,2
	JO	202,1
	MA	175,9
	TR	140,0
	ZZ	181,6
0709 90 70	MA	48,0
	TR	140,3
	ZZ	94,2
0709 90 80	EG	349,4
	ZZ	349,4
0805 10 20	EG	48,2
	IL	55,1
	MA	54,0
	TN	50,2
	TR	70,8
	ZZ	55,7
0805 20 10	IL	106,6
	MA	114,6
	TR	72,2
	ZZ	97,8
0805 20 30 , 0805 20 50 , 0805 20 70 , 0805 20 90	CN	41,9
	EG	83,3
	IL	73,1
	JM	97,3
	MA	131,7
	TR	80,4
	ZZ	84,6
0805 50 10	EG	78,7
	IL	114,8
	MA	77,4
	TR	123,0
	ZZ	98,5
0808 10 80	CA	102,8
	CN	88,7
	MK	40,9
	US	114,4
	ZZ	86,7
0808 20 50	CN	68,2
	US	119,3
	ZA	106,6
	ZZ	98,0

---

(1)  In-nomenklatura tal-pajjiżi ffissata mir-Regolament tal-Kummissjoni (KE) Nru 1833/2006 (ĠU L 354, 14.12.2006, p. 19). Il-kodiċi “ ZZ ” jirrappreżenta “oriġini oħra”.

ANNESS

METODU ENŻIMATIKU GĦAD-DETERMINAZZJONI TAL-KONTENUT TAL-LAMTU FIL-PREPARAZZJONIJIET UŻATI FL-GĦALF TA' L-ANNIMALI BL-UŻU TAL-KROMATOGRAFIJA TA' LIKWIDI BI PRESSJONI GĦOLJA (HPLC)

1.   Skop

Dan il-metodu jiddeskrivi l-kalkolu enżimatiku tal-kontenut tal-lamtu fl-għalf ta' l-annimali. Il-kontenut tal-lamtu hu mnissel mill-kalkolu kwantitattiv tal-glukows wara l-brejkdawn enżimatiku tal-lamtu preżenti fi glukows. Il-glukows kollu mkejjel hu kkunsidrat li jkun ġie mil-lamtu, li jkun hemm fil-kampjun.

2.   Definizzjonijiet

F'dan il-metodu, ikun determinat il-kontenut tal-lamtu u brejkdawn tal-prodotti b'massa molekolari għolja, li ma jinħallux f'40 % etanol. Il-kontenut tal-lamtu hu espress f'% (m/m).

3.   Prinċipju

Il-kampjuni huma omoġenizzati bit-tħin. Il-kampjun jinħasel b'40 % etanol biex ikunu eliminati zokkrijiet li jinħallu u prodotti li jinħallu tad-dekompożizzjoni tal-lamtu.

L-enżima termostabbli alfa-amilażi hija miżjuda mas-sospensjoni. Din l-enżima tkisser il-lamtu f'temperatura ta' 100 °Ċ fi ktajjen iżgħar, kemm jekk il-lamtu ikun qiegħed jinħall jew le. Ċapep kbar ta' lamtu jitkissru bil-mod ħafna.

Għalhekk hu neċessarju li l-kampjuni jinħallu għal kollox jew ikunu preżenti f'forma ta' sospensjoni li jkollha biċċiet sħaħ żgħar ħafna.

Imbagħad tiżdied it-tieni enżima amiloglukosidażi, li tidrolizza l-ktajjen iddegredati tal-glukows fi glukows f'temperatura ta' 60 °Ċ.

Wara li jiċċara l-likwidu fejn il-proteini, ix-xaħmijiet u l-fdalijiet preżenti jkunu twarrbu wara t-tisfija, tinkiseb soluzzjoni ċara li tkun tista' tintuża għall-HPLC.

Issir separazzjoni taz-zokkrijiet preżenti mill-HPLC.

4.   Reaġenti u materjali oħra

Uża reaġenti ta' grad analitiku rikonoxxut u ilma demineralizzat.

4.1.   Etanol 40 % vol. fl-ilma

4.2.   Glukows, min. 99 %.

4.3.   Soluzzjoni ta' Amiloglukosidażi (1,4-alfa-D-Glukan glukoidrolażi) mill-Aspergillus niger (attivita' enżimatika > 5 000 U/ml). Ħażna f'temperatura ta' madwar 4 °C

Alternattivament, jista' jintuża wkoll trab ta' l-amiloglukosidażi.

