▼B

---

L-ANNESS

ID-DESKRIZZJONI TAL-METODI ANALITIĊI TAR-RIFERIMENTl-qawwa alkolika skond il-volum
I	Kif jiġu stabbiliti s-sustanzi volatili u l-metanol L-Appendiċi I : It-Tħejjija tad-distillat L-Appendiċi II : Il-Kejl tad-densità tad-distillat — Il-Metodu A = Il-Piknometrija — Il-Metodu B = Id-Densimetrija elettronika — Il-Metodu Ċ = Id-Densimetrija bl-użu tal-miżien idrostatiku
II	Kif jiġi stabbilit l-estratt niexef totali bil-gravimetrija
III.	Kif jiġu stabbiliti s-sustanzi volatili u l-metanol
III.1	Rimarki Ġenerali
III.2	Il-Konġeneri volatili:
III.3	l-aldeidi, l-alkoli ogħla, l-etil aċetat u l-metanol (kromatografija bil- gass)
IV.	L-Aċidità volatili (p.m.)
V.	L-aċidu idroċjaniku ►M1  —————p.m.————— ◄
VI.	L-Anetol ►M1  —————p.m.————— ◄
VII	L-Aċidu gliċirriżiku ►M1  —————p.m.————— ◄
VIII	It-tipi totali taz-Zokkor ►M2  —————p.m.————— ◄
IX.	L-Isfar tal-bajd ►M1  —————p.m.————— ◄
▼M2
X.	Id-determinazzjoni tal-komposti tal-injam: furfural, 5-idrossimetilfurfural, 5-metilfurfural, vanillina, siringaldeid, koniferaldeid, sinapaldeid, aċidu galliku, aċidu ellaġiku, aċidu vanilliku, aċidu sirinġiku u skopoletina
▼M3
XI.	Id-determinazzjoni tal-kontenut 14C fl-etanol
▼B

I.   KIF TIĠI STABBILITA L-QAWWA ALKOLIKA SKOND IL-VOLUM FIX-XORB SPIRITUŻ

Introduzzjoni

Il-metodu tar-riferiment jinkludi żewġ Appendiċi:

L-appendiċi I : It-tħejjija tad-distillat

L-Appendiċi II : Il-kejl tad-densità tad-distillat

1.   L-Iskop

Il-metodu huwa xieraq għalbiex jistabbilixxi l-qawwa alkolika reali skond il-volum fix-xorb spirituż.

2.   Ir-Riferimenti Normattivi

L-ISO 3696:1987: L-ilma għall-użu analitiku fil-laboratorju - l-ispeċifikazzjonijiet u l-metodi tat-

3.   It-termini u d-definizzjonijiet

3.1.    It-temperatura tar-riferiment:

It-temperatura tar-riferiment sabiex tiġi stabbilita l-qawwa alkolika skond il-volum, id-densità u l-gravità speċifika tax-xorb spirituż hija 20°Ċ.

Nota 1:

L-espressjoni “f’temperatura ta’ t°Ċ” hija riżervata għal meta jiġu stabbiliti kollha (id-densità jew il-qawwa alkolika skond il-volum) espressi f’temperatura għajr it-temperatura tar-riferiment ta’ 20°Ċ.

3.2.    Id-Densità:

Id-densità hija l-massa għal kull unità tal-volum in vacuo fix-xorb spirituż f’temperatura ta’ 20 °Ċ. Hija espressa f’kilogrammi għal kull metru kubu u s-simbolu tagħha huwa ñ20°Ċ jew ñ20.

3.3.   Il-Gravità speċifika:

Il-gravità speċifika hija l-proporzjon, espress bħala numru deċimali, tad-densità tax-xorb spirituż f’temperatura ta’ 20 °Ċ mad-densità ta’ l-ilma fl-istess temperatura. Hija murija bis-simbolu d20 °Ċ/20 °Ċ jew d20/20, jew sempliċement d meta ma jkunx hemm l-ebda possibbiltà ta’ konfuzjoni. Il-karatteristika li kienet imkejla trid tkun speċifikata fuq iċ-ċertifikat ta’ l-assaġġ bl-użu biss tas-simboli definiti hawn fuq.

Nota 2:

Huwa possibbli li tinkiseb il-gravità speċifika mid-densità ñ20 f’temperatura ta’ 20 °Ċ:

p20 = 998,203 × d20/20 = p20/998,203

fejn id-998,203 huwa d-densità ta’ l-ilma f’temperatura ta’ 20 °Ċ.

3.4.    Il-qawwa alkolika reali skond il-volum:

Il-qawwa alkolika reali skond il-volum tax-xorb spirituż hija egwali għan-numru ta’ litri ta’ l-etil alkol li jkun jinsab f’100 l ta’ taħlita ta’ l-ilma ma’ l-alkohol li jkollha l-istess densità bħall-alkol jew l-ispirtu wara d-distillazzjoni. Il-valuri tar-riferiment għall-qawwa ta’ l-alkol skond il-volum ( % vol) f’temperatura ta’ 20 °Ċ kontra d-densità f’temperatura ta’ 20 °Ċ għal taħlitiet differenti ta’ l-ilma ma’ l-alkohol li jridu jintużaw huma dawk mogħtija fit-tabella internazzjonali adottata mill-Organizzazzjoni Internazzjonali tal-Metroloġija Legali fir-Rakkommandazzjoni tagħha Nru 22.

L-ekwazzjoni ġenerali li għandha x’taqsam mal-qawwa alkolika skond il-volum u d-densità ta’ taħlita ta’ ilma ma’ l-alkol f’temperatura partikolari hija mogħtija fil-paġna 40 tal-Kapitolu 3 “Il-qawwa alkolika skond il-volum” ta’ l-Anness mar-Regolament tal-Kummissjoni (KEE) Nru 2676/90 (ĠU L 272, tat-3.10.1990, p. 1) jew fil-manwal tal-metodi ta’ l-analiżi tal-OIV (1994) (p. 17).

Nota 3:

Għall-likuri u l-kremi li tagħhom huwa diffiċli li jitkejjel il-volum bl-eżatt, irid jintiżen il-kampjun u l-qawwa alkolika tiġi kkalkolata l-ewwel skond il-massa.

Il-formola ta’ konverżjoni:

fejn

ASM = il-qawwa alkolika skond il-massa,

P20 (alkol) = 789,24 kg/m3

4.   Il-prinċipju

Wara d-distillazzjoni, il-qawwa alkolika skond il-volum tad-distillat tiġi stabbilita bil-piknometrija, id-densimetrija elettronika, jew id-densimetrija bl-użu ta’ miżien idrostatiku.

L-APPENDICI I: IT-THEJJIJA TAD- DISTILLAT

1.   L-iskop

Il-metodu huwa addattat għat-tħejjija tad-distillati li għandhom jintużaw sabiex tiġi stabbilita l-qawwa alkolika reali skond il-volum tax-xorb spirituż.

2.   Il-prinċipju

L-ispirti jiġu ddistillati għalbiex jiġu mifruda l-etil alkol u komponenti oħra volatili mill-materjal estrattiv (is-sustanzi li ma jiddistillawx).

3.   Ir-Reaġenti u l-Materjali

4.   L-apparat u t-tagħmir

L-apparat normali tal-laboratorju u b’mod partikolari dan li ġej:

Nota:

L-apparat deskritt hawn fuq huwa maħsub għal kampjun ta’ mill-inqas 200 ml. Madankollu, kampjun iżgħar (ta’ 100 ml) jista’ jiġi distillat bl-użu ta’ fjaskett iżgħar tad-distillazzjoni, sakemm jintużaw ras għal kontra t-titjir ta’ l-ilma jew mekkaniżmu ieħor li jipprevjieni t-tkaxkir ta’ l-ilma.

5.   Il-ħażna tal-kampjuni tat-test

Il-kampjuni għandhom jinħażnu f’temperatura tal-kamra qabel l-analiżi.

6.   Il-proċedura

Kumment preliminari:

6.1.	Il-verifika ta’ l-apparat tad-distillazzjoni: L-apparat użat għandu jkun kapaċi għal dan li ġej: Id-distillazzjoni ta’ 200 ml ta’ taħlita ta’ ilma ma’ l-alkol b’konċentrazzjoni magħrufa qrib il-50 % vol ma tridx tikkawża telf ta’ alkohol ta’ aktar minn 0,1 % vol.

6.2.

Ix-xorb spirituż b’qawwa alkolika taħt l-50 % vol. Kejjel 200 ml ta’ l-ispirtu fil-fjaskett volumentriku. Irreġistra t-temperatura ta’ dan il-likwidu, jew żommha f’temperatura standard (20°Ċ). Ferragħ il-kampjun fil-fjaskett tal-qiegħ ittundjat ta’ l-apparat tad-distillazzjoni u laħlaħ il-fjaskett volumetriku bi tliet alikwoti b’kull waħda ta’ madwar 20 ml ta’ ilma distillat. Żid kull alikwota ta’ l-ilma tat-tlaħliħ mal-kontenut tal-fjaskett tad-distillazzjoni. Nota: Din id-dilwita ta’ 60 ml hija bizzejjed għall-ispirti li jkun fihom anqas minn 250 g ta’ estratt niexef għal kull litru. Inkella, sabiex tipprevjieni l-pirolisi, il-volum ta’ l-ilma tat-tlaħliħ irid ikun mill-anqas 70 ml jekk il-konċentrazzjoni ta’ l-estratt niexef tkun 300 g/l, 85 ml għal kull 400 g/l ta’ l-estratt niexef, u 100 ml għal kull 500 g/l ta’ l-estratt niexef (uħud mil-likuri jew mill-kremi tal-frott). Aġġusta dawn il-volumi proporzjonalment għall-volumi tal-kampjuni differenti. Żid ftit granuli ta’ kontra l-ħbit ma’ xulxin (3.1) (u ta’ kontra r-ragħwa għall-likuri tal-krema). Ferragħ 20 ml ta’ ilma distillat fil-fjaskett volumetriku ta’ 200 ml li jrid jiġi wżat biex iżomm id-distillat. Dan il-fjaskett irid mbagħad jitqieghed f’banju ta’ l-ilma kiesaħ (4.1) (minn 10 sa 15-il °Ċ għax-xorb spirituż bit-togħma ta’ l-aniżetta). Iddistilla, filwaqt li tevita t-tkaxkir u l-ħruq faħam, billi kultant tħawwad il-kontenut tal-fjaskett, sakemm il-livell tad-distillat ikun ftit millimetri taħt il-marka tal-kalibrazzjoni tal-fjaskett volumetriku. Meta t-temperatura tad-distillat tkun tnizzlet sa qrib iż-0,5°Ċ tat-temperatura oriġinali tal-likwidu, żid sal-marka bl-ilma ddistillat u ħallat sew. Dan id-distillat jintuża sabiex tiġi stabbilita l-qawwa alkolika skond il-volum (Appendiċi II)

6.3.

Ix-xorb spirituż b’qawwa alkolika ta’ iktar minn 50 % vol. Kejjel 100 ml mix-xorb spirituż fi fjaskett volumetriku ta’ 100 ml u ferragħ fil-fjaskett tal-qiegħ ittundjat ta’ l-apparat tad-distillazzjoni. Laħlaħ il-fjaskett volumetriku numru ta’ drabi bl-ilma ddistillat u żid it-tlaħliħ mal-kontenut tal-fjaskett tad-distillazzjoni bil-qiegħ ittundjat. Uża bizzejjed ilma sabiex iżżid il-kontenut tal-fjaskett sa madwar 230 ml. Ferragħ 20 ml ta’ l-ilma ddistillat fil-fjaskett volumetriku ta’ 200 ml li jrid jiġi wżat għalbiex iżomm id-distillat. Dan il-fjaskett irid imbagħad jitqieghed fil-banju ta’ l-ilma kiesaħ (4.1) (minn 10 sa 15-il °Ċ għax-xorb spirituż bit-togħma ta’ l-anisetta). Iddistilla, billi kultant tħawwad il-kontenut, sakemm il-livell tad-distillat ikun ftit millimetri taħt il-marka tal-kalibrazzjoni tal-fjaskett volumetriku ta’ 200-ml. Meta t-temperatura ta’ dan id-distillat tkun tnizzlet sa qrib iż-0,5°Ċ tat-temperatura oriġinali tal-likwidu, żid sal-marka bl-ilma ddistillat u ħallat sewwa. Dan id-distillat jintuża sabiex tiġi stabbilita l-qawwa alkolika skond il-volum (Appendiċi II) Nota: Il-qawwa alkolika skond il-volum tax-xorb spirituż hija d-doppju tal-qawwa alkolika tad-distillat.

APPENDICI II: IL-KEJL TAD-DENSITÀ TAD-DISTILLAT

IL-METODU A:   KIF TIĠI STABBILITA L-QAWWA ALKOLIKA REALI SKOND IL-VOLUM TAX-XORB SPIRITUŻ - IMKEJJEL BIL-PIKNOMETRIJA

A.1.   Il-prinċipju

Il-qawwa alkolika skond il-volum tinkiseb mid-densità tad-distillat imkejla bil-piknometrija.

A.2.   Ir-Reaġenti u l-Materjali

Matul l-analiżi, għajr jekk iddikjarat xorta oħra, uża biss reaġenti ta’ grad analitiku konoxxut u ilma ta’ mill-inqas il-grad 3 kif iddefinit fl-3696:1987.

A.2.1.

Is-soluzzjoni tal-klorur tas-sodju (2 % w/v) Sabiex tħejji litru 1, iżen 20 g tal-klorur tas-sodju u dewweb sa litru 1 bl-użu ta’ l-ilma.

A.3.   L-apparat u t-tagħmir

L-apparat tas-soltu tal-laboratorju u b’mod partikolari dan li ġej.

A.4.   Il-proċedura

Kummenti preliminari:

A.4.1.   Il-kalibrazzjoni tal-piknometru

Il-piknometru jiġi kkalibrat billi jiġu stabbiliti l-parametri li ġejjin:

A.4.1.1.

Il-kalibrazzjoni bl-użu ta’ miżien ta’ keffa waħda: Istabbilixxi: —  il-massa tal-piknomentru nadif u niexef (P), —  il-massa tal-piknometru mimli bl-ilma f’temperatura ta’ t °Ċ (P1), —  il-massa tal-fjaskett tat-tara (T0). A.4.1.1.1. Iżen il-piknometru nadif u niexef (P), A.4.1.1.2. Imla l-piknometru b’attenzjoni bl-ilma ddistillat f’tempetatura ambjentali u iffittja t-termometru. Ixxotta b’attenzjoni l-piknometru u qiegħdu fil-ġakketta iżolata termalment.Hawwad billi taqleb il-kontenitur rasu ‘l isfel sakemm il-qari tat-temperatura tat-termometru jkun kostanti. Iffissa l-piknometru livell max-xifer ta’ fuq tat-tubu tal-ġenb. Aqra t-temperatura t °Ċ b’attenzjoni u fejn meħtieġ ikkorreġi għal xi ineżattezzi fl-iskala tat-temperatura. Iżen il-piknometru mimli bl-ilma (P1). A.4.1.1.3. Iżen il-fjaskett tat-tara (T0). A.4.1.1.4. Il-kalkolu —  It-tara tal-piknometru battal = P - m fejn il-m hija l-massa ta’ l-arja fil-piknometru. il-m = 0,0012 x (P1 - P) Nota 2: Iż-0,0012 hija d-densità ta’ l-arja niexfa f’temperatura ta’ 20 °Ċ bi pressa ta’ 760 mm Hg —  Il-volum tal-piknometru f’temperatura ta’ 20°Ċ: fejn il-Ft hija l-fattur għat-temperatura t °Ċ meħuda mit-Tabella I tal-Kapitolu 1 “Id-Densità u l-gravità speċifika ta’ l-Anness mar-Regolament (KEE) Nru 2676/90 (p. 10).” Il-V20°Ċ għandha tkun magħrufa sa l-eqreb 0,001 ml. —  Il-massa ta’ l-ilma fil-piknometru f’temperatura ta’ 20 °Ċ: hija d-densità ta’ l-ilma f’temperatura ta’ 20°Ċ. Nota 3: Meta meħtieġ, jista’ jintuża l-valur 0,99715 tad-densità fl-arja u l-qawwa alkolika tiġi kalkolata b’riferiment għad-densità li tikkorrispondi fit-tabelli tal-HM Customs and Excise fl-arja.

A.4.1.2.

