1991R2568 — MT — 04.08.2016 — 029.001


Dan it-test hu maħsub purament bħala għodda ta’ dokumentazzjoni u m’għandu l-ebda effett legali. L-istituzzjonijiet tal-Unjoni m'għandhom l-ebda responsabbiltà għall-kontenut tiegħu. Il-verżjonijiet awtentiċi tal-atti rilevanti, inklużi l-preamboli tagħhom, huma dawk ippubblikati fil-Ġurnal Uffiċjali tal-Unjoni Ewropea u disponibbli f’EUR-Lex. Dawk it-testi uffiċjali huma aċċessibbli direttament permezz tal-links inkorporati f’dan id-dokument

►B

IR-REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 2568/91

tal-11 ta’ Lulju 1991

dwar il-karatteristiċi taż-żejt taż-żebbuġa u l-fdal taż-żejt taż-żebbuġa u dwar il-metodi ta’ analiżi rilevanti

(ĠU L 248 5.9.1991, p. 1)

Emendat bi:

 

 

Il-Ġurnal Uffiċjali

  Nru

Paġna

Data

►M1

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 3682/91 tas-17 ta’ Diċembru 1991

  L 349

36

18.12.1991

 M2

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 1429/92 tas-26 ta’ Mejju 1992

  L 150

17

2.6.1992

 M3

COMMISSION REGULATION (EEC) No 1683/92 of 29 June 1992 (*)

  L 176

27

30.6.1992

 M4

COMMISSION REGULATION (EEC) No 1996/92 of 15 July 1992 (*)

  L 199

18

18.7.1992

►M5

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 3288/92 tat-12 ta’ Novembru 1992

  L 327

28

13.11.1992

 M6

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 183/93 tad-29 ta’ Jannar 1993

  L 22

58

30.1.1993

 M7

Emendat bi: REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 826/93 tas-6 ta’April 1993

  L 87

6

7.4.1993

 M8

COMMISSION REGULATION (EEC) No 620/93 of 17 March 1993 (*)

  L 66

29

18.3.1993

 M9

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 177/94 tat-28 ta' Jannar 1994

  L 24

33

29.1.1994

 M10

COMMISSION REGULATION (EC) No 2632/94 of 28 October 1994 (*)

  L 280

43

29.10.1994

►M11

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 656/95 tat-28 ta' Marzu 1995

  L 69

1

29.3.1995

 M12

COMMISSION REGULATION (EC) No 2527/95 of 27 October 1995 (*)

  L 258

49

28.10.1995

 M13

COMMISSION REGULATION (EC) No 2472/97 of 11 December 1997 (*)

  L 341

25

12.12.1997

 M14

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 282/98 tat-3 ta’ Frar 1998

  L 28

5

4.2.1998

 M15

COMMISSION REGULATION (EC) No 2248/98 of 19 October 1998 (*)

  L 282

55

20.10.1998

 M16

REGOLAMENT TAL-KUMMISSIJONI (KE) Nru 379/1999 tad-19 ta’ Frar 1999

  L 46

15

20.2.1999

 M17

COMMISSION REGULATION (EC) No 455/2001 of 6 March 2001 (*)

  L 65

9

7.3.2001

 M18

COMMISSION REGULATION (EC) No 2042/2001 of 18 October 2001 (*)

  L 276

8

19.10.2001

►M19

COMMISSION REGULATION (EC) No 796/2002 of 6 May 2002 (*)

  L 128

8

15.5.2002

►M20

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 1989/2003 tas-6 ta' Novembru 2003

  L 295

57

13.11.2003

►M21

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 702/2007 tal-21 ta’ Ġunju 2007

  L 161

11

22.6.2007

 M22

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KE) Nru 640/2008 ta’ l-4 ta’ Lulju 2008

  L 178

11

5.7.2008

►M23

REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (UE) Nru 61/2011 tal-24 ta’ Jannar 2011

  L 23

1

27.1.2011

 M24

REGOLAMENT TA’ IMPLIMENTAZZJONI TAL-KUMMISSJONI (UE) Nru 661/2012 tad-19 ta’ Lulju 2012

  L 192

3

20.7.2012

►M25

REGOLAMENT TA’ IMPLIMENTAZZJONI TAL-KUMMISSJONI (UE) Nru 299/2013 tas-26 ta’ Marzu 2013

  L 90

52

28.3.2013

►M26

REGOLAMENT TA’ IMPLIMENTAZZJONI TAL-KUMMISSJONI (UE) Nru 1348/2013 tas-16 ta’ Diċembru 2013

  L 338

31

17.12.2013

►M27

REGOLAMENT TA' DELEGAT TAL-KUMMISSJONI (UE) 2015/1830 tat-8 ta' Lulju 2015

  L 266

9

13.10.2015

►M28

REGOLAMENT TA' IMPLIMENTAZZJONI TAL-KUMMISSJONI (UE) 2015/1833 tat-12 ta' Ottubru 2015

  L 266

29

13.10.2015

►M29

REGOLAMENT TA' IMPLIMENTAZZJONI TAL-KUMMISSJONI (UE) 2016/1227 tas-27 ta' Lulju 2016

  L 202

7

28.7.2016


Ikkoreġut b'

 C1

Rettifika, ĠU L 333, 5.12.2012, p.  48 (1989/2003)



(*)

Dan l-att qatt ma ġie ppubblikat bil-Malti.




▼B

IR-REGOLAMENT TAL-KUMMISSJONI (KEE) Nru 2568/91

tal-11 ta’ Lulju 1991

dwar il-karatteristiċi taż-żejt taż-żebbuġa u l-fdal taż-żejt taż-żebbuġa u dwar il-metodi ta’ analiżi rilevanti



▼M20

Artikolu 1

1.  Iż-żjut, li l-karatteristiċi tagħhom jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punti 1 u 2 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandhom jitqiesu bħala żjut verġni taż-żebbuġa fit-tifsira tal-punt 1(a) u (b) ta' l-Anness mar-Regolament Nru 136/66/KEE.

2.  Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 3 ta' l-Anness I ma' dan ir-Rgolament, għandu jitqies bħala żejt lampante taż-żebbuġa fit-tifsira tal-punt (ċ) ta' l-Anness mar-Regolament Nru 136/66/KEE.

3.  Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 4 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt irraffinat taż-żebbuġa fit-tifsira tal-punt 2 ta' l-Anness mar-Regolament Nru 136/66/KEE.

4.  Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 5 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt taż-żebbuġa kompost minn żjut irraffinati taż-żebbuġa u żjut verġni taż-żebbuġa fit-tifsira tal-punt 3 ta' l-Anness mar-Regolament 136/66/KEE.

5.  Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 6 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt krud taż-żebbuġa pomatika fit-tifsira tal-punt 4 ta' l-Anness mar-Rgolament 136/66/KEE.

6.  Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 7 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt irraffinat taż-żebbuġa pomatika fit-tifsira tal-punt 5 ta' l-Anness mar-Regolament 136/66/KEE.

7.  Iż-żejt, li l-karatteristiċi tiegħu jikkonformaw ma' dawk iddikjarati fil-punt 8 ta' l-Anness I ma' dan ir-Regolament, għandu jitqies bħala żejt taż-żebbuġa pomatika fit-tifsira tal-punt 6 ta' l-Anness mar-Regolament 136/66/KEE.

▼M26

Artikolu 2

1.  Il-karatteristiċi taż-żjut stabbiliti fl-Anness I għandhom jiġu stabbiliti skont il-metodi ta’ analiżi li ġejjin:

(a) biex jiġu stabbiliti l-aċidi xaħmin liberi, mogħtija bħala perċentwali ta’ aċidu olejku, il-metodu stabbilit fl-Anness II;

(b) biex jiġi stabbilit l-indiċi tal-perossidu, il-metodu stabbilit fl-Anness III;

(c) biex jiġi stabbilit l-ammont ta’ xama’, il-metodu stabbilit fl-Anness IV;

(d) biex jiġu stabbiliti l-kompożizzjoni u l-kontenut tal-isteroli u d-dialkoħol tat-triterpen permezz tal-kromatografija b’fażi gassuża f’kolonna kapillari, il-metodu stabbilit fl-Anness V;

(e) biex tiġi stabbilita l-perċentwali ta’ 2-gliċeril monopalmitat, il-metodu stabbilit fl-Anness VII;

(f) għall-analiżi spettrofotometrika, il-metodu stabbilit fl-Anness IX;

▼M28

(g) biex tiġi stabbilita l-kompożizzjoni tal-aċidi xaħmin, il-metodu stabbilit fl-Anness X;

▼M26

(h) biex jiġu stabbiliti s-solventi aloġenati volatili, il-metodu stabbilit fl-Anness XI;

(i) biex jiġu evalwati l-karatteristiċi organolettiċi taż-żejt taż-żebbuġa verġni, il-metodu stabbilit fl-Anness XII;

(j) biex jiġu stabbiliti l-istigmastadini, il-metodu stabbilit fl-Anness XVII;

(k) biex jiġi stabbilit l-ammont ta’ trigliċeridi b’ECN42, il-metodu stabbilit fl-Anness XVIII;

▼M28

(l) biex jiġi stabbilit l-ammont ta' alkoħol alifatiku u triterpeniku, il-metodu stabbilit fl-Anness XIX;

▼M26

(m) biex jiġi stabbilit l-ammont ta’ xama’, ta’ esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin u ta’ esteri etiliċi tal-aċidi xaħmin, il-metodu stabbilit fl-Anness XX.

▼M28 —————

▼M26

2.  L-awtoritajiet nazzjonali jew ir-rappreżentanti tagħhom għandhom iwettqu l-verifika tal-karatteristiċi organolettiċi taż-żjut taż-żebbuġa verġni permezz ta’ bordijiet li jduqu ż-żjut approvati mill-Istati Membri.

Il-karatteristiċi organolettiċi taż-żejt imsemmija fl-ewwel subparagrafu għandhom jitqiesu li jkunu konformi mal-kategorija ddikjarata jekk il-bord approvat mill-Istat Membru jikkonferma din il-klassifikazzjoni.

Jekk il-bord ma jikkonfermax il-kategorija tal-karatteristiċi organolettiċi ddikjarata, l-awtoritajiet nazzjonali jew ir-rappreżentanti tagħhom għandhom iwettqu żewġ kontrovalutazzjonijiet permezz ta’ bordijiet approvati oħrajn mingħajr dewmien, fuq talba tal-parti kkonċernata, u mill-inqas waħda minn dawn il-kontrovalutazzjonijiet trid titwettaq minn bord li jkun approvat mill-Istat Membru kkonċernat fejn ikun ġie prodott iż-żejt. Il-karatteristiċi kkonċernati għandhom jitqiesu li jkunu konformi mal-karatteristiċi ddikjarati jekk iż-żewġ kontrovalutazzjonijiet jikkonfermaw il-klassifika ddikjarata. Jekk dan ma jkunx il-każ, il-parti interessata jkollha tħallas l-ispejjeż tal-kontrovalutazzjonijiet.

3.  Meta l-awtoritajiet nazzjonali jew ir-rappreżentanti tagħhom iwettqu l-verifiki tal-karatteristiċi organolettiċi kif previst fil-paragrafu 1, il-kampjuni għandhom jittieħdu skont l-istandards internazzjonali EN ISO 661 u EN ISO 5555 għat-tħejjija tal-kampjuni għat-testijiet u għat-teħid tal-kampjuni rispettivament. Madankollu, minkejja l-punt 6.8 tal-istandard EN ISO 5555, fil-każ tal-lottijiet tat-tali żjut f’pakketti għall-konsum, il-kampjun għandu jittieħed skont l-Anness Ia ta’ dan ir-Regolament. Fil-każ taż-żjut bl-ingrossa li għalihom il-kampjuni ma jistgħux jittieħdu skont l-istandard EN ISO 5555, il-kampjuni għandhom jittieħdu skont l-istruzzjonijiet mogħtija mill-awtorità kompetenti tal-Istat Membru.

Mingħajr ħsara għall-istandard EN ISO 5555 u għall-Kapitolu 6 tal-istandard EN ISO 661, il-kampjuni meħudin għandhom jitpoġġew kemm jista’ jkun malajr f’post fid-dlam’ il bogħod mis-sħana qawwija u għandhom jintbagħtu lil-laboratorju għall-analiżi mhux aktar tard mill-ħames jum tax-xogħol wara li jittieħdu, inkella l-kampjuni għandhom jinżammu b’tali mod li ma tonqosx il-kwalità tagħhom jew li ma jsofrux ħsara waqt it-trasport jew il-ħażna qabel ma jintbagħtu lil-laboratorju.

4.  Għall-għanijiet tal-verifika prevista fil-paragrafu 3, fil-każ tal-prodotti fil-pakketti, l-analiżi msemmija fl-Annessi II, III, IX, XII u XX u, fejn ikun applikabbli, kull kontroanaliżi meħtieġa skont il-liġijiet nazzjonali, għandha titwettaq qabel id-data minima tad-durabbiltà. Fil-każ tat-teħid ta’ kampjuni taż-żjut bl-ingrossa, dawn l-analiżi għandhom jitwettqu mhux aktar tard minn sitt xhur wara x-xahar li fih ikun ittieħed il-kampjun.

M’għandu japplika l-ebda limitu taż-żmien għall-analiżi l-oħra previsti f’dan ir-Regolament.

Sakemm il-kampjun ma jkunx ittieħed inqas minn xahrejn qabel id-data minima tad-durabbiltà, jekk ir-riżultati tal-analiżi ma jkunux jaqblu mal-karatteristiċi tal-kategorija taż-żejt taż-żebbuġa jew taż-żejt mir-residwi taż-żebbuġ iddikjarata, il-parti kkonċernata għandha tiġi nnotifikata b’dan mhux aktar tard minn xahar qabel ma jintemm il-perjodu stabbilit fl-ewwel subparagrafu.

5.  Sabiex jiġu stabbiliti l-karatteristiċi taż-żjut taż-żebbuġa bil-metodi previsti fl-ewwel subparagrafu tal-paragrafu 1, ir-riżultati tal-analiżi għandhom jitqabblu direttament mal-limiti stabbiliti f’dan ir-Regolament.

▼M25

Artikolu 2a

1.  Għall-fini ta’ dan l-Artikolu, “żejt taż-żebbuġa kummerċjalizzat” tfisser kwantità totali ta’ żejt taż-żebbuġa u żejt mhux raffinat mir-residwi taż-żebbuġ ta’ Stat Membru rilevanti li jiġi kkunsmat f’dak l-Istat Membru jew esportat minn dak l-Istat Membru.

2.  L-Istati Membri għandhom jiżguraw li l-verifiki tal-konformità jitwettqu selettivament, skont analiżi tar-riskju, u bil-frekwenza x-xierqa, sabiex jiżguraw li ż-żejt taż-żebbuġa kkumerċjalizzat huwa konsistenti mal-kategorija ddikjarata.

3.  Il-kriterji biex jiġi vvalutat ir-riskju jistgħu jinkludu:

(a) il-kategorija taż-żejt, il-perjodu tal-produzzjoni, il-prezz taż-żjut fir-rigward ta’ żjut veġetali oħra, l-operazzjonijiet ta’ taħlit u ppakkjar, il-faċilitajiet u l-kundizzjonijiet tal-ħżin, il-pajjiż tal-oriġini, il-pajjiż destinatarju, il-mezz tat-trasport u l-volum tal-lott;

(b) il-pożizzjoni tal-operaturi fil-katina tal-kummerċjalizzazzjoni, il-volum u/jew il-valur ikkumerċjalizzat minnhom, il-firxa ta’ kategoriji ta’ żejt li jikkumerċjalizzaw, it-tip ta’ negozju mwettaq minnhom bħat-tħin, il-ħżin, ir-raffinar, it-taħlit, l-ippakkjar jew il-bejgħ bl-imnut;

(c) sejbiet li saru waqt verifiki preċedenti inklużi l-għadd u t-tip ta’ difetti misjuba, il-kwalità tas-soltu taż-żjut ikkummerċjalizzati, il-prestazzjoni tat-tagħmir tekniku użat;

(d) l-affidabbiltà tas-sistemi tal-operaturi għall-iżgurar tal-kwalità jew tas-sistemi ta’ awtoverifika marbuta mal-konformità mal-istandards tal-kummerċjalizzazzjoni;

(e) il-post fejn tkun saret il-verifika, partikolarment jekk ikun l-ewwel punt ta’ dħul fl-Unjoni, l-aħħar punt ta’ ħruġ mill-Unjoni jew il-post fejn iż-żjut jiġu prodotti, ippakkjati, mgħobbija jew mibjugħa lill-konsumatur aħħari.

(f) kwalunkwe tagħrif ieħor li jista’ jindika riskju ta’ nuqqas ta’ konformità.

4.  L-Istati Membri għandhom jistabbilixxu minn qabel:

(a) il-kriterji biex jiġi vvalutat ir-riskju tan-nuqqas ta’ konformità tal-lottijiet;

(b) abbażi tal-analiżi tar-riskju għal kull kategorija tar-riskju, l-għadd minimu ta’ operaturi jew lottijiet u/jew kwantitajiet li se jkunu soġġetti għall-verifika tal-konformità.

Għandha ssir kull sena mill-inqas verifika tal-konformità waħda għal kull elf tunnellata ta’ żejt taż-żebbuġa kkumerċjalizzat fl-Istat Membru.

5.  L-Istati Membri għandhom jivverifikaw il-konformità billi:

(a) iwettqu, fi kwalunkwe ordni, l-analiżijiet ipprovduti fl-Anness I; jew

(b) billi tiġi segwita l-ordni ddikjarata fl-Anness Ib fuq is-sensiela tad-deċiżjonijiet sakemm tintlaħaq waħda mid-deċiżjonijiet li jidhru fis-sensiela tad-deċiżjonijiet.

▼M19 —————

▼M25

Artikolu 3

Meta jinstab li l-karatteristiċi organolettiċi ta’ xi żejt ma jaqblux mad-deskrizzjoni tal-kategorija tiegħu, l-Istati Membri kkonċernati għandhom, mingħajr preġudizzju għal xi penalitajiet oħra, japplikaw penalitajiet effettivi, proporzjonati u disswassivi li jiġu stabbiliti fid-dawl tal-gravità tal-irregolarità misjuba.

Fejn il-verifiki juru irregolaritajiet sinifikanti, l-Istati Membri għandhom iżidu l-frekwenza tal-verifiki b’rabta mal-istadju tal-kummerċjalizzazzjoni, il-kategorija taż-żejt, l-oriġini u kriterji oħra.

▼M5

Artikolu 4

▼M19

1.  The Member States may approve assessment panels so that national authorities or their representatives can assess and verify organoleptic characteristics.

The terms of approval shall be set by Member States and ensure that:

 the requirements of Annex XII.4 are met,

 the panel head is given training recognised for this purpose by the Member State,

 continued approval depends on performance in annual checks arranged by the Member State.

Member States shall notify to the Commission a list of approved panels and the action taken under this paragraph.

▼M5

2.  Meta xi Stati Membri jiltaqgħu ma’ tfixkil fit-twaqqif tal-panels fit-territorju tagħhom, dawn jistgħu isejħu lil xi panel ieħor ta’ dewwieqa approvat f’ xi Stat Membru ieħor.

3.  Kull Stat Membru għandu jagħmel lista ta’ panels ta’ dewwieqa mwaqqfa minn organizzazzjonijiet professjonali jew ta’ l-istess qasam skond il-kondizzjonijiet preskritti fil-paragrafu 1 u għandhom jaraw li dawk il-kondizzjonijiet jiġu mħarsa.

▼M19 —————

▼B

Artikolu 6

1.  Il-kontenut ta’ żejt tal-għaġna ta’ żejt u fdalijiet oħra miksuba mill-estrazzjoni taż-żejt taż-żebbuġa (Kodiċi NM 2306 90 11 u 2306 90 19 ) għandu jiġi determinat billi jintuża l-metodu stabbilit f’Anness XV.

2.  Il-kontenut ta’ żejt imsemmi fil-paragrafu 1 għandu jiġi espress bħala perċentwali tal-piż ta’ żejt għall-piż ta’ materjal niexef.

▼M20

Artikolu 7

Għandhom japplikaw id-dispożizzjonijiet Komunitarji li jirrigwardaw il-preżenza tal-kontaminanti.

Rigward is-solventi aloġenati, il-limiti għall-kategoriji kollha taż-żjut taż-żebbuġa huma kif ġej:

 il-kontenut massimu ta' kull solvent aloġenat mikxuf: 0,1 mg/kg,

 il-kontenut massimu tas-solveni aloġenati mikxufa: 0,2 mg/kg.

▼M25

Artikolu 7a

Persuni naturali jew legali u gruppi ta’ persuni li huma detenturi taż-żejt taż-żebbuġ u żejt mhux raffinat mir-residwi taż-żebbuġ mill-estrazzjoni fil-mitħna sal-istadju tal-ibbottiljar inkluż, għal liema jkun l-għan professjonali jew kummerċjali, għandu jkun meħtieġ iżomm reġistri tal-ħruġ u tal-irtirar għal kull kategorija ta’ żjut bħal dawn.

L-Istat Membru għandu jiżgura li jkun hemm il-konformità xierqa mal-obbligu stipulat fl-ewwel paragrafu.

▼M25

Artikolu 8

1.  L-Istati Membri għandhom jgħarrfu lill-Kummisjoni bil-miżuri meħuda għall-implimentazzjoni ta’ dan ir-Regolament. Huma għandhom jinformaw minnufih lill-Kummissjoni bi kwalunkwe emenda sussegwenti.

2.  Sa mhux aktar tard mill-31 ta’ Mejju ta’ kull sena, l-Istati Membri għandhom jittrażmettu lill-Kummissjoni rapport dwar l-applikazzjoni ta’ dan ir-Regolament matul is-sena kalendarja preċedenti. Ir-rapport għandu jkun fih mill-inqas ir-riżultati tal-verifiki tal-konformità mwettqa fuq iż-żjut taż-żebbuġa skont il-mudelli stipulati fl-Anness XXI.

3.  In-notifiki msemmija f’dan ir-Regolament għandhom isiru skont ir-Regolament tal-Kummissjoni (KE) Nru 792/2009 ( 1 ).

▼B

Artikolu 9

Ir-Regolament (KEE) Nru 1058/77 huwa b’dan il-mezz revokat.

Artikolu 10

1.  Dan ir-Regolament għandu jidħol fis-seħħ fit-tielet jum wara l-pubblikazzjoni tiegħu fil-Ġurnal Uffiċjali ta l-Komunitajiet Ewropej.

Iżda, il-metodu stabbilit f’Anness XII għandu japplika mill- ►M1  1 ta’ Novembru 1992 ◄ , għajr sa fejn għandhom x’jaqsmu l-operazzjonijiet marbuta mas-sistema ta’ intervent.

▼M5

Dak il-metodu ma għandhux japplika għaż-żejt taż-żebbuġa verġni lest għas-suq qabel l-1 ta’ Novembru 1992.

▼B

2.  Dan ir-Regolament ma għandux japplika għaż-żejt taż-żebbuġa u għaż-żejt tal-fdal taż-żebbuġa ppakkjat qabel id-dħul fis-seħħ ta’ dan ir-Regolament u mpoġġi fis-suq sal-31 ta’ Ottubru 1992.

Dan ir-Regolament għandu jorbot fl-intier tiegħu u għandu japplika direttament fl-Istati Membri kollha.




ANNESSI

Sommarju



Anness I:

Karatteristiċi taż-żejt taż-żebbuġa

Anness Ia:

It-teħid ta’ kampjuni taż-żejt taż-żebbuġa jew taż-żejt mir-residwi taż-żebbuġ mogħtija f’pakketti għall-konsum

Anness Ib:

Dijagramma tad-deċiżjonijiet biex jiġi vverifikat jekk kampjun taż-żejt taż-żebbuġa jkunx konsistenti mal-kategorija ddikjarata jew le

Anness II:

Determinazzjoni tal-aċidi grassi liberi, metodu fil-kiesaħ

Anness III:

Determinazzjoni tal-valur tal-perossidu

Anness IV:

Determinazzjoni tal-kontenut tax-xama’ permezz tal-kromatografija tal-gass b’kollona kapillari

Anness V:

L-istabbiliment tal-kompożizzjoni u l-kontenut tal-isteroli u d-dialkoħol tat-triterpen permezz tal-kromatografija b’fażi gassuża f’kolonna kapillari

Anness VII:

►M21  Determinazzjoni tal-perċentwal ta’ 2-glyceryl monopalmitate ◄

▼M20 —————

▼B

Anness IX:

Investigazzjoni spettrofotometrika fl-ultravjola

▼M28

Anness X:

Determinazzjoni tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin permezz tal-kromatografija b'fażi gassuża

▼B

Anness XI:

Determinazzjoni tas-solventi aloġenati volatili taż-żejt taż-żebbuġa

Annex XII:

Il-metodu tal-kunsill internazzjonali taż-żebbuġ għall-valutazzjoni organolettika taż-żejt taż-żebbuġa verġni

▼M20 —————

▼M19 —————

▼B

Anness XV:

Kontenut ta’ żejt tal-fdal taż-żebbuġa

Anness XVI:

Determinazzjoni tal-valur tal-jodju

Anness XVII:

Metodu għad-determinazzjoni tas-stigmastadienes fiż-żjut tal-ħaxix

Annex XVIII:

Id-determinazzjoni tad-differenza bejn il-kontenut attwali u teoretiku tat-triaċilgliċeroli mal-ECN 42

Annex XIX:

►M28  Determinazzjoni tal-kontenut tal-alkoħol alifatiku u triterpeniku permezz tal-kromatografija b'fażi gassuża f'kolonna kapillari ◄

▼M23

Anness XX:

Metodu biex jiġi determinat il-kontenut ta' xema', esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin, u esteri etiliċi tal-aċidi xaħmin permezz ta' kromatografija b'fażi gassuża f'kolonna kapillari

▼M28 —————

▼M25

Anness ХХI:

Riżultati tal-verifiki tal-konformità mwettqa fuq iż-żjut taż-żebbuġa msemmija fl-Artikolu 8(2)

▼M27




ANNESS I

KARATTERISTIĊI TAŻ-ŻEJT TAŻ-ŻEBBUĠA



Kategorija

Esteri etiliċi tal-aċidi xaħmin (FAEEs) (*)

Aċidità

(%) (*)

Valur tal-perossidu

mEq O2/kg (*)

Xama'

mg/kg (**)

2 gliċerilmonopalmitat

(%)

Stigmastadieni

mg/kg (1)

Differenza: ECN42 (HPLC) u ECN42

(kalkolu teoretiku)

K232 (*)

K268 jew K270 (*)

Delta-K (*)

Evalwazzjoni organolettika

Medjan tad-difett (Md) (*)

Evalwazzjoni organolettika

Medjan tat-togħma tal-frott (Mf) (*)

1.  Żejt taż-żebbuġa straverġni

FAEEs ≤ 40 mg/kg (is-sena tal-ħsad 2013-2014) (2)

FAEEs ≤ 35 mg/kg (is-sena tal-ħsad 2014-2016)

FAEEs ≤ 30 mg/kg (is-snin tal-ħsad wara l-2016)

≤ 0,8

≤ 20

C42 + C44 + C46 ≤ 150

≤ 0,9 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku ≤ 14 %

≤ 0,05

≤ |0,2|

≤ 2,50

≤ 0,22

≤ 0,01

Md = 0

Mf > 0

≤ 1,0 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku > 14 %

2.  Żejt taż-żebbuġa verġni

≤ 2,0

≤ 20

C42 + C44 + C46 ≤ 150

≤ 0,9 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku ≤ 14 %

≤ 0,05

≤ |0,2|

≤ 2,60

≤ 0,25

≤ 0,01

Md ≤ 3,5

Mf > 0

≤ 1,0 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku > 14 %

3.  Żejt taż-żebbuġa lampante

> 2,0

C40 + C42 + C44 + C46 ≤ 300 (3)

≤ 0,9 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku ≤ 14 %

≤ 0,50

≤ |0,3|

Md > 3,5 (4)

≤ 1,1 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku > 14 %

4.  Żejt taż-żebbuġa raffinat

≤ 0,3

≤ 5

C40 + C42 + C44 + C46 ≤ 350

≤ 0,9 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku ≤ 14 %

≤ |0,3|

≤ 1,10

≤ 0,16

≤ 1,1 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku > 14 %

5.  Żejt taż-żebbuġa magħmul minn żjut taż-żebbuġa raffinati u verġni

≤ 1,0

≤ 15

C40 + C42 + C44 + C46 ≤ 350

≤ 0,9 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku ≤ 14 %

≤ |0,3|

≤ 0,90

≤ 0,15

≤ 1,0 jekk il-% totali tal-aċidu palmitiku > 14 %

6.  Żejt mhux raffinat mir-residwi taż-żebbuġ

C40 + C42 + C44 + C46 > 350 (5)

≤ 1,4

≤ |0,6|

7.  Żejt raffinat mir-residwi taż-żebbuġ

≤ 0,3

≤ 5

C40 + C42 + C44 + C46 > 350

≤ 1,4

≤ |0,5|

≤ 2,00

≤ 0,20

8.  Żejt mir-residwi taż-żebbuġ

≤ 1,0

≤ 15

C40 + C42 + C44 + C46 > 350

≤ 1,2

≤ |0,5|

≤ 1,70

≤ 0,18

(1)   L-isomeri kollha li setgħu (jew li ma setgħux) jiġu sseparati permezz tal-kolonna kapillari.