4.4.   Alfa-amilażi termostabbli (1,4-alfa-D-Glukan glukoidrolażi). Ħażna f'temperatura ta' madwar 4 °Ċ.

4.5.   Aċetat deidrat taż-żingu, p.a.

4.6.   Eksaċjanuferrat tal-potassju (II) (Potassium hexacyanoferrate (II) (K4[Fe(CN)]6.3H2O), ekstra pur.

4.7.   Aċetat tas-sodju anidru, p.a..

4.8.   Aċtu aċetiku glaċjali, 100 % (v/v).

4.9.   Bafer ta' l-aċetat tas-sodju (0,2 mol/l).

Iżen 16,4 gramma ta' aċetat tas-sodju (4.7) f'biker tal-ħġieġ. Ħoll fl-ilma u laħlaħ ġo flixkun volumetriku ta' 1 000 ml. Iddilwixxi bl-ilma sal-marka u rranġa l-pH għall-4,7 b’aċtu aċetiku (bl-użu ta' strument tal-pH (5.11)). Din is-soluzzjoni tista' tintuża sa massimu ta' 6 xhur f'temperatura tal-ħażna ta' 4 °Ċ .

4.10.   Soluzzjoni ta' l-amiloglukosidażi (attivita' enżimatika > 250 U/ml)

Ipprepara soluzzjoni ta' 5 ml ta' soluzzjoni ta' amiloglukosidażi (4.3) jew 660 mg ta' trab ta' amiloglukosidażi b'volum finali ta' 100 ml billi jintuża bafer ta' l-aċetat tas-sodju (4.9). Ipprepara mill-ewwel.

4.11.   Soluzzjoni ta' referenza.

Ipprepara soluzzjonijiet tal-glukows fl-ilma, kif użat konvenzjonalment fl-analiżi HPLC.

4.12.   Reaġent għat-tisfija/l-iċċarar (Carrez I).

Ħoll 219,5 gramma ta' aċetat taż-żingu (4.5) fl-ilma f'biker tal-ħġieġ. Laħlaħ ġo flixkun volumetriku ta' l-1 000 ml, żid 30 ml aċtu aċetiku (4.8). Ħawwad sew u żid bl-ilma. Din is-soluzzjoni tista' tintuża sa massimu ta' 6 xhur meta maħżuna f'temperatura ambjentali ta' ġewwa.

Reaġenti oħra tat-tisfija, ekwivalenti għal soluzzjoni ta' Carrez, jistgħu jintużaw.

4.13.   Reaġent għat-tisfija/l-iċċarar (Carrez II)

Ħoll 106,0 gramma Eksaferroċjanur tal-potassju (II) (4.6) (potassium hexacyanoferrate (II)) fl-ilma f'biker tal-ħġieġ. Laħlaħ ġo flixkun volumetriku ta' l-1 000 ml. Ħallat sew u żid bl-ilma. Din is-soluzzjoni tista' tintuża sa massimu ta' 6 xhur meta maħżuna f'temperatura ambjentali ta' ġewwa.

Reaġenti oħra tat-tisfija, ekwivalenti għal soluzzjoni ta' Carrez, jistgħu jintużaw.

4.14.   Fażi mobbli:

Hija ppreparata fażi mobbli li tkun tista' tintuża konvenzjonalment fl-analiżi HPLC taz-zokkor. Fil-każ ta' użu tal-kolonna bil-ġel tas-silika aminopropil eż., fażi mobbli komuni hi taħlita ta' ilma HPLC iggradat u aċetonitrile.

5.   Apparat

5.1.   Apparat tal-laboratorju standard tal-ħġieġ.

5.2.   Ċentrifuga li tagħti 1 000 g jew aktar (ikkalkulata fiċ-ċentru tat-tubu).