Il-metodu tal-kalibrazzjoni bl-użu ta’ miżien ta’ żewġ keffef A.4.1.2.1.  Qiegħed il-fjaskett tat-tara fil-keffa tax-xellug u l-piknometru nadif u niexef bit-tapp tiegħu tal-ġbir fil-keffa tal-lemin. Ibbilanċjhom billi tqiegħed piżijiet fuq in-naħa tal-piknometru: ta’ p grammi. A.4.1.2.2.  Imla l-piknometru b’attenzjoni bl-ilma distillat f’temperatura ambjentali u ffittja t-termometru; ixxotta sewwa l-piknometru u qiegħdu fil-ġakketta iżolata termalment; ħawwad billi taqleb rasu ‘l isfel il-kontenitur sakemm il-qari tat-temperatura tat-termometru jkun kostanti. Aġġusta bil-preċiż il-piknometru livell max-xifer ta’ fuq tat-tubu tal-ġenb. Naddaf it-tubu tal-ġenb, iffittja t-tapp tal-ġbir; aqra t-temperatura t °Ċ b’attenzjoni u meta meħtieġ ikkorreġi għalkull ineżattezza fl-iskala tat-temperatura. Iżen il-piknometru mimli bl-ilma, bil-p’ ikun il-piż fi grammi li jwassal għall-ekwilibriju. A.4.1.2.3.  Il-kalkolu —  It-tara tal-piknometru battal = p + m fejn il-m hija l-massa ta’ l-arja fil-piknometru. il-m- = 0,0012 x (p- p’) —  Il-volum tal-piknometru f’temperatura ta’ 20 °Ċ: fejn il-Ft hija l-fattur għat-temperatura t °Ċ meħuda mit-Tabella I tal-Kapitolu 1 “Id-Densità u l-Gravità speċifika” ta’ l-Anness mar-Regolament (KEE) Nru 2676/90 (p. 10). Il-V20 °Ċ trid tkun magħrufa sa l-eqreb 0,001 ml. —  Il-massa ta’ l-ilma fil-piknometru f’temperatura ta’ 20°Ċ: fejn iż-0,998203 hija d-densità ta’ l-ilma f’temperatura ta’ 20°Ċ.

A.4.2.   Kif tiġi stabbilita l-qawwa alkolika tal-kampjun tat-test

A.5.   Il-karatteristiċi tal-metodu tat-twettiq tax-xogħol (il-preċiżjoni)

A.5.1.   Ir-riżultati statistiċi tat-test interlaboratorju

L-informazzjoni li ġejja ġiet miksuba minn studju tat-twettiq tax-xogħol ta’ metodu internazzjonali imwettaq skond roċeduri miftiehma internazzjonalment ġ1ħ ġ2ħ.

IL-METODU B:   KIF TIĠI STABBILITA L-QAWWA ALKOLIKA REALI SKOND IL-VOLUM TAX-XORB SPIRITUŻ IMKEJJEL BID-DENSIMETRIJA ELETTRONIKA (IBBAŻATA FUQ L-OXXILLAZZJONI TA' FREKWENZA REŻONANTI TA' KAMPJUN F'CELLOLA TA' L-OXXILLAZZJONI)

B.1.   Il-prinċipju

Id-densità tal-likwidu tiġi stabbilita bil-kejl elettroniku ta’ l-oxxillazzjonijiet ta’ tubu-U li jivvibra. Sabiex jitwettaq dan il-kejl, il-kampjun jiġi miżjud ma’ sistema li toxxilla, li l-frekwenza speċifika ta’ oxxillazzjoni tagħha tiġi hekk immodifikata bil-massa miżjuda.

B.2.   Ir-Reaġenti u l-Materjali

Matul l-analiżi, għajr jekk iddikjarat xorta oħra, uża biss ir- reaġenti ta’ grad analitiku kkonoxxut u ilma ta’ mill-inqas il-grad ta’ 3 kif iddefinit fl-ISO 3696:1987.

B.3   L-apparat u t-tagħmir

L-apparat tas-soltu tal-laboratorju u b’mod partikolari dan li ġej:

B.4.   Il-proċedura

B.5.   Il-karatteristiċi tal-metodu tat-twettiq tax-xogħol (il-preċiżjoni)

B.5.1.

Ir-riżultati statistiċi tat-test interlaboratorju L-informazzjoni li ġejja ġiet miksuba minn studju dwar it-twettiq tax-xogħol ta’ metodu internazzjonali imwettaq skond il-proċeduri ġ1ħ ġ2 ħmiftiehma internazzjonalment. Is-sena tat-test interlaboratorju 1997 In-Numri tal-laboratorji 16 In-Numru tal-kampjuni 6 Il-Kampjuni A B Ċ D E F In-Numru tal-laboratorjiMiżmuma wara l-elimin-Azzjoni ta' dawk li qegħdin'il barra 11 13 15 16 14 13 In-Numru ta' dawk li kienu'l barra (laboratorji) 2 3 1 - 1 2 In-Numru tar-riżultatiaċċettati 22 26 30 32 28 26 Il-Valur medju % vol 23,81 40,12 440,35 39,27 42,39 56,99 26,52(*)     43,10(*) 45,91(*) 63,31(*) Id-Devjazzjoni tal-kapaċita tat-tennija (r)% vol 0,044 0,046 0,027 0,079 0,172 0,144 Id-Devjazzjoni relattiva tal-kapaċita tat-tennija (g) (%) 0,17 0,12 0,07 0,19 0.39 0,24 Il-Limitu tal-kapaċita tat-tennija () % vol 0,12 0,13 0,08 0,22 0.48 0,40 Id-Devjazzjoni tar-riproduċibbilta (p) % vol 0,054 0,069 0,083 0,141 0,197 0 205 Id-Devjazzjoni standardrelattiva tar-riproduċibbilta(g) (%) 0,21 0.17 0,21 0,34 0,45 0,34 Il-Limitu tar-riproduċibbilta() % vol 0,15 0,19 0,23 0,40 0,55 0.58 It-Tiġi tal-kampjuni A. Il-Likur tal-Frott: livell maqsum (*) B. Il-Brandy: duplikati għomja Ċ. Il-Whisky: duplikati għomja D. Il-Grappa: livell maqsum (*) E. L-Aquavit: livell maqsum (*) F. Ir-Rum: livell maqsum (*)

IL-METODU Ċ:   KIF TIĠI STABBILITA L-QAWWA ALKOLIKA REALI SKOND IL-VOLUM TAX-XORB SPIRITUÆ - IL-KEJL BID-DENSIMETRU LI JUÆA L-MIÆIEN IDROSTATIKU

Ċ.1   Il-prinċipju

Il-qawwa alkolika ta’ l-ispirti tista’ titkejjel bid-densimetrija bl-użu ta’ miżien idrostatiku msejjes fuq il-prinċipju ta’ Arkimede fejn meta oġġetti jitgħaddas f’likwidu jirċievi tefgħa ‘l fuq mill-likwidu egwali għall-piż tal-likwidu li jkun intħad postu.

Ċ.2.   Ir-Reaġenti u l-Materjali

Matul l-analiżi, sakemm għajr fejn iddikjarat xorta oħra, uża biss ir-reaġenti ta’ grad analitiku kkonoxxut u l-ilma ta’ mill-inqas il-grad ta’ 3 kif iddefinit fl-ISO 3696:1987.

Ċ.2.1.   Is-soluzzjoni tat-tindif tal-galleġġjan (l-idrossidu tas-sodju, 30 % w/v)

Sabiex tħejji 100 ml, iżen 30 g ta’ l-idrossidu tas-sodju u żid sal-volum bl-użu ta’ 96 % ta’ l-etanol skond il-volum.

Ċ.3.   L-apparat u t-tagħmir

Apparat tas-soltu tal-laboratorju u b’mod partikolari dan li ġej:

Ċ.4.   Il-Proċedura

Il-galleġġjant u ċ-ċilindru tal-kejl iridu jiġu mnaddfa bejn kull kejl bl-ilma distillat, imnixxef b’karta ratba tal-laboratorju li ma xxerridx fibri u mlaħalħa bis-soluzzjoni li d-densità tagħha trid tiġi stabbilita. Il-kejlijiet iridu jsiru malli l-apparat ikun laħaq l-istabbiltà sabiex jiġi ristrett it-telf tal-alkol bl-evaportazzjoni.

Ċ.5.   Il-karatteristiċi tat-twettiq tax-xogħol tal-metodu (il-preċiżjoni)

Ċ.5.1.   Ir-riżultati statistiċi tat-test interlaboratorju

L-informazzjoni li ġejja inkisbet minn studju dwar it-twettiq tax-xogħol ta’ metodu internazzjonali imwettaq skond il-proċeduri ġ1ħ ġ2ħ miftiehma internazzjonalment.

Is-sena
1.Il-fjaskett ta’ litru 1 bil-qiegħ ittundjat b’ġonta ta’ ħġieġ immattjat standardizzat,
2.Il-kolonna ta’ rettifikazzjoni Vigreux ta’ 20 ċm.
3.Il-kondensatur West bix-xifer dritt ta’ 10-ċm.
4.Il-kojlatura tat-tkessiħ ta’ 40 ċm tul,

II.   KIF JIĠI STABBILIT L-ESTRATT TOTALI NIEXEF TAX-XORB SPIRITUŻ BIL-GRAVIMETRIJA

1.   L-iskop

Ir-Regolament (KEE) Nru 1576/89 jipprovdi dan il-metodi biss għall-aquavit li l-estratt niexef tiegħu huwa limitat għal 15-il g/l.

2.   Ir-Referenzi Normattivi

L-ISO 3696:1987: L-ilma għall-użu fil-laboratorju analitiku - L-ispeċifikazzjonijiet u l-metodi tat-testijiet.

3.   Id-definizzjoni

L-estratt totali niexef jew il-materjal totali niexef jinkludu l-materjal kollu li mhux volatili taħt kondizzjonijiet fiżiċi speċifikati.

4.   Il-prinċipju

L-użin tal-fdal imħolli mill-evaporazzjoni ta’ l-ispritu fuq banju ta’ l-ilma jagħli u mnixxef f’forn tat-tnixxif.

5.   L-Apparat u t-Tagħmir

5.1.	Dixx ċilindriku ta’ l-evaporazzjoni bil-qiegħ ċatt ta’ 55 mm fid-dijametru.

5.2.	Banju ta’ l-ilma jagħli.

5.3.	Pipetta ta’ 25 ml, tal-klassi A.

5.4.	Forn tat-tnixxif.

5.5.	Desikkatur.

5.6	Miżien analitiku preċiż sa 0,1 mg.

6.   It-teħid tal-kampjuni u l-kampjuni

Il-kampjuni jinħażnu f’temperatura tal-kamra qabel l-analiżi.

7.   Il-proċedura

7.1.

Pipetta ta’ 25 ml ta’ l-ispirtu li jkun fiha inqas minn 15-il g/l ta’ materjal niexef f’dixx ċilindriku ta’ l-evaporazzjoni bil-qiegħ ċatt ta’ dijametru ta’ 55 mm li jkun intiżen minn qabel. Matul l-ewwel siegħa ta’ l-evaporazzjoni d-dixx ta’ l-evaporazzjoni jitqiegħed fuq il-għatu ta’ banju ta’ l-ilma jagħli biex il-likwidu ma jagħlix, billi dan jista’ jwassal għat-telf bit-titjir. Halli għal siegħa oħra f’kuntatt dirett mal-fwar tal-banju ta’ l-ilma jagħli.

7.2.	Ikkompleta t-tnixxif billi tqiegħed id-dixx ta’ l-evaporazzjoni f’forn tat-tnixxif f’temperatura ta’ 105°Ċ +/- 3°Ċ għal sagħtejn. Halli d-dixx ta’ l-evaporazzjoni jiksaħ f’desikkatur u iżen id-dixx ta’ l-evaporazzjoni bil-kontenut tiegħu.

8.   Il-kalkolu

Il-massa tal-fdal immoltoplikata b’40 hija egwali għall-estratt niexef li jkun jinsab fl-ispirtu u jrid jiġi espress f’g/l sa post wieħed deċimali.

9.   Il-karatteristiċi tat-twettiq tax-xogħol tal-metodu (il-preċiżjoni)

9.1.   Ir-riżultati statistiċi tat-test interlaboratorju

L-informazzjoni li ġejja ġiet miksuba minn studju ta’metodu internazzjonali tat-twettiq tax-xogħol imwettaq skond il-proċeduri miftiehma internazzjonalment ġ1ħ ġ2ħ.Is-Sena tat-test

III.   KIF JIĠU STABBILITI S-SUSTANZI VOLATILI U L-METANOL FIX-XORB SPIRITUŻ

III.1.   KUMMENTI ĠENERALI

1.   Id-definizzjoni

It-tifsirietIr-Regolament (KEE) Nru 1576/89 jiffissa l-limiti minimi tal-komposti volatili għajr għall-etanol u l-metanol għal serje ta’xorb spirituż (ir-rum, l-ispirti ta’ oriġini vitikulturali, l-ispirti tal-frott, eċċ.). Għal din is-serje ta’ xorb biss, dawn il-livelli huma kkunsidrati b’mod konvenzjonali li huma ekwivalenti għas-somma tal-konċentrati ta’:

Dawn li ġejjin huma miżuri konvenzjonali għall-kejl tal-komposti volatili:

2.   L-analiżi tal-kromatografija bil-gass tal-komposti volatili

L-assaġġi kromatografiċi bil-gass tal-komposti volatili għajr għal dawk iddikjarati hawn fuq jistgħu jkunu partikolarment interessanti bħala mezz sabiex jiġu stabbiliti kemm l-oriġini tal-materja prima wżata fid-distillazzjoni u l-kondizzjonijiet attwali tad-distillazzjoni.

Uħud mill-ispirti jkun fihom komponenti volatili oħra, bħalma huma l-komposti aromatiċi, li huma karatteristiċi tal-materja prima wzata għalbiex jinkisbu l-alkol, l-aroma tax-xorb spirituż u l-fatturi speċjali għat-tħejjija ta’ l-ispirtu. Dawn il-komposti huma importanti għall-valutazzjoni tal-ħtiġiet iddikjarati fir-Regolament (KEE) Nru 1576/89.

III.2.   KIF JIĠU STABBILITI L-KONĠENERI VOLATILI BIL-KROMATOGRAFIJA BIL-GASS: L-ALDEIDI, L-ALKOLI OG}LA, L-ETIL AĊETAT U L-METANOL

1.   L-iskop

Dan il-metodu huwa addattat għall-użu sabiex jiġi stabbiliti l-1,1-dietossietan (aċetal), it-2-metilbutan-1-ol (l-alkol amil attiv), it-3-metilbutan-1-ol (l-alkol isoamil), il-metanol (il-metil alkol), l-etil etanoate(l-etil aċetat), il-butan-1-ol (l-n-butanol), il-butan-2-ol (is-sek-butanol), it-2-metilpropan-1-ol (l-alkol isobutil), il-propan-1-ol (l-n-propanol) u l-etanal (l-aċetaldeid) fix-xorb spirituż li juża l-kromatografija bil-gass. Il-metodu juża standard intern, per eżempju l-pentan-3-ol. Il-konċentrazzjonijiet ta’ l-analiti huma espressi fi grammi għal kull 100 litru ta’ alkol assolut; il-qawwa alkolika tal-prodott trid tiġi stabbilita qabel l-analiżi. Ix-xorb spirituż li jista’ jiġi analizzat bl-użu ta’ dan il-metodu jinkludi l-whisky, il-brandy, ir-rum, l-ispirtu ta’ l-inbid, l-ispirtu tal-frott jew l-ispirtu tal-għeneb marc.

2.   Ir-Referenzi Normattivi

L-ISO 3696:1987: L-ilma għall-użu analitiku fil-laboratorju - L-ispeċifikazzjonijiet u l-metodi tat-testijiet.

3.   Id-definizzjoni

Il-konġeneri huma sustanzi volatili ffurmati flimkien ma’ l-etanol waqt il-fermentazzjoni, id-distillazzjoni u l-maturazzjoni tax-xorb spirituż.