(2)   Il-limitu japplika għaż-żjut taż-żebbuġa prodotti mill-1 ta' Marzu 2014 'il quddiem.

(3)   Iż-żjut li jkollhom bejn 300 mg/kg u 350 mg/kg ta' xama' jitqiesu bħala żjut taż-żebbuġa lampante jekk il-kontenut totali ta' alkoħol alifatiku ikun ta' 350 mg/kg jew inqas jew jekk il-kontenut ta' eritrodiol u uvaol fihom ikun ta' 3,5 % jew inqas.

(4)   Il-medjan tad-difett jista' jkun 3,5 jew inqas u l-medjan tat-togħma tal-frott 0.

(5)   Iż-żjut li jkollhom bejn 300 mg/kg u 350 mg/kg ta' xama' jitqiesu bħala żjut mhux raffinati mir-residwi taż-żebbuġ jekk il-kontenut totali ta' alkoħol alifatiku jkun ta' 350 mg/kg jew inqas jew jekk il-kontenut tal-eritrodiol u l-uvaol fihom ikun ta' 3,5 % jew inqas.



Kategorija

Kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi (1)

Ammont totali ta' isomeri tranżolejċi

(%)

Ammont totali ta' isomeri tranżlinolejċi u isomeri tranżlinoleniċi

(%)

Kompożizzjoni tal-isteroli

Ammont totali ta' steroli

(mg/kg)

Eritrodiol u uvaol

(%) (**)

Miristiku

(%)

Linoleniku

(%)

Arakidiku

(%)

Ejkosenojku

(%)

Beħeniku

(%)

Linjoċeriku

(%)

Kolesterol

(%)

Brassikasterol

(%)

Kampesterol (2)

(%)

Stigmasterol

(%)

App βsitosterol (3)

(%) (**)

Delta-7-stigmastenol (2)

(%)

1.  Żejt taż-żebbuġa straverġni

≤ 0,03

≤ 1,00

≤ 0,60

≤ 0,40

≤ 0,20

≤ 0,20

≤ 0,05

≤ 0,05

≤ 0,5

≤ 0,1

≤ 4,0

< Camp.

≥ 93,0

≤ 0,5

≥ 1 000

≤ 4,5

2.  Żejt taż-żebbuġa verġni

≤ 0,03

≤ 1,00

≤ 0,60

≤ 0,40

≤ 0,20

≤ 0,20

≤ 0,05

≤ 0,05

≤ 0,5

≤ 0,1

≤ 4,0

< Camp.

≥ 93,0

≤ 0,5

≥ 1 000

≤ 4,5

3.  Żejt taż-żebbuġa lampante

≤ 0,03

≤ 1,00

≤ 0,60

≤ 0,40

≤ 0,20

≤ 0,20

≤ 0,10

≤ 0,10

≤ 0,5

≤ 0,1

≤ 4,0

≥ 93,0

≤ 0,5

≥ 1 000

≤ 4,5 (4)

4.  Żejt taż-żebbuġa raffinat

≤ 0,03

≤ 1,00

≤ 0,60

≤ 0,40

≤ 0,20

≤ 0,20

≤ 0,20

≤ 0,30

≤ 0,5

≤ 0,1

≤ 4,0

< Camp.

≥ 93,0

≤ 0,5

≥ 1 000

≤ 4,5

5.  Żejt taż-żebbuġa magħmul minn żjut taż-żebbuġa raffinati u verġni

≤ 0,03

≤ 1,00

≤ 0,60

≤ 0,40

≤ 0,20

≤ 0,20

≤ 0,20

≤ 0,30

≤ 0,5

≤ 0,1

≤ 4,0

< Camp.

≥ 93,0

≤ 0,5

≥ 1 000

≤ 4,5

6.  Żejt mhux raffinat mir-residwi taż-żebbuġ

≤ 0,03

≤ 1,00

≤ 0,60

≤ 0,40

≤ 0,30

≤ 0,20

≤ 0,20

≤ 0,10

≤ 0,5

≤ 0,2

≤ 4,0

≥ 93,0

≤ 0,5

≥ 2 500

> 4,5 (5)

7.  Żejt raffinat mir-residwi taż-żebbuġ

≤ 0,03

≤ 1,00

≤ 0,60

≤ 0,40

≤ 0,30

≤ 0,20

≤ 0,40

≤ 0,35

≤ 0,5

≤ 0,2

≤ 4,0

< Camp.

≥ 93,0

≤ 0,5

≥ 1 800

> 4,5

8.  Żejt mir-residwi taż-żebbuġ

≤ 0,03

≤ 1,00

≤ 0,60

≤ 0,40

≤ 0,30

≤ 0,20

≤ 0,40

≤ 0,35

≤ 0,5

≤ 0,2

≤ 4,0

< Camp.

≥ 93,0

≤ 0,5

≥ 1 600

> 4,5

(1)   Kontenut ta' aċidi xaħmin oħra (%): palmitiku: 7,50-20,00; palmitolejku: 0,30-3,50; eptadekanojku: ≤ 0,30; eptadekenojku: ≤ 0,30; steariku: 0,50-5,00; olejku: 55,00-83,00; linolejku: 2,50-21,00.

(2)   Ara l-Appendiċi ta' dan l-Anness.

(3)   App β-sitosterol: Delta-5,23-stigmastadienol + klerosterol + beta-sitosterol + sitostanol + delta-5-avenasterol + delta-5,24-stigmastadienol.

(4)   Iż-żjut li jkollhom bejn 300 mg/kg u 350 mg/kg ta' xama' jitqiesu bħala żjut taż-żebbuġa lampante jekk il-kontenut totali ta' alkoħol alifatiku ikun ta' 350 mg/kg jew inqas jew jekk il-kontenut ta' eritrodiol u uvaol fihom ikun ta' 3,5 % jew inqas.

(5)   Iż-żjut li jkollhom bejn 300 mg/kg u 350 mg/kg ta' xama' jitqiesu bħala żjut mhux raffinati mir-residwi taż-żebbuġ jekk il-kontenut totali ta' alkoħol alifatiku jkun ta' 350 mg/kg jew inqas jew jekk il-kontenut tal-eritrodiol u tal-uvaol fihom ikun ta' iktar minn 3,5 %.

Noti:

(a) Ir-riżultati tal-analiżi għandhom jingħataw bl-istess għadd ta' ċifri wara l-punt deċimali bħal dak użat għal kull karatteristika. L-aħħar ċifra trid tiżdied b'unità waħda jekk iċ-ċifra ta' warajha tkun ta' iktar minn 4.

(b) Jekk karatteristika waħda biss ma tkunx konformi mal-valuri ddikjarati, għall-għanijiet ta' dan ir-Regolament, il-kategorija taż-żejt tista' tinbidel jew iż-żejt jista' jiġi ddikjarat bħala żejt li mhux pur.

(c) Il-karatteristiċi indikati bi stilla (*), b'referenża għall-kwalità taż-żejt, jimplikaw li: — għaż-żejt taż-żebbuġa lampante, jista' jkun li ż-żewġ limiti rilevanti jkunu differenti mill-valuri ddikjarati fl-istess ħin, - għaż-żjut taż-żebbuġa verġni, jekk mill-inqas wieħed minn dawn il-limiti jkun differenti mill-valuri ddikjarati, il-kategorija taż-żejt tinbidel, għalkemm iż-żjut xorta waħda jibqgħu kklassifikati f'waħda mill-kategoriji taż-żejt taż-żebbuġa verġni.

(d) Jekk karatteristika tkun immarkata b'żewġ asterisks (**), dan ifisser li, għat-tipi kollha ta' żejt mir-residwi taż-żebbuġ, iż-żewġ limiti rilevanti jistgħu jkunu differenti mill-valuri ddikjarati fl-istess ħin.




Appendiċi

ARBLU TAD-DEĊIŻJONIJIET

Arblu tad-deċiżjonijiet għall-kampesterol għaż-żejt taż-żebbuġa verġni u ż-żejt taż-żebbuġa straverġni:

image

Il-parametri l-oħra għandhom ikunu konformi mal-limiti stabbiliti f'dan ir-Regolament.

Dijagramma tad-deċiżjonijiet għad-delta-7-stigmastenol:

 Żjut taż-żebbuġa verġni u straverġni

  image

Il-parametri l-oħra għandhom ikunu konformi mal-limiti stabbiliti f'dan ir-Regolament.

 Żjut mir-residwi taż-żebbuġ (raffinati u mhux)

  image

▼M26




ANNESS Ia

IT-TEĦID TA’ KAMPJUNI TAŻ-ŻEJT TAŻ-ŻEBBUĠA JEW TAŻ-ŻEJT MIR-RESIDWI TAŻ-ŻEBBUĠ MOGĦTIJA F’PAKKETTI GĦALL-KONSUM

Dan il-metodu ta’ teħid ta’ kampjuni jintuża għal-lottijiet taż-żejt taż-żebbuġa jew taż-żejt mir-residwi taż-żebbuġ imqiegħda fil-pakketti għall-konsum. Japplikaw metodi differenti tat-teħid tal-kampjuni, skont jekk il-pakkett għall-konsum ikunx jaqbeż il-ħames litri jew le.

“Lott” għandha tfisser sett ta’ unitajiet tal-bejgħ li jiġu prodotti, immanifatturati u ppakkjati f’ċirkustanzi li jkunu tali li ż-żejt li jkun f’kull unità tal-bejgħ jitqies li jkun omoġenju f’termini tal-karatteristiċi analitiċi kollha tiegħu. L-individwazzjoni ta’ lott trid issir skont id-Direttiva 2011/91/UE tal-Parlament Ewropew u tal-Kunsill ( 2 ).

“Żieda” għandha tfisser il-kwantità ta’ żejt li tinsab f’pakkett għall-konsum u li tittieħed minn punt aleatorju tal-lott.

1.   IL-KONTENUT TAL-KAMPJUN EWLIENI

1.1.    Il-pakketti għall-konsum li ma jaqbżux il-ħames litri

Għall-pakketti għall-konsum li ma jaqbżux il-ħames litri, “kampjun ewlieni” għandha tfisser l-għadd ta’ żidiet meħudin minn lott, bi qbil mat-Tabella 1.



It-Tabella 1

Id-daqs minimu tal-kampjun primarju jrid ikun fih dan li ġej

Meta l-pakkett għall-konsum ikollu kapaċità ta’

Il-kampjun ewlieni jrid ikun fih żejt

(a)  litru jew aktar

(a)  minn pakkett wieħed għall-konsum

(b)  inqas minn litru

(b)  mill-għadd minimu ta’ pakketti b’kapaċità totali ta’ mill-anqas litru

Kull Stat Membru jista’ jżid l-għadd ta’ pakketti msemmi fit-Tabella 1 li għandu jikkostitwixxi kampjun ewlieni skont il-ħtiġijiet tiegħu (pereżempju l-valutazzjoni organolettika minn laboratorju differenti minn dak li jkun wettaq l-analiżi kimika, il-kontroanaliżi, eċċ.).

1.2.    Il-pakketti għall-konsum li jaqbżu l-ħames litri

Għall-pakketti għall-konsum li jaqbżu l-ħames litri, “kampjun ewlieni” għandha tfisser parti rappreżentattiva miż-żidiet kollha miksubin permezz ta’ proċess ta’ tnaqqis, bi qbil mat-Tabella 2. Il-kampjun ewlieni jrid ikun magħmul minn diversi eżempji.

“Eżempju” ta’ kampjun ewlieni għandha tfisser kull pakkett li jifforma l-kampjun ewlieni.



It-Tabella 2

L-għadd minimu ta’ żidiet li għandhom jintgħażlu

L-għadd ta’ pakketti fil-lott

L-għadd minimu ta’ żidiet li għandhom jintgħażlu

Sa 10 pakketti

1

Minn … 11 sa 150

2

Minn … 151 sa 500

3

Minn … 501 sa 1 500

4

Minn … 1 501 sa 2 500

5

iktar minn 2 500 pakkett għal kull 1 000 pakkett

żieda waħda żejda

Sabiex jitnaqqas il-volum tat-teħid tal-kampjuni tal-pakketti għall-konsum, il-kontenut taż-żidiet tat-teħid tal-kampjuni huwa omoġenizzat għat-tħejjija tal-kampjun ewlieni. Il-porzjonijiet taż-żidiet differenti jitferrgħu f’kontenitur wieħed biex jiġu omoġenizzati billi jitħawdu, sabiex il-kampjun jitħares bl-aħjar mod mill-arja.

Il-kontenut tal-kampjun ewlieni għandu jitferra’ f’sensiela ta’ pakketti ta’ kapacità minima ta’ litru, li kull wieħed minnhom ikun jikkostitwixxi eżempju tal-kampjun ewlieni.

Kull Stat Membru jista’ jżid l-għadd ta’ kampjuni ewlenin skont il-ħtiġijiet tiegħu (pereżempju l-valutazzjoni organolettika minn laboratorju differenti minn dak li jkun wettaq l-analiżi kimika, il-kontroanaliżi, eċċ.).

Kull pakkett irid jimtela b’tali mod li jitnaqqas kemm jista’ jkun is-saff tal-arja fil-wiċċ tiegħu u mbagħad irid jingħalaq u jiġi ssiġġillat kif xieraq biex ikun żgurat li ma jkunx jista’ jitbagħbas.

Dawn l-eżempji għandhom jiġu ttikkettati biex tkun żgurata l-identifikazzjoni korretta tagħhom.

2.   L-ANALIŻI U R-RIŻULTATI

2.1. Kull kampjun ewlieni għandu jinqasam mill-ġdid f’kampjuni tal-laboratorju, skont il-punt 2.5 tal-istandard EN ISO 5555, u għandu jiġi analizzat fl-ordni mogħtija fid-dijagramma tad-deċiżjonijiet stabbilita fl-Anness Ib jew f’kull ordni aleatorja oħra.

2.2. Meta r-riżultati kollha tal-analiżi jikkonformaw mal-karatteristiċi tal-kategorija taż-żejt iddikjarata, il-lott kollu għandu jiġi ddikjarat bħala konformi.

Meta riżultat wieħed tal-analiżi ma jkunx jikkonforma mal-karatteristiċi tal-kategorija taż-żejt iddikjarata, il-lott kollu għandu jiġi ddikjarat bħala mhux konformi.

3.   VERIFIKA TAL-KATEGORIJA TAL-LOTT

3.1. Sabiex l-awtorità kompetenti tivverifika l-kategorija tal-lott, hija tista’ żżid in-numru ta’ kampjuni ewlenin meħudin f’punti differenti tal-lott skont it-tabella li ġejja:



It-Tabella 3

L-għadd ta’ kampjuni ewlenin stabbilit skont id-daqs tal-lott

Id-daqs tal-lott (f’litri)

L-għadd ta’ kampjuni ewlenin

Inqas minn 7 500 litru

2

Minn 7 500 litru sa inqas minn 25 000 litru

3

Minn 25 000 litru sa inqas minn 75 000 litru

4

Minn 75 000 litru sa inqas minn 125 000 litru

5

125 000 litru u iktar

6 + 1 għal kull 50 000 litru iktar

Kull żieda li tikkostitwixxi kampjun ewlieni trid tittieħed minn post kontinwu fil-lott; il-post ta’ kull kampjun ewlieni jrid jiġi nnutat u jrid jiġi identifikat mingħajr ambigwità.

Il-formazzjoni ta’ kull kampjun ewlieni trid titwettaq skont il-proċeduri msemmija fil-punti 1.1 u 1.2.

Kull kampjun ewlieni mbagħad isirulu l-analiżi msemmija fl-Artikolu 2(1).

3.2. Meta wieħed mir-riżultati tal-analiżi msemmija fl-Artikolu 2(1) ta’ mill-inqas kampjun ewlieni wieħed ma jkunx jikkonforma mal-karatteristiċi tal-kategorija taż-żejt iddikjarata, il-lott kollu tal-kampjuni għandu jiġi ddikjarat bħala mhux konformi.




ANNESS Ib

DIJAGRAMMA TAD-DEĊIŻJONIJIET BIEX JIĠI VVERIFIKAT JEKK KAMPJUN TAŻ-ŻEJT TAŻ-ŻEBBUĠA JKUNX KONSISTENTI MAL-KATEGORIJA DDIKJARATA JEW LE

It-Tabella 1

image

It-Tabella 2

image

It-Tabella 3

image




Appendiċi 1



Tabella ta’ ekwivalenza bejn l-Annessi ta’ dan ir-Regolament u l-analiżi speċifikati fid-dijagramma tad-deċiżjonijiet

—  L-aċidità

L-Anness II

L-istabbiliment tal-aċidi xaħmin liberi, metodu bil-kesħa

—  Il-valur tal-perossidu

L-Anness III

L-istabbiliment tal-valur tal-perossidu

—  L-ispettrometrija tar-radjazzjoni ultravjola

L-Anness IX

L-analiżi spettrofotometrika

—  Il-valutazzjoni organolettika

L-Anness XII

Valutazzjoni organolettika taż-żejt taż-żebbuġa verġni

—  L-esteri etiliċi

L-Anness XX

Metodu biex jiġi stabbilit l-ammont ta’ xama’, ta’ esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin u ta’ esteri etiliċi tal-aċidi xaħmin permezz tal-kromatografija b’fażi gassuża f’kolonna kapillari

—  3,5-Stigmastadini

L-Anness XVII

Metodu għad-determinazzjoni tas-stigmastadienes fiż-żjut tal-ħaxix

▼M28

—  L-isomeri trans tal-aċidi xaħmin

L-Anness X

Determinazzjoni tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin permezz tal-kromatografija b'fażi gassuża

—  Il-kontenut tal-aċidi xaħmin

L-Anness X

Determinazzjoni tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin permezz tal-kromatografija b'fażi gassuża

▼M26

—  ΔECN42

L-Anness XVIII

L-istabbiliment tal-kompożizzjoni tat-trigliċeridi b’ECN42 (id-differenza bejn id-dejta tal-HPLC u l-kontenut teoretiku)

— Il-kompożizzjoni tal-isteroli u l-ammont totali ta’ steroli

— L-eritrodiol u l-uvaol

L-Anness V

L-istabbiliment tal-kompożizzjoni u l-kontenut tal-isteroli u d-dialkoħol tat-triterpen permezz tal-kromatografija b’fażi gassuża f’kolonna kapillari

—  Ix-xama’

L-Anness IV

Determinazzjoni tal-kontenut tax-xama’ permezz tal-kromatografija tal-gass b’kollona kapillari

▼M28

—  L-alkoħol alifatiku u triterpeniku

L-Anness XIX

Determinazzjoni tal-kontenut tal-alkoħol alifatiku u triterpeniku permezz tal-kromatografija kapillari b'fażi gassuża

▼M26

—  L-aċidi xaħmin issaturati fit-tieni pożizzjoni

Anness VII

L-istabbiliment tal-perċentwali ta’ 2-gliċeril monopalmitat

▼M29




ANNESS II

DETERMINAZZJONI TAL-AĊIDI GRASSI LIBERI, METODU FIL-KIESAĦ

1.   KAMP U QASAM TAL-APPLIKAZZJONI

Dan il-metodu jiddeskrivi d-determinazzjoni tal-aċidi grassi liberi fiż-żjut taż-żebbuġa u fiż-żjut mir-residwi taż-żebbuġ. Il-kontenut tal-aċidi grassi liberi huwa espress bħala aċidità kkalkolata bħala l-persentaġġ ta' aċidu olejku.

2.   PRINĊIPJU

Jiddewweb kampjun f'taħlita ta' solventi u l-aċidi grassi liberi preżenti jiġu ttitrati billi tintuża soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju jew tal-idrossidu tas-sodju.

3.   REAĠENTI

Ir-reaġenti kollha għandhom ikunu ta' kwalità analitika magħrufa u l-ilma użat għandu jkun distillat jew ta' purità ekwivalenti.

3.1

Etere dietiliku; 95 % etanol (v/v), taħlita ta' partijiet ugwali bil-volum.

Innewtralizza preċiżament fil-mument tal-użu b'soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju (3.2) billi żżid 0,3 ml ta' soluzzjoni ta' fenolftaleina (3.3) għal kull 100 ml ta' taħlita.

Nota 1:  L-etere dietiliku jieħu n-nar malajr ħafna u jista' jifforma perossidi splussivi. Meta jintuża, wieħed irid joqgħod attent ħafna.

Nota 2:  Jekk ma jkunx possibbli li jintuża l-etere dietiliku, tista' tintuża taħlita ta' solventi bl-etanol u t-toluwen. Jekk meħtieġ, l-etanol jista' jiġi sostitwit bil-propanol-2.

3.2

Soluzzjoni etanolika jew milwiema ttitrata tal-idrossidu tal-potassju jew tal-idrossidu tas-sodju, c(KOH) [jew c(NaOH)] madwar 0,1 mol/l jew, jekk meħtieġ, c(KOH) [jew c(NaOH)] madwar 0,5 mol/l. Huma disponibbli soluzzjonijiet kummerċjali.

Il-konċentrazzjoni eżatta tas-soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju (jew tas-soluzzjoni tal-idrossidu tas-sodju) għandha tkun magħrufa u vverifikata immedjatamement qabel tintuża. Uża soluzzjoni li tkun ġiet ippreparata tal-inqas ħamest ijiem qabel l-użu u mferrgħa ġo flixkun kannella tal-ħġieġ b'tapp tal-gomma. Is-soluzzjoni għandha tkun mingħajr kulur jew lewn it-tiben.

Jekk meta tintuża s-soluzzjoni milwiema tal-idrossidu tal-potassju (jew tal-idrossidu tas-sodju) tiġi osservata separazzjoni f'fażijiet, ibdel is-soluzzjoni milwiema b'soluzzjoni etanolika.

Nota 3:  Soluzzjoni stabbli mingħajr kulur tal-idrossidu tal-potassju (jew tal-idrossidu tas-sodju) tista' titħejja kif ġej. Għalli 1 000  ml ta' etanol jew ta' ilma flimkien ma' 8 g tal-idrossidu tal-potassju (jew ta' idrossidu tas-sodju) u 0,5 g ta' ċana tal-aluminju u kompli għalli bir-rifluss għal siegħa. Iddistilla minnufih. Dewweb il-kwantità meħtieġa tal-idrossidu tal-potassju (jew tal-idrossidu tas-sodju) fid-distillat. Ħalli għal diversi jiem u ferra' l-likwidu supernatanti ċar mill-preċipitat tal-karbonat tal-potassju (jew tal-karbonat tas-sodju).

Is-soluzzjoni tista' titħejja wkoll mingħajr distillazzjoni kif ġej: żid 4 ml ta' aluminju ta' butilat tal-aluminju ma' 1 000  ml ta' etanol u ħalli t-taħlita toqgħod għal diversi jiem. Ferra' l-likwidu supernatanti u dewweb il-kwantità meħtieġa tal-idrossidu tal-potassju (jew tal-idrossidu tas-sodju). Is-soluzzjoni hija lesta biex tintuża.

3.3

Soluzzjoni ta' 10 g/l ta' fenolftaleina f'bejn 95 % sa 96 % ta' etanol (v/v) jew blu alkalin 6B, jew soluzzjoni ta' 20 g/l ta' timolftaleina f'bejn 95 % sa 96 % ta' etanol (v/v). Fil-każ ta' żjut li għandhom kulur qawwi, għandu jintuża l-blu alkalin jew it-timolftaleina.

4.   APPARAT

Tagħmir normali tal-laboratorju li jinkludi:

4.1 Miżien analitiku;

4.2 flask koniku ta' 250 ml;

4.3 buretta ta' 10 ml tal-klassi A, gradata f'0,05 ml, jew buretta awtomatika ekwivalenti.

5.   PROĊEDURA

5.1    Tħejjija tal-kampjun għat-test

Il-kampjun għandu jiġi ffiltrat hekk kif jidher imċajpar.

5.2    Porzjon tat-test

Ħu kampjun skont l-aċidità preżunta f'konformità mat-tabella li ġejja:



Aċidità mistennija

Aċidità olejka (g/100 g)

Massa tal-kampjun (g)

Preċiżjoni tal-użin (g)

0 sa 2

10

0,02

> 2 sa 7,5

2,5

0,01

> 7,5

0,5

0,001

Iżen il-kampjun fil-flask koniku (4.2).

5.3    Determinazzjoni

Dewweb il-kampjun (5.2) f'bejn 50 sa 100 ml tat-taħlita nnewtralizzata minn qabel tal-etere dietiliku u l-etanol (3.1).

Ittitra filwaqt li tħawwad ma' soluzzjoni ta' 0,1 mol/l tal-idrossidu tal-potassju (jew tal-idrossidu tas-sodju) (3.2) (ara n-Nota 4) sakemm l-indikatur jinbidel (il-kulur tal-indikatur kulurit jippersisti għal tal-inqas għaxar minuti).

Nota 4:  Jekk il-kwantità tas-soluzzjoni ta' 0,1 mol/l tal-idrossidu tal-potassju (jew tal-idrossidu tas-sodju) meħtieġa taqbeż 10 ml, uża s-soluzzjoni ta' 0,5 mol/l jew ibdel il-massa tal-kampjun skont l-aċidu libera mistennija u t-tabella proposta.

Nota 5:  Jekk is-soluzzjoni ssir imċajpra matul it-titrazzjoni, żid biżżejjed solventi (3.1) biex tikseb soluzzjoni ċara.

Wettaq it-tieni determinazzjoni biss jekk l-ewwel riżultat ikun ogħla mil-limitu speċifikat għall-kategorija taż-żejt.