5.3.   Tubi tal-ħġieġ tal-100 ml għaċ-ċentrifuga.

5.4.   Aġitatur manjetiku.

5.5.   Vireg manjetiċi.

5.6.   Filtri skanalati, eż. 185 mm.

5.7.   Filtri tas-siringi, 0,45 μm, adattati għal soluzzjonijiet milwiema.

5.8.   Vjali għall-ikkampjunar adattati għall-kampjunatur awtomatiku HPLC.

5.9.   Fliexken volumetriċi tal-100 ml.

5.10.   Siringi tal-plastik, 5 u 10 ml.

5.11.   Miter tal-pH.

5.12.   Banju ta' l-ilma bit-termostat, li jista' jkun irregolat għal 60 °Ċ u 100 °Ċ.

5.13.   Pjanċi għat-tisħin bl-aġitaturi manjetiċi.

5.14.   Apparat ta' l-HPLC.

5.14.1.   Pompa, tajba għall-pulsazzjoni-żero.

5.14.2.   Kampjunatur awtomatiku.

5.14.3.   Kolonna u prekolonna, adattati għall-analiżi taz-zokkor.

5.14.4.   Forn vertikali, firxa ta' temperatura bejn dik ambjentali ta' ġewwa u l-40 °Ċ.

5.14.5.   Ditekter, tajjeb għall-analiżi taz-zokkor, eż., Ditekter għall-Indiċi Refrattiv.

5.14.6.   Sistema ta' integrazzjoni.

6.   Proċedura

6.1.   Ġenerali

Il-kampjuni huma analizzati wieħed wieħed.

6.2.   Preparazzjoni tal-kampjun għall-diversi tipi ta' prodotti

Il-prodott huwa omoġenizzat bit-tħin.

6.3.   Porzjon kampjun

Il-kontenut tal-lamtu hu stmat bl-għajnuna tad-dikjarazzjoni ta' l-ingredjenti. L-ammont tal-kampjun (miżun sa 0.1 mg eżatt) jista' jkun stmat minn:

6.4.   Id-determinazzjoni vojta

Il-vojt hu determinat billi ssirlu analiżi kompluta (kif deskritta f'6.5), mingħajr ma jiżdiedlu kampjun. Ir-riżultat tad-determinazzjoni vojta jintuża fil-kalkolu tal-kontenut tal-lamtu (7.1).

6.5.   L-analiżi

6.5.1.   It-tħejjija tal-kampjuni

Ħallat il-kampjun billi ċċaqilqu jew tħawdu. Il-porzjon magħżul għall-eżami (6.3) jintiżen f'tubu ċentrifugu (5.3) u jiżdiedu 50 ml etanol 40 % (4.1). Ħawwad fl-aġitatur manjetiku għall-20 minuta f'temperatura ambjentali ta' ġewwa. Ħalli l-virga manjetika fit-tubu u ċċentrifuga għal ħames minuti. Onfoħ bil-galbu u neħħi l-fażi likwida (eż., b'pipetta Pasteur). Irrepeti din il-proċedura ta' estrazzjoni b'25 ml etanol għal darbtejn (4.1). Ittrasferixxi r-residwu ġo flixkun volumetriku ta' 100 ml (5.9) b'madwar 70 ml ilma. Wara li tħoll jew tissospendi, żid 100 mikrolitru ta' alfa-amilażi termostabbli (4.4) u saħħan f'temperatura ta' 100 °Ċ għall-siegħa, eż. f'banju ta' l-ilma (5.12). Berred għal temperatura ta' 60 °Ċ f'banju ta' l-ilma, u żid 5 ml ta' soluzzjoni ta' amiloglukosidażi (4.10). Poġġi l-flixkun għall-30 min ġo banju ta' l-ilma f'temperatura ta' 60 °Ċ. Berred għal temperatura ambjentali ta' ġewwa, iċċara l-kampjun billi żżid 1 ml Carrez I (4.12), ħawwad u mbagħad żid 1 ml Carrez II (4.13). Carrez I u II jistgħu jkunu miżjuda qabel jew wara t-tberrid. Iddilwixxi bl-ilma sal-marka, omoġenizza u ffiltra s-soluzzjoni b'filtru skanalat (5.6). Iġbor l-estratt tal-kampjun.

6.5.2.   L-ipproċessar ta' l-estratti tal-kampjuni

Iffiltra l-estratti minn filtru tad-diska (5.7) b'siringa (5.10) li kienet imlaħalħa qabel bl-estratt. Iġbor il-filtrati ġo vjali (5.8).

Nota: Il-filtru tad-diska jista' jintuża ħafna drabi. Irid jitlaħlaħ bl-estratt li jmiss biex tkun evitata kontaminazzjoni ta' l-estratt ta' qabel.

6.6.   Il-kromatografija

L-HPLC hija magħmula konvenzjonalment għall-analiżi taz-zokkrijiet. Peress li l-kampjuni huma estratti bl-etanol/ilma, il-glukows hu z-zokkor prinċipali li jrid ikun analizzat. Jekk l-analiżi HPLC turi traċċi ta' maltosju, din tista' tindika konverżjoni mhux kompluta tal-lamtu.