4.   Il-prinċipju

Il-konġeneri fix-xorb spirituż jiġu stabbiliti bl-injezzjoni diretta tax-xorb spirituż, jew tax-xorb spirituż dilwit kif approprjat, f’sistema ta’ kromatografija bil-gass (GC). Il-konġeneri jiġu mifruda bil-programmazzjoni tat-temperatura fuq kolonna addattata u jinkixfu bl-użu ta’ apparat tal-kxif bil-fjamma għall-jonizzazzjoni (FID). Il-konċentrazzjoni ta’ kull konġeneru tiġi stabbilita rigward l-istandard intern mill-fatturi tar-rispons, li jiġu miksuba matul il-kalibrazzjoni taħt l-istess kondizzjonijiet kromatografiċi bħal dawk ta’ l-analiżi tax-xorb spirituż.

5.   Ir-Reaġenti u l-Materjali

Għajr jekk iddikjarat xorta oħra, uża biss reaġenti ta’ safa aktar minn 97 %, mixtrija minn għand provveditur akkreditat ta’ l-ISO b’ċertifikat tas-safa, ħielsa minn konġeneri oħra fid-dilwit tat-test (dan jista’ jiġi kkonfermat bl-injezzjoni ta’ standards individwali tal-konġeneri fid-dilwita tat-test bl-użu tal- kondizzjonijiet tal-GC bħal fis-6.4) u l-ilma biss ta’ mill-inqas il-grad ta’ 3 kif iddefinit fl-ISO 3696. L-aċetal u l-aċetaldeid għandhom jinħażnu fid-dlam f’temperatura ta’ < 5°Ċ, ir-reaġenti l-oħra jistgħu jinħażnu f’temperatura tal-kamra.

5.1.	L-etanol assolut ►C2  (CAS 64-17-5) ◄ .

5.2.	Il-metanol ►C2  (CAS 67-56-1) ◄ .

5.3.	Il-propan-1-ol ►C2  (CAS 71-23-8) ◄ .

5.4.	►C1  It-2-metilpropan-1-ol (CAS 78-83-1). ◄

▼C2

5.5.	L-istandards interni aċċettabbli: il-pentan-3-ol (CAS 584-02-1), il-pentan-1-ol (CAS 71-41-0), il-4- metilpentan-1-ol (CAS 626-89-1) jew il-metil nonanoat (CAS 1731-84-6).

▼B

5.6.	It-2-metilbutan-1-ol ►C2  (CAS 137-32-6) ◄ .

5.7.	It-3-metilbutan-1-ol ►C2  (CAS 123-51-3) ◄ .

5.8.	L-etil aċetat ►C2  (CAS 141-78-6) ◄ .

5.9.	Il-butan-1-ol ►C2  (CAS 71-36-3) ◄ .

5.10.

Il-butan-2-ol ►C2  (CAS 78-92-2) ◄ .

5.11.

L-aċetaldeid ►C2  (CAS 75-07-0) ◄ .

5.12.

L-aċetal ►C2  (CAS 105-57-7) ◄ .

5.13.

L-40 % v/v soluzzjoni ta’ l-etanol Sabiex tħejji 400 ml/l soluzzjoni ta’ l-etanol ferragħ 400 ml etanol (5.1) fi fjaskett volumetriku ta’ litru 1, żid sal-volum bl-ilma ddistillat u ħallat.

▼C3

5.13a.

Għall-alkoħol etiliku ta’ oriġini agrikola biss, etanol assolut (CAS 64-17-5).

▼B

5.14.

It-tħejjija u l-ħażna tas-soluzzjonijiet standard (il-proċedura wżata għall-metodu validat). Is-soluzzjonijiet standard kollha għandhom jinħażnu f’temperatura ta’ < 5°Ċ u għandhom jitħejjew friski fuq bażi ta’ kull xahar. Il-mases u l-komponenti tas-soluzzjonijiet għandhom jiġu rreġistrati sa l-eqreb 0,1 mg. 5.14.1. Is-Soluzzjoni standard - A Ippipettja r-reaġenti li ġejjin fi fjaskett volumetriku ta’ 100 -ml, li jkun fih madwar 60-ml tas-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13) sabiex tiġi minimizzata l-evaporazzjoni tal-komponenti, żid sal-volum bis-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13) u ħallat sewwa. Irreġistra l-piż tal-fjaskett, kull komponent miżjud u l-piż totali finali tal-kontenut. Il-Komponent Il-Volum (ml) Il-Metanol (5.2) 3,0 Il-Propal-1-ol (5.3) 3,0 It-2-metilpropan (5.4) 3,0 It-2-metilbutan-1-ol (5,6) 3,0 It-3-metilbutan-1-ol (5,7) 3,0 L-Etil aċetat (5.8) 3,0 Il-Butan-1-ol (5.9) 3,0 Il-Butan-2-ol (5.10) 3,0 L-Aċetaldeid (5.11) 3,0 L-Aċetal (5.12) 3,0 Nota 1: Huwa preferibbli li l-aċetal u l-aċetaldeid jiġu miżjuda fl-aħħar sabiex jiġi mminimizzat it-telf permezz ta’ l-evaporazzjoni. ▼M3 5.14.1a. Għall-alkoħol etiliku ta’ oriġini agrikola biss, is-soluzzjoni standard A għandha titħejja billi tippipettja r-reaġenti b’volumi mnaqqsa ta’ alkoħol ogħla bl-għan li jkun hemm soluzzjonijiet standard b’konċentrazzjonijiet qrib il-limiti legali għall-alkoħol etiliku ta’ oriġini agrikola. ▼B 5.14.2. Is-Soluzzjoni standard - B Ippipettja 3 ml ta’ pentan-3-ol, jew standard intern ieħor addattat, (5.5) fi fjaskett volumetriku ta’ 100 ml, li jkun fih madwar 80 ml tas-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13), żid sal-volum bis-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13) u ħallat sewwa. Irreġistra l-piż tal-fjaskett, il-piż tal-pentan-3-ol jew standard ieħor intern miżjud u l-piż totali finali tal-kontenut. ▼M3 5.14.2a. Għall-alkoħol etiliku ta’ oriġini agrikola biss, is-soluzzjoni standard B għandha titħejja billi tippipettja bi standard intern xieraq b’volumi mnaqqsa bl-għan li jkun hemm soluzzjonijiet standard b’konċentrazzjonijiet qrib il-limiti legali għall-alkoħol etiliku ta’ oriġini agrikola. ▼B 5.14.3. Is-Soluzzjoni standard - Ċ Ippipettja 1 ml tas-Soluzzjoni A (5.14.1) u 1 ml tas-Soluzzjoni B (5.14.2) fi fjaskett volumetriku ta’ 100-ml, li jkun fih madwar 80 ml tas-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13), żid sal-volum bis-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13) u ħallat sewwa. Irreġistra l-piż tal-fjaskett, kull komponent miżjud u l-piż totali finali tal-kontenut. 5.14.4. Is-Soluzzjoni standard - D Għalbiex tinżamm kontinwità analitika, ħejji standard tat-kwalità tal-kontroll billi tuża l-istandard A imħejji qabel (5.14.1). Ippipettja 1 ml tas-Soluzzjoni A (5.14.1) fi fjaskett volumetriku ta’ 100-ml, li jkun fih madwar 80 ml tas-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13), żid sal-volum bis-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13) u ħallat sewwa. Irreġistra l-piż tal-fjaskett, kull komponent miżjud u l-piż totali finali tal-kontenut. 5.14.5. Is-Soluzzjoni standard - E Ippipettja 10 ml tas-Soluzzjoni B (5.14.2) fi fjaskett volumetriku ta’ 100-ml, li jkun fih madwar 80 ml tas-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13), żid sal-volum bis-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13) u ħallat sewwa. Irreġistra l-piż tal-fjaskett, kull komponent miżjud u l-piż totali finali tal-kontenut. 5.14.6. Is-soluzzjonijiet standard għalbiex tiġi verifikata l-linearità tar-rispons tal-FID Fi fjasketti volumetriċi separati ta’ 100-ml, li jkun fihom madwar 80 ml tas-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13), ippipettja 0,0,1,0,5,1,0,2,0 ml tas-Soluzzjoni A (5.14.1) u 1 ml tas-Soluzzjoni B (5.14.2), żid sal-volum bis-soluzzjoni ta’ l-etanol (5.13) u ħallat sewwa. Irreġistra l-piż tal-fjaskett, kull wieħed mill-komponenti miżjuda u l-piż totali finali tal-kontenut. 5.14.7. Is-Soluzzjoni standard QC Ippipettja 9 ml tas-Soluzzjoni standard D (5.14.4) u 1 ml tas-Soluzzjoni standard E (5.14.5) f’reċipjent miżien u ħallat sewwa. Irreġistra l-piż tal-fjaskett, kull wieħed mill-komponenti miżjuda u l-piż totali finali tal-kontenut.

6.   L-apparat u t-tagħmir

6.1.	L-apparat kapaċi li jkejjel id-densità u l-qawwa alkolika.

6.2.	Miżien analitiku, kapaċi li jkejjel sa erba’ postijiet deċimali.

6.3.	Kromatografu bil-gass ipprogrammat skond it-temperatura, iffittjat b’apparat tal-kxif bil-fjamma tal-jonizzazzjoni u integratur jew sistema oħra li timmaniġġja l-informazzjoni li kapaċi tkejjel l-ogħla żoni jew l-ogħla għoli.

6.4.

Il-kolonna/i kromatografika/ċi bil-gass, kapaċi li tissepara/jisseparaw l-analiti hekk illi r-reżoluzzjoni minima tal-komponenti individwali (għajr għat-2-metilbutan-1-ol u t-3-metilbutan-1-ol) tkun/ikunu mill-anqas 1.3. Nota 2: Il-kolonni u kondizzjonijiet tal-GC li ġejjin huma eżempji adattati: 1)  Spazju tar-ritenzjoni ta’ 1 m x 0,32 mm i.d. ikkonnettjat ma’ kolonna tas-CP-WAX 57 CB ta’ 50 m x 0,32 mm i.d. 0,2 ìm ħxuna tal-lega (polietilene glikol stabillizzat) segwit b’kolonna Carbowax 400 ta’ 50 m x 0,32 mm i.d. 0,2 ìm ħxuna tal-lega(Il-kolonni huma konnessi bl-użu ta’ konnetturi li jiffittjaw bil-pressa.) Il-gass trasportatur u l-pressa: L-Elju (135 kPa) Il-kolonna tat-temperatura: 350C għal 17-il minuta, minn 35 sa 700Ċ fi 120C/min, żomm f'temperatura ta' 700C għal 25 min. It-temperatura ta' l-injettur: 1500C It-temperatura ta' l-apparattal-kxif: 2500C Il-volum ta' l-injezzjoni: 1 ul. maqsum f'minn 20 sa 100: 1 2)  Spazju tar-ritenzjoni ta’ 1 m x 0,32 mm i.d. konness ma’ kolonna tas-CP-WAX 57 CB 50 m x 0,32 mm i.d. 0,2 ìm ħxuna tal-lega (polietilene glikol stabbilizzat). (L-ispazju tar-ritenzjoni huwa konness bl-użu ta’ konnettur li jiffittja bil-pressa.) Il-gass trasportatur u l-pressa: L-Elju (65 kPa) It-temperatura tal-kolonna: 35oC għal 10 min., minn 35 sa 110oC fi 5oC/min., minn 110 sa 190oC fi 30oC/min/., żomm f'temperatura ta 190oC għal 2 min. It-temperatura ta' l-injettur: 260oC It-tempertura ta' l-apparat tal-kxif 300oC Il-volum ta' l-injezzjoni: 1 ųl, maqsum f'55: 1 3)  Kolonna ppakkjata(5 % CW20M, Carbopak2 m x 2 mm i.d Kolonna ppakkjata (5 % ), 2 m x 2 mm. It-temperatura tal-kolonna: 65C għal 4 min., minn 65 sa 140C f'10C/min., żomm f'temperatura ta' 140C għal 5 min., minn140 sa 150C fi 30C/min, żomm f'150C għal 3 min. It-temperatura ta' l-injettur: 650C It-temperatura ta' l-apparat tal-kxif: 2000C Il-volum ta' l-injezzjoni: 1 ųl

7.   It-teħid tal-kampjuni u l-kampjuni

7.1.	Il-kampjun tal-laboratorju Malli jiġi rċevut, titkejjel il-qawwa alkolika ta’ kull wieħed mill-kampjuni (6.1).

8.   Il-proċedura (użata għall-metodu tal-validazzjoni)

8.1.

Il-porzjon tat-test 8.1.1. Iżen reċipjent approprjat issiġillat u li jiżen u rreġistra l-piż. 8.1.2. Ippipettja 9 ml mill-kampjun tal-laboratorju għal gor-reċipjent u rreġistra l-piż (l-MSAMPLE). 8.1.3. Żid 1 ml tas-Soluzzjoni standard E (5.14.5) u rreġistra l-piż (MIS). 8.1.4. Xengel sewwa l-materjal tat-test minn naħa għall-oħra (b’mill-inqas 20 inverzjoni). Il-kampjuni jridu jinħażnu f’anqas minn 5 °Ċ qabel l-analiżi sabiex jiġi mminimizzat it-telf volatili.

8.2.

It-test in bjank 8.2.1. Bl-użu ta’ miżien ta’ erba’ postijiet deċimali (6.2), iżen reċipjent approprjat issiġillat u li jiżen u rreġistra l-piż. 8.2.2. Ippipettja 9 mis-soluzjponi ta’ 400 ml/l ta’ l-etanol (5.13) għal ġor-reċipjent u rreġistra l-piż. 8.2.3. Żid 1 ml tas-Soluzzjoni standard E (5.14.5) u rreġistra l-piż. 8.2.4. Xengel sewwa l-materjal tat-test minn naħa għall-oħra (b’mill-inqas 20 inverzjoni). Il-kampjuni jridu jinħażnu f’inqas minn 5°Ċ qabel l-analiżi sabiex jiġi mminimizzat it-telf volatili.

8.3.	It-test preliminari Injetta s-Soluzzjoni standard Ċ (5.14.3) sabiex tiżgura illi l-analiti kollha jiġu mifruda b’riżoluzzjoni minima ta’ 1.3 (għajr għat-2-metilbutan-1-ol u t-3-metilbutan-1-ol).

8.4.

Il-kalibrazzjoni Il-kalibrazzjoni għandha tiġi ċċekkjata bl-użu tal-proċedura li ġejja. Iżgura illi r-reazzjoni tkun lineari billi tanalizza suċċessivament għal tliet darbiet kull waħda mis-soluzzjonijiet standard lineari (5.14.6) li jkun fihom standard intern (IS). Miż-żoni l-aktar għolja jew il-qċaċet l-aktar għolja ta’ l-integratur ikkalkola għal kull injezzjoni l-proporzjon R għal kull konġeneru u pinġi l-grafika R kontra l-proporzjon tal-konċentrazzjoni tal-konġeneru għall-istandard intern (IS), Ċ. Għandha tinkiseb tpinġija linerai, b’koeffiċjent ta’ korrelazzjoni ta’ mill-inqas 0,99.Iż-żona l-aktar għolja jew il-għoli tal kongeneru

8.5.

Kif tiġi stabbilita Injetta s-Soluzzjoni standard Ċ (5.14.3) u ż-żewġ soluzzjonijiet standard tal-QC (5.14.7). Segwi b’kampjuni mhux magħrufa (imħejjija skond it-8.1 u t-8.2) billi ddaħħal standard standard wieħed tal-QC f’kull 10 kampjuni sabiex tiżgura stabbiltà analitika. Injetta Soluzzjoni standard Ċ waħda (5.14.3) wara kull 5 kampjuni.

9.   Il-kalkolu

Tista’ tintuża sistema awtomata tal-maniġġjar ta’ l-informazzjoni, sakemm l-informazzjoni tista’ tiġi ċċekkjata permezz tal-prinċipji deskritti fil-metodu ta’ hawn taħt.

Kejjel jew iż-żoni l-iktar għolja jew l-għoljiet quċċata għall-konġeneru u l-għoljiet quċċata ta’ standard intern.

9.1.