6.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

L-aċidità bħala perċentwali ta' aċidu olejku bil-piż hija ugwali għal:

image

fejn:

V

=

il-volum tas-soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju (jew tal-idrossidu tas-sodju) titrata użata, f'millimetri;

c

=

il-konċentrazzjoni eżatta f'moli għal kull litru tas-soluzzjoni ttitrata tal-idrossidu tal-potassju (jew tal-idrossidu tas-sodju) użata;

M

=

282 g/mol, il-piż molari fi grammi għal kull mol ta' aċidu olejku;

m

=

il-massa tal-kampjun fi grammi.

L-aċidità olejka hija rrappurtata kif ġej:

(a) sa żewġ punti deċimali għall-valuri minn 0 sa 1 (valur inkluż);

(b) sa punt deċimali wieħed għall-valuri minn 1 sa 100 (valur inkluż).

▼B




ANNESS III

DETERMINAZZJONI TAL-VALUR TAL-PEROSSIDU

1.   SKOP

Dan l-Istandard jiddeskrivi metodu għall-istabbilizzazzjoni tal-valur ta’ perossidu ta’ żjut u xaħmijiet

2.   QASAM TA’ APPLIKAZZJONI

Dan l-Istandard huwa applikabbli għaż-żjut u x-xaħmijiet tal-annimali u l-ħxejjex

3.   DEFINIZZJONI

Il-valur tal-perossidu huwa l-kwantità ta’ dawk is-sostanzi fil-kampjun, espressa f’termini ta’ milliekwivalenti ta’ ossiġenu attiv għal kull kilogramma, li jossidaw il-jodju tal-potassju taħt il-kondizzjonijiet ta’ operazzjoni deskritti.

4.   PRINĊIPJU

Trattament tal-porzjon tat-test, f’soluzzjoni fl-aċidu aċetiku u kloroforma, b’soluzzjoni ta’ jodju tal-potassju. Titrazzjoni tal-jodju meħlus b’soluzzjoni standardizzata ta’ sodium thiosulphate.

5.   APPARAT

It-tagħmir użat għandu jkun ħieles minn sostanzi ta’ riduzzjoni jew ossidanti.

Nota: Tidlikx l-uċuħ tal-qiegħ b’xi grass

5.1.

Mgħarfa tal-ħġieġ ta’ 3 ml.

5.2.

Flasks, bl-għonq u t-tapp immolati, ta’ kapaċità ta’ xi 250 ml, imnixxfin minn qabel u mimlija b’gass pur, xott u inerti (nitroġenu jew, jekk jista’ jkun, diossidu tal-karbonju).

5.3.

Buretta ta’ 25- jew 50-ml, gradata b’0,1 ml.

6.   REAĠENTI

6.1.

Kloroforma, kwalità ta’ reaġent analitiku, meħlus mill-ossiġenu billi jitbaqbaq minn ġewwa fih kurrent ta’ gass pur, xott u inerti.

6.2.

Aċidu aċetiku glaċjali, kwalità ta’ reaġent analitiku, meħlus mill-ossiġenu billi jitbaqbaq minn ġewwa fih kurrent ta’ gass pur, xott u inerti.

6.3.

Jodur tal-potassju, soluzzjoni milwiema saturata, ppreparata dan l-aħħar, ħielsa mill-jodju u mill-iodates

6.4.

Soluzzjoni milwiema standardizzata bi preċiżjoni ta’ sodium thiosulphate ta’ 0,01 jew 0,002 Mol/L, standardizzata eżatt qabel tintuża.

6.5.

Dispersjoni milwiema ta’ soluzzjoni ta’ lamtu ta’ 10 g/l, imħejjija riċentament minn lamtu naturali li jinħall.

7.   KAMPJUN

Ara li l-kampjun jitneħħa u jinżamm il-bogħod mid-dawl, jinżamm kiesaħ ġewwa reċipjenti tal-ħġieġ mimlijin għal kollox, issiġillati ermetikament b’tappijiet tal-ħġieġ immolati jew tas-sufra.

8.   PROĊEDURA

It-test għandu jsir f’dawl diffuż jew f’dawl artifiċjali. Iżen f’magħrfa tal-ħġieġ (5.1) jew, fin-nuqqas tagħha, fi flask (5.2), sa l-eqreb 0,001 g, piż tal-kampjun skond it-tabella li ġejja, skond il-valur ta’ perossidu mistenni:



Valur ta’ perossidu mistenni

(meq)

Piż tal-porzjon tat-test

(g)

0 sa 12

5,0 sa 2,0

12 sa 20

2,0 sa 1,2

20 sa 30

1,2 sa 0,8

30 sa 50

0,8 sa 0,5

50 sa 90

0,5 sa 0,3

Neħħi t-tapp ta’ flask (5.2) u daħħal l-imgħarfa tal-ħġieġ li jkun fiha l-porzjon għall-ittestjar. Żid 10 ml ta’ kloroforma (6.1). Dewweb malajr il-parti għall-ittestjar billi tħawwadha Żid 15 ml ta’ aċidu aċetiku (6.2), u mbagħad 1 ml ta’ soluzzjoni ta’ jodur tal-potassju (6.3). Daħħal malajr it-tapp, ħawwadha għal minuta, u ħalliha għal ħames minuti eżatt il-bogħod mid-dawl b’temperatura ta’ minn 15 sa 25 oC.

Żid bejn wieħed u ieħor 75 ml ta’ ilma ddistillat. Ittitra l-jodju meħlus bis-soluzzjoni ta’ sodium thiosulphate (6.4) (soluzzjoni ta’ 0,002 N għall-valuri mistennija ta’ inqas minn 12, u soluzzjoni ta’ 0,01 N għal valuri mistennija ’l fuq minn 12) filwaqt li tħawwad sewwa, billi tuża soluzzjoni ta’ lamtu (6.5) bħala indikatur.

Wettaq żewġ determinazzjonijiet fuq l-istess kampjun tat-test.

Wettaq blank test fl-istess waqt. Jekk ir-riżultat tal-blank test jaqbeż 0,05 ml ta’ soluzzjoni ta’ 0,01 ta’ sodium thiosulphate (6.4), ibdel ir-reaġenti impuri.

9.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI:

Il-valur tal-perossidu (PV), f’milliekwivalenti ta’ ossiġenu attiv għal kull kilogramma, jingħata bil-formula:

image

fejn:

V

=

in-numru ta’ ml ta’ soluzzjoni standardizzata ta’ sodium thiosulphate (6.4) użat għat-test, korrett sabiex jagħti kas tal-blank test;

T

=

il-molarità eżatta tas-soluzzjoni ta’ sodium thiosulphate (6.4) wżata;

m

=

il-piż fi g. tal-porzjon tat-test.

Ħu il-medja aritmetika taż-żewg determinazzjonijiet imwettqa bħala r-riżultat.

▼M21




ANNESS IV

DETERMINAZZJONI TAL-KONTENUT TAX-XAMA’ PERMEZZ TAL-KROMATOGRAFIJA TAL-GASS B’KOLLONA KAPILLARI

1.   SKOP

Dan il-metodu jiddeskrivi proċedura għad-determinazzjoni tal-kontenut ta’ xama’ fiż-żjut taż-żebbuġa. Ix-xama’ jinfired skond l-għadd ta’ atomi tal-karbonju. Dan il-metodu jista’ jintuża partikularment biex issir distinzjoni bejn iż-żejt taż-żebbuġ miksub permezz tat-tagħsir u bejn dak miksub permezz ta’ l-estrazzjoni (żejt tal-fdal).

2.   PRINĊIPJU

Il-materja grassa, miżjuda b’livell standard intern xieraq, tiġi frazzjonata bil-kromatografija fuq kolonna ta’ ġell idratat tas-silika; l-ewwel frazzjoni miksuba fil-kondizzjonijiet ta’ prova (bil-polarità tiegħu tkun inqas minn dik tat-triglycerides) jiġi rkuprat, imbagħad jiġi analizzat direttament bil-kromatografija tal-gass fuq kolonna kapillari.

3.   APPARAT

3.1.

Flask Erlenmeyer ta’ 25 ml.

3.2.

Kolonna tal-ħġieġ għall-kromatografija tal-gass, ta’ diametru intern ta’ 15,0 mm, twila bejn 30 u 40 cm, u mgħammra b’vit.

3.3.

Apparat ta’ kromatografija tal-gass addattat għall-funzjonament bil-kolonna kapillari, mgħammar b’sistema għall-intoduzzjoni diretta fil-kolonna, u magħmul minn:

3.3.1.

Kompartiment termostatiku għall-kolonni, mgħammar bi programmatur tat-temperatura.

3.3.2.

Injettur kiesaħ għall-introduzzjoni diretta fil-kolonna.

3.3.3.

Indikatur tal-jonizzazzjoni tal-fjamma u konvertitur-amplifikatur.

3.3.4.

Reġistratur-integratur adattat għall-konvertitur-amplifikatur (3.3.3.), b’rata ta’ rispons ta’ mhux aktar minn sekonda, u b’velocità tal-karta varjabbli. (Wieħed jista’ juża wkoll sistemi informatiċi li jippermettu l-ġbir tad-dejta tal-kromatografija bil-gass permezz ta’ kompjuter.)

3.3.5.

Kolonna kapillari tal-ħġieġ jew tas-silika mdewba, twila bejn 8 u 12 m, ta’ diametru intern ta’ bejn 0,25 u 0,32 mm, miksija minn ġewwa b’likwidu, u bi ħxuna uniformi ta’ bejn 0,10 u 0,30 μm. (Likwidi għat-tifrix adattati għall-użu, tat-tipi SE52 jew SE54 fis-suq.)

3.4.

Mikrosiringa għall-introduzzjoni diretta fil-kolonna ta’ 10 μl, mgħammra b’labra iebsa.

3.5.

Vibratur ta’ l-elettriku.

3.6.

Evaporatur ċirkolari.

3.7.

Muffle furnace.

3.8.

Miżien analitiku li jiggarantixxi preċiżjoni ta’ + 0,1 mg.

3.9.

L-apparat tal-ħġieġ normali tal-laboratorju.

4.   REAĠENTI

4.1.

Ġell tas-silika tad-daqs ta’ fraka ta’ bejn 60 u 200 μm.

Poġġi l-ġell fil-forn f’temperatura ta’ 500 °C għal talanqas erba’ sigħat. Kessħu mill-ġdid, imbagħad żidlu l-ilma fi kwantità ta’ 2 % tal-ġell tas-silika mtella’. Ħawwad sew it-taħlita omoġenizzata. Ħalli fid-dlam għal talanqas 12-il siegħa qabel l-użu.

4.2.

n-hexane, għall-kromatografija.

4.3.

Eter etiliku, għall-kromatografija

4.4.

n-Heptane, għall-kromatografija.

4.5.

Soluzzjoni standard ta’ lauryl arachidate, f’0,1 % (m/V) fil-hexane (skond il-livell standard intern). (Wieħed jista’ juża wkoll palmitate tal-palmitil jew inkella methyl stearate)

4.5.1.

Soudan 1 (1-phenyl-azo-2-naphthol)

4.6.

Gass portatur: idroġenu jew elju pur għall-kromatografija tal-gass.

4.7.

Gassijiet awżiljari:

 idroġenu pur għall-kromatografija tal-gass;

 arja safja, għall-kromatografija tal-gass.

5.   PROĊEDURA

5.1.   Tħejjija tal-kolonna kromatografika

Dendel 15 g ta’ ġell tas-silika (4.1) fl-n-hexane (4.2) u daħħlu fil-kolonna (3.2). Ħallih joqgħod spontanjament, u kompli t-tqegħid bl-għajnuna ta’ shaker elettroniku (3.5) biex is-saff kromatografiku jsir aktar omoġenju. Saffi 30 ml ta’ n-hexane biex tneħħi l-impuritajiet li jista’ jkun hemm. Iżen eżatt 500 mg mill-kampjun bl-għajnuna tal-miżien (3.8.) fl-Erlenmeyer ta’ 25 ml (3.1.), u żid il-kwantità meħtieġa ta’ standard intern (4.5.) skond il-kontenut previst ta’ xama’. Per eżempju, żid 0,1 mg ta’ lauryl arachidat fil-każ taż-żejt taż-żebbuġa, u minn 0,25 sa 0,5 mg fil-każ taż-żejt tal-fdal taż-żebbuġa. Ittrasferixxi l-kampjun hekk ippreparat għall-kolonna kromatografika bl-għajnuna ta’ żewġ porzjonijiet ta’ 2 ml ta’ n-hexane (4.2.).

Ħalli s-solvent inixxi sa 1 mm ’il fuq mill-ogħla livell ta’ l-assorbent, imbagħad saffi 70 ml addizzjonali ta’ n-hexane sabiex tneħħi l-n-alcanes li jkunu preżenti naturalment. Imbagħad ibda l-eluzzjoni kromatografika billi tiġbor 180 ml tat-taħlita n-hexane/eter etiliku, b’proporzjon 99:1, filwaqt li tinżamm rata ta’ madwar 15-il taqtira kull 10 sekondi. L-eluzzjoni tal-kampjun għandha ssir f’temperatura ta’ l-ambjent ta’ 22 °C + 4.

Noti:

 It-taħlita n-hexane/eter etiliku (99:1) għandha titħejja kuljum.

 Biex tikkontrolla viżwalment l-eluzzjoni korretta tax-xama’, tista’ żżid mal-kampjun fis-soluzzjoni 100 μl ta’ 1 % Sudan fit-taħlita ta’ l-eluzzjoni. Peress li l-kolorant għandu retenzjoni intermedjarja bejn ix-xama’ u t-triglycerides, malli l-kulur jilħaq il-fond tal-kolonna kromatografika, jeħtieġ li l-eluzzjoni tkun sospiża għax ix-xama’ kollu jkunu ġew eluti.

Nixxef il-frazzjoni hekk miksuba fl-evaporatur ċirkolari (3.6.) sakemm is-solvent prattikament ikun tneħħa għalkollox. Neħħi l-aħħar 2 ml tas-solvent bl-għajnuna ta’ kurrent dgħajjef ta’ nitroġenu; imbagħad żid 2-4 ml ta’ n-heptane.

5.2.   Analiżi bil-kromatografija tal-gass

5.2.1.   Proċeduri preliminari

Waħħal il-kolonna mal-kromatografu tal-gass (3.3.) billi tqabbad it-terminal ta’ dħul fis-sistema on-column u t-terminal ta’ ħruġ ma’ l-indikatur. Agħmel verifika ġenerali ta’ l-apparat ta’ kromatografija bil-gass (l-operazzjoni taċ-ċirkwiti tal-gass, l-effiċjenza ta’ l-indikatur u tas-sistema ta’ reġistrazzjoni, eċċ.).

Jekk il-kolonna tkun qiegħda tintuża għall-ewwel darba, l-ewwel għandu jsir il-kondizzjonament tagħha. Għaddi nixxija rqiqa ta’ gass fil-kolonna, imbagħad ixgħel l-apparat tal-kromatografija tal-gass. Saħħanha bil-mod sakemm wara xi 4 sigħat tilħaq temperatura ta’ 350 °C. Żomm din it-temperatura għal talanqas sagħtejn, imbagħad għaddi għall-aġġustament ta’ l-apparat biex ikun jista’ jitħaddem (l-aġġustar tar-rata ta’ ċirkolazzjoni tal-gassijiet, it-tqabbid tal-fjamma, it-tqabbid mar-reġistratur elettroniku (3.3.4.), l-aġġustar tat-temperatura ta’ l-ambjent għall-kolonna, għall-indikatur, eċċ.) u rreġistra s-sinjal għal sensibbiltà talanqas darbtejn ikbar minn dik prevista għat-twettiq ta’ l-analiżi. Il-linja bażilari għandha tkun lineari, mingħajr l-ebda tip ta’ quċċata, u ma jista’ jkollha l-ebda sinjal ta’ devjazzjoni.

Devjazzjoni rettilineari negattiva tindika li l-konnessjonijiet tal-kolonna mhumiex sew; devjazzjoni pożittiva tindika li l-kolonna ma ġietx ikkondizzjonata kif suppost.

5.2.2.   Għażla tal-kondizzjonijiet tat-tħaddim

B’mod ġenerali, il-kundizzjonijiet tat-tħaddim li għandhom ikunu osservati huma dawn li ġejjin:

 it-temperatura tal-kolonna:

 



 

20 °C/minuta

 

5 °C/minuta

 

20 °C/minuta

 

fil-bidu 80 °C

(1′)

240 °C

325 °C

(6′)

340 °C

(10′)

 it-temperatura ta’ l-indikatur: 350 °C;

 il-kwantità tal-materjal injettat: 1 μl tas-soluzzjoni (2-4 ml) ta’ n-heptane;

 gass portatur: elju jew idroġenu bil-veloċità lineari l-aktar xierqa għall-gass magħżul (ara l-Appendiċi);

 sensittività ta’ l-istrument: livell xieraq skond il-kundizzjonijiet ta’ hawn isfel:

Dawn il-kundizzjonijiet jistgħu jkunu mmodifikati skond il-karatteristiċi tal-kolonna u ta’ l-apparat ta’ kromatografija tal-gass, bil-għan li jinfired ix-xama’ kollu u li jkun hemm riżoluzzjoni sodisfaċenti tal-qċaċet (ara l-figura); il-periodu ta’ retenzjoni ta’ l-standard intern C32 għandu jkun ta’ 18-il minuta + 3. L-aktar quċċata tax-xama’ rappreżentattiva għandha tidher f’talanqas 60 % ta’ l-iskala.

Il-parametri ta’ l-integrazzjoni tal-qċaċet għandhom jiġu ddeterminati b’tali mod li tinkiseb evalwazzjoni korretta tas-superfiċji tal-qċaċet ikkunsidrati.

Nota:Minħabba t-temperatura finali għolja, hija permessa devjazzjoni pożittiva ta’ mhux aktar minn 10 % ta’ l-iskala sħiħa.

5.3.   Eżekuzzjoni ta’ l-analiżi

Tella’ 1 μl mis-soluzzjoni bl-għajnuna tal-mikrosiringa ta’ 10 μl; neħħi l-plunger tas-siringa sabiex il-labra tibqa’ vojta. Daħħal il-labra fl-injettur, u wara sekonda jew tnejn, injetta malajr; wara madwar 5 sekondi, oħroġ il-labra bil-mod.

Agħmel ir-reġistrazzjoni sa l-eluzzjoni totali tax-xama’.

Il-linja bażilari għandha dejjem tissodisfa l-kundizzjonijiet stipulati.

5.4.   Identifikazzjoni tal-qċaċet

L-identifikazzjoni tal-qċaċet differenti għandha ssir abbażi tal-ħin ta’ retenzjoni, skond tqabbil ma’ taħlitiet ta’ xama’ b’ħinijiet ta’ retenzjoni magħrufin, analizzati fl-istess kundizzjonijiet.

Il-Figura turi kromatogramma tax-xama’ ta’ żejt taż-żebbuġa verġni.

5.5.   Evalwazzjoni kwantitattiva

Ikkalkola s-superfiċji tal-qċaċet ta’ l-istandard intern, kif ukoll ta’ l-esters alifatiċi minn C40 sa C46, bl-għajnuna ta’ l-integratur.

Ikkalkola l-kontenut tax-xama’ ta’ kull wieħed mill-esters, f’mg/kg ta’ xaħam, skond il-formula:

image

Fejn:

Ax

=

is-superfiċje tal-quċċata ta’ kull ester, f’millimetri kwadri;

As

=

is-superfiċje tal-quċċata ta’ l-istandard intern, f’millimetri kwadri;

ms

=

il-massa ta’ l-istandard intern miżjud, f’milligrammi;

m

=

il-massa tal-kampjun meħud għall-analiżi, fi grammi.

6.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

Indika t-total tal-kontenut tat-tipi differenti ta’ xama’ minn C40 sa C46, fi mg/kg ta’ materja grassa (ppm).

Nota:Il-komponenti li għandhom jiġu kkwantifikati jirreferu għall-qċaċet b’numru biż-żewġ tal-karbonju, bejn l-estri C40 u C46, skond l-eżempju tal-kromatogramma tax-xama’ taż-żejt taż-żebbuġa indikat fil-figura li ġejja. Jekk l-ester C46 jidher darbtejn, biex jiġi identifikat, jaqbel li ssir analiżi tal-frazzjoni tax-xama’ f’żejt tal-fdal taż-żebbuġa fejn il-quċċata C46 huwa faċilment identifikabbli għax għandha maġġoranza ċara.

Ir-riżultati għandhom ikunu espressi sa punt deċimali wieħed.

FIGURA

Kromatogramma tax-xama’ f’żejt taż-żebbuġa ( 3 )

image

Tifsir:

I.S.

=

Lauryl arachidate

1.

=

Diterpenic esters

2 + 2′

=

Esters C40

3 + 3′

=

Esters C42

4 + 4′

=

Esters C44

5.

=

Esters C46

6.

=

Sterol esters u alkoħol triterpenic




APPENDIĊI

Determinazzjoni tal-veloċità lineari tal-gass

Injetta minn 1 sa 3 μl metanu (jew propan) fl-apparat kromatografiku tal-gass, wara l-aġġustament tiegħu għall-kundizzjonijiet normali ta’ l-operazzjoni. Żomm kont tal-ħin li l-gass jieħu biex jgħaddi mill-kolonna, mill-mument li jiġi injettat sakemm tintlaħaq il-quċċata (tM).

Il-veloċità lineari f’ċm/sek. hija mogħtija bil-formula L/tM, fejn L huwa t-tul tal-kolonna f’ċm, u tM huwa l-ħin imkejjel f’sekondi.

▼M26




ANNESS V

L-ISTABBILIMENT TAL-KOMPOŻIZZJONI U L-KONTENUT TAL-ISTEROLI U D-DIALKOĦOL TAT-TRITERPEN PERMEZZ TAL-KROMATOGRAFIJA B’FAŻI GASSUŻA F’KOLONNA KAPILLARI

1.   KAMP TA’ APPLIKAZZJONI

Il-metodu jiddeskrivi proċedura biex jiġi stabbilit il-kontenut tal-isteroli individwali, tal-isteroli kollha u tad-dialkoħol tat-triterpen fiż-żjut taż-żebbuġa u fiż-żjut mir-residwi taż-żebbuġ.

2.   IL-PRINĊIPJU

Iż-żejt, li jkollu l-α-kolestanol miżjud bħala standard intern, jinbidel f’sapun bl-idrossidu tal-potassju f’soluzzjoni etanolika u s-sustanzi li ma jistgħux jinbidlu f’sapun jiġu estratti bl-etere etiliku.

Il-frazzjoni tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen tinfired minn mas-sustanzi li ma jistgħux jinbidlu f’sapun permezz tal-kromatografija b’saff irqiq fuq pjanċa bażika ta’ ġell tas-silika. Il-frazzjonijiet irkuprati mill-ġell tas-silika jinbidlu f’eteri tat-trimetilsilil u mbagħad jiġu analizzati permezz tal-kromatografija b’fażi gassuża f’kolonna kapillari.

3.   L-APPARAT

L-apparat tas-soltu tal-laboratorju u b’mod partikulari dan li ġej:

3.1. Flask ta’ 250 ml b’kondensatur ta’ rifluss b’ġonot tal-ħġieġ żmeriljat.

3.2. Lembut ta’ separazzjoni ta’ 500 ml.

3.3. Fliexken ta’ 250 ml.

3.4. Apparat komplut għall-analiżi bil-kromatografija b’saff irqiq bl-użu ta’ pjanċi tal-ħġieġ ta’ 20 ċm b’20 ċm.

3.5. Lampa tar-radjazzjoni ultravjola b’tul ta’ mewġa ta’ 254 nm jew 366 nm.

3.6. Mikrosiringi ta’ 100 μl u 500 μl.

3.7. Lembut b’filtru forma ta’ ċilindru b’septum poruż ta’ G3 (b’porożità ta’ 15-il μm sa 40 μm) li jkollu dijametru ta’ madwar 2 ċm u jkun fond 5 ċm, li jkun adattat għall-filtrazzjoni f’vakwu b’ġonta interna tal-ħġieġ żmeriljat.

3.8. Flask Erlenmeyer b’vakwu ta’ 50 ml b’ġonta esterna tal-ħġieġ żmeriljat, li jista’ jitwaħħal mal-lembut b’filtru (imsemmi fil-punt 3.7.).

3.9. Tubu tat-testijiet ta’ 10 ml bil-qiegħ li jidjieq u tapp tal-ħġieġ li jissiġilla.

3.10. Kromatografu b’fażi gassuża li jkun jista’ jintuża ma’ kolonna kapillari, li jkollu sistema ta’ injezzjoni maqsuma u li jkun magħmul minn:

3.10.1. kompartiment termostatiku għall-kolonni li jifilħu jżommu t-temperatura mixtieqa bi preċiżjoni ta’ ± 1 °C;

3.10.2. unità ta’ injezzjoni b’temperatura li tista’ tiġi adattata li jkollha element ta’ vaporizzazzjoni tal-ħġieġ persilanizzat u sistema maqsuma;

3.10.3. individwatur tal-jonizzazzjoni bi fjamma (FID);

3.10.4. sistema biex tinkiseb id-dejta li tkun tista’ tintuża mal-individwatur tal-jonizzazzjoni bi fjamma (imsemmi fil-punt 3.10.3.), li jkollha l-kapaċità tal-integrazzjoni manwali.

3.11. kolonna kapillari tas-silika mdewba li tkun twila bejn 20 u 30 m, li jkollha dijametru intern ta’ 0,25 mm sa 0,32 mm, u tkun miksija b’5 % difenil u 95 % dimetilpolisilossan (il-fażi stazzjonarja ta’ SE-52 jew SE-54 jew fażi ekwivalenti), hekk li jkollha ħxuna uniformi ta’ bejn 0,10 μm u 0.30 μm.

3.12. Mikrosiringa ta’ 10 μl għall-kromatografija b’fażi gassuża, b’labra mkaħħla li tkun adattata għall-injezzjoni maqsuma.

3.13. Dessikatur tad-diklorur tal-kalċju

4.   REAĠENTI

4.1. Konċentrazzjoni minima ta’ idrossidu tal-potassju ta’ 85 %.

4.2. Madwar 2 N ta’ soluzzjoni etanolika tal-idrossidu tal-potassju.

Dewweb 130 g ta’ idrossidu tal-potassju (imsemmi fil-punt 4.1.) permezz tat-tkessiħ f’200 ml ta’ ilma ddistillat u mbagħad żidu bl-etanol (imsemmi fil-punt 4.10.) sa ma jkollok litru. Żomm is-soluzzjoni fi fliexken tal-ħġieġ skur magħluqin sewwa b’tapp u maħżuna għal mhux aktar minn jumejn.

4.3. Etere etiliku għall-kwalità tal-analiżi.

4.4. Madwar 0,2 N ta’ soluzzjoni etanolika tal-idrossidu tal-potassju.

Dewweb 13-il g ta’ idrossidu tal-potassju (imsemmi fil-punt 4.1.) f’20 ml ta’ ilma ddistillat u żidu bl-etanol (imsemmi fil-punt 4.10.) sa ma jkollok litru.

4.5. Sulfat tas-sodju anidru għall-kwalità tal-analiżi.

4.6. Pjanċi tal-ħġieġ (ta’ 20 ċm b’20 ċm) miksijin bil-ġell tas-silika, mingħajr indikatur tal-fluworexxenza, u li jkunu ħoxnin 0,25 mm (dawn jinsabu għall-bejgħ lesti għall-użu).

4.7. Toluwen għall-kwalità tal-kromatografija.

4.8. Aċeton għall-kwalità tal-kromatografija.

4.9. n-eżan għall-kwalità tal-kromatografija.