7.   Kalkolu u tifsira tar-riżultati

7.1.   Il-kalkolu tar-riżultati HPLC

Mir-riżultati ta' l-analiżi HPLC, il-kontenut (%, m/m) tal-glukows hu kkalkulat. Is-soluzzjoni enżimatika ta' l-amiloglukosidażi (4.3) hi stabilizzata bil-glukows. Barra minn hekk, l-alfa-amilażi termostabbli (4.4) hi stabilizzata bis-sukrows, li tista' tkun parzjalment mibdula fi glukows b'attivita' ta' l-invertażi ta' l-amiloglukosidażi. Għalhekk, il-kejl tal-konċentrazzjoni tal-glukows (%, m/v) irid ikun ikkoreġut għall-konċentrazzjoni tal-glukows (%, m/v) fil-vojt. Il-kontenut tal-glukows (%, m/m) ikkoreġut għall-vojt huwa imbagħad ikkalkulat mill-korrezzjoni tal-konċentrazzjoni tal-glukows, il-piż tal-kampjun u l-ikkalibrar mas-soluzzjonijiet ta' referenza (4.11).

7.2.   Il-kalkolu tal-kontenut tal-lamtu

Il-kontenut tal-lamtu (%, m/m) hu kkalkulat mill-kontenut tal-glukows (%, m/m) wara l-korrezzjoni tal-vojt.

Kontenut tal-lamtu = 0,9 * korrezzjoni tal-glukows

8.   Preċiżjoni

8.1.   Test interlaboratorjali

Id-dettalji tat-test interlaboratorjali fuq il-preċiżjoni tal-metodu huma miġbura fil-qosor f'8.4.

8.2.   Ripetibbiltà

Id-differenza assoluta bejn żewġ riżultati tat-testijiet singoli indipendenti, miksuba bl-użu ta' l-istess metodu fuq materjal identiku għal test fl-istess laboratorju mill-istess operatur bl-użu ta' l-istess apparat f'perijodu qasir ta' żmien, tkun f'mhux aktar minn 5 % tal-każijiet akbar mil-limitu tar-ripetibbiltà ta' 1,1 % (m/m). Il-limitu ta' ripetibbilta' hu mnissel minn riżultati miġbura minn test interlaboratorjali (ara 8.4).

8.3.   Riproduċibilita'

Id-differenza assoluta bejn żewġ riżultati tat-testijiet singoli, miksuba bl-użu ta' l-istess metodu fuq materjal identiku fl-laboratorji differenti minn operaturi differenti bl-użu ta' apparat differenti, tkun f'mhux aktar minn 5 % tal-każijiet akbar mill-limitu tar-riproduċibbilita' ta' 3,7 % (m/m). Il-limitu ta' riproduċibbilita' hu mnissel minn riżultati miġbura minn test interlaboratorjali (ara 8.4).

8.4.   Riżultati tat-test interlaboratorjali

Test interlaboratorjali kien sar fl-2005 u l-2006 bil-parteċipazzjoni tal-laboratorji Ewropej tad-Dwana. Dan it-test twettaq skond l-ISO 5725 u l-protokoll IUPAC (W. Horwitz, Pure and Applied Chemistry, vol. 67, 1995, p. 331-343). Id-data ta' preċiżjoni mogħtija fit-tabella hawn taħt:

Riżultati ta' statistika mill-istudju interlaboratorjali

	Kampjun
	1	2	3	4	5
L-għadd ta' laboratorji wara l-eliminazzjoni ta' dawk barra l-limitu	25	26	26	25	24
L-għadd ta' riżultati aċċettati	50	52	52	50	48
Kontenut medju tal-lamtu (%, m/m)	31,2	14,4	25,1	12,9	27,8
Devjazzjoni standard ta’ ripetibbiltà sr (%, m/m)	0,4	0,3	0,6	0,2	0,3
Limitu ta' ripetibbilità r (%, m/m)	1,1	0,8	1,7	0,7	0,9
Devjazzjoni standard ta’ riproduċibiltà sR (%, m/m)	1,7	0,8	1,7	0,9	1,3
Limitu ta' riproduċibilità R (%, m/m)	4,8	2,2	4,7	2,5	3,7
Kampjuni 1 : għalf niexef tal-klieb 2 : għalf niexef tal-qtates 3 : għalf niexef tal-qtates (kampjun 2) biż-żjieda tal-lamtu 4 : għalf niexef tal-qtates (kampjun 2) biż-żjieda tal-polpa tal-pitravi 5 : għalf kummerċjali ta' annimali domestiċi