Il-kalkolu tal-fattur tar-rispons Mill-kromatogramma ta’ l-injezzjoni tas-Soluzzjoni standard Ċ (5.14.3), ikkalkola l-fattur tar-rispons għal kull wieħed mill-konġeneri bl-użu ta’ l-ekwazzjoni (1).Iż-żona l-iktar għoljaIl-konċ. tal-konġeneru jew il-għoli IS = standard Intern Il-Konċ. tal-konġeneru = il-konċentrazzjoni tal-konġeneru fis-Soluzzjoni Ċ (5.14.3) Il-Konċ. IS = il-konċentrazzjoni ta’ l-istandard intern fis-Soluzzjoni Ċ (5.14.3). 9.1.2. L-analiżi tal-kampjun Bl-użu ta’ l-ekwazzjoni (2) ta’ hawn taħt, ikkalkola l-konċentrazzjoni ta’ kull wieħed mill-konġeneri fil-kampjuni.Iż-żona l-iktar għolja jewMg (g) Iż-żona l-iktar għolja jew Mkampjun = il-piż tal-kampjun (8.1.2); il-MIS = il-piż ta’ l-istandard intern (8.1.3); il-Konċ. IS = il-konċentrazzjoni ta’ l-istandard intern fis-Soluzzjoni Ċ (5.14.3). il-RF = il-fattur tar-rispons ikkalkolat bl-użu tal-ekwazzjoni 1. 9.1.3. L-analiżi tal-kontroll tal-kwalità tas-soluzzjoni standard Bl-użu ta’ l-ekwazzjoni (3) ta’ hawn taħt, ikkalkola l-perċentwal ta’ l-irkupru tal-valur fil-mira għal kull wieħed mill-konġeneri fl-istandards tal-kontroll tal-kwalità (5.14.7): Il-konċentrazzjoni ta’ l-analit fl-istandard tal-QC tiġi kkalkolata bl-użu ta’ l-ekwazzjonijiet (1) u (2) ta’ hawn fuq.

9.2.

Il-preżentazzjoni finali tar-riżultati Ir-riżultati jiġu kkonvertit mill- ì/g sa g għal kull 100 litru alkol assolut għall-kampjuni li jużaw l-ekwazzjoni (4): Il-Konċ. (ųg/g) x p x 10(il-qawwa ( % vol) x 1 000 )PIC FILE= fejn = id-densità f’ kg/m3. Ir-riżultati jiġu kwotati sa tliet ċifri sinifikanti u massimu ta’ post wieħed deċimali eż. 11,4 g għal kull 100 l alkol assolut.

10.   Il-garanzija u l-kontroll tal-kwalità (użati għall-metodu tal-validazzjoni)

Bl-użu ta’ l-ekwazzjoni (2) ta’ hawn fuq, ikkalkola l-konċentrazzjoni ta’ kull wieħed mill-konġeneri fis-soluzzjonijiet standard tal-kontroll tal-kwalità mħejjija billi tiġi segwita l-proċedura bħal minn fit-8.1.1 sat-8.1.4. Bl-użu ta’ l-ekwazzjoni (3), ikkalkola l-perċentwal ta’ l-irkupru għall-valur fil-mira. Jekk ir-riżultati analizzati jkunu fil-limitu ta’ +/- 10 % tal-valuri teoretiċi tagħhom għal kull konġenitur, l-analiżi tista’ tipproċedi. Jekk le, għandha ssir investigazzjoni sabiex tinstab il-kawża ta’ l-ineżattezza u tittieħed l-azzjoni ta’ rimedju kif xieraq.

11.   Il-karatteristiċi tal-metodu tat-twettiq tax-xogħol (il-preċiżjoni)

Ir-riżultati statistiċi tat-test interlaboratorjuit-tabelli li ġejjin jagħtu l-valuri għall-komposti li ġejjin: l-etanal, l-etil aċetat, l-aċetal, l-etanal totali, il-metanol, il-butan-2-ol, il-propan-1-ol, il-butan-1-ol, il-2-metil-propan-1-ol, it-2 metul-butan-1-ol, it-3 metil-butan-1-ol.

L-informazzjoni li ġejja kienet miksuba minn studju internazzjonali tat-twetiq tax-xogħol tal-metodu mwettaq skond proċeduri miftiehma internazzjonalment.

▼M2

III.3.   DETEMINAZZJONI TAL-AĊIDI VOLATILI TAL-ISPIRTI

1.    Kamp tal-applikazzjoni

Il-metodu ġie vvalidat permezz ta' studju interlaboratorju għar-rum, il-brandy, il-marc u l-ispirti tal-frott, f'livelli li jvarjaw minn 30 mg/l sa 641 mg/l.

2.    Referenzi Normattivi

ISO 3696: 1987 Ilma għall-użu analitiku — Speċifikazzjonijiet u metodi tal-ittestjar.

3.    Definizzjonijiet

3.1.	L-aċidità volatili hija kkalkulata billi titnaqqas l-aċidità fissa mill-aċidità totali.

3.2.	L-aċidità totali hija s-somma ta' aċiditajiet titrabbli.

3.3.	L-aċidità fissa hija l-aċidità tar-residwu li jibqa' wara l-evaporazzjoni tal-ispirtu sa ma jinxef.

4.    Prinċipju

L-aċidità totali u l-aċidità fissa huma ddeterminati permezz tat-titrazzjoni jew tal-potenzjometrija.

5.    Reaġenti u Materjali

Matul l-analiżi, sakemm ma jiġix iddikjarat mod ieħor, uża biss reaġenti ta' grad analitiku rikonoxxut u ilma mill-inqas tal-grad 3 kif definit fl-ISO 3696:1987.

5.1.	Soluzzjoni 0,01 M idrossidu tas-sodju (NaOH)

5.2.	Soluzzjoni tal-indikatur imħallat: Iżen 0,1 g ta' karminju indigo u 0,1 g ta' fenol aħmar. Ħoll f'40 mL ilma u żid bl-etanol sa 100 mL.

6.    Apparat u Tagħmir

Apparat tal-laboratorju indirett, oġġetti tal-ħġieġ tal-kategorija A u dan li ġej:

7.    It-teħid tal-kampjuni u l-kampjuni

Il-kampjuni jinħażnu f'temperatura tal-kamra qabel l-analiżi.

8.    Proċedura

8.1.   Aċidità totali

8.1.1.   Preparazzjoni tal-kampjun

L-ispirtu jiġi irradjat bl-ultrasoniku (ultrasonikazzjoni) jew imħawwad għal żewġ minuti f'vakwu biex jinħeles mid-dijossidu tal-karbonju jekk meħtieġ.

8.1.2.   Titrazzjoni

B'pipetta iġbed 25 mL tal-ispirtu fi flask Erlenmeyer ta' 500 ml.

Żid madwar 200 mL ilma mgħolli, iddistillat u mkessaħ (imħejji frisk ta' kuljum) u 2-6 qatriet mis-soluzzjoni mħallta tal-indikatur (5.2).

Ittitra bis-soluzzjoni 0,01 M idrossidu tas-sodju (5.1) sakemm ikun hemm kambjament tal-kulur minn isfar fl-aħdar għal vjola fil-każ ta' spirti mingħajr kulur, u minn isfar fil-kannella għal kannella fl-aħmar fil-każ ta' spirtu ta' lewn kannella rispettivament.

It-titrazzjoni tista' titwettaq ukoll permezz ta' potenzjometrija, sa pH 7,5.

Nieħdu n1 mL bħala l-volum tas-soluzzjoni 0,01 M idrossidu tas-sodju miżjud.

8.1.3.   Kalkolu

L-aċidità totali (AT) espressa f'milliekwivalenti għal kull L ta' spirtu hija ugwali għal 0,4 × n1.

L-aċidità totali (AT′) espressa f'mg ta' aċidu aċetiku għal kull L ta' spirtu hija ugwali għal 24 × n1.

8.2.   Aċidità fissa

8.2.1.   Tħejjija tal-kampjun

Evapora 25 mL tal-ispirtu sa ma jinxef:

8.2.2.   Titrazzjoni

Ħoll ir-residwu li jibqa' wara l-evaporazzjoni b'ilma mgħolli, iddistillat u mkessaħ (imħejji frisk ta' kuljum) u żid sa ma l-volum ikun madwar 100 mL; u żid bejn 2 u 6 qatriet mis-soluzzjoni mħallta tal-indikatur (5.2).

Ittitra bis-soluzzjoni 0,01 M idrossidu tas-sodju (5.1).

It-titrazzjoni tista' titwettaq ukoll permezz ta' potenzjometrija, sa pH 7,5.

Meta n2 mL ikun il-volum tas-soluzzjoni 0,01 M idrossidu tas-sodju miżjud.

8.2.3.   Kalkolu

L-aċidità fissa (AF) espressa f'milliekwivalenti kull L ta' spirtu hija ugwali għal 0,4 × n2.

L-aċidità fissa (AF) espressa f'mg ta' aċidu aċetiku għal kull L ta' spirtu hija ugwali għal 24 × n2.

9.    Kalkolu ta' aċidità volatili

9.1.	Espressjoni f'milliekwivalenti għal kull L: Nieħdu: AT = aċidità totali f'milliekwivalenti għal kull L AF = aċidità fissa f'milliekwivalenti għal kull L L-aċidità volatili, AV, f'milliekwivalenti għal kull L hija ugwali għal: AT – AF

9.2.	Espressjoni f'mg ta' aċidu aċetiku għal kull L: Meta: AT′ = aċidità totali f'mg ta' aċidu aċetiku għal kull L AF′ = aċidità fissa f'mg ta' aċidu aċetiku għal kull L L-aċidità volatili, AV, f'mg ta' aċidu aċetiku għal kull L hija ugwali għal: AT′ – AF′

9.3.	Espressjoni fi g ta' aċidu aċetiku għal kull hl ta' alkoħol 100 % vol pur hija ugwali għal: meta A hija l-qawwa alkoħolika skont il-volum tal-ispirtu.

10.    Karatteristiċi tal-prestazzjoni analitika (Preċiżjoni)

10.1.   Ir-riżultati statistiċi tat-test interlaboratorju

Din id-dejta nkisbet minn studju internazzjonali ta' prestazzjoni analitika mwettaq skont il-proċeduri miftiehma internazzjonalment [1] [2].

Tipi ta' kampjuni:

A	Spirtu tal-għajnbaqar; Livell maqsum *

B	Rum I; duplikati għomja

C	Rum II; livell maqsum *

D	Slivovitz; duplikati għomja

E	Brandy; duplikati għomja

F	Spirtu tal-Marc; duplikati għomja

▼M1

V.   DETERMINAZZJONI KROMATOGRAFIKA B'ANETHOLE GAS TA' TRANS-ANETHOLE F'XORB ALKOĦOLIKU

1.   Għan

Dan il-metodu huwa addattat għad-determinazzjoni ta' trans-anethole f'xorb alkoħoliku b'togħma taż-żerriegħa ta' l-anisi bl-użu tal-kromatografija b'gass kapillari.

2.   Referenzi normattivi

ISO 3696: 1987 Ilma għall-użu ta' l-analiżi fil-laboratorji – Speċifikazzjonijiet u metodi ta' l-ittestjar.

3.   Prinċipju

Il-konċentrazzjoni ta' trans-anethole fl-ispirtu hija ddeterminata bil-kromatografija tal-gass (GC). L-istess kwantità ta' internal standard, per eżempju 4-allylanisole (estragole) meta l-estragole m'huwiex preżenti b'mod naturali fil-kampjun, hija miżjuda mal-kampjun tat-test u ma' soluzzjoni ta' trans-anethole ta' konċentrazzjoni magħrufa wżata bħala referenza. It-tnejn li huma huma mbagħad dilwiti ma' soluzzjoni ta' 45 % ethanol u injettati direttament fis-sistema GC. Hemm bżonn li ssir estrazzjoni qabel il-preparazzjoni u l-analiżi ta' kampjun għal-likuri li fihom kwantitajiet kbar ta' zokkor.

4.   Reaġenti u materjali

Waqt l-analiżi, uża biss reaġenti ta' purità ta' mill-inqas 98 %. Għandu jintuża ilma ta' mill-inqas grad 3 kif definit mill-ISO 3696.

Kimiċi ta' referenza għandhom jinħażnu kesħin (f'temperatura ta' 4 °C), fid-dlam, f'kontenituri ta' l-aluminju jew fi fliexken tar-reaġenti magħmula mill-ħġieġ kulurit (ambra). It-tappijiet għandhom ikunu preferibbilment imdaħħla fil-post b'siġill ta' l-aluminju. It-trans-anethole ikollu bżonn jitniżżel mill-istat kristallin tiegħu qabel jintuża, imma f'dan il-każ it-temperatura tiegħu m'għandha qatt taqbeż il-35 °C.

4.1.	Ethanol 96 % vol. (CAS 64-17-5)

4.2.	1-methoxy-4-(1-propenyl) benzene; (trans-anethole) (CAS 4180-23-8)

4.3.	4-allylanisole, (estragole) (CAS 140-67-0), internal standard suġġerit (IS)

4.4.	Ethanol 45 % vol. Żid 560 g ta' ilma distillat ma' 378 g ta' ethanol 96 % vol.

4.5.

Preparazzjoni ta' soluzzjonijiet standard Is-soluzzjonijiet standard kollha għandhom jinħażnu f'temperatura ambjentali (15 sa 35!!! error character !!! Β!!! error character !!! ΊC) fid-dlam f'kontenituri ta' l-aluminju jew fi fliexken tar-reaġenti magħmula mill-ħġieġ kulurit (ambra). It-tapp għandu jkun preferibbilment imdaħħal fil-post b'siġill ta' l-aluminju. It-trans-anethole u l-4-allylanisole huma prattikament insolubbli fl-ilma, u għalhekk hemm bżonn li t-trans-anethole u l-4-allylanisole jiddewbu fi ftit 96 % ethanol (4.1) qabel iż-żieda ta' 45 % ethanol (4.4). Is-soluzzjonijiet għall-użu għandhom ikunu preparati kull ġimgħa. 4.5.1.   Soluzzjoni Standard A Soluzzjoni għall-użu ta' trans-anethole (konċentrazzjoni: 2 g/l) Iżen 40 mg ta' trans-anethole (4.2) f'volumetric flask ta' 20 ml (jew 400 mg f'200 ml, eċċ.). Żid ftit 96 % ethanol (4.1) u kompli l-volum b'45 % vol. ethanol (4.4), ħallat sew. 4.5.2   Soluzzjoni internal standard B Soluzzjoni għall-użu ta' internal standard, per eżempju estragole (konċentrazzjoni: 2 g/l) Iżen 40 mg ta' estragole (4.3) f'volumetric flask ta' 20 ml (400 mg f'200 ml, eċċ.). Żid ftit 96 % vol. ethanol (4.1) u kompli l-volum b'45 % vol. ethanol (4.4), ħallat sew. 4.5.3   Soluzzjonijiet użati biex tiċċekkja l-linearity response tal-flame ionisation detector (FID) Il-linearity response tal-FID trid tkun iċċekkjata għall-analiżi waqt li tqis firxa ta' konċentrazzjonijiet ta' trans-anethole fi spirti minn 0 g/l sa 2.5 g/l. Fil-proċedura ta' l-analiżi, il-kampjuni mhux magħrufa li se jkunu analizzati huma dilwiti 10 darbiet (8.3). Għall-kondizzjonijiet ta' l-analiżi deskritti fil-metodu, soluzzjonijiet għall-użu li jikkorrispondu għal konċentrazzjonijiet ta' 0, 0,05, 0,1, 0,15, 0,2, u 0,25 g/l ta' trans-anethole fil-kampjun li se jkun analizzat huma preparati kif ġej: ħu 0,5, 1, 1,5, 2, u 2,5 ml ta' soluzzjoni għall-użu A (4.5.1) u ttrasferixxi bil-pipetta f'volumetric flasks separati ta' l-20 ml; ittrasferixxi bil-pipetta f'kull flask 2 ml ta' soluzzjoni internal standard B (4.5.2) u kompli l-volum b'45 % vol. ethanol (4.4), ħallat sew. Il-blank solutions (8.4) hija wżata bħala soluzzjoni ta' 0 g/l. 4.5.4   Soluzzjoni standard C Ħu 2 ml ta' soluzzjoni standard A (4.5.1) u ttrasferixxi bil-pipetta f'volumetric flask ta' l-20 ml, imbagħad żid 2 ml ta' soluzzjoni internal standard B (4.5.2) u kompli l-volum b'45 % vol. ethanol (4.4), ħallat sew.

5.   Apparat

5.1.	Kromatografu b'gass kapillari li fih flame ionisation detector (FID) u integrator jew xi sistema oħra ta' data handling li kapaċi tkejjel il-peak heights jew areas, u b'automatic sampler jew l-apparat meħtieġ għall-injezzjoni manwali tal-kampjun.

5.2.	Split/splitless injector

5.3.	Kolonna kapillari, per eżempju: Tul: 50 m Diametru ta' ġewwa: 0,32 mm Ħxuna tal-film: 0,2 μm Fażi stazzjonarja: FFAP – modified TPA polyethylene glycol cross-linked porous polymer.