4.10. Etere etiliku għall-kwalità tal-kromatografija.

4.11. Etanol ta’ kwalità analitika.

4.12. Aċitat etiliku ta’ kwalità analitika.

4.13. Soluzzjoni ta’ referenza għall-kromatografija b’saff irqiq: kolesterol jew sterol tal-pjanti u soluzzjoni ta’ 5 % ta’ eritrodiol fl-aċitat etiliku (imsemmi fil-punt 4.11.).

4.14. 2,7-diklorofluworoxxina, 0,2 % f’soluzzjoni etanolika. Ġib ir-reaġent ftit iktar bażiku billi żżid xi qtar tas-soluzzjoni alkoħolika ta’ 2 N tal-idrossidu tal-potassju (imsemmija fil-punt 4.2.).

4.15. Piridina anidruża għall-kwalità tal-kromatografija (ara n-Nota numru 5).

4.16. Disilażan tal-eżametil ta’ kwalità analitika.

4.17. Trimetilklorosilan ta’ kwalità analitika.

4.18. Mudelli tas-soluzzjonijiet tal-eteri tat-trimetilsilil tal-isteroli.

Dawn għandhom jitħejjew fil-ħin tal-użu mill-isteroli u l-eritrodiol miksubin miż-żjut li jkun fihom dawn is-sustanzi.

4.19. α-kolestanol ta’ purità ta’ iktar minn 99 % (il-purità trid tiġi ċċekkjata permezz ta’ analiżi tal-kromatografija b’fażi gassuża).

4.20. soluzzjoni bl-α-kolestanol bħala standard intern, soluzzjoni ta’ 0,2 % (m/V) fl-aċitat etiliku (imsemmi fil-punt 4.11.).

4.21. Soluzzjoni tal-fenolftaleina, 10 g/l fl-etanol (imsemmi fil-punt 4.10.).

4.22. Gass trasportatur: l-idroġenu jew l-elju, pur għall-kromatografija tal-gass.

4.23. Gassijiet awżiljarji: l-idroġenu, l-elju, in-nitroġenu u l-arja, li jkunu puri għall-kromatografija tal-gass.

4.24. Taħlita ta’ 65:35 (V/V) ta’ n-eżan/etere etiliku (imsemmija fil-punti 4.9. u 4.10 rispettivament).

4.25. reaġent ta’ sililazzjoni, li tikkonsisti f’taħlita ta’ 9:3:1 (V/V/V) ta’ piridina/disilażan tal-eżametil/trimetilklorosilan.

5.   PROĊEDURA

5.1.

Tħejjija tas-sustanzi li ma jistgħux jinbidlu f’sapun

5.1.1.

Filwaqt li tuża mikrosiringa ta’ 500 μl (imsemmija fil-punt 3.6), fil-flask ta’ 250 ml (imsemmi fil-punt 3.1) daħħal volum tas-soluzzjoni bl-α-kolestanol bħala standard intern (imsemmija fil-punt 4.20) li jkun fiha ammont ta’ kolestanol li jikkorrispondi ma’ madwar 10 % tal-kontenut tal-isteroli tal-kampjun. Pereżempju, żid 500 μl tas-soluzzjoni bl-α-kolestanol (imsemmija fil-punt 4.20) għal kampjun taż-żejt taż-żebbuġa ta’ 5 g u 1 500 μl għal kampjun taż-żejt mir-residwi taż-żebbuġ. Ħallih jevapora f’banju ta’ ilma fietel permezz ta’ kurrent ħafif tan-nitroġenu sa ma jinxef, u wara li tkun berridt il-flask, iżen ħames ± 0,01 g tal-kampjun niexef iffiltrat fl-istess flask.

Nota 1: Iż-żjut u x-xaħmijiet tal-annimali jew veġetali li jkun fihom kwantitajiet kbar ta’ kolesterol jistgħu juru quċċata li l-ħin ta’ żamma tagħha jkun jixbah lil dak tal-kolestanol. Jekk dan iseħħ, il-frazzjoni tal-isteroli jkollha tiġi analizzata darbtejn, bl-istandard intern u mingħajru.

5.1.2.

Żid 50 ml ta’ 2 N ta’ soluzzjoni etanolika tal-idrossidu tal-potassju (imsemmija fil-punt 4.2) u xi ftit ħaffiefa, poġġi l-kondensatur ta’ rifluss u saħħan it-taħlita sakemm din tibda tagħli bil-mod u sa ma s-soluzzjoni ssir qisha sapun (sa ma ssir ċara). Kompli saħħan għal 20 minuta oħra mbagħad żid 50 ml ta’ ilma ddistillat mill-parti ta’ fuq tal-kondensatur, aqla’ l-kondensatur u kessaħ il-flask sa ma jkollu bejn wieħed u ieħor temperatura ta’ 30 °C.

5.1.3.

Ittrasferixxi l-kontenut tal-flask b’mod kwantitattiv f’lembut ta’ separazzjoni ta’ 500 ml (imsemmi fil-punt 3.2) billi tuża diversi porzjonijiet ta’ ilma ddistillat (ta’ 50 ml). Żid bejn wieħed u ieħor 80 ml ta’ etere etiliku (imsemmi fil-punt 4.10), ħawwad sew għal madwar 60 sekonda, filwaqt li tirrilaxxa l-pressjoni b’mod regolari billi taqleb il-lembut ta’ separazzjoni ta’ taħt fuq u tiftaħ it-tapp. Ħalli t-taħlita toqgħod sa ma jkun hemm separazzjoni kompluta taż-żewġ fażijiet (ara n-Nota 2).

Imbagħad neħħi s-soluzzjoni tas-sapun b’mod kemm jista’ jkun komplut u poġġieħa f’lembut tas-separazzjoni ieħor. Bl-istess mod, agħmel żewġ estrazzjonijiet oħra tal-fażi tal-ilma u l-alkoħol billi tuża 60 sa 70 ml ta’ etere etiliku (imsemmi fil-punt 4.10).

Nota 2: Kwalunkwe emulsjoni tista’ tiġi distrutta biż-żieda ta’ kwantitajiet żgħar ta’ etanol (imsemmi fil-punt 4.11).

5.1.4.

Ħallat it-tliet estratti tal-etere f’lembut tas-separazzjoni wieħed li jkun fih 50 ml ta’ ilma. Kompli aħsel bl-ilma (50 ml) sakemm l-ilma tal-ħasil ma jibqax jagħti kulur roża meta tiżdiedlu qatra ta’ soluzzjoni tal-fenolftaleina (imsemmija fil-punt 4.12).

Meta jkun tneħħa l-ilma tal-ħasil, iffiltra bis-sulfat tas-sodju anidru (imsemmi fil-punt 4.5) fi flask ta’ 250 ml li jkun intiżen minn qabel, filwaqt li taħsel il-lembut u l-filtru bi kwantitajiet żgħar tal-etere etiliku (imsemmi fil-punt 4.10).

5.1.5.

Ħalli s-solvent jevapora permezz tad-distillazzjoni fuq evaporatur rotatorju fi 30 °C f’vakwu. Żid 5 ml ta’ aċeton u neħħi s-solvent volatili għalkollox f’kurrent ħafif tal-arja. Nixxef il-fdalijiet fil-forn f’temperatura ta’ 103 °C ± 2 °C għal kwarta, kessaħ f’dessikaturi u iżen sal-eqreb 0.1 mg.

5.2.

Separazzjoni tal-frazzjoni tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen (l-eritrodiol u l-uvaol)

5.2.1.

Ipprepara l-pjanċi bażiċi tal-kromatografija b’saff irqiq. Għaddas il-pjanċi tal-ġell tas-silika (imsemmija fil-punt 4.6) madwar 4 ċm fis-soluzzjoni etanolika tal-idrossidu tal-potassju ta’ 0,2 N (imsemmija fil-punt 4.5) għal għaxar sekondi, imbagħad ħallihom sagħtejn jinxfu f’kabinett għad-dħaħen u fl-aħħar poġġihom f’forn f’temperatura 100 °C għal siegħa.

Neħħihom mill-forn u żommhom f’dessikatur tal-klorur tal-kalċju sa ma jkun hemm bżonn jintużaw (il-pjanċi li jkunu għaddew minn din il-proċedura jridu jintużaw fi żmien ħmistax).

Nota 3: Meta jintużaw il-pjanċi bażiċi tal-ġell tas-silika biex tiġi sseparata l-frazzjoni tal-isteroli, il-frazzjoni li ma tistax tinbidel f’sapun m’hemmx għalfejn tiġi ttrattata bl-ossidu tal-aluminju. B’dan il mod il-komposti kollha ta’ natura aċida (l-aċidi xaħmin u oħrajn) jinżammu fuq il-linja ta’ rilevament u l-faxxa tal-isteroli tinfired b’mod ċar mill-faxxa tal-alkoħol alifatiku u tat-triterpen.

5.2.2.

Poġġi t-taħlita tal-eżan u tal-etere etiliku (imsemmija fil-punt 4.24) (ara n-Nota 4) fil-kamra tal-iżvilupp, f’fond ta’ madwar ċentimetru. Agħlaq il-kamra bl-għatu x-xieraq u ħalliha hekk għal mill-inqas nofsiegħa f’post kiesaħ sabiex jiġi stabbilit bilanċ bejn il-likwidu u l-fwar. Fuq in-naħa ta’ ġewwa tal-kamra jistgħu jitqiegħdu strixxi ta’ karta filtru li jkunu mgħaddsin fl-elwent. Dan inaqqas il-ħin tal-iżvilupp bejn wieħed u ieħor b’terz u jwassal għal elużjoni aktar uniformi u regolari tal-komponenti.

Nota 4: It-taħlita li tkun qed tiżviluppa trid tinbidel għal kull test, sabiex jinkisbu kundizzjonijiet tal-elużjoni li jkunu perfettament riproduċibbli, u bħala solvent alternattiv tista’ tintuża t-taħlita ta’ 50:50 (V/V) ta’ n-eżan/etere etiliku.

5.2.3.

Ipprepara soluzzjoni ta’ madwar 5 % tas-sustanzi li ma jistgħux jinbidlu f’sapun (imsemmija fil-punt 5.1.5) fl-aċitat etiliku (imsemmi fil-punt 4.12) u, bl-użu ta’ mikrosiringa ta’ 100 μl, poġġi 0.3 ml minn din is-soluzzjoni fi strixxa dejqa u uniformi fin-naħa t’isfel (2 ċm) tal-pjanċa kromatografika (imsemmija fil-punt 5.2.1). F’linja waħda mal-istrixxa qiegħed 2 sa 3 μl tas-soluzzjoni ta’ referenza tal-materjal (imsemmija fil-punt 4.13) sabiex il-faxxa tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen tkun tista’ tiġi identifikata wara li tiżviluppa.

5.2.4.

Qiegħed il-pjanċa fil-kamra tal-iżvilupp imħejji kif speċifikat fil-punt 5.2.2. It-temperatura ambjentali għandha tinżamm bejn 15 u 20 °C (ara n-Nota 5). Agħlaq il-kamra mal-ewwel bl-għatu u ħalli l-proċess ta’ elużjoni jseħħ sa ma l-parti ta’ quddiem tas-solvent tasal madwar ċentimetru mit-tarf ta’ fuq tal-pjanċa. Neħħi l-pjanċa mill-kamra tal-iżvilupp u ħalli s-solvent jevapora f’kurrent ta’ arja sħuna jew billi tħalli l-pjanċa għal ftit ħin taħt għata.

Nota 5: Temperatura ogħla minn hekk tista’ tgħarraq is-separazzjoni.

5.2.5.

Sprejja l-pjanċa kemm kemm u b’mod uniformi bis-soluzzjoni ta’ 2,7-diklorofluworoxxina (imsemmija fil-punt 4.14) u mbagħad ħalliha ħa tinxef. Meta l-pjanċa tiġi osservata f’dawl ultravjola, il-faxex tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen ikunu jistgħu jiġu identifikati billi jiġu allinjati mat-tbajja’ miksubin permezz tas-soluzzjoni ta’ referenza (imsemmija fil-punt 4.13). Immarka l-limiti tal-faxex mat-truf tal-fluworexxenza b’lapes iswed (ara l-pjanċa tal-kromatografija b’saff irqiq mogħtija fil-figura 3).

5.2.6.

Obrox il-ġell tas-silika minn fuq il-parti mmarkata billi tuża spatula tal-metall. Poġġi l-materjal mitħun b’mod fin li jkun tneħħa fil-lembut b’filtru (imsemmi fil-punt 3.7). Żid 10 ml ta’ aċitat etiliku sħun (imsemmi fil-punt 4.12), ħawdu bil-mod bl-ispatula tal-metall u ffiltrah f’vakwu, filwaqt li tiġbor il-filtrat fil-flask Erlenmeyer (imsemmi fil-punt 3.8.) li jkun imwaħħal mal-lembut b’filtru.

Aħsel il-fdal fil-flask tliet darbiet bl-etere etiliku (imsemmi fil-punt 4.3) (madwar 10 ml kull darba), filwaqt li tiġbor il-filtrat fl-istess flask imwaħħal mal-lembut, evapora l-filtrat sa ma jintlaħaq volum ta’ 4 sa 5 ml, ittrasferixxi s-soluzzjoni li jibqa’ għal ġot-tubu tat-testijiet ta’ 10 ml li jkun intiżen minn qabel (imsemmi fil-punt 3.9), evaporah permezz tat-tisħin ħafif f’kurrent ħafif tan-nitroġenu sa ma jinxef, erġa’ oħolqu mill-ġdid billi tuża ftit qtar tal-aċeton (imsemmi fil-punt 4.8) u evaporah għal darb’oħra sa ma jinxef.

Il-fdal li jibqa’ fit-tubu tat-testijiet irid ikun magħmul mill-frazzjonijiet tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen.

5.3.

Tħejjija tal-eteri tat-trimetilsilil

5.3.1.

Żid ir-reaġent ta’ sililazzjoni (imsemmi fil-punt 4.25) (ara n-Nota 6), bil-proporzjon ta’ 50 μl għal kull milligramma ta’ steroli u dialkoħol tat-triterpen, fit-tubu tat-testijiet li jkun fih il-frazzjoni tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen, filwaqt li tevita kwalunkwe assorbiment tal-umdità (ara n-Nota 7).

Nota 6: Wieħed jista’ jsib għall-bejgħ soluzzjonijiet lesti għall-użu. Wieħed jista’ jsib ukoll reaġenti ta’ sililazzjoni oħrajn bħal, pereżempju, il-bistrimetilsilil trifluwor aċetammid + 1 % trimetilklorosilan, li jrid jiġi dilwit bl-istess volum ta’ piridina anidruża.

Minflok il-piridina jista’ jintuża l-istess ammont ta’ aċetonitril.

5.3.2.

Sodd it-tubu tat-testijiet u ħawdu bil-galbu (mingħajr ma taqilbu rasu ’l isfel) sakemm il-komponenti jinħallu għalkollox. Ħallih joqgħod għal mill-inqas kwarta f’temperatura ambjentali u mbagħad ħawdu b’azzjoni ċentrifuga għal ftit minuti. Is-soluzzjoni ċara tkun lesta biex tiġi analizzata bil-kromatografija b’fażi gassuża.

Nota 7: L-opalexxenza ħafifa li tista’ tirriżulta hija normali u ma toħloq l-ebda anomalija. Il-formazzjoni ta’ bjuda jew l-apparenza ta’ kulur roża jindikaw il-preżenza ta’ umdità jew deterjorament tar-reaġent. Jekk dan iseħħ, it-test irid jerġa’ jsir (jekk jintuża l-eżametildisilażan jew it-trimetilklorosilan biss).

5.4.

Analiżi bil-kromatografija b’fażi gassuża

5.4.1.

L-operazzjonijiet preliminari, il-kundizzjonament tal-kolonna kapillari.

5.4.1.1. Waħħal il-kolonna (imsemmija fil-punt 3.11) fil-kromatografu b’fażi gassuża billi tqabbad it-tarf ta’ ġewwa mal-apparat għall-injezzjoni maqsuma u t-tarf ta’ barra mal-individwatur.

Wettaq kontrolli ġenerali fuq il-kromatografu b’fażi gassuża (għat-tnixxijiet miċ-ċirkwiti tal-gass, l-effiċjenza tal-individwatur, l-effiċjenza tas-sistema ta’ separazzjoni u s-sistema ta’ reġistrazzjoni, eċċ.).

5.4.1.2. Jekk il-kolonna tkun qed tintuża għall-ewwel darba, huwa rrakkomandat li din isirilha proċess ta’ kundizzjonament, jiġifieri li jingħadda kurrent ħafif ta’ gass mill-kolonna nnifisha, imbagħad li jitqabbad il-kromatografu b’fażi gassuża u jibda t-tisħin b’mod gradwali sa ma tintlaħaq temperatura li tkun mill-inqas 20 °C iktar mit-temperatura ta’ tħaddim (ara n-Nota 8). Żomm din it-temperatura għal mill-inqas sagħtejn, imbagħad qiegħed l-apparat kollu fil-modalità tat-tħaddim (l-aġġustament tal-kurrenti tal-gass u tas-sistema ta’ separazzjoni, it-tqabbid tal-fjamma, il-konnessjoni mas-sistema tal-kompjuter, l-aġġustament tat-temperatura tal-kolonna, tal-individwatur u tal-apparat għall-injezzjoni, eċċ.) u mbagħad irreġistra s-sinjal b’sensittività li tkun mill-inqas darbtejn iktar minn dik maħsuba għall-analiżi. Ir-rotta tal-linja ta’ referenza trid tkun lineari, mingħajr ebda quċċata, u m’għandhiex turi devjazzjonijiet.

Devjazzjoni f’linja dritta negattiva tindika tnixxija mill-ġonot tal-kolonna, waqt li devjazzjoni pożittiva tindika li l-kundizzjonament tal-kolonna ma kienx biżżejjed.

Nota 8: It-temperatura tal-kundizzjonament dejjem trid tkun mill-inqas 20 °C inqas mit-temperatura massima speċifikata għall-fażi stazzjonarja użata.

5.4.2.

Għażla tal-kundizzjonijiet tat-tħaddim.

5.4.2.1. Il-kundizzjonijiet tat-tħaddim huma dawn li ġejjin:

 it-temperatura tal-kolonna: 260 ± 5 °C;

 it-temperatura tal-apparat għall-injezzjoni: 280 sa 300 °C;

 it-temperatura tal-individwatur: 280 sa 300 °C;

 il-veloċità lineari tal-gass trasportatur: l-elju - 20 sa 35 cm/s; l-idroġenu - 30 sa 50 cm/s;

 il-proporzjon tas-separazzjoni: minn 1:50 sa 1:100;

 is-sensittività tal-istrumenti: minn 4 sa 16-il darba l-attenwazzjoni minima;

 is-sensittività tar-reġistrazzjonijiet: 1 sa 2 mV bi skala sħiħa;

 ammont ta’ sustanza injettata: 0,5 sa 1 μl tas-soluzzjoni tal-eteri tat-trimetilsilil (TMSE).

Dawn il-kundizzjonijiet jistgħu jinbidlu skont il-karatteristiċi tal-kolonna u tal-kromatografu b’fażi gassuża sabiex jinkisbu kromatogrammi li jilħqu r-rekwiżiti li ġejjin:

 il-ħin ta’ żamma għall-quċċata tal-ß-sitosterol għandu jkun ta’ 20 minuta ± 5 minuti;

 il-quċċata tal-kampesterol għandha tkun: għaż-żejt taż-żebbuġa (b’kontenut medju ta’ 3 %) 20 ± 5 % tal-iskala sħiħa; u għaż-żejt tal-fażola tas-sojja (b’kontenut medju ta’ 20 %) 80 ± 10 % tal-iskala sħiħa;

 l-isteroli kollha li jkun hemm iridu jiġu sseparati. Barra milli jkunu mifrudin, il-qċaċet iridu jkunu wkoll maqtugħin għal kollox, jiġifieri l-linja tal-quċċata għandha tmur lura lejn il-linja ta’ referenza qabel ma titlaq għall-quċċata li jmiss. Madankollu, jista’ jkun hemm riżoluzzjoni mhux sħiħa, dejjem jekk il-quċċata f’RRT 1,02 (is-sitostanol) tkun tista’ tiġi kkwantifikata permezz tal-linja perpendikulari.

5.4.3.

Il-proċedura analitika

5.4.3.1. Ħu 1 μl ta’ eżan billi tuża l-mikrosiringa ta’ 10 μl, iġbed għal ġo fiha 0,5 μl ta’ arja u mbagħad 0,5 μl sa 1 μl tas-soluzzjoni tal-kampjun. Għolli l-planġer tas-siringa iktar sabiex il-labra tiżvojta. Imbotta l-labra fil-membrejn tal-apparat għall-injezzjoni u wara sekonda jew tnejn injetta malajr, imbagħad neħħi l-labra bil-mod wara madwar ħames sekondi.

Jista’ jintuża wkoll apparat awtomatiku għall-injezzjoni.

5.4.3.2. Irreġistra sakemm ikun hemm elużjoni sħiħa tal-eteri tat-trimetilsilil (it-TMSE) tad-dialkoħol tat-triterpen preżenti. Il-linja ta’ referenza trid tkompli tilħaq ir-rekwiżiti meħtieġa (ara l-punt 5.4.1.2).

5.4.4.

L-identifikazzjoni tal-qċaċet

Identifika l-qċaċet individwali fuq il-bażi tal-ħin ta’ żamma u billi tqabbel mat-taħlita tal-eteri tat-trimetilsilil (it-TMSE) tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen analizzati bl-istess kundizzjonijiet (ara l-Appendiċi).

L-elużjoni tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen isseħħ fl-ordni li ġejja: kolesterol, brassikasterol, ergosterol, 24-metilin-kolesterol, kampesterol, kampestanol, stigmasterol, Δ7-kampesterol, Δ5,23-stigmastadienol, klerosterol, ß-sistosterol, sitostanol, Δ5-avenasterol, Δ5,24-stigmastadienol, Δ7-stigmastenol, Δ7-avenasterol, eritrodiol u uvaol.

Il-ħinijiet ta’ żamma għall-ß-sitosterol għall-kolonni SE-52 u SE-54 jidhru fit-Tabella 1.

Il-Figuri 1 u 2 juru l-kromatogrammi tipiċi għal xi żjut.

5.4.5.

L-evalwazzjoni kwantitattiva.

5.4.5.1. Ikkalkula l-erjas tal-α-kolestanol u l-qċaċet tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen billi tuża s-sistema tal-kompjuter. Tagħtix każ tal-qċaċet għal kwalunkwe sustanza komposta li mhix inkluża fost dawk imniżżlin fit-Tabella 1 (l-ergosterol ma jridx jiġi kkalkulat). Il-fattur tat-tweġiba għall-α-kolestanol għandu jitqies li huwa ta’ 1.

5.4.5.2. Ikkalkula l-konċentrazzjoni ta’ kull sterol individwali f’mg/kg ta’ materjal xaħmi kif ġej:

image

fejn:

Ax

=

l-erja tal-quċċata tal-isterol x f’unitajiet tas-sistema tal-kompjuter;

As

=

l-erja tal-quċċata tal-α-kolestanol f’unitajiet tas-sistema tal-kompjuter;

ms

=

il-massa tal-α-kolestanol miżjud f’milligrammi;

m

=

il-massa tal-kampjun użat għall-istabbiliment tal-karatteristiċi fi grammi.

6.   L-ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

6.1. Agħti l-konċentrazzjonijiet tal-isteroli individwali f’mg/kg ta’ materjal xaħmi u l-għadd totali tagħhom bħala “l-isteroli kollha”.

Il-kompożizzjoni ta’ kull sterol individwali u tal-eritrodiol u l-uvaol għandha tingħata bħala numru b’ċifra waħda wara l-punt deċimali.

Il-kompożizzjoni tal-isteroli kollha għandha tingħata bħala numru mingħajr ċifri wara l-punt deċimali.

▼M28

6.2. Ikkalkula l-perċentwal ta' kull sterol individwali mill-proporzjon tal-erja tal-quċċata rilevanti mal-arja totali tal-quċċata għall-isteroli:

image

fejn:

Ax

=

l-erja tal-quċċata għal x;

ΣA

=

l-erja totali tal-quċċata għall-isteroli.

▼M26

6.3. β-sitosterol evidenti: Δ5-23-stigmastadienol + klerosterol + β-sitosterol + sitostanol + Δ5-avenasterol + Δ5-24-stigmastadienol.

6.4. Ikkalkula l-perċentwali tal-eritrodiol u l-uvaol:

image

fejn:

ΣA

=

l-erja totali tal-isteroli f’unitajiet tas-sistema tal-kompjuter;

Er

=

l-erja tal-eritrodiol f’unitajiet tas-sistema tal-kompjuter;

Uv

=

l-erja tal-uvaol f’unitajiet tas-sistema tal-kompjuter.




Appendiċi

L-istabbiliment tal-veloċità lineari tal-gass

Filwaqt li tissettja l-kromatografu b’fażi gassuża f’kundizzjonijiet normali tat-tħaddim, injetta 1 sa 3 μl ta’ metan (jew propan) u kejjel il-ħin li l-gass jieħu biex jgħaddi mill-kolonna mill-ħin tal-injezzjoni sal-ħin li fih tidher il-quċċata (tM).

Il-veloċità lineari f’ċm/s tinkiseb permezz tal-formola L/tM, fejn L huwa t-tul tal-kolonna f’ċentimetri u tM huwa l-ħin imkejjel f’sekondi.



It-Tabella 1

Il-ħinijiet relattivi ta’ żamma għall-isteroli

Il-quċċata

L-identifikazzjoni

Il-ħin relattiv ta’ żamma

Il-kolonna SE-54

Il-kolonna SE-54

1

Kolesterol

Δ-5-kolesten-3ß-ol

0,67

0,63

2

Kolestanol

5α-kolestan-3ß-ol

0,68

0,64

3

Brassikasterol

[24S]-24-metil-Δ-5,22-kolestadien-3ß-ol

0,73

0,71

*

Ergosterol

[24S] 24 metil Δ5-7-22 kolestatrien 3β-ol

0,78

0,76

4

24-metilin-kolesterol

24-metilin-Δ-5,24-kolestadien-3ß-o1

0,82

0,80

5

Kampesterol

(24R)-24-metil-Δ-5-kolesten-3ß-ol

0,83

0,81

6

Kampestanol

(24R)-24-metil-kolestan-3ß-ol

0,85

0,82

7

Stigmasterol

(24S)-24-etil-Δ-5,22-kolestadien-3ß-ol

0,88

0,87

8

Δ-7-kampesterol

(24R)-24-metil-Δ-7-kolesten-3ß-ol

0,93

0,92

9

Δ-5,23-stigmastadienol

(24R,S)-24-etil-Δ-5,23-kolestadien-3ß-ol

0,95

0,95

10

Klerosterol

(24S)-24-etil-Δ-5,25-kolestadien-3ß-ol

0,96

0,96

11

ß-sitosterol

(24R)-24-etil-Δ-5-kolesten-3ß-ol

1,00

1,00

12

Sitostanol

24-etil-kolestan-3ß-ol

1,02

1,02

13

Δ-5-avenasterol

(24Z)-24-etilidin-Δ-kolesten-3ß-ol

1,03

1,03

14

Δ-5-24-stigmastadienol

(24R,S)-24-etil-Δ-5,24-kolestadien-3ß-ol

1,08

1,08

15

Δ-7-stigmastenol

(24R,S)-24-etil-Δ-7-kolesten-3ß-ol

1,12

1,12

16

Δ-7-avenasterol

(24Z)-24-etilidin-Δ-7-kolesten-3ß-ol

1,16

1,16

17

Eritrodiol

5α olean-12en-3β28 diol

1,41

1,41

18

Uvaol

Δ12-ursen-3β28 diol

1,52

1,52

Il-Figura 1

Kromatogramma f’fażi gassuża tal-frazzjoni tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen ta’ żejt taż-żebbuġa lampante (miżjud bl-istandard intern)

image

Il-Figura 2

Kromatogramma f’fażi gassuża tal-frazzjoni tal-isteroli u tad-dialkoħol tat-triterpen ta’ żejt taż-żebbuġa raffinat (miżjud bl-istandard intern)

image

Il-Figura 3

Pjanċa tal-kromatografija b’saff irqiq ta’ żejt mir-residwi taż-żebbuġ, li turi l-parti li trid tinbarax biex jiġu stabbiliti l-isteroli u d-dialkoħol tat-triterpen

image

1 – Skwalin

2 – Alkoħol tat-triterpen u alkoħol alifatiku

3 – Steroli u dialkoħol tat-triterpen

4 – Aċidi xaħmin inizjali u aċidi xaħmin liberi

▼M26 —————

▼M21




ANNESS VII

DETERMINAZZJONI TAL-PERĊENTWAL TA’ 2-GLYCERYL MONOPALMITATE

1.   SKOP U QASAM TA’ APPLIKAZZJONI

Dan il-metodu jiddeskrivi l-proċedura analitika biex jiġi ddeterminat il-perċentwal ta’ l-aċidu palmitiku fit-2 pożizzjoni tat-triglycerides permezz ta’ l-evalwazzjoni tat-2-glyceryl monopalmitate.