5.4.	Apparat komuni tal-laboratorji: A grade volumetric glassware, analytical balance (preċiżjoni: ±0,1 mg).

6.   Kondizzjonijiet tal-kromatografija

It-tip ta' kolonna u d-dimensjonijiet, u l-kondizzjonijiet tal-GC, għandhom ikunu dawk li l-anethole u l-internal standard ikunu separati minn xulxin u minn kull sustanza oħra li tista' tinterferixxi. Kondizzjonijiet tipiċi għall-kolonna mogħtija bħala eżempju f'5.3 huma:

6.1.	Carrier gas: analytical helium

6.2.	Rata tal-fluss: 2 ml/min

6.3.	Injector temperature: 250 °C

6.4.	Detector temperature:: 250 °C

6.5.	Kondizzjonijiet tat-temperatura tal-forn: isothermal, 180°C, run time 10 minuti

6.6.	Injection volume: 1 μl, split 1:40.

7.   Kampjuni

Il-kampjuni għandhom jinħażnu f'temperatura ambjentali, f'post mudlam u mhux kiesaħ.

8.   Proċedura

8.1    Screening tal-kampjun għall-estragole

Biex tassigura li m'hemm l-ebda estragole preżenti b'mod naturali fil-kampjun, għandha ssir analiżi blank mingħajr iż-żieda ta' ebda internal standard. Jekk l-estragole huwa preżenti b'mod naturali jrid jintgħażel internal standard ieħor (per eżempju menthol).

Ittrasferixxi bil-pipetta 2 ml tal-kampjun f'volumetric flask ta' l-20 ml u kompli l-volum b'45 % vol. ethanol (4.4), ħallat sew.

8.2   Preparazzjoni ta' kampjuni mhux magħrufa

Ittrasferixxi bil-pipetta kampjun ta' 2 ml f'volumetric flask ta' l-20 ml imbagħad żid 2 ml ta' soluzzjoni internal standard B (4.5.2) u kompli l-volum b'45 % vol. ethanol (4.4), ħallat sew.

8.3	Blank Ittrasferixxi bil-pipetta 2 ml ta' soluzzjoni internal standard B (4.5.2) f'volumetric flask ta' l-20 ml u kompli l-volum b'45 % vol. ethanol (4.4), ħallat sew.

8.4

Test ta' linearità Qabel tinbeda l-analiżi, il-linearità tar-response tal-FID għandha tkun iċċekkjata billi jiġu analizzati b'mod suċċessiv tliet kopji preċiżi ta' kull waħda mil-linearity standard solutions (4.5.3). Miż-żoni peak jew il-peak heights ta' l-integrator għal kull injezzjoni ipplottja graph tal-konċentrazzjoni tal-mother solution tagħhom fi g/l versus ir-ratio R għal kull wieħed. R = il-peak height jew żona tat-trans-anethole diviża bil-peak height jew żona ta' l-estragole. Għandu jingħata linear plot.

8.5

Determinazzjoni Injetta l-blank solution (8.3), segwita mis-soluzzjoni standard C (4.5.4), segwita minn wieħed mil-linearity standards (4.5.3) li se jaħdem bħala kampjun tal-kontroll tal-kwalità (dan jista' jintgħażel b'referenza għall-konċentrazzjoni probabbli ta' trans-anethole f'dak li mhux magħruf) segwit minn ħamsa mhux magħrufa (8.2); daħħal kampjun ta' linearità (għall-kontroll tal-kwalità) wara kull ħames kampjuni mhux magħrufa, biex tassigura stabbilità analitika.

9.   Kalkolu tar-response factor

Kejjel iż-żoni peak (billi tuża integrator jew xi data system oħra) jew il-peak heights (manual integration) għat-trans-anethole u l-peaks ta' l-internal standard.

9.1   Kalkolu tar-response factor (RF i)

Ir-response factor huwa kkalkulat kif ġej:

Rfi = (Ci/area or heighti)*(area or heightis/Cis)

Fejn:

Ci	hija l-konċentrazzjoni ta' trans-anethole fis-soluzzjoni standard A (4.5.1)

Cis	hija l-konċentrazzjoni ta' internal standard fis-soluzzjoni standard B (4.5.2)

areai

hija ż-żona (jew il-height) tal-peak tat-trans-anethole

areais

hija ż-żona (jew il-height) tal-peak ta' l-internal standard

RFi huwa kkalkulat mill-ħames kampjuni ta' soluzzjoni C (4.5.4).

9.2   Analiżi tas-soluzzjonijiet tal-linearity response test.

Injetta s-soluzzjonijiet tal-linearity response test. (4.5.3).

9.3   Analiżi tal-kampjun

Injetta s-soluzzjoni mhux magħrufa tal-kampjun (8.2).

10.   Kalkolu tar-riżultati

Il-formola għall-kalkolu tal-konċentrazzjoni ta' trans-anethole hi din li ġejja:

ci = Cis * (żona jew heighti /żona jew heightis )*RFi

Fejn:

ci	hija l-konċentrazzjoni ta' trans-anethole mhux magħrufa

Cis	hija l-konċentrazzjoni ta' internal standard fis-soluzzjoni mhux magħrufa (4.5.2)

Area jew heighti

hija ż-żona jew il-height tal-peak tat-trans-anethole

Area jew heightis

hija ż-żona jew il-height tal-peak ta' l-internal standard

RFi	huwa r-response coefficient (ikkalkulat bħal dak f'9.1)

Il-konċentrazzjoni ta' trans-anethole hija espressa fi grammi f'kull litru, sa punt deċimali wieħed.

11.   Assigurazzjoni u kontroll tal-kwalità

Il-chromatograms iridu jkunu dawk li l-anethole u l-internal standard ikunu separati minn xulxin u minn kull sustanza oħra li tista' tinterferixxi. Il-valur tar-RFi huwa kkalkulat mir-riżultati għall-ħames injezzjonijiet ta' soluzzjoni C (4.5.4). Jekk il-coefficient of variation (CV % = (standard deviation/mean)*100) huwa sa plus jew minus 1 %, il-valur medju tar-RFi huwa aċċettabbli.

Il-kalkolu ta' hawn fuq għandu jintuża biex tkun kalkulata l-konċentrazzjoni ta' trans-anethole fil-kampjun magħżul għall-kontroll tal-kwalità mis-soluzzjonijiet tal-linearity control (4.5.3).

Jekk ir-riżultati medji kkalkulati mill-analiżi tal-linearity solution magħżula bħala kampjun għall-internal quality control (IQC) huma sa plus jew minus 2,5 % tal-valur teoretiku tagħhom, allura r-riżultati għall-kampjuni mhux magħrufa jistgħu jkunu aċċettati.

12.   Trattament tal-kampjun tax-xorb alkoħoliku li fih ammont kbir ta' zokkor u tal-kampjun tal-likuri qabel l-analiżi bil-GC

Estrazzjoni ta' alkoħol mix-xorb alkoħoliku li fih ammont kbir ta' zokkor, sabiex tkun tista' tiġi ddeterminata l-konċentrazzjoni ta' trans-anethole bl-użu tal-kromatografija b'gass kapillari.

12.1.   Prinċipju

Parti milll-kampjun tal-likuri tittieħed u ma' din jinżied l-internal standard, f'konċentrazzjoni simili għal dik ta' l-analyte (trans-anethole) fil-likur. Ma' dan jinżiedu sodium phosphate dodecahydrate u anhydrous ammonium sulphate. It-taħlita li tirriżulta titħawwad sew u titkessaħ, żewġ saffi jiżviluppaw, u s-saff ta' alkoħol fil-wiċċ jitneħħa. Parti minn dan is-saff ta' alkoħol tittieħed u tiġi dilwita ma' soluzzjoni ta' 45 % ethanol (4.4) (Nota: l-ebda internal standard ma jiżdied f'din il-fażi, għax diġa żdied). Is-soluzzjoni li tirriżulta tiġi analizzata fil-kromatografija tal-gass.

12.2.   Reaġenti u materjali

Waqt l-estrazzjoni uża biss reaġenti ta' purità ikbar muinn 99 %.

12.2.1.

Ammonium sulphate, anhydrous, (CAS 7783-20-2).

12.2.2.

Sodium phosphate, dibasic, dodecahydrate, (CAS 10039-32-4).

12.3.   Apparat

Conical flasks, separating flasks, friġġ.

12.4.   Proċedura

12.4.1.    Screening tal-kampju għall-estragole

Biex tassigura li m'hemm l-ebda estragole preżenti b'mod naturali fil-kampjun, għandhom isiru blank extraction (12.6.2) u analiżi mingħajr iż-żieda ta' ebda internal standard. Jekk l-estragole huwa preżenti b'mod naturali jrid jintgħażel internal standard ieħor.

12.4.2.   Estrazzjoni

Ittrasferixxi bil-pipetta 5 ml ta' 96 % ethanol (4.1) f'conical flask, iżen f'dan il-flask 50 mg ta' internal standard (4.3), u żid 50 ml tal-kampjun. Żid 12 g ta' ammonium sulphate, anhydrous (12.2.1), 8.6 g ta' dibasic sodium phosphate, dodecahydrate (12.2.2). Agħlaq il-conical flask b'tapp.

Ħawwad il-flask għal mill-inqas 30 minuta. Jista' jintuża apparat mekkaniku għat-taħwid, imma mhux Teflon coated magnetic stirring bar, minħabba li t-Teflon jassorbi ftit mill-analyte. Ara li l-imluħa miżjuda ma jdubux kompletament.

Poġġi l-flask magħluq bit-tapp fi friġġ (T < 5 C) għal mill-inqas sagħtejn.

Wara dan il-ħin, suppost li jkun hemm żewġ saffi distinti ta' likwidi u residwu solidu. Is-saff ta' alkoħol għandu jkun ċar, jekk le, erġa' poġġi fil-friġġ sakemm ikun hemm separazzjoni ċara.

Meta s-saff ta' l-akoħol ikun ċar, ħu bil-galbu parti minnu (per eżempju 10 ml), mingħajr ma ċċaqlaq is-saff ta' l-ilma, poġġi f'tubu tal-ħġieġ kulur ambra u għalaq sew.

12.4.3.   Preparazzjoni tal-kampjun estratt li se jkun analizzat

Ħalli l-estratt (12.4.2) jilħaq temperatura ambjentali.

Ħu 2 ml tas-saff ta' l-akoħol tal-kampjun estratt u ttrasferixxi bil-pipetta f'volumetric flask ta' l-20 ml, kompli l-volum b'45 % ethanol (4.4), ħallat sew.

12.5.   Determinazzjoni

Segwi l-proċedura kif indikat f'8.5.

12.6.   Kalkolu tar-riżultati

Uża l-formola li ġejja biex tikkalkula r-riżultati:

Ci = (mis/V)* (areai/areais)*RFi

fejn:

mis	hija l-piż ta' internal standard (4.3) meħud (12.4.2) (f'milligrammi)

V	hija l-volum ta' kampjun mhux magħruf (50 ml)

RFi	hija r-response factor (9.1)

areai

hija ż-żona tal-peak tat-trans-anethole

areais

hija ż-żona tal-peak ta' internal standard

Ir-riżultati huma espressi fi grammi f'kull litru, sa punt deċimali wieħed.

12.7   Kontroll u assigurazzjoni tal-kwalità

Segwi l-proċedura kif indikat fi 11 hawn fuq.

13.   Karatteristiċi ta' method performance (preċiżjoni)

Riżultati statistiċi tat-test interlaboratorju:

It-tabelli li ġejjin jagħtu l-valuri għall-anethole.

L-informazzjoni li ġejja ttieħdet minn studju internazzjonali ta' method performance magħmul skond proċeduri miftehma internazzjonalment.

Tipi ta' kampjuni:

A	pastis, blind duplicates

B	pastis, blind duplicates

C	pastis, blind duplicates

D	pastis, blind duplicates

E	pastis, single duplicates

F	pastis, single duplicates

Tipi ta' kampjuni:

G	ouzo, split levels (*)

H	anisi, blind duplicates

I	likur b'togħma taż-żerriegħa ta' l-anisi, duplicates

J	likur b'togħma taż-żerriegħa ta' l-anisi, duplicates.

VI.    GLYCYRRHIZIC ACID. DETERMINAZZJONI TA' GLYCYRRHIZIC ACID BL-UŻU TAL-KROMATOGRAFIJA HIGH-PERFORMANCE TAL-LIKWIDU

1.   Għan

Dan il-metodu huwa addattat għad-determinazzjoni ta' glycyrrhizic acid f'xorb alkoħoliku b'togħma taż-żerriegħa ta' l-anisi bl-użu tal-kromatografija tal-likwidu high performance (HPLC). Ir-Regolament (KEE) Nru. 1576/89 jispeċifika li kull xorb alkoħoliku b'togħma taż-żerriegħa ta' l-anisi msejjaħ “ pastis ” irid ikun fih bejn 0,05 u 0,5 g ta' glycyrrhizic acid f'kull litru.

2.   Referenzi normattivi

ISO 3696: 1987 Ilma għall-użu ta' l-analiżi fil-laboratorji – Speċifikazzjonijiet u metodi ta' l-ittestjar.

3.   Prinċipju

Il-konċentrazzjoni ta' glycyrrhizic acid hija ddeterminata bl-użu tal-kromatografija tal-likwidu high performance (HPLC) bil-UV detection. Soluzzjoni standard u l-kampjun tat-test huma ffiltrati u huma injettati separatament direttament fis-sistema HPLC.

4.   Reaġenti u materjali

Waqt l-analiżi, uża biss reaġenti ta' grad HPLC, absolute ethanol u ilma ta' grad 3 kif definit mill-ISO 3696.

4.1.	Ethanol 96 % vol. (CAS 64-17-5).

4.2.	Ammonium glycyrrhizinate, C42H62O16NH3 (Glycyrrhizic acid ammonium salt) (Mol. Wt.: 839,98) (CAS 53956-04-0): purità mill-anqas 90 % (Mol. Wt.: glycyrrhizic acid 822,94).

4.3.	Glacial acetic acid, CH3COOH, (CAS 64-19-7).

4.4.	Methanol, CH3OH (CAS 67-56-1).

4.5	Ethanol 50 % vol. Għal 1 000  ml f'temperatura ta' 20°C: —  96 % vol. ethanol (4.1): 521 ml —  Ilma (2.0): 511 ml.

4.6

Preparazzjoni ta' l-HPLC elution solutions 4.6.1.   Elution solvent A (eżempju) 80 parti (skond il-volum) ta' ilma (2.0) 20 parti (skond il-volum) ta' acetic acid (4.3). Neħħi l-gass mill-elution solvent għal ħames minuti. Nota: Jekk l-ilma wżat ma ġiex mikrofiltrat, aħjar tiffiltra l-elution solvent preparat fuq filter għall-organic solvents b'pore size inqas minn jew fid-daqs ta' 0,45μm. 4.6.2.   Elution solvent B Methanol (4.4).

4.7

Preparazzjonijiet ta' soluzzjonijiet standard Is-soluzzjonijiet standard kollha jridu jkunu preparati mill-ġdid wara xahrejn. 4.7.1.   Soluzzjoni ta' referenza C Iżen għall-eqreb 0,1 mg, 25 mg ta' ammonium glycyrrhizinate (4.2) f'volumetric flask tal-100 ml. Żid ftit 50 % vol. ethanol (4.5) u dewweb l-ammonium glycyrrhizinate. Meta jkun dab kompli sal-marka b'50 % vol. ethanol (4.5). Iffiltra minn filter għall-organic solvent. 4.7.2.   Soluzzjonijiet standard użati biex tiċċekkja l-linearità tar-response ta' l-istrumentazzjoni Soluzzjoni għall-użu ta' 1,0 g/l hija preparata billi tiżen, bl-iktar mod preċiż possibbli 0,1 mg, 100 mg ta' ammonium glycyrrhizinatef'volumetric flask tal-100 ml. Żid ftit 50 % vol. ethanol (4.5) u dewweb l-ammonium glycyrrhizinate. Meta jkun dab kompli sal-marka b'50 % vol. ethanol (4.5). Mill-inqas erba' soluzzjonijiet oħra li jikkorrispondu għal 0,05, 0,1, 0,25 u 0,5 g/l ta' ammonium glycyrrhizinate huma preparati billi jiġu trasferiti bil-pipetta rispettivament 5 ml, 10 ml, 25 ml u 50 ml tas-soluzzjoni għall-użu ta' 1,0 g/l f'volumetric flasks separati tal-100 ml. Imbagħad kompli sal-marka b'50 % vol. ethanol (4.5) u ħallat sew. Iffiltra s-soluzzjonijiet kollha minn filter għall-organic solvents

5.   Apparat

5.1.   Sistema ta' separazzjoni

5.1.1

Kromatografu high-performance tal-likwidu.