Dan il-metodu huwa applikabbli għaż-żjut veġetali likwidi fit-temperatura ta’ l-ambjent (20 °C).

2.   PRINĊIPJU

Wara t-tħejjija, il-kampjun ta’ żejt huwa sottomess għall-azzjoni tal-lipażi pankreatiku: idroliżi parzjali u speċifiku fil-pożizzjonijiet 1 u 3 tal-molekula ta’ triglyceride ġġib magħha id-dehra tal-monoglycerides fil-pożizzjoni 2. Il-preċentwal ta’ 2-glyceril monopalmitate fil-frazzjoni ta’ monoglyceride jiġi ddeterminat, wara silylation, permezz ta’ kromatografija tal-gass fuq kolonna kapillari.

3.   APPARAT U TAGĦMIR

3.1.

Flask Erlenmeyer ta’ 25 ml.

3.2.

Bikers ta’ 100, 250 u 300 ml.

3.3.

Kolonna tal-ħġieġ għall-kromatografija, b’dijametru intern ta’ 21-23 mm, twila 400 mm, mgħammra bi pjanċa tal-ħġieġ sinterizzat u vit.

3.4.

Provetti ta’ 10, 50, 100 u 200 ml.

3.5.

Flaskijiet ta’ 100 u 250 ml.

3.6.

Evaporatur ċirkolari.

3.7.

Tubi għaċ-ċentrifuga bil-qiegħ koniku ta’ 10 ml, b’tapp immolat.

3.8.

Ċentrifuga għat-tubi ta’ 10 u 100 ml.

3.9.

Termostat biex it-temperatura tinżamm f’ 40 ± 0,5 °C

3.10.

Pipetti ggradwati ta’ 1 u 2 ml.

3.11.

Siringa ipodermika ta’ 1 ml.

3.12.

Mikrosiringa ta’ 100 μl.

3.13.

Lenbut ta’ 1 000 ml

3.14.

Kromatografu tal-gass għal kolonni kapillari, mgħammar b’injettur on column fil-kiesaħ għall-introduzzjoni diretta tal-kampjun fil-kolonna, u b’forn biex tinżamm temperatura ta’ madwar 1 °C.

3.15.

Injettur on column fil-kiesaħ għall-introduzzjoni diretta tal-kampjun fil-kolonna.

3.16.

Rilevatur tal-jonizzazzjoni tal-fjamma u elettrometru.

3.17.

Reġistratur-integratur adattat għall-elettrometru b’veloċità ta’ risposta ta’ mhux aktar minn sekonda, u b’veloċità tal-karta varjabbli.

3.18.

Kolonna kapillari tal-ħġieġ jew tas-silika mdewba ta’ bejn 8 u 12-il metru, b’dijametru intern ta’ bejn 0,25 u 0,32 mm, miksija b’methylpolysiloxane jew b’phenyl methylpolysiloxane 5 %, bi ħxuna ta’ bejn 0,10 u 0,30 μm, li tista’ tintuża f’temperatura ta’ 370 °C.

3.19.

Mikrosiringa ta’ 10 μl mgħammra b’labra iebsa, twila talanqas 7.5 cm, għall-injezzjoni diretta fuq il-kolonna.

4.   REAĠENTI

4.1.

Ġell tas-silika tad-daqs ta’ fraka ta’ bejn 0 063 u 0 200 mm (70/280 mesh), imħejji kif ġej: qiegħed il-ġell tas-silika ġewwa kapsula tal-porċellana, nixxef fil-forn f’temperatura ta’ 160 °C għal 4 sigħat, imbagħad kessaħ f’temperatura ta’ l-ambjent f’dessikatur. Żid volum ta’ ilma ewkivalent għal 5 % tal-piż tal-ġell tas-silika, kif ġej: ġewwa flask Erlenmeyer ta’ 500 ml, iżen 152 g ġell tas-silika u żidlu 8 g ta’ ilma distillat, sodd it-tubu u ħawwad bil-mod sabiex l-ilma jinfirex b’mod uniformi. Ħalli joqgħod għal talanqas 12-il siegħa qabel l-użu.

4.2.

n-hexane (għall-kromatografija).

4.3.

Isopropanol.

4.4.

Isopropanol, soluzzjoni milwiema 1/1 (V/V).

4.5.

Lipażi pankreatika. Il-lipażi li tintuża għandu jkollha attività ta’ bejn 2 u 10 unitajiet ta’ lipażi għal kull mg (fis-suq jeżistu lipażi pankreatiċi b’attività ta’ bejn 2 u 10 unitajiet għal kull mg ta’ enżima).

4.6.

Soluzzjoni stabbilizzanti ta’ trishydroxymethylaminomethane: soluzzjoni milwiema 1 M miġjuba sa pH 8 (kontroll potenzjometriku) permezz ta’ HCI kkonċentrat (1/1 V/V).

4.7.

Sodju kolat, ta’ kwalità enżimatika, soluzzjoni milwiema 0,1 % (din is-soluzzjoni għandha tintuża sa 15-il jum wara l-preparazzjoni tagħha).

4.8.

Klorur tal-kalċju, soluzzjoni milwiema 22 %.

4.9.

Eter djetiliku għall-kromatografija.

4.10.

Solvent ta l-iżvilupp: taħlita n-hexane/eter djetiliku (87/13) (V/V).

4.11.

Idrossidu tas-sodju, soluzzjoni ta’ 12 % fil-piż.

4.12.

Phenolphthalein, soluzzjoni ta’ 1 % fl-etanol.

4.13.

Gass portatur: idroġenu jew elju, għall-kromatorgrafija tal-gass.

4.14.

Gassijiet awżiljari: – idroġenu, b’purità minima ta’ 99 %, mingħajr umidità jew sustanzi organiċi – u arja, għall-kromatografija tal-gass, bl-istess livell ta’ purità.

4.15.

Reaġent ta’ silanizzazzjoni: taħlita pyridine/hexamethyldisilazane, trimethylchlorosilane 9/3/1 (V/V/V) (Fis-suq jeżistu soluzzjonijiet lesti għall-użu). Jistgħu jintużaw reaġenti oħrajn ta’ silylation, partikolarment bit-trimethylsilyl trifluoracetamide + 1 % trimethylchlorosilane, dilwiti ma’ l-istess volum ta’ anhydrous pyridine).

4.16.

Kampjuni ta’ referenza: monoglycerides puri jew taħlitiet ta’ monoglycerides b’kompożizzjoni magħrufa tal-perċentwal, simili għal dik tal-kampjun.

5.   PROĊEDURA

5.1.   Tħejjija tal-kampjun

5.1.1.

Iż-żjut b’aċidità ħielsa ta’ inqas minn 3 % ma jeħtiġux jiġu newtralizzati qabel il-kromatografija tal-kolonna bil-ġell tas-silika. Iż-żjut b’aċidità ħielsa ta’ aktar minn 3 % għandhom ikunu sottomessi għan-newtralizzazzjoni skond il-punt 5.1.1.1.

5.1.1.1.

Ferra’ 50 g żejt u 200 ml n-hexane fil-lenbut ta’ 1 000 ml (3.13). Żid 100 ml isopropanol u kwantità tas-soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju 12 % (4.11) ekwivalenti għall-aċidità ħielsa taż-żejt, miżjuda b’5 %. Ħawwad sewwa għal minuta. Żid 100 ml ilma distillat, erġa’ ħawwad u ħalli joqgħod.

Ferra’, imbagħad neħħi l-aħħar saff li fih is-sapun. Neħħi s-safef intermedji li jista’ jkun hemm (muċilaġni u sustanzi li ma jdubux). Aħsel is-soluzzjoni hexane taż-żejt newtralizzat b’porzjonijiet suċċessivi ta’ bejn 50 u 60 ml tas-soluzzjoni isopropanol/ilma 1/1 (V/V) (4.4) sakemm ma jibqax jidher il-kulur roża tal-phenolphthalein.

Neħħi l-biċċa l-kbira mill-hexane permezz tad-distillazzjoni fil-vakwu (per eżempju, jista’ jintuża evaporatur ċirkolari) uttrasferixxi ż-żejt għal ġo flask ta’ 100 ml (3.5). Nixxef iż-żejt fil-vakwu sakemm is-solvent ikun tneħħa għal kollox.

Fi tmiem din il-proċedura, l-aċidità taż-żejt għandha tkun inqas minn 0,5 %.

5.1.2.

Ferra’ 1 g ta’ żejt ippreparat kif deskritt hawn fuq, ġewwa flask Erlenmeyer ta’ 25 ml (3.1) u dewweb f’10 ml mit-taħlita ta’ l-iżvilupp (4.10). Ħalli s-soluzzjoni toqgħod għal talanqas kwarta qabel ma ssir il-kromatrografija fuq kolonna bil-ġell tas-silika.

Jekk is-soluzzjoni tkun imċajpra, għaddiha miċ-ċentrifuga biex tiżgura l-aqwa kundizzjonijiet għall-kromatografija. (Jistgħu jintużaw skrataċ ta’ ġell tas-silika SPE ta’ 500 mg lesti għall-użu).

5.1.3.

Tħejjija tal-kolonna kromatografika

Ferra’ fil-kolonna (3.3) madwar 30 ml mis-solvent ta’ l-iżvilupp (4.10), daħħal biċċa qoton fil-parti ta’ isfel tal-kolonna bl-għajnuna ta’ virga tal-ħġieġ; agħfas biex tneħħi l-arja.

Ġo biker, ipprepara suspensjoni ta’ 25 g ġell tas-silika (4.1) f’madwar 80 ml mis-solvent ta’ l-iżvilupp, u ferragħ fil-kolonna bl-għajnuna ta’ lenbut.

Iċċekkja li l-ġell kollu tas-silika jkun daħal fil-kolonna; aħsel bis-solvent ta’ l-iżvilupp (4.10), iftaħ il-vit u ħalli l-livell tal-likwidu jilħaq madwar 2 mm ‘il fuq mil-livell superjuri tal-ġell tas-silika.

5.1.4.

Kromatografija fuq kolonna

Ġo flask Erlenmeyer ta’ 25 ml (3.1), iżen eżatt 1 g tal-kampjun imħejji skond il-punt 5.1.

Dewweb il-kampjun f’10 ml mis-solvent ta’ l-iżvilupp (4.10). Ferragħ is-soluzzjoni fil-kolonna kromatografika mħejjija skond il-punt 5.1.3. Kemm jista’ jkun, tħarrikx is-superfiċje tal-kolonna.

Iftaħ il-vit u ħalli s-soluzzjoni tal-kampjun tnixxi sakemm tilħaq il-livell tal-ġell tas-silika. Żviluppa b’150 ml mis-solvent ta’ l-iżvilupp. Aġġusta r-rata sa 2 ml/min (sabiex 150 ml inixxu fil-kolonna f’madwar 60-70 minuta).

Irkupra l-eluzzjoni ġo flask ta’ 250 ml li jkun ġie mwieżen minn qabel. Evapora s-solvent fil-vakwu u neħħi l-aħħar traċċi tiegħu taħt kurrent ta’ nitroġenu.

Iżen il-flask u ikkalkula l-estratt irkuprat.

(Fil-każ li jkunu qed jintużaw skrataċ SPE tas-silika lesti għall-użu, ipproċedi kif ġej: Daħħal 1 ml mis-soluzzjoni (5.1.2.) ġo l-iskrataċ, imħejjija minn qabel b’3 ml ta’ n-hexane.

Saffi s-soluzzjoni, u żviluppa b’4 ml ta’ n-hexane/eter djetiliku 1/1 (V/V).

Irkupra s-soluzzjoni f’tubu ta’ 10 ml, u evapora taħt kurrent ta’ nitroġenu sakemm tkun nixfet.

Esponi l-fdal niexef għal-lipażi pankreatika (5.2.). Huwa fondamentali li tivverifika l-kompożizzjoni ta’ aċidi grassi qabel u wara li jiġi mgħoddi mill-iskartoċċ SPE).

5.2.   Idroliżi bil-lipażi pankreatika

5.2.1.

Fit-tubu għaċ-ċentrifuga, iżen 0,1 g taż-żejt imħejji skond il-punt 5.1. Żid 2 ml mis-soluzzjoni stabbilizzanti (4.6.), 0,5 ml mis-soluzzjoni ta’ sodju kolat (4.7), u 0,2 ml mis-soluzzjoni ta’ klorur tal-kalċju, filwaqt li tħawwad sewwa wara kull żieda. Agħlaq it-tubu b’tapp li jissiġilla mħejji għal dan il-għan u qiegħdu fit-termostat f’temperatura ta’.

5.2.2.

Żid 20 mg lipażi, ħawwad bil-galbu (filwaqt li tevita li jixxarrab it-tapp), u qiegħed it-tubu fit-termostat għal eżatt 2 minuti, imbagħad aqilgħu, ħawdu sewwa għal eżatt minuta, u ħallih jiksaħ.

5.2.3.

Żid 1 ml ta’ eter djetiliku, agħlaq bit-tapp u ħawwad sew, imbagħad għaddi miċ-ċentrifuga, u ittrasferixxi s-soluzzjoni ta’ eter ġo tubu nadif u niexef, bl-għajnuna ta’ mikrosiringa.

5.3.   Tħejjija tad-derivattivi silanizzati u tal-kromatografija tal-gass

5.3.1.

Bl-għajnuna ta’ mikrosiringa, daħħal 100 μl mis-soluzzjoni (5.2.3.) ġo tubu bil-qiegħ koniku ta’ 10 ml.

5.3.2.

Neħħi s-solvent taħt kurrent dgħajjef ta’ nitroġenu, żid 200 μl ta’ reaġent ta’ silanizzazzjoni (4.15.), agħlaq bit-tapp u ħalli joqgħod għal 20 minuta.

5.3.3.

Wara 20 minuta, żid bejn 1 u 5 ml n-hexane (skond il-kundizzjonijiet kromatografiċi): is-soluzzjoni li tirriżulta hija lesta għall-kromatografija tal-gass.

5.4.   Kromatografija tal-gass

Il-kundizzjonijiet ta’ tħaddim huma dawn li ġejjin:

 Temperatura ta’ l-injettur (on column) inqas mit-temperatura tat-tgħollija tas-solvent (68 °C);

 Temperatura tar-rivelatur: 350 °C;

 Temperatura tal-kolonna: programmar tat-temperatura tal-forn: 60 °C għal minuta, b’żieda ta’ 15 °C kull minuta sa 180 °C, imbagħad ta’ 5 °C kull minuta sa 340 °C, imbagħad 340 °C matul 13-il minuta;

 Gass portatur: idroġenu jew elju, aġġustat għall-veloċità lineari xierqa sabiex tinkiseb r-riżoluzzjoni riflessa fil-Figura 1. Il-ħin tar-retenzjoni tat-triglyceride C54 għandu jkun ta’ 40 + 5 minuti (ara l-Figura 2); (Il-kundizzjonijiet ta’ tħaddim indikati hawn fuq jingħataw bħala proposta indikattiva. Kull operatur ikollu jaddattahom kif xieraq biex jilħqu r-reżoluzzjoni mixtieqa. It-tul tal-quċċata li tikkorrispondi għat-2-glyceryl monopalmitate għandu jkun ugwali għal talanqas 10 % mill-iskala tar-reġistratur).

 L-ammont ta’ sostanza injettata: 0,5-1 μl mis-soluzzjoni (5 ml) ta’ n-hexane (5.3.3.).

5.4.1.   Identifikazzjoni tal-qċaċet

Il-monoglycerides individwali jiġu identifikati skond il-ħinijiet ta’ retenzjoni miksuba, u b’relazzjoni ma’ dawk miksuba bit-taħlitiet standard ta’ monoglycerides analizzati fl-istess kundizzjonijiet.

5.4.2.   Evalwazzjoni kwantitattiva

Is-superfiċje ta’ kull quċċata tiġi kkalkulata permezz ta’ integratur elettroniku.

6.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI:

Il-perċentwal ta’ glyceryl monopalmitate jiġi kkalkulat abbażi tar-relazzjoni bejn is-superfiċje tal-quċċata u t-total tas-superfiċji tal-qċaċet tal-monoglycerides kollha (ara l-Figura 2), skond il-formula:

Glyceril monopalmitate (%):

image

Fejn:

Ax

=

is-superfiċje tal-quċċata li tikkorrispondi għall-glyceryl monopalmitate

ΣA

=

it-total tas-superfiċji tal-qċaċet kollha tal-monoglycerides

Ir-riżultat għandu jingħata b’ punt deċimali wieħed.

7.   RAPPORT TA’ L-ANALIŻI

Ir-rapport ta’ l-analiżi għandu jispeċifika:

 ir-referenza għal dan il-metodu;

 it-tagħrif kollu meħtieġ għall-identifikazzjoni kompleta tal-kampjun;

 ir-riżultat ta’ l-analiżi;

 kull devjazzjoni minn dan il-metodu, sew minħabba deċiżjoni tal-partijiet ikkonċernati sew minħabba raġuni oħra;

 id-dettalji ta’ l-identifikazzjoni tal-laboratorju, id-data ta’ l-analiżi u l-firma tal-persuni responsabbli għaliha.

Figura 1

Kromatogramma tal-prodotti tar-reazzjoni tas-silanizzazzjoni miksubin bl-azzjoni tal-lipażi fuq żejt taż-żebbuġa raffinat miżjud b’20 % ta’ żejt esterifikat (100 %).

image

Nota: “aċidi grassi liberi” = xaħmijiet ta' l-aċtu; “Żejt taż-żebbuġa raffinat + 20 % taż-żejt estratt” = żejt taż-żebbuġa raffinat + 20 % żejt esterifat; “1-2 monopalmitolein” = 1-2 monopalmitolein; “1-2 mono C18 insat.” = mhux saturat 1-2 mono C18

Figura 2

Kromatogramma ta’:

A)

Żejt taż-żebbuġa mhux esterifikat, wara l-lipażi; wara s-silanizzazzjoni; f’dawn il-kundizzjonijiet (kolonna kapillari 8-12 m), il-frazzjoni ta’ xama’ tiġi elwita fl-istess ħin bħall-frazzjoni ta’ diglyceride, jew ftit wara.

Wara l-lipażi, il-kontenut ta’ triglycerides ma għandux jaqbeż 15 %.

image

Tifsir:

1

=

Aċidi grassi liberi

2

=

Monoglycerides

3

=

Diglycerides

4

=

Triglycerides

*

=

2-monopalmitine

**

=

Triglycéride C54

Kromatogramma ta’:

B)

żejt esterifikat wara l-lipażi; wara s-silanizzazzjoni; f’dawn il-kundizzjonijiet (kolonna kapillari 8-12 m), il-frazzjoni ta’ xama’ tiġi elwita fl-istess ħin bħall-frazzjoni ta’ diglyceride, jew ftit wara.

Wara l-lipażi, il-kontenut ta’ triglycerides ma għandux jaqbeż 15 %.

image

Tifsir:

1

=

Aċidi grassi liberi

2

=

Monoglycerides

3

=

Diglycerides

4

=

Triglycerides

*

=

2-monopalmitine

**

=

Triglyceride C54

8.   NOTI

TĦEJJIJA TAL-LIPAŻI

Lipażi b’attività sodisfaċenti huma disponibbli fis-suq. Wieħed jista’ jippreparahom ukoll fil-laboratorju, kif ġej:

Kessaħ 5 kg ta’ frixa friska tal-majjal sa 0 °C. Neħħi x-xaħam solidu u t-tessut konnettiv ta’ madwarha, u itħan ġo blender sakemm issir pasta likwida. Ħawwad din il-pasta għal bejn 4 u 6 sigħat ma’ 2,5 litru ta’ anhydrous acetone, imbagħad għaddi miċ-ċentrifuga. Oħroġ il-fdal tliet darbiet oħra bl-istess volum ta’ anhydrous acetone, imbagħad darbtejn b’taħlita acetone/eter djetiliku (1/1) (V/V), u darbtejn bl-eter djetiliku.

Nixxef il-fdal matul 48 siegħa fil-vakwu biex jinkiseb trab stabbli li jżomm għal żmien twil fil-friġġ u protett mill-umdità.

KONTROLLAR TA’ L-ATTIVITA’ LIPAŻIKA

Ħejji emulsjoni ta’ żejt taż-żebbuġa kif ġej:

Ġo mikser, ħawwad għal 10 minuti taħlita magħmula minn 165 ml soluzzjoni ta’ gomma arabika f’100 g/l, 15 g silġ mitħun u 20 ml żejt taż-żebbuġa newtralizzat minn qabel.

Imbagħad daħħal 10 ml minn din l-emulsjoni f’biker ta’ 50 ml, imbagħad 0,3 ml minn soluzzjoni ta’ sodju kolat f’0,2 g/ml u 20 ml ilma distillat.

Qiegħed il-biker ġo termostat regolat għal 37 °C; daħħal l-elettrodi tal-miter tal-pH u l-aġitatur bl-iskrun.

Bl-għajnuna ta’ buretta, qattar soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju 0,1 N sakemm jintlaħaq livell pH ta’ 8,3.

Żid kwantità ta’ sospensjoni ta’ trab tal-lipażi fl-ilma (0,1 g/ml ta’ lipażi). Malli l-miter tal-pH jindika livell pH ta’ 8.3, qabbad il-kronometru u żid is-soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju billi tqattarha bir-ritmu meħtieġ biex il-livell pH jinżamm f’8.3. Innota kull minuta l-volum tas-soluzzjoni li jkun ġie kkunsmat.

Irreġistra din l-informazzjoni fi grafika x/y, bil-ħin fuq l-assi x, u l-millilitri ta’ soluzzjoni ta’ alkali 0,1 N ikkunsmati biex jinżamm livell kostanti tal-pH fuq l-assi y. B’hekk għandha tinkiseb grafika lineari.

L-attività tal-lipażi, imkejla f’unitajiet ta’ lipażi għal kull mg, tiġi kkalkolata bil-formula li ġejja:

image

Fejn:

A

hija l-attività f’unitajiet ta’ lipażi/mg;

V

hija l-għadd ta’ millilitri ta’ soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju 0,1 N kull minuta (ikkalkulat abbażi tal-grafika);

N

hija n-normalità tas-soluzzjoni ta’ idrossidu tas-sodju;

m

hija l-massa tal-lipażi tat-test f’mg.

L-unità ta’ lipażi hija ddefinita bħala l-kwantità ta’ enżimi li jeħilsu 10 mikro-ekwivalenti ta’ aċidu kull minuta.

▼M20 —————

▼M28




ANNESS IX

INVESTIGAZZJONI SPETTROFOTOMETRIKA FL-ULTRAVJOLA

DAĦLA

Eżaminazzjoni spettrofotometrika fl-ultravjola tista' tipprovdi tagħrif dwar il-kwalità ta' xaħma, l-istat ta' konservazzjoni tagħha, u t-tibdiliet miġjuba fiha minn proċessi teknologiċi. L-assorbiment tal-meded tat-tul ta' mewġa speċifikat fil-metodu huwa dovut għall-preżenza ta' sistemi konjugati ta' diene u triene, b'riżultat ta' proċessi ta' ossidazzjoni u/jew prattiċi ta' rfinar. Dawn l-assorbimenti huma espressi bħala estinzjonijiet speċifiċi

image

(l-estinzjoni ta' soluzzjoni ta' 1 % w/v tax-xaħam fis-solvent speċifikat, f'ċellola ta' 10 mm), konvenzjonalment indikata b'K (imsejħa wkoll “koeffiċjent ta' estinzjoni”).

1.   KAMP TA' APPLIKAZZJONI

Dan l-Anness jiddeskrivi l-proċedura għat-twettiq ta' eżaminazzjoni spettrofotometrika ta' żejt taż-żebbuġa fl-ultravjola.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Kampjun jiddewweb fis-solvent meħtieġ, u l-assorbiment tas-soluzzjoni tiġi mbagħad titkejjel fil-meded tat-tul ta' mewġa speċifikati b'referenza għal solvent pur.

L-estinzjonijiet speċifiċi fi 232 nm u 268 nm fl-isoottan jew 232 nm u 270 nm fiċ-ċikloeżan huma kkalkulati għal konċentrazzjoni ta' 1 % w/v f'ċellola ta' 10 mm.

3.   TAGĦMIR

3.1.

Spettrofotometru xieraq għall-kejl f'meded tat-tul ta' mewġa tal-ultravjola (minn 220 nm sa 360 nm), bil-kapaċità li jaqra unitajiet nanometriċi individwali. Huwa rakkomandat li ssir verifika regolari għall-preċiżjoni u r-riproduċibbiltà tal-assorbiment u tal-iskali tal-medda tat-tul ta' mewġa, kif ukoll għad-dawl mhux iċċentrat.

3.1.1.

Skala tal-medda tat-tul ta' mewġa: Din tista' tiġi ċċekkjata bl-użu ta' materjal ta' referenza li jkun jikkonsisti minn filtru ottiku tal-ħġieġ li jkun fih l-ossidu tal-olmju jew soluzzjoni li jkun fiha l-ossidu tal-olmju (siġillat jew le) li għandu faxex distinti ta' assorbiment. Il-materjali ta' referenza huma ddisinjati għall-verifika u l-ikkalibrar tal-iskali tal-medda tat-tul tal-mewġa ta' spettrofotometri viżibbli u ultravjola li għandhom wisa' nominali tal-faxxa spettrali ta' 5 nm jew inqas. Il-kejl isir kontra vojt tal-arja fil-firxa tat-tul ta' mewġa ta' bejn 640 u 240 m, skont l-istruzzjonijiet inklużi mal-materjal ta' referenza. Issir korrezzjoni ta' bażi b'beam path vojta ma' kull alterazzjoni tal-medda tat-tul. Il-meded tat-tul ta' mewġa tal-istandard huma elenkati fiċ-ċertifikat tal-materjal ta' referenza.

3.1.2.