5.1.2.

Sistema ta' ppumpjar li tippermettilek li tilħaq u żżomm rata ta' fluss kostanti jew ipprogrammata bi preċiżjoni kbira.

5.1.3.

UV spectrophotometric detection system: għandu jkun issettjat fuq 254 nm.

5.1.4.

Solvent degassing system.

5.2.	Computational integrator jew recorder, li l-performance tiegħu hija kompatibbli mal-bqija tas-sistema.

5.3.	Kolonna (eżempju): Materjal: stainless steel jew ħġieġ Diametru ta' ġewwa: 4 sa 5 mm Tul: 100 sa 250 mm Fażi stazzjonarja: cross-linked silica ma' octadecyl functional group (C18) (preferibbilment sferiku), particle size massimu: 5 μm.

5.4.	Apparat tal-laboratorju 5.4.1. Analytical balance bi preċiżjoni ta' 0,1 mg 5.4.2. A-grade volumetric glassware 5.4.3. Micromembrane filtration arrangement għal volumi żgħar.

6.   Kondizzjonijiet tal-kromatografija

6.1.	Karatteristiċi ta' l-elution: (eżempju) —  rata tal-fluss: 1 ml/minuta, —  solvent A = 30 %, —  solvent B = 70 %.

6.2.	Detection: —  UV = 254 nm

7.   Proċedura

7.1.   Preparazzjoni tal-kampjun tax-xorb alkoħoliku

Iffiltra, jekk ikun hemm bżonn, minn filter għall-organic solvents (pore diameter: 0,45 μm).

7.2.   Determinazzjoni

Meta l-kondizzjonijiet tal-kromatografija jkunu stabbilew ruħhom,

fejn:

c	hija l-konċentrazzjoni fi grammi f'kull litru ta' glycyrrhizic acid fix-xorb alkoħoliku li jkun qed jiġi analizzat

C	hija l-konċentrazzjoni fi grammi f'kull litru ta' ammonium glycyrrhizinate fis-soluzzjoni ta' referenza

h	hija ż-żona (jew il-height) tal-peak ta' glycyrrhizic acid tax-xorb alkoħoliku li jkun qed jiġi analizzat

H	hija ż-żona (jew il-height) tal-peak ta' glycyrrhizic acid tas-soluzzjoni ta' referenza

P	hija l-purità tar-referenza ammonium glycyrrhizinate (f' %)

823	hija l-massa ta' mole wieħed ta' glycyrrhizic acid

840	hija l-massa ta' mole wieħed ta' ammonium glycyrrhizinate.

8.   Karatteristiċi ta' method performance (preċiżjoni)

Riżultati statistiċi tat-test interlaboratorju:

It-tabella li ġejja tagħti l-valuri għall-glycyrrhizic acid.

L-informazzjoni li ġejja ttieħdet minn studju internazzjonali ta' method performance magħmul skond proċeduri miftiehma internazzjonalment.

Tipi ta' kampjuni:

A	pastis, blind duplicates

B	pastis, split levels (*)

C	pastis, blind duplicates

D	pastis, blind duplicates

E	pastis, blind duplicates

VII.    CHALCONES, METODU TAL-KROMATOGRAFIJA TAL-LIKWIDU HIGH-PERFORMANCE BIEX TIVVERIFIKA L-PREŻENZA TA' CHALCONES FIL-PASTIS

1.   Għan

Dan il-metodu huwa addattat biex tiddetermina jekk iċ-chalcones humiex preżenti fix-xorb alkoħoliku b'togħma ta' l-anisi jew le. Chalcones huma koloranti naturali tal-familja flavanoid li huma preżenti fl-għeruq tal-likurizja (Glycyrrhiza glabra).

Biex xorb alkoħoliku b'togħma taż-żerriegħa ta' l-anisi jissejjaħ “ pastis ”, irid ikun fih iċ-chalcones (Regolament (KEE) Nru. 1576/89).

2.   Referenzi normattivi

ISO 3696: 1987 Ilma għall-użu ta' l-analiżi fil-laboratorji – Speċifikazzjonijiet u metodi ta' l-ittestjar.

3.   Prinċipju

Soluzzjoni ta' referenza ta' estratt tal-likurizja hija preparata. Il-preżenza jew l-assenza ta' chalcones hija ddeterminata bl-użu tal-kromatografija high-performance tal-likwidu (HPLC) bil-UV detection.

4.   Reaġenti u materjali

Waqt l-analiżi, uża biss reaġenti ta' grad HPLC. L-ethanol għandu jkun 96 % vol. Għandu jintuża ilma ta' grad 3 biss kif definit mill-ISO 3696.

4.1.	Ethanol 96 % vol. (CAS 64-17-5)

4.2.	Acetonitrile, CH3CN, (CAS 75-05-8)

4.3.	Sustanza ta' referenza: Glycyrrhiza glabra: likurizja, “sweet root” Għeruq tal-likurizja mitħunin mhux fini (Glycyrrhiza glabra). Dimensjonijiet medji tal-biċċiet tawwalin: tul: 10 sa 15 mm, ħxuna: 1 sa 3 mm.

4.4.	Sodium acetate, CH3COONa, (CAS 127-09-3)

4.5.	Glacial acetic acid, CH3COOH, (CAS 64-19-7)

4.6.

Preparazzjoni tas-soluzzjonijiet 4.6.1.   Ethanol 50 % volume Għal 1 000  ml f'temperatura ta' 20 °C: —  96 % vol. ethanol (4.1): 521 ml, —  Ilma (2.0): 511 ml. 4.6.2.   Solvent A: acetonitrile Acetonitrile (4.2) ta' purità għall-analiżi HPLC. Neħħi l-gass 4.6.3.   Solvent B: 0,1 M sodium acetate buffer solution, pH 4,66. Iżen 8,203 g ta' sodium acetate (4.4), żid 6,005 g ta' glacial acetic acid (4.5) u kompli għal 1 000  ml bl-ilma (2) f'volumetric flask.

5.   Preparazzjoni ta' l-estratt ta' referenza mill-Glycyrrhiza glabra (4.3)

5.1.	Iżen 10 g ta' għeruq tal-likurizja (Glycyrrhiza glabra) (4.3) u poġġiha f'distillation flask bil-qiegħ tond. —  żid 100 ml ta' 50 % vol. ethanol (4.6.1), —  għalli taħt reflux għal siegħa, —  iffiltra, —  poġġi l-likwidu filtrat għalih biex tużah iktar tard

5.2.	Ħu l-estratt tal-likurizja mill-filter —  poġġih f'distillation flask bil-qiegħ tond, —  żid 100 ml ta' 50 % vol. ethanol (4.6.1), —  għalli taħt reflux għal siegħa, —  iffiltra. Poġġi l-likwidu filtrat għalih biex tużah iktar tard.

5.3.	L-estrazzjoni tal-likurizja trid issir tliet darbiet wara xulxin.

5.4.	Ħallat it-tliet likwidi filtrati.

5.5.	Evapora s-solvent phase (ta' 5.4.) fuq rotary evaporator.

5.6.	Ħu l-estratt residwu (ta' 5.5) ma' 100 ml 50 % vol. ethanol (4.6.1).

6.   Apparat

6.1.   Sistema ta' separazzjoni.

6.1.1.

Kromatografija tal-likwidu high-performance.

6.1.2.

Sistema ta' ppumpjar li kapaċi tilħaq u żżomm rata ta' fluss kostanti jew programmata bi pressjoni għolja.

6.1.3.

UV/visible spectrophotometric detection system li tista' tkun issettjata fuq 254 u 370 nm.

6.1.4.

Solvent degassing system:

6.1.5.

Column oven li jista' jkun issettjat għal temperatura ta' 40 ± 0,1 °C.

6.2.	Computational integrator jew recorder, li l-performance tiegħu hija kompatibbli mal-bqija tas-sistema ta' separazzjoni.

6.3.	Kolonna Materjal: stainless steel jew ħġieġ Diametru ta' ġewwa: 4 sa 5 mm Fażi stazzjonarja: cross-linked silica ma' octadecyl derived functional group (C18), particle size: 5 μm l-iktar (fażi cross-linked).

6.4.

Apparat komuni tal-laboratorju, inkluż: 6.4.1. analytical balance (preċiżjoni: ± 0,1 mg); 6.4.2. Apparat tad-distillar b'reflux condenser, li jinkludi, per eżempju: —  flask bil-qiegħ tond tal-250 ml bi standardised ground-glass joint, —  reflux condenser twil 30 ċm, u —  sors ta' sħana (kull reazzjoni piroġenika li tinvolvi l-materja estrattiva trid tkun evitata billi tuża arranġament addattat). 6.4.3. Apparat tar-rotary evaporation. 6.4.4. Apparat għall-filtrazzjoni (i.e. Buchner funnel).

6.5.

Kondizzjonijiet tal-kromatografija (eżempju). 6.5.1. Karatteristiċi ta' elution ta' solvents A (4.6.2) u B (4.6.3): —  bidla minn 20/80 (v/v) għal 50/50 (v/v) gradient fi 15-il minuta, —  bidla minn 50/50 (v/v) għal 75/25 (v/v) gradient f'ħames minuti, —  saħħa ugwali ta' 75/25 (v/v) għal ħames minuti, —  stabbilizzazzjoni tal-kolonna bejn l-injezzjonijiet, —  saħħa ugwali ta' 20/80 (v/v) għal ħames minuti. 6.5.2. Rata tal-fluss: 1 ml/minuta. 6.5.3. Issettjar tal-UV detector: id-detector irid ikun issettjat fuq 370 nm biex tinstab il-preżenza ta' chalcones u mbagħad fuq 254 nm biex jinstab il-glycyrrhizic acid. Nota: il-bidla ta' wavelength (minn 370 nm għal 254 nm) trid issir 30 sekonda qabel il-bidu tal-peak ta' elution tal-glycyrrhizic acid.

7.   Proċedura

7.1.   Preparazzjoni tal-kampjun tax-xorb alkoħoliku

Iffiltra minn filter għall-organic solvents (pore diameter: 0,45 μm).

7.2.   Preparazzjoni ta' l-estratt ta' likurizja residwu (5.6)

Għamel dilution wieħed f'għaxra b'50 % vol. ethanol (4.6.1) qabel l-analiżi.

7.3.   Determinazzjoni

7.3.1.

Injetta 20 μl ta' l-estratt ta' likurizja preparat (7.2). Għamel l-analiżi billi tuża l-kondizzjonijiet tal-kromatografija deskritti hawn fuq (6.5).

7.3.2.

Injetta 20 μl tal-kampjun (7.1) (kampjun tax-xorb alkoħoliku b'togħma taż-żerriegħa ta' l-aniżi). Għamel l-analiżi billi tuża l-kondizzjonijiet tal-kromatografija deskritti hawn fuq (6.5).

7.3.3.

Qabbel iż-żewġ chromatograms. Għandu jkun hemm xebh kbir bejn iż-żewġ chromatograms fil-chalcone exit zone (waqt id-detection ta' 370 nm taħt il-kondizzjonijiet ta' l-analiżi deskritti hawn fuq) (ara Tabella 1).

8.    Chromatogram karatteristiku għal pastis

Figura 1

Il-chromatogram li jirriżulta mill-metodu deskritt hawn fuq, li juri l-preżenza ta' chalcones f'“pastis”. Il-Peaks 1 sa 8 huma chalcones u peak 9 hija glycyrrhizic acid.

9.   Karatteristiċi ta' method performance (preċiżjoni)

Riżultati tat-test interlaboratorju:

It-tabella li ġejja tagħti l-performance għal rikonoxximent ta' preżenza jew assenza ta' chalcones fil-pastis u f'xorb alkoħoliku bit-togħma taż-żerriegħa ta' l-anisi.

L-informazzjoni li ġejja ttieħdet minn studju internazzjonali ta' method performance magħmul skond proċeduri miftiehma internazzjonalment.

Tipi ta' kampjuni:

A	pastis, blind duplicates

B	pastis, single sample

C	pastis, single sample

D	“pastis” (li ma fihx chalcones), blind duplicates

E	pastis (li ma fihx chalcones), blind duplicates

F	likur b'togħma taż-żerriegħa ta' l-anisi (li ma fihx chalcones), blind duplicates

G	likur b'togħma taż-żerriegħa ta' l-anisi (li ma fihx chalcones), blind duplicates

H	ouzo (li ma fihx chalcones), single sample

I	ouzo (li ma fihx chalcones), single sample

J	anisi (li ma fihx chalcones), blind duplicates

K	“pastis” (li ma fihx chalcones), blind duplicates.

▼M2

VIII.   ZOKKOR TOTALI

1.    Kamp tal-applikazzjoni

Il-metodu HPLC–RI jiġi applikat biex jiddetermina t-total ta' zokkor (espress bħala zokkor invertit) fl-ispirti, bl-esklużjoni ta' likuri li fihom il-bajd u l-prodotti tal-ħalib.

Il-metodu ġie vvalidat fi studju interlaboratorju għall-pastis, l-aniżetta distillata, il-likur taċ-ċirasa, il-crème de (segwit bl-isem ta' frotta jew il-materja prima użata) u l-crème de cassis, fil-livelli li jvarjaw bejn 10,86 g/l sa 509,7 g/l. Madankollu, il-linearità tar-rispons tal-istrument ġiet ippruvata għall-medda tal-konċentrazzjoni 2,5 g/l sa 20,0 g/l.

Dan il-metodu mhuwiex maħsub biex jiddetermina l-livelli baxxi ta' zokkor.

2.    Referenzi Normattivi

ISO 3696:1987 Ilma għall-użu analitiku — Speċifikazzjonijiet u metodi tal-ittestjar.

3.    Prinċipju

Assaġġi ta' kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja tas-soluzzjonijiet taz-zokkor, biex jiġu determinati l-konċentrazzjonijiet tal-glukożju, tal-fruttożju, tas-sukrożju, tal-maltożju u tal-lattożju.

Dan il-metodu juża fażi stazzjonarja alkilammina u d-detezzjoni ta' riffrattometrija differenzjali u qed jingħata bħala eżempju. L-użu ta' reżini ta' skambju anjoniku bħala fażi stazzjonarja għandu jkun possibbli wkoll.

4.    Reaġenti u Materjali

4.1.	Glukożju (CAS 50-99-7), b'purezza tal-inqas 99 %.

4.2.	Fruttożju (CAS 57-48-7), b'purezza tal-inqas 99 %.

4.3.	Sukrożju (CAS 57-50-1), b'purezza tal-inqas 99 %.

4.4.	Lattożju (CAS 5965-66-2), b'purezza tal-inqas 99 %.

4.5.	Maltożju monoidrat (CAS 6363-53-7), b'purezza tal-inqas 99 %.

4.6.	Aċetonitril pur (CAS 75-05-8) għall-analiżi HPLC.

4.7.	Ilma distillat jew demineralizzat, preferibbilment mikrofiltrat.

4.8.

Solventi (eżempju) Is-solvent tal-elwizzjoni huwa magħmul minn: 75 parti b'volum ta' aċetonitril (4.6), 25 parti b'volum ta' ilma distillat (4.7). Għaddi l-elju minnu b'rata baxxa għal 5-10 minuti qabel jintuża biex ineħħi l-gass. Jekk l-ilma użat ma jkunx ġie mikrofiltrat, is-solvent għandu jiġi ffiltrat b'filter għas-solventi organiċi b'daqs tal-pori 0,45 μm jew inqas.

4.9.	Etanol assolut (CAS 64-17-5).

4.10.

Soluzzjoni ta' etanol (5 %, v/v).

4.11.

Tħejjija ta' soluzzjoni ewlenija standard (20 g/L) Iżen 2 g minn kull zokkor li jrid jiġi analizzat (4.1. sa 4.5.), ittrasferihom mingħajr telf fi flask volumetriku ta' 100 mL. (NB 2.11 g ta' maltożju monoidrat huwa ekwivalenti għal 2 g ta' maltożju). Aġġusta għal 100 mL b'5 % alkoħol (4.10), ħawwad u aħżen f'madwar + 4 °C. Ħejji soluzzjoni ewlenija ġdida darba fil-ġimgħa.

4.12.

Tħejjija ta' soluzzjonijiet standard tax-xogħol (2,5, 5,0, 7,5, 10,0 u 20,0 g/L) Iddilwa s-soluzzjoni ewlenija, 20 g/L, (4.11) bejn wieħed u ieħor b'5 % vol. ta' soluzzjoni ta' alkoħol (4.10) biex tagħti ħames standards ta' xogħol ta' 2,5, 5,0, 7,5, 10,0 u 20,0 g/L. Iffiltra b'filter b'daqs tal-pori 0,45 μm jew anqas (5.3).

5.    Apparat u Tagħmir

5.1.   Is-sistema HPLC tista' tikseb riżoluzzjoni bażi taz-zokkor kollu.

5.1.1.

Il-kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja b'valv tal-injezzjoni b'sitt passaġġi mgħammar b'loop ta' 10 μL jew kwalunkwe apparat ieħor, kemm jekk awtomatiku jew manwali, għall-injezzjoni affidabbli tal-mikrovolumi.

5.1.2.

Sistema ta' ppumpjar li tippermettilek tilħaq u żżomm rata ta' fluss kostanti jew ipprogrammata bi preċiżjoni kbira.

5.1.3.

Rifrattometru differenzjali.

5.1.4.

Integratur jew recorder komputazzjonali, li l-prestazzjoni tiegħu hija kompatibbli mal-bqija tas-sistema.

5.1.5.

Prekolonna: Huwa rrakkomandat li tinhemeż prekolonna adattata mal-kolonna analitika.

5.1.6.

Kolonna (eżempju): Materjal: azzar inossidabbli jew ħġieġ. Dijametru Intern: 2-5 mm. Tul: 100-250 mm (jiddependi mid-daqs tal-partiċelli ippakkjati), pereżempju, 250 mm jekk il-partiċelli għandhom dijametru ta' 5 μm. Fażi stazzjonarja: gruppi funzjonali tal-alkilammina ibbondjati mas-siliċe, daqs massimu tal-partiċella 5 μm.

5.1.7.

Kundizzjonijiet tal-kromatografija (eżempju): Solvent tal-elwizzjoni (4,8), rata ta' fluss: 1 mL/minuta. Detezzjoni: Rifrattometrija differenzjali. Biex jiġi żgurat li d-ditekter ikun perfettament stabbli, għandu jinxtegħel ftit sigħat qabel l-użu. Iċ-ċellola ta' referenza trid timtela bis-solvent ta' elwizzjoni.

5.2.	Bilanċ analitiku preċiż sa 0,1 mg.

5.3.	Apparat għall-filtrazzjoni għal volumi żgħar bl-użu ta' mikromembrana 0,45 μm.

6.    Ħażna tal-kampjuni

Meta jaslu, il-kampjuni jinħażnu f'temperatura tal-kamra qabel l-analiżi.

7.    Proċedura

7.1.   PARTI A: Tħejjija tal-Kampjun

7.1.1.

Ħawwad il-kampjun.

7.1.2.

Iffiltra l-kampjun minn ġo filtru b'daqs tal-pori 0,45 μm jew inqas (5.3).

7.2.   PARTI B: HPLC

7.2.1.   Determinazzjoni

Injetta 10 μL tas-soluzzjoni standard (4.12.) u l-kampjuni (7.1.2.). Agħmel l-analiżi skont il-kundizzjonijiet adattati tal-kromatografija, pereżempju dawk deskritti hawn fuq.

7.2.2.

Jekk xi massimu ta' kampjun ikollu erja (jew għoli) akbar mill-ogħla livell korrispondenti fl-aktar standard ikkonċentrat, il-kampjun għandu jiġi dilwit bl-ilma ddistillat u analizzat mill-ġdid.

8.    Kalkolu

Qabbel iż-żewġ kromotogrami miksuba mis-soluzzjoni standard u l-ispirtu. Identifika l-qċaċet permezz tal-ħinijiet tagħhom ta' retenzjoni. Kejjel l-erjas (jew l-għoli) tagħhom biex tikkalkula l-konċentrazzjonijiet permezz tal-metodu standard estern. Qis kull dilwizzjoni magħmula fuq il-kampjun.

Ir-riżultat finali huwa s-somma ta' sukrożju, maltożju, lattożju, glukożju u fruttożju, espressa bħala zokkor invertit fi g/L.

Iz-zokkor invertit huwa kkalkulat bħala s-somma tal-monosakkaridi u d-disakkaridi bi proprjetajiet ta' riduzzjoni kollha preżenti, flimkien mal-ammont stojkjometriku ta' glukożju u fruttożju ikkalkulat mis-sukrożju preżenti.

Zokkor invertit (g/L)

=

glukożju (g/L) + fruttożju (g/L) + maltożju (g/L) + lattożju (g/L) + (sukrożju (g/L) × 1,05)

1,05

=

(Piż Molekulari ta' fruttożju + Piż Molekolari ta' glukożju)/Piż Molekulari ta' sukrożju

9.    Karatteristiċi tal-prestazzjoni analitika (Preċiżjoni)

9.1.   Ir-riżultati statistiċi tat-test interlaboratorju

Din id-dejta nkisbet minn studju internazzjonali ta' prestazzjoni analitika mwettaq skont il-proċeduri miftiehma internazzjonalment [1] [2].

▼M1

IX.   ISFAR TAL-BAJD. DETERMINAZZJONI TAL-KONĊENTRAZZJONI TA' ISFAR TAL-BAJD FIX-XORB ALKOĦOLIKU – METODU FOTOMETRIKU

1.   Għan

Dan il-metodu huwa addattat għad-determinazzjoni tal-konċentrazzjoni ta' isfar tal-bajd minn 40 sa 250 g/l fil-likuri tal-bajd u l-likuri bil-bajd.

2.   Referenzi normattivi

ISO 3696: 1897 Ilma għall-użu ta' l-analiżi fil-laboratorji – Speċifikazzjonijiet u metodi ta' l-ittestjar.

3.   Prinċipju

L-ethanol-soluble phosphorus compounds li jinsabu fl-isfar tal-bajd huma estratti u l-konċentrazzjoni tagħhom hija determinata bil-fotometrija bħala phosphorus molybdate complex.

4.   Reaġenti u materjali

4.1.	Ilma double-distilled

4.2.	Diatomaceous earth

4.3.	Ethanol 96 % vol. (CAS 64-17-5)

4.4.	Soluzzjoni 15 % magnesium acetate (CAS 16674-78-5)

4.5.	10 % sulphuric acid (CAS 7664-93-9)

4.6.	1 N sulphuric acid.

4.7.	0,16 g/l potasssium dihydrogen phosphate (CAS 778-77-0), soluzzjoni KH2PO4

4.8.

Reaġent għad-determinazzjoni tal-fosfat: dewweb 20 g ta' ammonium molybdate (CAS 12054-85-2), (NH4)6Mo7O24.4H2O f'400 ml ilma f'temperatura ta' 50°C; dewweb, f'kontenitur ieħor, gramma ta' ammonium vanadate (CAS 7803-55-6), NH4VO3, f'300 ml ilma jaħraq, ħallih jibred, imbagħad żid 140 ml ta' nitric acid konċentrat (CAS 7697-37-2). Ħallat is-soluzzjonijiet imberrda f'volumetric flask ta' l-1 000  ml u kompli sal-marka ta' l-1 000  ml.

5.   Apparat

5.1.	Conical flask tal-100 ml

5.2.	Ultrasonic bath (jew magnetic stirrer)

5.3.	Volumetric flask tal-100 ml

5.4.	Banju bl-ilma f'temperatura ta' 20 °C

5.5.	Filter (Whatman No 4 jew ekwivalenti)

5.6.	Crucible tal-porċellana (jew tal-platinum)

5.7.	Banju bl-ilma jagħli

5.8.

Hot plate

5.9.	Muffle furnace

5.10.

Volumetric flask tal-50 ml

5.11.

Volumetric flask ta' l-20 ml

5.12.

Spectrophotometer issettjat fuq 420 nm

5.13.

Cuvette ta' ċentimetru.

6.   Kampjuni

Il-kampjuni huma maħżuna f'temperatura ambjentali qabel l-analiżi.

7.   Proċedura

7.1.   Preparazzjoni tal-kampjun

7.1.1.

Iżen 10 g tal-kampjun f'conical flask tal-100 ml (5.1).

7.1.2.

Żid gradwalment 70 ml ta' ethanol (4.3) f'porzjonijiet żgħar, ħawwad ma' kull żieda, u poġġi f'banju ultrasoniku (5.2) għal 15-il minuta (jew ħawwad it-taħlita b'magnetic stirrer (5.2) għal 10 minuti f'temperatura ambjentali).

7.1.3.

Ittrasferixxi l-kontenut tal-flask f'volumetric flask tal-100 ml (5.3) b'washings ta' ethanol (4.3). Aġġusta sal-calibration mark b'ethanol (4.3) u poġġi l-flasks f'water bath f'temperatura ta' 20 °C (5.4). Aġġusta sal-calibration mark f'temperatura ta' 20 °C.

7.1.4.

Żid ammont żgħir ta' diatomaceous earth (4.2) u ffiltra (5.5), u armi l-ewwel 20ml.

7.1.5.

Ittrasferixxi 25 ml tal-likwidu filtrat f'crucible tal-porċellana (jew tal-platinum) (5.6). Il-likwidu filtrat irid imbagħad jiġi konċentrat b'gentle evaporation f'boiling water bath (5.7), biż-żieda ta' 5ml ta' soluzzjoni 15 % magnesium acetate (4.4).

7.1.6.

Poġġi l-crucibles fuq hot plate (5.8) u saħħan sakemm jixxuttaw.

7.1.7.

Ġib ir-residwu rmied billi ssaħħan sa l-inkandexxenza f'temperatura ta' 600 °C f'muffle furnace(5.9) sakemm l-irmied isir abjad, minimu ta' siegħa u nofs imma jista' jitħalla matul il-lejl.

7.1.8.

Ħu l-irmied ma' 10 ml ta' 10 % sulphuric acid (4.5) u ttrasferieh b'washings ta' ilma distillat (4.1) f'volumetric flask ta' 50 ml (5.10), u imla sal-marka f'temperatura ambjentali b'ilma distillat (4.1).Parti ta' 5 ml ta' din is-soluzzjoni ta' rmied għandha tintuża biex tkun ippreparatas-soluzzjoni tal-kampjun tad-determinazzjoni tal-konċentrazzjoni tal-fosfat bil-fotometrija.

7.2.   Determinazzjoni tal-konċentrazzjoni tal-fosfat bil-fotometrija

7.2.1.   Soluzzjoni komparattiva

7.2.1.1.

Poġġi 10 ml ta' 10 % sulphuric acid (4.5) f'volumetric flask tal-50 ml (5.10) u imla sal-marka b'ilma distillat (4.1).

7.2.1.2.

Żid ma' parti ta' 5 ml ta' din is-soluzzjoni (7.2.1.1.), li qiegħda f'volumetric flask ta' l-20 ml (5.11), millilitru ta' l N sulphuric acid (4.6) u 2 ml tar-reaġent tal-fosfat (4.8) u kompli sa 20 ml b'ilma distillat (4.1).

7.2.1.3.

Għalaq b'tapp mhux issikat, ħawwad u saħħan f'banju bl-ilma jagħli (5.7) għal 10 minuti, imbagħad berred f'banju bl-ilma f'temperatura ta' 20 °C (5.4) għal 20 minuta.

7.2.1.4.

Imla cuvette ta' ċentimetru (5.13) b'din is-soluzzjoni komparattiva.

7.2.2.   Soluzzjoni tal-kampjun

7.2.2.1.

Żid ma' parti ta' 5 ml tas-soluzzjoni ta' l-irmied (7.1.8), li qiegħda f'volumetric flask ta' l-20 ml (5.11), millilitru ta' 1 N sulphuric acid (4.6) u 2 ml tar-reaġent tal-fosfat (4.8) u kompli sa 20 ml b'ilma distillat (4.1).

7.2.2.2.

Għalaq b'tapp mhux issikat, ħawwad u saħħan f'banju bl-ilma jagħli (5.7) għal 10 minuti, imbagħad berred f'banju bl-ilma f'temperatura ta' 20 °C (5.4) għal 20 minuta.

7.2.2.3.

Is-soluzzjoni safra li tiżviluppa hija analizzata mmedjatament bl-ispectrophotometry (5.12) f'cuvette ta' ċentimetru (5.13) b'420 nm kontra s-soluzzjoni komparattiva (7.2.1.4.).

7.2.3.   Calibration curve

7.2.3.1.

Biex tibni l-calibration curve, żid partijiet ta' 2 ml tar-reaġent tal-fosfat (4.8) f'volumetric flasks ta' l-20 ml (5.11) u li kull wieħed fih 1 N sulphuric acid (4.6) u 0, 2, 4, 6, 8 u 10 ml tas-soluzzjonita' potassium dihydrogen phosphate (4.7) rispettivament, u kompli sal-marka ta' 20 ml b'ilma distillat (4.1).

7.2.3.2.

Għalaq b'tapp mhux issikat, ħawwad u saħħan f'banju bl-ilma jagħli(5.7) għal 10 minuti, imbagħad berred f'banju bl-ilma f'temperatura ta' 20 °C (5.4) għal 20 minuta u analizza bl-ispectrophotometry (5.12) f'cuvette ta' ċentimetru(5.13) b'420 nm kontra s-soluzzjoni komparattiva (7.2.1.4).

7.2.3.3.

Binja tal-calibration curve: soluzzjoni ta' dihydrogen phosphate(ml) 0 2 4 6 8 10 P2O5 (mg) 0 0,167 0,334 0,501 0,668 0,835

8.   Espressjoni tar-riżultati

Il-kontenut ta' isfar tal-bajd fi g/l huwa kkalkulat mill-formola li ġejja:

Fejn:

110	conversion factor għal total P2O5 fi g f'100 g ta' isfar tal-bajd

mg P2O5

valur stabbilit mill-calibration curve

density

massa per unit volume (g/ml) tal-likur ibbażat fuq il-bajd f'temperatura ta' 20 °C

E	piż tal-likur ibbażat fuq il-bajd fi g

40	dilution factor għal parti ta' 5 ml ta' soluzzjoni ta' rmied.

9.   Karatteristiċi ta' (preċiżjoni)

Riżultati statistiċi tat-test interlaboratorju:

It-tabella li ġejja tagħti l-valuri għall-isfar tal-bajd.

L-informazzjoni li ġejja ttieħdet minn studju internazzjonali ta' method performance magħmul skond proċeduri miftiehma internazzjonalment.

Tipi ta' kampjuni

A	Advocaat, blind duplicates

B	Advocaat, blind duplicates

C	Advocaat, blind duplicates

D	Advocaat (diluted), split levels (*)

E	Advocaat, blind duplicates

▼M2

X.   DETERMINAZZJONI TAL-KOMPOSTI TAL-INJAM LI ĠEJJIN FL-ISPIRTI PERMEZZ TA' KROMATOGRAFIJA LIKWIDA BI PRESTAZZJONI GĦOLJA (HPLC): FURFURAL, 5-IDROSSIMETILFURFURAL, 5-METILFURFURAL, VANILLINA, SIRINGALDEID, KONIFERALDEID, SINAPALDEID, AĊIDU GALLIKU, AĊIDU ELLAGIKU, AĊIDU VANILLIKU, AĊIDU SIRINĠIKU U SKOPOLETINA

1.    Kamp tal-applikazzjoni

Il-metodu qiegħed biex jiddetermina s-sustanzi li ġejjin: furfural, 5-idrossimetilfurfural, 5-metilfurfural, vanillina, siringaldeid, koniferaldeid, sinapaldeid, aċidu galliku, aċidu ellagiku, aċidu vanilliku, aċidu sirinġiku u skopoletina, permezz ta' kromatografija likwida bi prestazzjoni għolja.

2.    Referenzi normattivi

Il-metodu analitiku rikonoxxut mill-Assemblea Ġenerali tal-Organizzazzjoni Internazzjonali tad-Dielja u l-Inbid (OIV) u ppubblikat mill-OIV bir-referenza OIV-MA-BS-16: R2009.

3.    Prinċipju

Id-determinazzjoni bil-kromatografija likwida bi prestazzjoni għolja (HPLC), b'detezzjoni permezz ta' spettrofotometrija ultravjola b'tul ta' mewġ differenti u permezz ta' spettrofluworimetrija.