Skala tal-assorbenza: Din tista' tiġi ċċekkjata bl-użu ta' materjali ta' referenza siġillati u disponibbli fis-suq, li jkunu jikkonsistu minn soluzjonijiet ta' dikromat tal-potassju fl-aċidu, f'ċerti kunċentrazzjonijiet u valuri ċċertifikati ta' assorbiment fil-λmax tiegħu (ta' 4 soluzzjonijiet ta' dikromat tal-potassju fl-aċidu perkloriku siġillati f'erba' kuvetti UV tal-kwarz sabiex jitkejlu l-linearità u r-referenza tal-preċiżjoni fotometrika fl-UV). Is-soluzzjonijiet ta' dikromat tal-potassju jitkejlu kontra vojt tal-aċidu użat, wara l-korrezzjoni tal-bażi, skont l-istruzzjonijiet inklużi mal-materjal ta' referenza. Il-valuri ta' assorbiment huma elenkati fiċ-ċertifikat tal-materjal ta' referenza.

Possibbiltà oħra biex jiġi vverifikat ir-rispons tal-fotoċellula u l-fotomultiplikatur hija li wieħed jipproċedi kif ġej: iżen 0,2000 g ta' kromat tal-potassju pur għall-ispettrofotometrija u dewweb f'soluzzjoni ta' 0,05 N ta' soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju fi flask gradat ta' 1 000 ml, u żid sal-marka. Ħu eżattament 25 ml tas-soluzzjoni miksuba, ferra' fi flask gradat ta' 500 ml u ddilwa sal-marka billi tuża l-istess soluzzjoni ta' idrossidu tal-potassju.

Kejjel l-estinzjoni tas-soluzzjoni hekk miksuba f'275 nm, billi tuża s-soluzzjoni ta' idrossidu tal-potassju bħala referenza. L-estinzjoni mkejla permezz ta' kuvetta ta' 1 cm għandha tkun ta' 0,200 ± 0,005.

3.2.

Kuvetti tal-kwarz rettangolari, bl-għotjien, xierqa għal kejl fil-meded tat-tul ta' mewġa ultravjola (bejn 220 u 360 mm), li jkollhom traġitt ottimu ta' 10 mm. Meta mimlijin bl-ilma jew solvent ieħor xieraq, il-kuvetti m'għandhomx juru differenzi ta' aktar minn 0,01 unità ta' estinzjoni bejniethom.

3.3.

Flasks volumetriċi ta' marka waħda, b'kapaċità ta' 25 ml, il-klassi A.

3.4.

Miżien analitiku, li jista' jaqra sal-eqreb 0,0001 g.

4.   REAĠENTI

Matul l-analiżi, sakemm mhux speċifikat mod ieħor, uża biss reaġenti ta' grad analitiku rikonoxxut, kif ukoll ilma distillat jew demineralizzat, ta' purità ekwivalenti.

Solvent: Iso-ottan (2,2,4 trimetilpentan) għal kejl fi 232 nm u 268 nm jew ċikloessan għal kejl fi 232 nm u 270 nm, b'assorbiment ta' inqas minn 0,12 fi 232 nm u inqas minn 0,05 fi 270 nm b'riferiment għall-ilma distillat, imkejjel f'ċellola ta' 10 mm.

5.   PROĊEDURA

5.1.

Il-kampjun imsemmi għandu jkun perfettament omoġenju u mingħajr impuritajiet sospiżi. Jekk mhuwiex, għandu jiġi ffiltrat bil-karta, f'temperatura ta' madwar 30 °C.

5.2.

Iżen bi preċiżjoni madwar 0,25 g (sal-eqreb 1 mg) tal-kampjun hekk imħejji fi flask gradat ta' 25 ml, żid sal-marka bis-solvent speċifikat u omoġenizza. Is-soluzzjoni miksuba għandha tkun perfettament ċara. Jekk ikun hemm opalexxenza jew torbidezza, iffiltra malajr bil-karta.

NOTA: Ġeneralment, massa ta' 0,25-0,30 g tkun biżżejjed għall-kejl tal-assorbiment taż-żjut taż-żebbuġa verġni u straverġni f'268 nm u f'270 nm. Għall-kejl f'232 nm, is-soltu jkun jeħtieġ kampjun ta' 0,05 g, għalhekk is-soltu jitħejjew żewġ soluzzjonijiet distinti. Għall-kejl tal-assorbiment taż-żjut mir-residwi taż-żebbuġ, taż-żjut taż-żebbuġa raffinati, u taż-żjut taż-żebbuġa adulterati, is-soltu jkun jeħtieġ porzjon iżgħar tal-kampjun, eż. 0,1 g, minħabba l-assorbiment aħjar tagħhom.

5.3.

Jekk meħtieġ, ikkoreġi l-linja bażi (220-290 nm) bis-solvent fiż-żewġ ċelloli tal-kwarz (il-kampjun u r-referenza), imbagħad imla ċ-ċellola tal-kwarz kampjun bis-soluzzjoni tat-test u kejjel l-estinzjonijiet f'232, 268 u 270 nm kontra s-solvent użat bħala referenza.

Il-valuri tal-estinzjoni li jiġu rreġistrati għandhom jaqgħu fil-medda ta' bejn 0,1 u 0,8, jew fil-firxa tal-linearità tal-ispettrofotometru li għandha tiġi vverifikata. Jekk le, għandu jerġa' jsir il-kejl billi jintużaw soluzzjonijiet aktar konċentrati jew aktar dilwiti, kif ikun xieraq.

5.4.

Wara l-kejl tal-assorbiment f'268 jew 270 nm, kejjel l-assorbiment fi λmax, λmax + 4 u λmax – 4. Dawn il-valuri ta' assorbiment jintużaw biex tiġi ddeterminata l-varjazzjoni fl-estinzjoni speċifika (ΔΚ).

NOTA: λmax huwa meqjus ta' 268 nm għall-isoottan użat bħala solvent, u ta' 270 nm għas-cikloeżan.

6.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

6.1.

Irreġistra l-estinzjonijiet speċifiċi (koeffiċjenti ta' estinzjoni) fuq it-tuliet tal-mewġa differenti ikkalkolati kif ġej:

image

fejn:

=

estinzjoni speċifika fuq it-tul tal-mewġa λ;

=

estinzjoni mkejla fuq it-tul tal-mewġa λ;

c

=

konċentrazzjoni tas-soluzzjoni fi g/100 ml;

s

=

tul tat-traġitt taċ-ċellola tal-kwarz f'cm;

espressi sa żewġ ċifri deċimali.

6.2.

Varjazzjoni tal-estinzjoni speċifika (ΔΚ)

Il-varjazzjoni tal-valur assolut tal-estinzjoni (ΔΚ) tinħadem hekk:

image

fejn Km hija l-estinzjoni speċifika fil-medda tat-tul ta' mewġa għall-assorbiment massimu fi 270 mm u 268 mm, skont is-solvent użat.

Ir-riżultati għandhom jiġu espressi sa żewġ ċifri deċimali.




ANNESS X

DETERMINAZZJONI TAL-ESTERI METILIĊI TAL-AĊIDI XAĦMIN PERMEZZ TAL-KROMOTOGRAFIJA B'FAŻI GASSUŻA

1.   KAMP TA' APPLIKAZZJONI

Dan l-Anness jagħti gwida dwar id-determinazzjoni tal-kromotografija b'fażi gassuża tal-aċidi xaħmin ħielsa u marbuta fix-xaħmijiet u ż-żjut veġetali, wara l-konverżjoni tagħhom f'esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin (FAME).

L-aċidi xaħmin marbuta tat-triaċilgliċeroli (TAGs) u, skont il-metodu ta' esterifikazzjoni, l-aċidi xaħmin ħielsa (FFA), jiġu kkonvertiti f'esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin (FAME), li jiġu ddeterimati permezz tal-kromotografija kapillari b'fażi gassuża.

Il-metodu deskritt f'dan l-Anness jippermetti d-determinazzjoni tal-FAME minn C12 sa C24, inklużi l-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin li jkunu saturati, ċismonoinsaturati u transmonoinsaturati, u ċispoliinsaturati u transpoliinsaturati.

2.   PRINĊIPJU

Il-kromotografija b'fażi gassuża (GC) tintuża għall-analiżi kwantitattiva tal-FAME. Il-FAME jitħejjew skont il-Parti A. Imbagħad jiġu injettati u vaporizzati fl-injettur. Is-separazzjoni tal-FAME ssir fuq kolonni analitiċi ta' polarità u ta' tul speċifiċi. Jintuża Individwatur tal-Jonizzazzjoni bi Fjamma (FID) għad-detezzjoni tal-FAME. Il-kundizzjonijiet tal-analiżi jingħataw fil-Parti B.

L-idroġenu jew l-elju jistgħu jintużaw bħala l-gass trasportatur (il-fażi mobbli) fil-kromotografija b'fażi gassuża tal-FAME bil-FID. L-idroġenu jħaffef is-separazzjoni u jwassal għal qċaċet iktar akuti. Il-fażi stazzjonarja hija saff mikroskopiku ta' rita likwida rqiqa fuq wiċċ sod inerti magħmul mis-silika mdewba.

Hekk kif jgħaddu mill-kolonna kapillarja, il-komposti volatilizzati li qed jiġu analizzati jinteraġixxu mal-fażi stazzjonarja, u b'hekk jiksu l-wiċċ ta' ġewwa tal-kolonna. Minħabba din l-interazzjoni differenti ta' komposti differenti, jelwixxu f'ħin differenti, u dan il-ħin jissejjaħ il-ħin ta' retenzjoni tal-komposta għal sett determinat ta' paramentri tal-analiżi. It-tqabbil tal-ħinijiet ta' retenzjoni jintuża għall-identifikazzjoni tal-komposti differenti.

PARTI A

TĦEJJIJA TAL-ESTERI METILIĊI TAL-AĊIDI XAĦMIN MIŻ-ŻJUT TAŻ-ŻEBBUĠA U MIŻ-ŻJUT MIR-RESIDWI TAŻ-ŻEBBUĠA

1.   KAMP TA' APPLIKAZZJONI

Din il-parti tispeċifika t-tħejjija tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin. Tinkludi metodi għat-tħejjija tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin miż-żjut taż-żebbuġa u miż-żjut mir-residwi taż-żebbuġa.

2.   QASAM TA' APPLIKAZZJONI

It-tħejjija tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin minn żjut taż-żebbuġa u minn żjut mir-residwi taż-żebbuġa ssir bit-transesterifikazzjoni b'soluzzjoni metanolika tal-idrossidu tal-potassju f'temperatura tal-ambjent. Il-ħtieġa ta' purifikazzjoni tal-kampjun qabel it-transesterifikazzjoni tiddependi mill-kontenut ta' aċidi xaħmin ħielsa tal-kampjun, u mill-parametru analitiku li għandu jiġi ddeterminat, li jista' jintgħażel skont it-tabella li ġejja:



Kategorija taż-żejt

Metodu

Żejt taż-żebbuġa verġni b'aċidità ≤ 2,0 %

1.  Aċidi xaħmin

2.  Aċidi xaħmin trans

3.  ΔECN42 (wara l-purifikazzjoni bil-ġell tas-silika SPE)

Żejt taż-żebbuġa raffinat

Żejt taż-żebbuġa magħmul minn żejt taż-żebbuġa raffinat u żjut taż-żebbuġa verġni

Żejt mir-residwi taż-żebbuġa raffinat

Żejt mir-residwi taż-żebbuġa

Żejt taż-żebbuġa verġni b'aċidità > 2,0 %

Żejt mir-residwi taż-żebbuġa mhux raffinat

1.  Aċidi xaħmin (wara l-purifikazzjoni bil-ġell tas-silika SPE)

2.  Aċidi xaħmin trans (wara l-purifikazzjoni bil-ġell tas-silika SPE)

3.  ΔECN42 (wara l-purifikazzjoni bil-ġell tas-silika SPE)

3.   METODOLOĠIJA

3.1.    Transesterifikazzjoni b'soluzzjoni metanolika ta' idrossidu tal-potassju f'temperatura tal-ambjent.

3.1.1.    Prinċipju

L-esteri metiliċi huma fformati bit-transesterifikazzjoni bl-idrossidu tal-potassju metanoliku bħala stadju intermedju qabel ma ssir is-sapunifikazzjoni.

3.1.2.    Reaġenti

3.1.2.1.

Metanol b'mhux iktar minn 0,5 % (m/m) kontenut tal-ilma.

3.1.2.2.

Eżan, kwalità kromatografika.

3.1.2.3.

Ettan, kwalità kromatografika.

3.1.2.4.

Eteru djetiliku, stabilizzat għall-analiżi.

3.1.2.5.

Aċeton, kwalità kromatografika.

3.1.2.6.

Solvent tal-elużjoni biex jippurifika ż-żejt bil-kolonna kromatografika/SPE, taħlita ta' eżan u eteru djetiliku 87/13 (v/v).

3.1.2.7.

Idrossidu tal-potassju, soluzzjoni metanolika ta' madwar 2 M: dewweb 11,2 g idrossidu tal-potassju f'100 ml metanol.

3.1.2.8.

Skrataċ tal-ġell tas-silika, 1 g (6 ml), għall-estrazzjoni f'fażi solida.

3.1.3.    Tagħmir

3.1.3.1.

Tubi tat-testijiet bit-tapp tal-kamin (b'volum ta' 5 ml), b'tapp li jkun fih ġunta PTFE.

3.1.3.2.

Pipetti gradati jew awtomatiċi, 2 ml u 0,2 ml.

3.1.4.    Purifikazzjoni tal-kampjuni taż-żejt

Fejn meħtieġ, il-kampjuni se jiġu ppurifikati billi ż-żejt jingħadda minn skartoċċ tal-estrazzjoni tal-ġell tas-silika b'fażi solida. Skartoċċ tal-ġell tas-silika (3.1.2.8) jitqiegħed f'apparat għall-elużjoni b'vakwu u jinħasel f'vakwu b'6 ml ta' eżan (3.1.2.2); il-ħasil isir mingħajr vakwu. Wara dan, soluzzjoni taż-żejt (madwar 0,12 g) f'0,5 ml ta' eżan (3.1.2.2) titgħabba fuq il-kolonna. Is-soluzzjoni tinġibed 'l isfel u mbagħad tiġi elwita b'10 ml ta' eżan/eteru djetiliku (87:13 v/v) (3.1.2.6). L-elwiti mħallta jiġu omoġenizzati u jinqasmu f'żewġ volumi simili. Alikwota tiġi evaporata sakemm tinxef f'evaporatur rotanti taħt pressjoni ridotta u f'temperatura tal-ambjent. Ir-residwu jiddewweb f'1 ml ta' etan u s-soluzzjoni tkun lesta għall-analiżi għall-aċidi xaħmija mill-GC. It-tieni alikwota tiġi evaporata u r-residwu jiddewweb f'1 ml ta' aċeton għall-analiżi għat-trigliċeridi bl-HPLC, jekk meħtieġ.

3.1.5.    Proċedura

F'tubu tat-testijiet bit-tapp tal-kamin ta' 5 ml (3.1.3.1), iżen madwar 0,1 g mill-kampjun taż-żejt. Żid 2 ml etan (3.1.2.2), u ħawwad. Żid 0,2 ml ta' soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju metanoliku (3.1.2.7), agħlaq bit-tapp li jkun fih ġunta PTFE, issikka t-tapp, u ħawwad sew għal 30 sekonda. Ħalli t-taħlita tistratifika ruħha sakemm is-soluzzjoni ta' fuq tiċċara. Ferra' s-saff ta' fuq li jkun fih l-esteri metiliċi. Is-soluzzjoni tal-etan hija lesta għall-injezzjoni fil-kromatografu b'fażi gassuża. Huwa rakkomandabbli li s-soluzzjoni tinżamm fil-friġġ sal-mument tal-analiżi bil-kromatografija b'fażi gassuża. Mhux rakkomandabbli li s-soluzzjoni tinħażen għal iktar minn 12-il siegħa.

PARTI B

DETERMINAZZJONI TAL-ESTERI METILIĊI TAL-AĊIDI XAĦMIN PERMEZZ TAL-KROMOTOGRAFIJA B'FAŻI GASSUŻA

1.   KAMP TA' APPLIKAZZJONI

Din il-parti tagħti gwida ġenerali għall-applikazzjoni tal-kromatografija b'fażi gassuża f'kolonna kapillari, għad-determinazzjoni tal-kompożizzjoni kwalitattiva u kwantitattiva ta' taħlita ta' esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin miksuba skont il-metodu speċifikat fil-Parti A.

Din il-parti ma tapplikax għall-aċidi xaħmin polimerizzati.

2.   REAĠENTI

2.1.    Gass trasportatur

Gass inerti (l-elju jew l-idroġenu), imnixxef sewwa u b'kontenut ta' ossiġenu ta' inqas minn 10 mg/kg.

Nota 1:  L-idroġenu jista' jirdoppja l-veloċità tal-analiżi, iżda huwa perikoluż. Mezzi ta' sikurezza huma disponibbli.

2.2.    Gassijiet awżiljarji

2.2.1.

Idroġenu (purità ≥ 99,9 %), ħieles mit-tniġġis organiku.

2.2.2.

Arja jew ossiġenu, ħielsa mit-tniġġis organiku.

2.2.3.

Nitroġenu (purità > 99 %).

2.3.    Standard ta' referenza

Taħlita ta' esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin puri, jew l-esteri metiliċi ta' xaħam ta' kompożizzjoni magħrufa, li jekk jista' jkun jixbah lil dak tal-materja xaħmija li għandha tiġi analizzata. Isomeri ċis u trans ta' esteri metiliċi ottadekenojċi, ottadekadienojċi u ottadekatrienojċi huma utli għall-identifikazzjoni tal-isomeri trans tal-aċidi insaturati.

Wieħed għandu joqgħod attent li jimpedixxi l-ossidazzjoni tal-aċidi xaħmin poliinsaturati.

3.   TAGĦMIR

L-istruzzjonijiet mogħtija għandhom x'jaqsmu mat-tagħmir normali użat għall-kromatografija b'fażi gassuża, bl-użu ta' kolonni kapillari u ta' detettur tal-jonizzazzjoni bil-fjamma.

3.1.    Kromatografu b'fażi gassuża

Il-kromatografu b'fażi gassuża għandu jkollu l-elementi li ġejjin.

3.1.1.    Sistema ta' injezzjoni

Użu ta' sistema ta' injezzjoni b'kolonni kapillari, f'liema każ is-sistema ta' injezzjoni għandha tkun iddisinjata b'mod speċjali għall-użu ma' tali kolonni. Tista' tkun tat-tip li tifred jew tista' tkun tat-tip li ma tifridx fuq tip ta' injezzjoni tal-kolonna.

3.1.2.    Forn

Il-forn għandu jkun kapaċi jsaħħan il-kolonna kapillari sa temperatura ta' mill-inqas 260 °C, u li jżomm it-temperatura mixtieqa f'firxa ta' 0,1 °C. Dan l-aħħar rekwiżit huwa partikolarment importanti meta jintuża tubu tas-silika mdewba.

L-użu tat-tisħin bit-temperatura pprogrammata huwa rrakkomandat fil-każijiet kollha, u b'mod partikolari għall-aċidi grassi b'inqas minn 16-il atomu tal-karbonju.

3.1.3.    Kolonna kapillari

3.1.3.1.

Tubu, magħmul minn materjal inerti għas-sustanzi li għandhom jiġu analizzati (ġeneralment tal-ħġieġ jew tas-silika mdewba). Id-djametru intern għandu jkun bejn 0,20 u 0,32 mm. Il-wiċċ intern għandu jiġi ttrattat b'mod xieraq (eż. tħejjija tal-wiċċ, diżattivazzjoni) qabel ma jirċievi l-kisja tal-fażi stazzjonarja. Tul ta' 60 m ikun biżżejjed għall-aċidu xaħmi u għall-isomeri ċis u trans tal-aċidi xaħmin.

3.1.3.2.

Kolonni fil-fażi stazzjonarja u marbutin bil-polisiloksan polari (ċjanopropilsilikon) huma xierqa.

Nota 2:  Hemm riskju li l-polisiloksani polari jagħtu lok għal xi diffikultajiet fl-identifikazzjoni u s-separazzjoni tal-aċidu linoleniku u l-aċidi C20.

Il-kisjiet għandhom ikunu rqaq, jiġifieri bejn 0,1 u 0,2 μm.

3.1.3.3.

Assemblaġġ u kondizzjonament tal-kolonna

Irrispetta l-prekawzjonijiet normali għall-assemblaġġ tal-kolonni kapillari, jiġifieri t-tqegħid tal-kolonna fil-forn (support), l-għażla u l-assemblaġġ tal-ġonot (nuqqas ta' tnixxijiet), it-tqassim tat-truf tal-kolonna fl-injettur u d-detettur (tnaqqis tal-ispazji moħlija). Qiegħed il-kolonna taħt kurrent tal-gass trasporatur (eż. 0,3 bar (30 kPa) f'każ ta' kolonna ta' tul ta' 25 m u djametru intern ta' 0,3 mm).

Ikkundizzjona l-kolonna billi tipprogramma t-temperatura tal-forn fi 3 °C/min mit-temperatura tal-ambjent sat-temperatura ta' 10 °C taħt il-limiti ta' dekompożizzjoni tal-fażi stazzjonarja. Żomm il-forn f'din it-temperatura għal siegħa sakemm tiġi stabbilita l-linja bażi. Reġġa' t-temperatura għal 180 °C biex taħdem f'kundizzjonijiet isotermiċi.

Nota 3:  Kolonni kkundizzjonati minn qabel b'mod xieraq huma disponibbli kummerċjalment.

3.1.4.    Detettur u tal-jonizzazzjoni bi fjamma u konvertur-amplifikatur.

3.2.    Siringa

Is-siringa għandu jkollha kapaċità massima ta' 10 μl, u tkun iggradata f'diviżjonijiet ta' 0,1 μl.

3.3.    Sistema ta' ksib tad-dejta

Sistema ta' ksib tad-dejta mqabbda fuq l-internet bid-detetturi, imħaddma bi programm tas-softwer xieraq għall-integrazzjoni u n-normalizzazzjoni tal-qċaċet.

4.   PROĊEDURA

L-operazzjonijiet deskritti f'4.1 sa 4.3 huma marbutin mal-użu ta' detettur tal-jonizzazzjoni tal-fjamma.

4.1.    Kundizzjonijiet tat-test

4.1.1.    Għażla tal-kundizzjonijiet ottimi tal-operazzjoni għall-kolonni kapillari

Minħabba l-effiċjenza u l-permeabbiltà tal-kolonni kapillari, is-separazzjoni bejn il-kostitwenti u t-tul ta' żmien tal-analiżi jiddependu ħafna mir-rata ta' ċirkolazzjoni tal-gass trasportatur fil-kolonna. Għaldaqstant, se jkun meħtieġ li l-kundizzjonijiet tal-operazzjoni jiġu ottimizzati billi dan il-parametru jiġi aġġustat (jew sempliċiment it-telf mit-tarf ta' fuq tal-kolonna), skont jekk l-għan huwiex li tittejjeb is-separazzjoni jew li titħaffef l-analiżi.

Il-kundizzjonijiet li ġejjin sfaw xierqa għas-separazzjoni tal-FAMEs (C4 sa C26). Eżempji ta' kromatogrammi jintwerew fl-Appendiċi B:



Temperatura tal-injettur:

250 °C

Temperatura tad-detettur:

250 °C

Temperatura tal-forn:

minn 165 °C (8 min) sa 210 °C fi 2 °C/min

Idroġenu tal-gass trasportatur:

pressjoni tat-tarf ta' fuq tal-kolonna, 179 kPa

Fluss totali:

154,0 ml/min;

Proporzjon tal-firda:

1:100

Volum tal-injezzjoni:

1 μl

4.1.2.    Determinazzjoni tar-riżoluzzjoni (ara l-Appendiċi A)

Ikkalkula r-riżoluzzjoni R ta' żewġ qċaċet ġirien I u II, permezz tal-formola:

R = 2 × ((dr(II) d r(I))/(ω(I) + ω(II))) jew R = 2 × ((tr(II) t r(I))/(ω(I) + ω(II))) (USP) (United States Pharmacopeia),

Jew

R = 1,18 × ((tr(II) – tr(I))/(ω0,5(I) + ω0,5(II))) (EP, BP, JP, DAB), (JP (Japanese Pharmacopeia), EP (Pharmacopée Européenne), BP (British Pharmacopeia))

fejn:

d r(I) hija d-distanza ta' retenzjoni tal-quċċata I;

d r(II) hija d-distanza ta' retenzjoni tal-quċċata II;

t r(I) hija l-ħin ta' retenzjoni tal-quċċata I;

t r(II) hija l-ħin ta' retenzjoni tal-quċċata II;

ω(I) hija l-wisa' tal-bażi tal-quċċata I;

ω(II) hija l-wisa' tal-bażi tal-quċċata II;

ω0,5 hija l-wisa' tal-quċċata tal-kompost speċifikat, f'nofs il-għoli tal-quċċata;

Jekk ω(I) ≈ ω (II), ikkalkula R permezz tal-formoli li ġejjin:

R = (dr(II) d r(I))/ω = (dr(II) d r(I))/4σ

fejn:

σ hija d-devjazzjoni standard (ara l-Appendiċi A, il-Figura 1).

Jekk id-distanza dr bejn iż-żewġ qċaċet d r(II) - d r(I) hija ugwali għal 4σ, il-fattur ta' riżoluzzjoni huwa R = 1.

Jekk żewġ qċaċet ma jkunux għalkollox mifrudin, it-tanġenti għall-punti ta' inflezzjoni taż-żewġ qċaċet jaqsmu 'l xulxin fil-punt C. Sabiex iż-żewġ qċaċet jinfirdu għalkollox, id-distanza bejn iż-żewġ qċaċet għandha tkun ugwali għal:

d r(II) - d r(I) = 6 σ li minnu R = 1,5 (ara l-Appendiċi A, il-Figura 3).

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.    L-analiżi kwalitattiva

Identifika l-qċaċet tal-esteri metiliċi tal-kampjun mill-kromatogramma fl-Appendiċi B, figura 1, jekk meħtieġ b'interpolazzjoni, jew bi tqabbil ma' dawk tat-taħlitiet ta' referenza ta' esteri metiliċi (kif indikat fil-punt 2.3).

5.2.    Analiżi kwantitattiva

5.2.1.    Determinazzjoni tal-kompożizzjoni

Ikkalkula l-frazzjoni tal-massa wi tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin individwali, espressi bħala perċentwal bil-massa tal-esteri metiliċi, kif ġej:

5.2.2.    Il-metodu tal-kalkolu

5.2.2.1.   Każ ġenerali

Ikkalkula l-kontenut ta' komponent partikolari i, espress bħala perċentwal skont il-massa tal-esteri metiliċi, billi tiddetermina l-perċentwal irrappreżentat mill-erja tal-quċċata korrispondenti relattiva għat-total tal-erja tal-qċaċet kollha, permezz tal-formula li ġejja:

wi = (Ai/ΣA) × 100

fejn:

Ai hija l-erja taħt il-quċċata tal-esteru metiliku tal-aċidu xaħmi individwali i;

ΣA hija s-somma tal-erji taħt il-qċaċet kollha tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin individwali.

Ir-riżultati għandhom jingħataw sa żewġ punti deċimali.

Nota 4:  Għax-xaħmijiet u ż-żjut, il-frazzjoni tal-massa tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin hija ugwali għall-frazzjoni tal-massa tat-triaċilgliċeroli fi grammi għal kull 100 g. Għall-każijiet li fihom din l-ipoteżi mhix permessa, ara 5.2.2.2.

5.2.2.2.   L-użu ta' fatturi ta' korrezzjoni

F'ċerti każijiet, ngħidu aħna fil-preżenza ta' aċidi xaħmin b'inqas minn tmien atomi tal-karbonju, jew ta' atomi bi gruppi sekondarji, l-erji għandhom jiġu kkoreġuti permezz ta' fatturi ta' korrezzjoni speċifiċi (Fci). Dawn il-fatturi għandhom jiġu ddeterminati għal kull strument għalih. Għal dan il-għan, għandhom jintużaw materjali ta' referenza speċifiċi b'kompożizzjoni ċertifikata ta' aċidu xaħmi fil-firxa korrispondenti.

Nota 5:  Dawn il-fatturi ta' korrezzjoni mhumiex identiċi għall-fatturi ta' korrezzjoni FID teoretiċi, li jingħataw fl-Appendiċi A, billi jinkludu wkoll il-prestazzjoni tas-sistema ta' injezzjoni, eċċ. Madankollu, fil-każ ta' differenzi ikbar, is-sistema kollha għandha tiġi vverifikata għall-prestazzjoni tagħha.

Għal din it-taħlita ta' referenza, il-perċentwal tal-massa tal-FAME i jingħata permezz tal-formula:

wi = (mi m) × 100

fejn:

mi hija l-massa tal-FAME i fit-taħlita ta' referenza;

Σm hija t-total tal-mases tal-komponenti varji bħala FAMEs tat-taħlita ta' referenza.

Mill-kromatogramma tat-taħlita ta' referenza, ikkalkula l-perċentwal skont l-erja għall-FAME i, kif ġej:

wi = (Ai/ΣA) × 100

fejn:

Ai hija l-erja tal-FAME i fit-taħlita ta' referenza;

ΣA hija s-somma tal-erji kollha tal-FAMEs kollha tat-taħlita ta' referenza.

Għaldaqstant, il-fattur ta' korrezzjoni Fc huwa

Fc = (mi × ΣA)/(Ai/Σm)

Għall-kampjun, il-perċentwal skont il-massa ta' kull FAME i huwa:

wi = (Fi × Ai)/Σ (Fi × Ai)

Ir-riżultati għandhom jingħataw sa żewġ punti deċimali.

Nota 6:  Il-valur ikkalkulat jikkorrispondi għall-perċentwal tal-massa tal-aċidu xaħmi individwali kkalkulat bħala triaċilgliċeroli għal kull 100 g ta' xaħam.

5.2.2.3.   L-użu ta' standard intern

F'ċerti analiżi (pereżempju meta mhux l-aċidi xaħmin kollha jkunu kkwantifikati, bħal meta xi aċidi b'erba' karbonji jew sitta jkunu preżenti flimkien ma' aċidi b'16 u 18-il karbonju, jew meta jeħtieġ jiġi ddeterminat l-ammont assolut ta' xi aċidu xaħmi f'kampjun), jeħtieġ li jintuża Standard Intern. Spiss jintużaw aċidi xaħmin b'5, 15 jew 17-il karbonju. Il-fattur ta' korrezzjoni (jekk ikun hemm) għall-Istandard Intern għandu jiġi ddeterminat.

Il-perċentwal bil-massa tal-komponent i, espress bħala esteri metiliċi, jingħata mbagħad permezz tal-formula:

wi = (mIS × Fi × Ai)/(m × FIS × AIS)

fejn:

A i hija l-erja tal-FAME i;

A IS hija l-erja tal-istandard intern;

F i hija l-fattur ta' korrezzjoni tal-aċidu xaħmi i, espress bħala FAME;

F IS hija l-fattur ta' korrezzjoni tal-istandard intern;

m hija l-massa tal-porzjon tat-test, f'milligrammi;

m IS hija l-massa tal-istandard intern, f'milligrammi.

Ir-riżultati għandhom jingħataw sa żewġ punti deċimali.

6.   RAPPORT TAT-TEST

Ir-rapport tat-test għandu jispeċifika l-metodi użati għat-tħejjija tal-esteri metiliċi għall-analiżi tal-kromatografija b'fażi gassuża. Għandu wkoll isemmi d-dettalji kollha operattivi mhux speċifikati f'dan il-Metodu Standard, jew meqjusa mhux obbligatorji, flimkien ma' dettalji ta' kull inċident li seta' kellu influwenza fuq ir-riżultati.

Ir-rapport tat-test għandu jinkludi l-informazzjoni kollha meħtieġa għall-identifikazzjoni sħiħa tal-kampjun.

7.   PREĊIŻJONI

7.1.    Riżultati tat-test interlaboratorju

Id-dettalji ta' test interlaboratorju fuq il-preċiżjoni tal-metodu jingħataw fl-Anness C tal-istandard IOC/T.20/Doc. Nru 33. Il-valuri mnissla minn dan it-test interlaboratorju aktarx ma jkunux applikabbli għall-firxiet ta' konċentrazzjoni u għall-matriċi għajr dawk mogħtija.

7.2.    Ripetibbiltà

Id-differenza assoluta bejn żewġ riżultati ta' testijiet singoli indipendenti, miksuba bl-użu tal-istess metodu fuq materjal identiku għall-eżami fl-istess laboratorju mill-istess operatur bl-użu tal-istess tagħmir f'perjodu qasir ta' żmien, għandha tkun f'mhux aktar minn 5 % tal-każijiet akbar mill-valur r, mogħti fit-tabelli 1 sa 14 fl-Anness C tal-istandard IOC/T.20/Doc. Nru 33.

7.3.    Riproduċibbiltà

Id-differenza assoluta bejn żewġ riżultati ta' testijiet singoli, miksuba bl-użu tal-istess metodu fuq materjal identiku għall-eżami f'laboratorji differenti b'operaturi differenti u bl-użu ta' tagħmir differenti, għandha tkun f'mhux aktar minn 5 % tal-każijiet akbar mill-valur R, mogħti fit-tabelli 1 sa 14 fl-Anness C tal-istandard IOC/T.20/Doc. Nru 33.




Appendiċi A

Figura 1

image

b'wisa' ta' ω0,5 f'nofs l-għoli tat-trijanglu (ABC) u wisa' b f'nofs l-għoli tat-trijanglu (NPM)



Figura 2

Figura 3

image

image




Appendiċi B

Figura 1

Profil kromatografiku b'fażi gassuża miskub bil-metodu tal-metilazzjoni kiesħa miż-żejt mir-residwi taż-żebbuġ

image

Il-qċaċet kromatografiċi jikkorrispondu għall-esteri metiliċi u etiliċi, għajr fejn indikat mod ieħor.

▼B




ANNESS XI

DETERMINAZZJONI TAL-KONTENUT TA' SOLVENTI VOLATILI ALOĠINATI FIŻ-ŻEJT TAŻ-ŻEBBUĠA

1.   METODU

Analiżi bil-kromatografija tal-gass bl-użu tat-teknika ta' spazju ta' arja.

2.   TAGĦMIR

2.1.

Apparat ta' kromatografija tal-gass mgħammar b'electron capture didekter (ECD).

2.2.

Apparat ta' spazju ta' arja.

2.3.

Kolonna tal-kromatografija tal-gass, tal-ħġieġ, twila 2 m u b'djametru ta' 2 mm, fażi stazzjonarja. OV101 10 % jew ekwivalenti, li timla ħamrija kalċinata diatomea, maħsula bl-aċidu u silanizzata u ta' daqs ta' partiċella ta' malja ta' 80 sa 100.

2.4.

Gass awżiljarju u carrier: nitroġenu għal kromatografija tal-gass, xieraq għal kxif bil-qbid tal-elettroni.

2.5.

Flasks tal-ħġieġ, 10 sa 15 ml, b'kisja ta' teflon u tapp tal-aluminju b'aċċessorju biex tidħol siringa.

2.6.

Moros li jagħlqu ermetikament.

2.7.

Siringa tal-gass 0,5 sa 2 ml.

3.   REAĠENTI

Standard: solventi aloġenati ta' grad ta' purità xieraq għal kromatografija tal-gass.

4.   PROĊEDURA

4.1.

Iżen eżattament madwar 3g ta' żejt fi flask tal-ħġieġ (mhux biex jerġa' jintuża); issiġġillah ermetikament. Qiegħdu f'termostat fuq 70 oC għal siegħa. Permezz ta' siringa neħħi bil-mod 0,2 sa 0,5 ml tal-ispazju ta' arja. Injettah fil-kolonna tal-apparat ta' kromatografija tal-gass irregolat kif ġej:

 temperatura tal-injettur: 150 oC,

 temperatura tal-kolonna: 70 sa 80 oC,

 temperatura tad-didekter: 200 sa 250 oC.

Jistgħu jintużaw ukoll temperaturi oħra sakemm ir-riżultati jibqgħu ekwivalenti.

4.2.

Soluzzjonijiet ta' riferenza: ħejji soluzzjonijiet standard billi tuża żejt taż-żebbuġa raffinat mingħajr traċċa ta' solventi b'konċentrazzjonijiet li jvarjaw bejn 0,05 sa 1 ppm (mg/kg) u li jikkorrispondu għall-kontenut maħsub tal-kampjun. Is-solventi aloġinati jistgħu jiġu dilwiti bl-użu tal-pentan.

4.3.

Stima kwantitattiva: ikkorrelata l-uċuħ jew l-elevazzjonijiet tal-qċaċet tal-kampjun u tas-soluzzjoni standard tal-konċentrazzjoni meqjusa l-eqreb. Jekk id-devjazzjoni tkun akbar minn 10 % l-analiżi trid terġa' ssir mqabbla ma' soluzzjoni oħra standard sakemm id-devjazzjoni tkun sa 10 %. Il-kontenut jiġi kkalkolat fuq il-bażi tal-medja tal-injezzjonijiet elementari.

4.4.

Espressjoni tar-riżultati: f'ppm (mg/kg). Il-limitu ta' kxif għall-metodu huwa ta' 0,01 mg/kg.

▼M26




ANNESS XII

IL-METODU TAL-KUNSILL INTERNAZZJONALI TAŻ-ŻEBBUĠ GĦALL-VALUTAZZJONI ORGANOLETTIKA TAŻ-ŻEJT TAŻ-ŻEBBUĠA VERĠNI

▼M28

1.   GĦAN U KAMP TA' APPLIKAZZJONI

L-għan tal-metodu internazzjonali deskritt f'dan l-Anness huwa li jistabbilixxi l-proċedura għall-valutazzjoni tal-karatteristiċi organolettiċi taż-żejt taż-żebbuġa verġni, fi ħdan it-tifsira tal-punt 1 tal-Parti VIII tal-Anness VII tar-Regolament (UE) Nru 1308/2013 tal-Parlament Ewropew u tal-Kunsill ( 4 ), u li jistabbilixxi l-metodu għall-klassifikazzjoni ta' dan iż-żejt abbażi ta' dawk il-karatteristiċi. Il-metodu fih ukoll indikazzjonijiet dwar it-tikkettar fakultattiv.

Il-metodu deskritt japplika biss għaż-żjut taż-żebbuġa verġni u għall-klassifika jew it-tikkettar ta' dan it-tip ta' żejt skont l-intensità tad-difetti perċepiti u tat-togħma tal-frott, kif stabbiliti minn grupp ta' dewwieqa magħżula, imħarrġa u mmonitorjati, magħquda f'bord.

L-istandards tal-IOC imsemmija f'dan l-Anness jintużaw fl-aħħar verżjoni disponibbli tagħhom.

▼M26

2.   IL-VOKABULARJU ĠENERALI BAŻIKU GĦALL-ANALIŻI SENSORJA

Ara l-istandard bir-referenza IOC/T.20/Doc. No 4 msejjaħ “L-analiżi sensorja: il-vokabularju ġenerali bażiku”.

3.   IL-VOKABULARJU SPEĊIFIKU

3.1.    Attributi negattivi

Immuffat/bin-naqal mhux ċar Togħma karatteristika taż-żejt miksub minn żebbuġ li jkun tpoġġa fuq xulxin jew inħażen f’kundizzjonijiet hekk li jkun għadda minn stat avvanzat ta’ fermentazzjoni anerobika jew taż-żejt li jkun tħalla f’kuntatt man-naqal li jkun trabba fil-btieti u t-tankijiet ta’ taħt l-art u li wkoll ikun għadda minn proċess ta’ fermentazzjoni anerobika.

Imnawwar-umdu-togħma ta’ ħamrija Togħma karatteristika taż-żjut miksubin minn frott li fih ikunu trabbew għadd kbir ta’ fungi minħabba li jkun inħażen f’post umdu għal diversi ġranet jew taż-żejt miksub minn żebbuġ li jkun inġabar bil-ħamrija u t-tajn fuqu u ma jkunx inħasel.

Togħma ta’ nbid-togħma ta’ ħall-aċiduż-qares Togħma karatteristika ta’ ċerti żjut li tfakkrek fl-inbid jew fil-ħall. Din it-togħma tiġi l-iktar mill-proċess ta’ fermentazzjoni bl-arja taż-żebbuġ jew tal-pejst taż-żebbuġ li jkun tħalla fuq il-matts tal-għasir li ma jkunux inħaslu sewwa u li jkunu wasslu għall-formazzjoni tal-aċidu aċetiku, tal-aċitat etiliku u tal-etanol.

Misnieħ Togħma taż-żjut li jkunu għaddew minn proċess qawwi ta’ ossidazzjoni.

Togħma ta’ żebbuġ mimsus bil-ġlata (injam imxarrab) Togħma karatteristika taż-żjut miksubin minn żebbuġ li jkun intmess bil-ġlata qabel ma nqata’.

▼M28

3.1.1.    Attributi negattivi oħrajn



Imsaħħan jew Maħruq

Togħma karatteristika ta' żjut li tiġi minn tisħin żejjed u/jew fit-tul tisħin waqt l-ipproċessar, partikolarment meta l-pasta titħawwad bis-sħana, jekk dan ma jsirx f'kundizzjonijiet termali xierqa.

Hay-wood (togħma ta' żebbuġ imnixxef)

Togħma karatteristika ta' ċerti żjut li jsiru minn żebbuġ li jkun tnixxef.

Aħrax

Sensazzjoni ta' xi ħaġa ħoxna u magħquda, qisha pasta, li jħallulek f'ħalqek ċerti żjut qodma.

Xaħmi

Togħma taż-żejt li tfakkar fid-diżil, fil-griż jew fiż-żejt minerali.

Veġetali l-ilma

Togħma li ż-żejt jikseb minħabba kuntatt fit-tul ma' ilma veġetali li jkun għadda minn proċessi ta' fermentazzjoni.

Salmura

Togħma taż-żejt miksub minn żebbuġ li jkun ġie ppriżervat fis-salmura.

Metalliku

Togħma li tfakkar fil-metall. Din hija t-togħma tipika taż-żejt li jkun ilu żmien twil f'kuntatt ma' wċuħ tal-metall waqt il-proċessi tat-tħin, it-taħlit, l-għasir jew il-ħżin.

Ħalfa

Togħma karatteristika taż-żejt miksub minn żebbuġ magħsur fuq matts ġodda tal-ħalfa. It-togħma tista' tvarja skont jekk il-matts ikunux magħmulin mill-ħalfa ħadra jew mill-ħalfa mnixxfa.

Imdewwed

Togħma taż-żejt miksub minn żebbuġ li jkunu attakkawh bil-kbir id-dwied tad-dubbiena taż-żebbuġ (Bactrocera oleae).

Ħjar

Togħma li tiġi meta ż-żejt idum wisq ippakkjat b'mod ermetiku, partikolarment f'reċipjenti tal-landa, u li hija attribwita lill-formazzjoni tat-2,6 nonadienal.

3.2.    Attributi pożittivi



Togħma ta' frott

Sett ta' sensazzjonijiet marbutin mas-sens tax-xamm li huma tipiċi għaż-żejt, skont il-varjetà taż-żebbuġ, u li jiġu miż-żebbuġ frisk u b'saħħtu, kemm jekk ikun sar u kemm jekk ikun għadu ma sarx. Dawn is-sensazzjonijiet jinħassu direttament u/jew min-naħa ta' wara tal-imnieħer.

Morr

Togħma karatteristika ewlenija taż-żejt miksub miż-żebbuġ aħdar jew miż-żebbuġ li jkun qed jiskura. Din tinħass mill-papilli kalċiformi li jinsabu fil-parti “V” tal-ilsien.

Punġenti

Sensazzjoni tattili ta' ħruq li hija tipika għaż-żjut li jkunu prodotti fil-bidu tas-sena tal-ħsad, l-iktar minn żebbuġ li jkun għadu ma sarx. Din tinħass fil-ħalq kollu, partikolarment fil-ġerżuma.

▼M29

3.3.    Terminoloġija fakultattiva għall-finijiet tat-tikkettar

Fuq talba, il-kap tal-bord jista' jiċċertifika li ż-żjut li ġew ivvalutati huma konformi mad-definizzjonijiet u mal-gradi li jikkorrispondu biss mat-termini li ġejjin, skont l-intensità u l-perċezzjoni tal-attributi.

Attributi pożittivi (togħma ta' frott, morr u punġenti): Skont l-intensità tal-perċezzjoni:

  Qawwija, meta l-valur medjan tal-attribut ikun ta' iktar minn 6;

  Medja, meta l-valur medjan tal-attribut ikun ta' bejn 3 u 6;

  Ħafifa, meta l-valur medjan tal-attribut ikun ta' inqas minn 3.

Togħma tal-frott

Sett ta' sensazzjonijiet marbutin mas-sens tax-xamm li huma tipiċi għaż-żejt, skont il-varjetà taż-żebbuġ u li jiġu miż-żebbuġ frisk u b'saħħtu, u li fihom la tiddomina t-togħma tal-frott aħdar u lanqas dik tal-frott li jkun sar. Dawn jiġu nnutati direttament u/jew permezz tan-naħa ta' wara tal-imnieħer.

Togħma tal-frott aħdar

Sett ta' sensazzjonijiet marbutin mas-sens tax-xamm li huma tipiċi għaż-żejt u li jfakkru fil-frott aħdar, skont il-varjetà taż-żebbuġ u li jiġu miż-żebbuġ aħdar frisk u b'saħħtu. Dawn jiġu nnutati direttament u/jew permezz tan-naħa ta' wara tal-imnieħer.

Togħma tal-frott misjur

Sett ta' sensazzjonijiet marbutin mas-sens tax-xamm li huma tipiċi għaż-żejt u li jfakkru fil-frott misjur, skont il-varjetà taż-żebbuġ u li jiġu miż-żebbuġ frisk u b'saħħtu. Dawn jiġu nnutati direttament u/jew permezz tan-naħa ta' wara tal-imnieħer.

Togħma bbilanċjata

Żejt li ma jurix nuqqas ta' bilanċ, jiġifieri s-sensazzjoni tattili u marbuta mas-sens tax-xamm u tat-togħma li fiha l-valur medjan tal-attribut tat-togħma morra u l-valur medjan tal-attribut punġenti ma jkunux iktar minn żewġ punti ogħla minn dak tat-togħma tal-frott.

Żejt ta' togħma mmoderata

Żejt li l-valur medjan tal-attributi tat-togħma morra u punġenti jkun ta' 2 jew inqas.

Lista ta' termini skont l-intensità tal-perċezzjoni:



Termini suġġetti għall-produzzjoni ta' ċertifikat tat-test organolettiku

Medjan tal-attribut

Togħma tal-frott

Togħma tal-frott misjur

Togħma tal-frott aħdar

Togħma ħafifa

Inqas minn 3

Medja tat-togħma tal-frott

Bejn 3 u 6

Togħma qawwija

Iktar minn 6

Togħma ħafifa tal-frott misjur

Inqas minn 3

Togħma medja tal-frott misjur

Bejn 3 u 6

Togħma qawwija tal-frott misjur

Iktar minn 6

Togħma ħafifa tal-frott aħdar

Inqas minn 3

Togħma medja tal-frott aħdar

Bejn 3 u 6

Togħma qawwija tal-frott aħdar

Iktar minn 6

Togħma ħafifa morra

Inqas minn 3

Togħma medja morra

Bejn 3 u 6

Togħma qawwija morra

Iktar minn 6

Togħma punġenti ħafifa

Inqas minn 3

Togħma punġenti medja

Bejn 3 u 6

Togħma punġenti qawwija

Iktar minn 6

Żejt ibbilanċjat

Il-valur medjan tal-attribut tat-togħma morra u l-valur medjan tal-attribut tat-togħma punġenti jkunu mhux aktar minn 2 punti ogħla mill-punt medjan tat-togħma tal-frott

Żejt ta' togħma mmoderata

Il-valur medjan tal-attribut tat-togħma morra u l-valur medjan tal-attribut tat-togħma punġenti ma jkunux aktar minn 2

▼M26

4.   IT-TAZZA GĦAD-DEWQAN TAŻ-ŻEJT

Ara l-istandard bir-referenza IOC/T.20/Doc. No 5 msejjaħ “It-tazza għad-dewqan taż-żejt”.

5.   IL-KAMRA TAT-TESTIJIET

Ara l-istandard bir-referenza IOC/T.20/Doc. No 6 msejjaħ “Gwida għall-installazzjoni ta’ kamra tat-testijiet”.

6.   AĊĊESSORJI

L-aċċessorji li ġejjin, li dawk li jduqu ż-żjut għandhom bżonn biex iwettqu xogħolhom sewwa, jridu jiġu pprovduti f’kull kabina u jridu jkunu jistgħu jintlaħqu faċilment:

 tazzi (standardizzati) li jkun fihom il-kampjuni, mogħtija numru tal-kodiċi, mgħottija b’watch-glass u miżmuma f’temperatura ta’ 28 °C ± 2 °C;

 folja tal-profil (ara l-Figura 1), stampata jew fuq il-kompjuter, dejjem jekk il-kundizzjonijiet tal-folja tal-profil jiġu ssodisfati, flimkien mal-istruzzjonijiet għall-użu tagħha jekk dan ikun meħtieġ;

 pinna jew linka li ma titħassarx;

 gabarrejiet bil-biċċiet tat-tuffieħ u/jew ilma, ilma bil-gass u/jew biskuttelli;

 tazza ilma f’temperatura ambjentali;

 folja bi tfakkira tar-regoli ġenerali mniżżlin fit-taqsimiet 8.4 u 9.1.1;

 sputaturi.

7.   IL-KAP TAL-BORD U D-DEWWIEQA

7.1.    Il-kap tal-bord

Il-kap tal-bord għandu jkun persuna mħarrġa kif xieraq li jkollha għarfien espert tat-tipi ta’ żjut li se tiltaqa’ magħhom hija u twettaq xogħolha. Il-kapijiet huma l-persuni ewlenin tal-bord u huma responsabbli għall-organizzazzjoni u t-tmexxija tiegħu.

Ix-xogħol tal-kap tal-bord jitlob taħriġ bażiku fl-għodod tal-analiżi sensorja, ħila sensorja, akkuratezza fit-tħejjija, l-organizzazzjoni u t-twettiq tat-testijiet u ħila u sabar biex jiġu ppjanati t-testijiet u biex dawn jitwettqu b’mod xjentifiku.

Il-kapijiet huma l-uniċi persuni responsabbli għall-għażla tad-dewwieqa u għat-taħriġ u l-monitoraġġ tagħhom sabiex jiġi stabbilit il-livell ta’ kapaċità tagħhom. Għalhekk, huma responsabbli għall-valutazzjoni tad-dewwieqa, li dejjem trid tkun oġġettiva, u li għaliha jridu jiżviluppaw proċeduri speċifiċi bbażati fuq testijiet u fuq kriterji b’saħħithom ta’ aċċettazzjoni u rifjut. Ara l-istandard bir-referenza IOC/T.20/Doc. No 14 imsejjaħ “Gwida għall-għażla ta’ dewwieqa tas-sengħa għaż-żejt taż-żebbuġa verġni u għat-taħriġ u l-monitoraġġ tagħhom”.

Il-kapijiet tal-bord huma responsabbli għall-prestazzjoni tal-bord u għalhekk għall-evalwazzjoni tagħha, u jridu jagħtu provi affidabbli u oġġettivi tagħha. Fi kwalunkwe każ, huma jridu juru f’kull ħin li għandhom kontroll fuq il-metodu u d-dewwieqa. Hija rrakkomandata l-kalibrazzjoni perjodika tal-bord (ara l-paragrafu 5 tal-istandard bir-referenza IOC/T.20/Doc. No 14).

Il-kapijiet għandhom ir-responsabbiltà aħħarija għaż-żamma tar-rekords tal-bord. Dawn ir-rekords iridu jkunu jistgħu jiġu ttraċċati dejjem. Huma jridu jħarsu r-rekwiżiti tal-assigurazzjoni u tal-kwalità stabbiliti fl-istandards internazzjonali għall-analiżi sensorja u jiżguraw l-anonimità tal-kampjuni f’kull ħin.

Huma għandhom ikunu responsabbli għall-inventarji u biex ikun żgurat li l-apparat u t-tagħmir meħtieġ għall-konformità mal-ispeċifikazzjonijiet ta’ dan il-metodu jitnaddaf u jinżamm sewwa u għandhom iżommu prova bil-miktub ta’ dan, kif ukoll tal-fatt li hemm konformità mal-kundizzjonijiet tat-testijiet.

Huma għandu jkollhom l-inkarigu li jirċievu u jaħżnu l-kampjuni malli dawn jaslu fil-laboratorju, kif ukoll li jaħżnuhom wara li jkunu ġew ittestjati. Meta jagħmlu dan, għandhom jiżguraw f’kull ħin li l-kampjuni jibqgħu anonimi u li dawn jinħażnu sewwa, u għal dan il-għan iridu jiżviluppaw proċeduri bil-miktub sabiex jiżguraw li l-proċess kollu jkun jista’ jiġi ttraċċat u jkun joffri l-garanziji x-xierqa.

Barra minn hekk, huma responsabbli għat-tħejjija, il-kodifikazzjoni u l-preżentazzjoni tal-kampjuni lid-dewwieqa, skont disinn sperimentali xieraq f’konformità mal-protokolli stabbiliti minn qabel, kif ukoll għall-ġbir u l-ipproċessar statistiku tad-dejta miksuba mid-dewwieqa.

Huma għandu jkollhom l-inkarigu li jiżviluppaw u jfasslu kwalunkwe proċedura oħra li tista’ tkun meħtieġa biex tikkumplimenta dan l-istandard u biex jiġi żgurat li l-bord jiffunzjona tajjeb.

Iridu jfittxu modi kif iqabblu r-riżultati tal-bord ma’ dawk miksuba minn bordijiet oħrajn li jwettqu l-analiżi taż-żejt taż-żebbuġa verġni sabiex jiċċekkjaw jekk il-bord hux qed jaħdem kif suppost jew le.

Il-kap tal-bord għandu d-dmir jimmotiva l-membri tal-bord billi jħeġġeġ l-interess u l-kurżità tagħhom u billi jinkuraġġixxi spirtu kompetittiv bejniethom. Biex jagħmlu dan, il-kapijiet qed jingħataw parir qawwi li jiżguraw fluss reċiproku u bla problemi ta’ informazzjoni mal-membri tal-bord billi jżommuhom infurmati dwar il-kompiti kollha li huma jwettqu u r-riżultati miksuba. Barra minn hekk, huma għandhom jiżguraw li l-opinjoni tagħhom ma tkunx magħrufa u għandhom jipprevjenu lill-kapijiet possibbli milli jasserixxu l-kriterji tagħhom fuq id-dewwieqa l-oħra.

Huma għandhom ilaqqgħu lid-dewwieqa bil-quddiem biżżejjed u jwieġbu għal kwalunkwe mistoqsija li dawn jista’ jkollhom dwar it-twettiq tat-testijiet, iżda għandhom joqogħdu lura milli jissuġġerulhom kwalunkwe opinjoni fuq il-kampjun.