4.    Reaġenti

Ir-reaġenti kollha jridu jkunu ta' kwalità analitika. L-ilma użat irid ikun ilma distillat jew ilma b'tal-anqas purità ekwivalenti. Preferibbilment jintuża ilma mikroffiltrat b'qawwa ta' reżistenza ta' 18,2 M Ω.cm.

4.1.	96 % vol. ta' alkoħol.

4.2.	Metanol bi kwalità għall-HPLC (Solvent B).

4.3.	Aċidu aċetiku dilwit għal 0,5 % vol. (Solvent A).

4.4.	Fażijiet mobbli: (mogħti biss bħala eżempju) Solvent A (0,5 % aċidu aċetiku) u solvent B (metanol pur). Iffiltra minn membrana (b'porożità ta' 0,45 μm). Neħħi l-gass f'banju ultrasoniku, jekk ikun meħtieġ.

4.5.	Standards ta' referenza ta' 99 % purità minima: furfural, 5-idrossimetil furfural, 5-metilfurfural, vanillina, siringaldeid, koniferaldeid, sinapaldeid, aċidu galliku, aċidu ellagiku, aċidu vanilliku, aċidu sirinġiku u skopoletina.

4.6.

Soluzzjoni ta' referenza: is-sustanzi standard maħlula f'soluzzjoni ta' 50 % vol. soluzzjoni ta' alkoħol milwiema. Il-konċentrazzjonijiet finali fis-soluzzjoni ta' referenza għandhom ikunu fl-ordni ta': furfural: 5 mg/L; 5-idrossimetil furfural: 10 mg/L; 5-metilfurfural 2 mg/L; vanillina: 5 mg/L; siringaldeid: 10 mg/L; koniferaldeid: 5 mg/L; sinapaldeid: 5 mg/L; aċidu galliku: 10 mg/L; aċidu ellagiku: 10 mg/L; aċidu vanilliku: 5 mg/L; aċidu sirinġiku: 5 mg/L; skopoletina: 0,5 mg/L.

5.    Tagħmir

Apparat standard tal-laboratorju

5.1.

Kromatografija likwida bi prestazzjoni għolja li tista' taħdem f'modalità ta' gradjent binarju u mgħammra bi: 5.1.1.  Ditekter spettrofotometriku li jista' jkejjel tul ta' mewġ bejn 260 u 340 nm. Madankollu, preferibbilment ikun jaħdem b'ditekter ta' tul ta' mewġ multiplu b'arranġament dijodu jew simili, biex jikkonferma l-purità tal-qċaċet. 5.1.2.  Ditettur spettrofloworimetriku — tul ta' mewġ ta' eċċitament: 354 nm, tul ta' mewġ ta' emissjoni: 446 nm (għad-determinazzjoni ta' traċċi ta' skopoletina; li huwa wkoll osservabbli f'313 nm bl-ispettrofotometrija). 5.1.3.  Apparat ta' injezzjoni li jista' jintroduċi 10 jew 20 μl (pereżempju) tal-kampjun tat-test. 5.1.4.  Kolonna ta' kromatografika likwida bi prestazzjoni għolja, tip RP C18, daqs massimu tal-partiċella 5 μm.

5.2.	Siringi għal HPLC.

5.3.	Apparat għall-filtrazzjoni b'membrana ta' volumi żgħar.

5.4.	Kompjuter-integratur jew rekorder bi prestazzjoni kompatibbli mal-apparat kollu, u b'mod partikolari, għandu jkollu diversi kanali ta' akkwist.

6.    Proċedura

6.1.   Tħejjija tas-soluzzjoni li għandha tiġi injettata

Is-soluzzjoni ta' referenza u l-ispirtu huma ffiltrati, jekk ikun meħtieġ, permezz ta' membrana b'dijametru massimu tal-pori ta' 0,45 μm.

6.2.

Kundizzjonijiet tat-tħaddim kromatografiku: agħmel l-analiżi f'temperatura ambjentali permezz tat-tagħmir deskritt f'(5.1) u bl-użu tal-fażijiet mobbli f'(4.4) bi fluss ta' madwar 0,6 ml kull minuta b'segwiment tal-gradjent ta' hawn taħt (mogħti biss bħala eżempju) Ħin: 0 min 50 min 70 min 90 min Solvent A (aċidu-ilma): 100 % 60 % 100 % 100 % solvent B (metanol): 0 % 40 % 0 % 0 % Innota li f'ċerti każijiet dan il-gradjent għandu jiġu modifikat biex tevita l-koelwizzjoni.

6.3.

Determinazzjoni 6.3.1. Injetta l-istandards ta' referenza separatament, imbagħad imħallta. Adatta l-kundizzjonijiet operattivi biex il-fatturi tar-riżoluzzjoni tal-qċaċet tal-komponenti kollha jkunu tal-anqas 1. 6.3.2. Injetta l-kampjun kif imħejji fil-6.1. 6.3.3. Kejjel iż-żona tal-qċaċet fis-soluzzjoni ta' referenza u fl-ispirtu u kkalkula l-konċentrazzjonijiet.

7.    Preżentazzjoni tar-riżultati

Ippreżenta l-konċentrazzjoni ta' kull kostitwent f'mg/l.

8.    Karatteristiċi tal-prestazzjoni tal-metodu (preċiżjoni)

Din id-dejta nkisbet minn studju internazzjonali ta' prestazzjoni analitika mwettaq skont il-proċeduri miftiehma internazzjonalment [1], [2].

8.1.   Furfural

8.2.   5-idrossimetilfurfural

8.3.   5-Metilfurfural

8.4.   Vanillina

8.5.   Siringaldeid

8.6.   Koniferaldeid

8.7.   Sinapaldeid

8.8.   aċidu galliku

8.9.   Aċidu ellagiku

8.10.   Aċidu vanilliku

8.11.   Aċidu sirinġiku

8.12.   Skopoletina

▼M3

XI.    DETERMINAZZJONI TAL-KONTENUT 14C FL-ETANOL

1.    Introduzzjoni

Id-determinazzjoni tal-kontenut 14C fl-etanol tippermetti li ssir distinzjoni bejn alkoħol minn karburant tal-fossili (sinteżi tal-alkoħol) u alkoħol minn materja prima reċenti (fermentazzjoni ta’ alkoħol).

2.    Definizzjoni

Il-kontenut ta’ 14C ta’ etanol għandu jitqies bħala l-kontenut ta’ 14C iddeterminat bl-użu tal-metodu deskritt hawnhekk jew il-metodu deskritt fl-istandard EN 16640 Metodu C.

Il-kontenut naturali ta’ 14C fl-atmosfera (il-valur ta’ referenza), li huwa assorbit minn veġetazzjoni ħajja permezz ta’ assimilazzjoni, mhuwiex valur kostanti. Għalhekk, il-valur ta’ referenza huwa iddeterminat fuq etanol minn materja prima tal-aktar perjodu reċenti ta’ veġetazzjoni. Dan il-valur annwali ta’ referenza huwa iddeterminat skont l-istandard EN 16640. Madankollu, valur ta’ referenza ieħor jista’ jiġi aċċettat meta jiġi ċċertifikat minn korp akkreditat.

3.    Prinċipju

Il-kontenut 14C ta’ kampjuni li jkun fihom alkoħol b’massa ta’ etanol ta’ mill-anqas 85 % huwa iddeterminat direttament permezz ta’ għadd bix-xintillazzjoni likwida.

4.    Reaġenti

4.1.   Xintillatur tat-toluwen

5,0 g 2,5-difeniloxażol (PPO)

0,5 g p-bis-[4-metil-5-feniloxażolil(2)]-benżen (dimetil-POPOP) f’litru wieħed tat-toluwen ta’ grad analitiku.

Xintillaturi tat-toluwen kummerċjali lesti għall-użu ta’ din il-kompożizzjoni jistgħu jintużaw ukoll.

4.2.   Standard 14C

n-Eżadekan 14C b’attività ta’ madwar 1 × 106 dpm/g (madwar 1,67 × 106 cBq/g) u eżattezza garantita ta’ attività iddeterminata ta’ ± 2 % rel.

4.3.   etanol ħieles mill-14C

Alkoħol ta’ sinteżi minn materja prima ta’ oriġini mill-fossili b’massa ta’ etanol ta’ mill-inqas 85 %, biex jiġi iddeterminat l-isfond.

5.    Apparat

6.    Proċedura

6.1.   Aġġustament tat-tagħmir

It-tagħmir għandu jkun aġġustat skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-kondizzjonijiet tal-kejl ikunu l-aħjar meta l-valur E2/B, l-indiċi tal-kwalità, jkun fl-aqwa tiegħu.

E = effiċjenza

B = sfond

Kanali ta’ żewġ metri biss huma ottimizzati. It-tielet wieħed jitħalla miftuħ kollu għall-finijiet ta’ kontroll.

6.2.   Għażla ta’ tubi tal-għadd

Numru akbar ta’ tubi tal-għadd milli jkun meħtieġ aktar tard jiġu mimlija kull wieħed b’10 ml ta’ etanol sintezzizat ħieles mill-14C u 10 ml ta’ xintillatur tat-toluwen. Kull wieħed jitkejjel għal tal-anqas 4 ċikli × 100 minuta. It-tubi li l-isfondi tagħhom ivarjaw b’aktar minn ± 1 % rel. mill-medja jitwarrbu. Tubi ġodda mill-fabbrika u mill-istess lott biss jistgħu jintużaw.

6.3.   Determinazzjoni tal-istandard estern/proporzjon tal-kanal (ESCR).

Matul il-proċess tal-issettjar tal-kanali (punt 6.1) l-ESCR jiġi iddeterminat billi jintuża l-programm adattat tal-kompjuter meta tiġi iddeterminata l-effiċjenza. L-istandard estern użat huwa 137ċesju, li jkun diġà ġie inkluż mill-manifattur.

6.4.   Preparazzjoni tal-kampjun

Kampjuni li jkollhom kontenut ta’ etanol ta’ massa ta’ mill-anqas 85 % u ħieles minn impuritajiet, li jassorbu f’tul tal-mewġa ta’ inqas minn 450 nm jistgħu jitkejlu. Ir-residwu baxx ta’ esteri u aldeidi ma jkollu l-ebda effett ta’ tfixkil. Il-kontenut tal-alkoħol tal-kampjun huwa iddeterminat minn qabel b’approssimazzjoni ta’ 0,1 %.

7.    Kejl tal-kampjuni billi jintuża l-istandard estern

7.2.   Kejl

10 ml minn kul wieħed mill-kampjuni preparati skont il-punt 6.4 jiġu miġbuda b’pipetti f’tubu tal-għadd magħżul ivverifikat għall-isfond u jiżdiedu 10 ml ta’ xintillatur tat-toluwen permezz ta’ dożatur awtomatiku. Il-kampjuni fit-tubi jiġu omoġenizzati permezz ta’ movimenti ta’ tidwir adattati; il-likwidu m’għandux jitħalla jxarrab il-polietilen imdaħħal fit-tap bil-kamin. Tubu li jkun fih etanol fossili ħieles mill-14C jiġi preparat bl-istess mod biex ikejjel l-isfond. Sabiex tivverifika l-valur rilevanti annwali ta’ 14C jiġi preparat duplikat ta’ etanol reċenti mill-aħħar perjodu ta’ veġetazzjoni, b’tubu jiġi mħallat bl-istandard intern, ara l-punt 8.

Il-kampjuni ta’ kontroll u tal-isfond jitqiegħdu fil-bidu tas-serje ta’ kejl, li għandu jkun fiha mhux aktar minn 10 kampjuni għall-analiżi. Il-ħin totali ta’ kejl għal kull kampjun huwa tal-anqas ta’ 2 × 100 minuta, bil-kampjuni individwali jitkejlu f’partijiet ta’ stadji ta’ 100 minuta sabiex xi ċaqliq tat-tagħmir jew xi difett ieħor jinkixef. (Għalhekk ċiklu wieħed jikkorrispondi ma’ intervall ta’ kejl ta’ 100 minuta għal kull kampjun).

Il-kampjuni tal-isfond u ta’ kontroll għandhom jitħejjew friski kull erba’ ġimgħat.

Fil-każ ta’ kampjuni estinti (ESCR madwar 1,8) l-effiċjenza hija affettwata b’mod negliġibbli bil-bidla f’dan il-valur. Jekk il-bidla hija fil-limitu ta’ ± 5 % rel. tista’ tkun mistennija l-istess effiċjenza. Għal kampjuni aktar estinti, bħal alkoħol żnaturat, l-effiċjenza tista’ tiġi iddeterminata permezz tal-korrezzjoni tal-estinzjoni tal-graff. Jekk programm adattat tal-kompjuter ma jkunx disponibbli għandu jintuża l-istandard intern, u dan jagħti riżultat mhux ambigwu.

8.    Kampjuni ta’ kejl billi jintuża l-istandard intern eżadekan14C

8.1.   Proċedura

Kampjuni ta’ kontroll u tal-isfond (etanol reċenti u mill-fossili) u l-materjal mhux magħruf jitkejlu bħala duplikati. Kampjun tad-duplikat jiġi preparat f’tubu mhux magħżul u kwantità dożata eżatta (30 μl) ta’ eżadekan14C tiżdied bħala standard intern (attività miżjuda ta’ madwar 26 269 dpm/gC bejn wieħed u ieħor 43 782 cBq/gC). Għall-preparazzjoni tal-kampjun u l-ħin tal-kejl tal-kampjuni l-oħra ara l-punt 7.2, iżda l-ħin ta’ kejl għall-kampjuni bl-istandard intern jista’ jitnaqqas b’xi ħames minuti bi ssettjar minn qabel f’105 taħbita. Jintuża duplikat wieħed għal kull kampjun tal-isfond u ta’ kontroll jintużaw għas-serje tal-kejl; dawn jitqiegħdu fil-bidu tas-serje tal-kejl.

8.2.   Immaniġġar tal-istandard intern u t-tubi tal-għadd

Biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni waqt il-kejl bl-istandard intern dawn għandhom jinħażnu u jiġu mmaniġġati ’l bogħod miż-żona fejn il-kampjuni għall-analiżi huma preparati u mkejla. Wara l-kejl it-tubi użati għall-isfond jistgħu jerġgħu jintużaw. Il-tappijiet bil-kamin u t-tubi li jkun fihom l-istandard intern għandhom jintremew.

9.    Espressjoni tar-riżultati

9.1.   L-unità tal-attività ta’ sustanza radjuattiva hija l-becquerel; 1 Bq = 1 diżintegrazzjoni/sec.

L-indikazzjoni tar-radjuattività speċifika hija espressa bħala becquerels relattivi għal gramma waħda karbonju = Bq/gC.

Biex jinkisbu riżultati aktar prattiċi, dawn għandhom jiġu espressi f’centi-bequerels = cBq/gC.

Id-deskrizzjonijiet u l-formoli użati fil-letteratura, ibbażati fuq dpm, jistgħu jintużaw ukoll. Biex tikseb figuri li jikkorrispondu f’cBq sempliċement immoltiplika l-figura dpm b’100/60.

9.2.   Espressjoni tar-riżultati bl-istandard estern

9.3.   Espressjoni tar-riżultati bl-istandard intern

9.4.   Abbrevjazzjonijiet

cpmpr

=

ir-rata medja tal-għadd tal-kampjun fuq il-ħin totali tal-kejl.

cpmNE

=

ir-rata medja tal-isfond tat-taħbit kalkolata bl-istess mod.

cpmIS

=

ir-rata tal-għadd tal-kampjuni, bl-istandard intern.

dpmIS

=

il-kwantità ta’ standard intern miżjud (kalibrazzjoni dpm ta’ radjuattività).

V

=

il-volum tal-kampjuni użati f’ml.

F

=

il-kontenut fi grammi ta’ alkoħol għal kull ml li jikkorrispondi mal-konċentrazzjoni tiegħu.

Z

=

l-effiċjenza li tikkorrispondi mal-valur ESCR.

1,918

=

in-numru ta’ grammi ta’ alkoħol għal kull gramma ta’ karbonju.

10.    Affidabbiltà tal-metodu

10.1.   Ripetibbiltà (r)

r = 0,632 cBq/g C; S(r) = ± 0,223 cBq/g C

10.2.   Riproduċibilità (R)

S(r) = ± 0,821 cBq/g C S(R) = ± 0,290 cBq/g C.