▼M28

7.1.1.    Il-viċikap tal-bord

B'raġunijiet iġġustifikati, il-kap tal-bord jista' jiġi ssostitwit minn viċikap tal-bord, li jista' jieħu ħsieb il-kompiti tiegħu rigward it-twettiq tat-testijiet. Dan is-sostitut irid ikollu l-ħiliet kollha meħtieġa minn kap tal-bord.

▼M28

7.2.    Dewwieqa

Il-persuni li jaġixxu ta' dewwieqa fit-testijiet organolettiċi fuq iż-żjut taż-żebbuġa għandhom jagħmlu dan b'mod volontarju. Għalhekk, huwa rakkomandabbli li l-kandidati jressqu applikazzjoni bil-miktub. Il-kandidati għandhom jintgħażlu, jitħarrġu u jiġu mmonitorjati mill-kap tal-bord skont il-ħiliet tagħhom li jiddistingwu bejn kampjuni simili; wieħed għandu jiftakar li t-taħriġ se jżidilhom il-preċiżjoni tagħhom.

Id-dewwieqa jridu jaġixxu bħala osservaturi sensorjali reali, u jridu jinsew il-gosti personali tagħhom waqt it-testijiet u jirrappurtaw biss is-sensazzjonijiet li jipperċepixxu. Biex jagħmlu dan, għandhom jaħdmu dejjem fis-silenzju, b'mod rilassat u mingħajr għaġla, filwaqt li jagħtu l-ikbar attenzjoni sensorjali possibbli lill-kampjun li jkunu qed iduqu.

Għal kull test hemm bżonn bejn 8 u 12-il dewwieq, għalkemm huwa għaqli li jkun hemm xi ftit aktar dewwieqa f'riżerva sabiex jiġu koperti l-assenzi li jistgħu jinqalgħu.

▼M26

8.   KUNDIZZJONIJIET TAT-TESTIJIET

8.1.    Preżentazzjoni tal-kampjun

Il-kampjun taż-żejt għall-analiżi għandu jiġi ppreżentat f’tazzi standardizzati għad-dewqan li jikkonformaw mal-istandard bir-referenza IOC/T.20/Doc. No 5 msejjaħ “It-tazza għad-dewqan taż-żejt”.

It-tazza għandu jkun fiha bejn 14 u 16-il ml żejt, jew bejn 12,8 u 14.6 g jekk il-kampjuni għandhom jintiżnu, u għandha tkun mgħottija b’watch-glass.

Kull tazza għandha tiġi mmarkata b’kodiċi magħmul minn ċifri jew minn kombinazzjoni ta’ ittri u ċifri magħżulin b’mod aleatorju. Il-kodiċi se jiġi mmarkat b’sistema li ma jkollhiex irwejjaħ.

8.2.    Temperatura tat-test u tal-kampjun

Il-kampjuni taż-żejt maħsubin għad-dewqan għandhom jinżammu fit-tazzi f’temperatura ta’ 28 °C ± 2 °C matul it-test kollu. Din it-temperatura ntgħażlet għaliex din tagħmilha aktar faċli li wieħed josserva d-differenzi organolettiċi milli kieku t-test isir f’temperatura ambjentali u minħabba li f’temperaturi iktar baxxi, il-komposti aromatiċi partikulari għal dawn iż-żjut ma jsirux volatili sewwa filwaqt li temperaturi ogħla jwasslu għall-formazzjoni ta’ komposti volatili partikuari għaż-żjut imsaħħnin. Ara l-istandard bir-referenza IOC/T.20/Doc. No 5 msejjaħ “It-tazza għad-dewqan taż-żejt” għall-metodu li għandu jintuża biex il-kampjuni jissaħħnu meta jkunu fit-tazza.

Il-kamra fejn isiru t-testijiet irid ikollha temperatura li tkun bejn 20 °C u 25 °C (ara l-istandard bir-referenza IOC/T.20/Doc. No 6).

8.3.    Ħinijiet tat-test

L-aħjar ħin biex wieħed iduq iż-żjut huwa filgħodu. Ġie ppruvat li hemm perjodi ottimi għall-perċezzjoni tat-togħma u r-riħa matul il-jum. Qabel l-ikel ikun hemm perjodu ta’ ħin li matulu tiżdied is-sensittività tas-sensi tax-xamm u tat-togħma, filwaqt li wara l-ikel din il-perċezzjoni tonqos.

Madankollu, dan il-kriterju m’għandux jinżamm sal-estrem li l-ġuħ itellef lid-dewwieqa f’xogħolhom u b’hekk tonqos il-kapaċità tagħhom li jiddistingwu l-kampjuni. Għaldaqstant, huwa rrakkomandat li s-sessjonijiet tad-dewqan isiru bejn l-għaxra ta’ filgħodu u nofsinhar.

8.4.    Id-dewwieqa: regoli ġenerali ta’ mġiba

Ir-rakkomandazzjonijiet li ġejjin japplikaw għall-imġiba tad-dewwieqa matul xogħolhom.

Meta l-kap tal-bord isejħilhom biex jieħdu sehem f’test organolettiku, id-dewwieqa għandhom ikunu jistgħu jattendu fil-ħin stabbilit minn qabel u għandhom iħarsu r-regoli li ġejjin:

 M’għandhomx ipejpu jew jixorbu l-kafè għal mill-inqas 30 minuta qabel il-ħin stabbilit tat-test.

 Ma jridux jużaw fwejjaħ, kosmetiċi jew sapun li r-riħa tagħhom tista’ ddum fuqhom sal-ħin tat-test. Iridu jużaw sapun mingħajr fwieħa biex jaħslu jdejhom u mbagħad għandhom ilaħalħuhom u jnixxfuhom kemm ikun hemm bżonn biex jeliminaw kull riħa.

 Għandhom isumu għal mill-inqas siegħa qabel id-dewqan.

 Jekk ma jkunux jifilħu, u b’mod partikulari jekk ikun effettwat is-sens tax-xamm u tat-togħma tagħhom, jew jekk ikunu qed isofru minn effetti psikoloġiċi li ma jħalluhomx jikkonċentraw fuq xogħolhom, id-dewwieqa m’għandhomx iduqu ż-żjut u għandhom jgħarrfu lill-kap tal-bord kif xieraq.

 Meta d-dewwieqa jkunu kkonformaw mar-regoli mogħtija hawn fuq, għandhom jieħdu posthom fil-kabina allokata għalihom fil-kwiet u bl-ordni.

 Huma għandhom jaqraw sewwa l-istruzzjonijiet mogħtija fuq il-folja tal-profil u għandhom jibdew jeżaminaw il-kampjun sa ma jkunu lesti għalkollox biex iwettqu l-kompitu tagħhom (jiġifieri sa ma jkunu rrilassati u mingħajr għaġla). Jekk ikollhom xi dubju, għandhom jikkonsultaw lill-kap tal-bord fil-privat.

 M’għandhomx jitkellmu huma u jwettqu xogħolhom.

 Għandhom iżommu l-mowbajl tagħhom mitfi l-ħin kollu sabiex ma jtellfux lill-kollegi tagħhom f’xogħolhom u ma jtellfulhomx il-konċentrazzjoni tagħhom.

9.   IL-PROĊEDURA GĦALL-VALUTAZZJONI ORGANOLETTIKA TAŻ-ŻEJT TAŻ-ŻEBBUĠA VERĠNI U GĦALL-KLASSIFIKA TIEGĦU

9.1.    It-teknika tad-dewqan

▼M29

9.1.1. Id-dewwieqa għandhom jaqbdu t-tazza, iżommuha mgħottija bil-watch-glass u jgħawġuha bil-mod; imbagħad għandhom idawru t-tazza kompletament f'din il-pożizzjoni sabiex ixarrbuha kemm jista' jkun minn ġewwa. Ladarba jlestu dan l-istadju, għandhom ineħħu l-watch-glass u jxommu l-kampjun, filwaqt li jieħdu nifsijiet fil-fond bil-mod sabiex jevalwaw iż-żejt. M'għandhomx idumu iktar minn 30 sekonda jxommu ż-żejt. Jekk f'dan il-ħin ma jkun irnexxielhom jaslu għall-ebda konklużjoni, għandhom jieqfu għal waqfa qasira ta' mistrieħ qabel ma jerġgħu jippruvaw.

Meta jsir it-test tax-xamm, id-dewwieqa għandhom jevalwaw is-sensazzjonijiet ta' ġol-ħalq (is-sensazzjonijiet ġenerali retronażali tax-xamm, tat-togħma u dawk tattili). Sabiex jagħmlu dan, għandhom jieħdu bejn wieħed u ieħor 3 ml ta' żejt. Huwa importanti ħafna li ż-żejt jitqassam fil-kavità kollha tal-ħalq, mill-parti ta' quddiem tal-ħalq u tal-ilsien tul il-ġnub għall-parti ta' wara u għall-parti li tappoġġa l-palat u l-gerżuma, minħabba li huwa fatt magħruf li l-perċezzjoni tas-sensazzjonijiet tat-togħma u tattili jvarjaw fl-intensità tagħhom skont iż-żona tal-ilsien, tal-palat u tal-gerżuma.

Għandu jiġi enfasizzat li huwa essenzjali li jinfirex ammont suffiċjenti taż-żejt bil-mod ħafna fuq in-naħa ta' wara tal-ilsien lejn il-parti li tappoġġa l-palat u l-gerżuma waqt li d-dewwieq jikkonċentra fuq l-ordni li fiha jidhru l-istimuli tat-togħma morra u qawwija. Jekk dan ma jsirx, f'ċerti żjut dawn iż-żewġ stimuli jistgħu ma jiġux innutati jew inkella l-istimulu tat-togħma qawwija jista' jgħatti 'l dak tat-togħma morra.

Il-fatt li d-dewwieq jieħu nifsijiet qosra wieħed wara l-ieħor u jiġbed in-nifs mill-ħalq jippermettilu mhux biss li jifrex il-kampjun b'mod estensiv mal-ħalq kollu, iżda wkoll li jinnota l-komposti aromatiċi volatili permezz tan-naħa ta' wara tal-imnieħer billi jġiegħel lill-ġisem juża 'l dan il-kanal.

N.B. Meta d-dewwieqa ma jipperċepixxu l-ebda togħma ta' frott fil-kampjun u l-intensità tal-valur tal-attribut negattiv li jikklassifika tkun ta' 3,5 jew inqas, il-kap tal-bord jista' jiddeċiedi jagħmel arranġamenti biex id-dewwieqa janalizzaw mill-ġdid il-kampjun fit-temperatura ambjentali (COI/T.20/Doc. No 6/Rev. 1, Settembru 2007, it-taqsima 3 — Speċifikazzjonijiet ġenerali għall-installazzjoni ta' kamra tat-testijiet) filwaqt li jispeċifika l-kuntest u l-kunċett tat-temperatura ambjentali. Meta l-kampjun jilħaq temperatura tal-kamra, id-dewwieqa għandhom jivvalutaw mill-ġdid biex jivverifikaw biss jekk ikunx ipperċepit l-attribut tat-togħma tal-frott. Jekk dan ikun il-każ, dawn għandhom jimmarkaw l-intensità tiegħu fuq l-iskala.

Għandha titqies is-sensazzjoni tattili ta' togħma qawwija. Għal dan l-għan huwa rrakkomandat li d-dewwieqa jibilgħu ż-żejt.

▼M26

9.1.2. Meta tkun qed issir il-valutazzjoni organolettika taż-żejt taż-żebbuġa verġni, huwa rrakkomandat li f’kull sessjoni jiġu vvalutati mhux aktar minn ERBA’ KAMPJUNI, u li ma jsirux aktar minn tliet sessjonijiet kuljum, sabiex jiġi evitat l-effett ta’ kuntrast li jista’ jinħoloq meta wieħed iduq immedjatament kampjuni oħrajn.

Minħabba li d-dewqan suċċessiv jgħajja lid-dewwieqa u jwassal għal nuqqas ta’ sensittività kkawżat mill-kampjuni ta’ qabel, jeħtieġ jintuża prodott li jista’ jneħħi ż-żejt li jibqa’ fil-ħalq mis-sessjoni ta’ dewqan ta’ qabel.

Huwa rakkomandat li wieħed juża biċċa tuffieħa li, wara li d-dewwieq jomgħodha, tkun tista’ tintrema fl-isputatur. Imbagħad id-dewwieq għandu jlaħlaħ ħalqu bi ftit ilma f’temperatura ambjentali. Għandu jkun hemm perjodu ta’ mill-inqas 15-il minuta bejn tmiem sessjoni u l-bidu ta’ oħra.

9.2.    L-użu tal-folja tal-profil min-naħa tad-dewwieqa

Il-folja tal-profil li għandha tintuża mid-dewwieqa hija mogħtija fid-dettall fil-Figura 1 ta’ dan l-Anness.

Kull dewwieq li jifforma parti mill-Bord għandu l-ewwel ixomm imbagħad itiegħem ( 5 ) iż-żejt ikkonċernat. Id-dewwieqa mbagħad għandhom idaħħlu l-intensità li biha jqisu kull attribut negattiv u pożittivi fuq l-iskala ta’ 10-ċm murija fil-folja tal-profil mogħtija.

Jekk huma jinnutaw kwalunkwe attribut negattiv li mhux imniżżel fit-Taqsima 4, għandhom iniżżluhom fit-taqsima msejħa “Oħrajn”, billi jużaw it-terminu jew it-termini li jiddeskrivu l-attributi bl-aktar mod preċiż.

▼M28

9.3.    L-użu tad-dejta mill-kapijiet tal-bord

Il-kap tal-bord għandu jiġbor il-folji tal-profil li kull dewwieq ikun mela, u għandu janalizza mill-ġdid l-intensità assenjata lill-attributi differenti. Jekk isib xi anomalija, għandu jistieden lid-dewwieq jirrevedi l-folja tal-profil tiegħu u, jekk ikun meħtieġ, jirrepeti t-test.

Il-kap tal-bord għandu jdaħħal id-dejta tal-valutazzjoni ta' kull membru tal-bord fi programm tal-kompjuter bħal dak mogħti fl-istandard IOC/T.20/Doc. Nru 15, sabiex ikun jista' jikkalkula r-riżultati tal-analiżi b'mod statistiku, abbażi tal-kalkolu tal-valur medjan tagħhom. Ara l-punt 9.4 u l-Appendiċi ta' dan l-Anness. Id-dejta għal kampjun partikolari għandha tiddaħħal bl-għajnuna ta' matriċi magħmula minn disa' kolonni li jirrappreżentaw id-disa' attributi sensorjali, u numru ta' linji n li jirrappreżenta l-għadd n ta' membri tal-bord użati.

Meta jinstab difett u tal-inqas 50 % tal-bord ikunu daħħluh fit-taqsima msejħa “Oħrajn”, il-kap tal-bord għandu jikkalkula l-valur medjan tad-difett, u għandu jasal għall-klassifika korrispondenti.

Il-valur tal-koeffiċjent qawwi tal-varjazzjoni li jiddefinixxi l-klassifika (difett bl-akbar intensità u bl-attribut tat-togħma ta' frott) m'għandux ikun ta' aktar minn 20 %.

Jekk is-sitwazzjoni tkun bil-kontra, il-kap tal-bord għandu jirrepeti l-evalwazzjoni tal-kampjun speċifiku f'sessjoni oħra tad-dewqan.

Jekk din is-sitwazzjoni tinqala' ta' spiss, huwa rakkomandat li l-kap tal-bord jagħti lid-dewwieqa taħriġ speċifiku addizzjonali (IOC/T.20/Doc. No 14, § 5), u li juża l-indiċi tar-ripetibbiltà u l-indiċi tad-devjazzjoni biex jivverifika l-prestazzjoni tad-dewwieq (IOC/T.20/Doc. No 14, § 6).

▼M29

9.4.    Il-klassifika taż-żejt

Iż-żejt għandu jiġi kklassifikat kif ġej, skont il-valur medjan tad-difetti u l-valur medjan tal-attribut tat-togħma tal-frott. Il-valur medjan tad-difetti huwa ddefinit bħala l-valur medjan tad-difett innutat bl-akbar intensità. Il-valur medjan tad-difetti u l-valur medjan tal-attribut tat-togħma tal-frott jingħataw bħala numri b'ċifra waħda wara l-punt deċimali.

Iż-żejt jiġi kklassifikat billi l-valur medjan tad-difetti u l-valur medjan tal-attribut tat-togħma tal-frott jitqabblu mal-firxiet ta' valuri ta' referenza mogħtija hawn taħt. L-iżball tal-metodu tqies meta kienu qed jiġu stabbiliti l-limiti ta' dawn il-firxiet u allura dawn għandhom jitqiesu bħala assoluti. Il-pakketti ta' softwer tal-kompjuter jippermettu li l-klassifika tintwera fil-forma ta' tabella bid-dejta statistika jew fil-forma ta' graff.

(a) Żejt taż-żebbuġa straverġini il-valur medjan tad-difetti huwa 0 u l-valur medjan tal-attribut tat-togħma ta' frott huwa ta' iktar minn 0;

(b) Żejt taż-żebbuġa verġni: il-valur medjan tad-difetti huwa ta' iktar minn 0 iżda ta' mhux iktar minn 3,5 u l-valur medjan tal-attribut tat-togħma ta' frott huwa ta' iktar minn 0;

(c) Żejt taż-żebbuġa lampante: il-valur medjan tad-difetti huwa ta' iktar minn 3,5 jew huwa ta' 3,5 jew inqas, u l-valur medjan tal-attribut tat-togħma ta' frott huwa ta' 0.

Nota 1:  Meta l-valur medjan tal-attribut tat-togħma morra u/jew qawwija jkun ta' iktar minn 5,0, il-kap tal-bord għandu jiddikjara dan fuq iċ-ċertifikat tat-test.

Fil-każ tal-valutazzjonijiet imwettqa għall-kontroll tal-konformità, għandu jsir test wieħed. Fil-każ ta' kontrovalutazzjonijiet, l-analiżi trid titwettaq darbtejn u f'sessjonijiet tad-dewqan differenti; Ir-riżultati tal-analiżi duplikata jridu jkunu omoġenji b'mod sistematiku. (Ara l-punt 9.5). Jekk le, il-kampjun għandu jerġa' jiġi analizzat mill-ġdid darbtejn. Il-valur finali tal-medjan tal-attributi tal-klassifikazzjoni se jkun ikkalkulat billi tintuża l-medja taż-żewġ valuri medjani.

▼M29

9.5    Kriterji għall-aċċettazzjoni u r-rifjut ta' duplikati

Għandu jintuża l-errur normalizzat, li huwa ddefinit hawn taħt, biex jiġi stabbilit jekk żewġ riżultati ta' analiżi duplikata jkunux omoġenji jew statistikament aċċettabbli:

image

Fejn Me1 u Me2 huma l-valuri medjani taż-żewġ duplikati (rispettivament l-ewwel u t-tieni analiżi) u U1 u U2 huma l-inċertezzi estiżi miksuba għal dawn iż-żewġ valuri, ikkalkolati hekk kif speċifikat fl-Appendiċi:

U 1 = c × s* and image

Għall-inċertezza estiża, c = 1,96; għalhekk:

U1 = 0,0196 × CVr × Me1

fejn CVr huwa l-koeffiċjent qawwi tal-varjazzjoni.

Biex ikun iddikjarat li ż-żewġ valuri miksuba mhumiex statistikament differenti, En irid tkun ta' 1,0 jew inqas.

▼M26




Appendiċi

Metodu għall-kalkolu tal-valur medjan u tal-intervalli ta’ kunfidenza

Il-valur medjan

image

Il-valur medjan huwa ddefinit bħala n-numru reali Xm ikkaratterizzat mill-fatt li l-probabbiltà (p) li l-valuri ta’ distribuzzjoni (X) ikunu inqas minn dan in-numru (Xm) hija ta’ 0,5 jew inqas u mill-fatt li, fl-istess ħin, il-probabbiltà (p) li l-valuri ta’ distribuzzjoni (X) ikunu daqs Xm jew inqas hija ta’ 0,5 jew iktar minn hekk. Definizzjoni iktar prattika hija li l-valur medjan huwa l-50 perċentil ta’ distribuzzjoni tan-numri rranġati f’ordni dejjem tiżdied. F’termini aktar sempliċi, dan huwa l-valur tan-nofs ta’ sett ordnat ta’ numri bil-fard, jew il-medja ta’ żewġ valuri tan-nofs ta’ sett ordnat ta’ numri biż-żewġ.

Id-devjazzjoni standard b’saħħitha

Sabiex wieħed jasal għal stima affidabbli tal-varjabbiltà madwar il-medja, jeħtieġ li wieħed jirreferi għad-devjazzjoni standard b’saħħitha kif stmata skont Stuart u Kendall (4). Il-formula tagħti d-devjazzjoni standard b’saħħitha asintotika, jiġifieri l-istima b’saħħitha tal-varjabbiltà tad-dejta kkunsidrata, fejn N huwa l-għadd ta’ ossrvazzjonijiet u IQR hija l-firxa interkwartali li tiġbor fiha eżattament 50 % tal-każijiet ta’ distribuzzjoni partikulari tal-probabbiltà:

image

Il-firxa interkwartali tiġi kkalkulata billi wieħed jikkalkula d-daqs tad-differenza bejn il-75 perċentil u l-25 perċentil.

image

Fejn il-perċentil huwa l-valur Xpc ikkaratterizzat mill-fatt li l-probabbiltà (p) li l-valuri ta’ distribuzzjoni jkunu inqas minn Xpc hija daqs valur wieħed minn mija speċifiku jew inqas u mill-fatt li, fl-istess ħin, il-probabbiltà (p) li l-valuri ta’ distribuzzjoni jkunu daqs Xpc jew inqas hija daqs dak il-valur wieħed minn mija speċifiku jew iktar minn hekk. Il-valur wieħed minn mija jindika l-frazzjoni tad-distribuzzjoni magħżula. Fil-każ tal-valur medjan dan huwa ta’ 50/100.

image

Għal skopijiet prattiċi, il-perċentil huwa l-valur ta’ distribuzzjoni li jikkorrispondi għal erja speċifika li tiġi quddiem il-kurva tad-distribuzzjoni jew tad-densità. Pereżempju, il-25 perċentil jirrappreżenta l-valur tad-distribuzzjoni li jikkorrispondi għal erja ta’ 0,25 jew ta’ 25/100.

F’dan il-metodu, il-perċentili jiġu kkalkulati abbażi tal-valuri reali li jidhru fil-matriċi tad-dejta (il-proċedura għall-kalkolu tal-perċentili).

Il-koeffiċjent b’saħħtu tal-varjazzjoni (f’perċentwali)

Il-valur ta’ CVr% jirrappreżenta numru pur li jindika l-perċentwali ta’ varjabbiltà tas-sett ta’ numri analizzat. Għalhekk, dan il-valur huwa utli ħafna biex wieħed jiċċekkja l-affidabbiltà tal-membri tal-bord.

image

L-intervalli ta’ kunfidenza tal-valur medjan f’95 %

L-intervalli ta’ kunfidenza f’95 % (valur tal-iżball tal-ewwel tip ta’ 0.05 jew 5 %) jirrappreżentaw l-intervall li fih il-valur tal-valur medjan ikun jista’ jvarja li kieku jkun possibbli li wieħed jirrepeti l-esperiment għal għadd infinit ta’ drabi. Fil-prattika, dawn jindikaw l-intervall ta’ varjabbiltà tat-test fil-kundizzjonijiet tat-tħaddim adottati, jekk wieħed jibda t-test bis-suppożizzjoni li huwa possibbli li dan jiġi ripetut diversi drabi. Bħal fil-każ tal-valur ta’ CVr%, l-intervall jgħin biex wieħed jivvaluta l-affidabbiltà tat-test.

image

image

fejn C = 1.96 għall-intervall ta’ kunfidenza fil-livell ta’ 95 %.

L-Anness I tal-istandard bir-referenza IOC/T 20/Doc. No 15 jagħti eżempju tal-folja tal-kalkolu.

Referenzi

(1) Wilkinson, L. 1990. Systat: The system for statistics (“Systat. Is-sistema għall-istatistika”). Evanston, IL.SYSTAT Inc.

(2) Cicchitelli, G. 1984. Probabilità e Statistica (“Il-probabbiltà u l-istatistika”). Maggioli Editore, Rimini.

(3) Massart, D.L.; Vandeginste, B.G.M.; Deming, Y.; Michotte, L. 1988. Chemometrics. A textbook (“Il-kimometrija. Ktieb akkademiku”). Elsevier. Amsterdam.

(4) Kendall, M.G.; Stuart, A. 1967. The advanced theory of statistics. Vol. 1 (“It-teorija avvanzata tal-istatistika. L-ewwel volum”). Hafner Publishing Co.

(5) McGill, R.; Tukey, J.W.; Larsen, W.A. 1978. Variation of Box Plots (“Il-varjazzjoni tal-plotts tal-kaxex”). The American Statistician, 32, (2), 12-16.

(6) IOC/T.28/Doc. No 1 ta’ Settembru tal-2007, Il-linji gwida għall-akkreditazzjoni tal-laboratorji għat-testijiet sensorji b’referenza partikulari għaż-żejt taż-żebbuġa verġni skont l-istandard tal-ISO/IEC 17025:2005.

(7) IOC/T.20/Doc. No 14.

(8) IOC/T.20/Doc. No 15.

(9) ISO/IEC 17025:05.

▼M20 —————

▼M19 —————

▼B




ANNESS XV

1.   KONTENUT TA’ ŻEJT TAL-FDAL TAŻ-ŻEBBUĠ

1.1.   Apparat

 apparat xieraq ta’ estrazzjoni mgħammar bi flixkun b’qiegħ tond ta’ 200 sa 250 ml,

 msaħħan bl-elettriku (eż, banju bir-ramel, banju bl-ilma) jew hotplate,

 bilanċ analitiku,

 forn irregolat sa massimu ta’ 80 oC,

 forn msaħħan bl-elettriku mgħammar b’apparat termostatiku rregolat sa 103 ±2 oC u ieħor li minnu jista’ jiġi mgħoddi kurrent ta’ arja jew li jista’ jitħaddem bi pressjoni mnaqqsa

 mitħna mekkanika, faċli biex titnaddaf, u waħda li tippermetti it-tħin tal-fdalijiet taż-żebbuġ mingħajr żjieda fit-temperatura jew xi tibdil li jinħass fil-kontenut ta’ umdità tagħhom, fil-materja volatili jew fis-sostanzi li jistgħu jiġu estratti bil-hexane.

 ħolqa ta’ estrazzjoni u tajjar jew karta filtru li jkunu diġà tneħħew minnhom sostanzi li jistgħu jiġu estratti bil-hexane,

 dessikatur,

 passatur b’toqob ta’ djametru ta’ 1 mm,

 partikoli żgħar ta’ ħaffiefa imnixxfa minn qabel.

1.2.   Reaġent

Hexane normali, ta’ grad tekniku, li għandu jħalli fdal ta’ anqas minn 0,002 g kull 100 ml, meta jevapora kollu.

2.   PROĊEDURA

2.1.   Tħejjija tal-kampjun tat-test.

Jekk ikun hemm bżonn, uża l-mitħna mekkanika, li qabel tkun ġiet imnaddfa sew, biex tidħan il-kampjun tal-laboratorju sabiex tfarrku fi frak li jkun jista’ jgħaddi għal kollox mill-għarbiel.

Uża madwar waħda minn għoxrin biċċa tal-kampjun biex ittemm il-proċess tat-tindif tal-mitħna, armi l-materjal mitħun, itħan li jibqa’ u iġbor, ħallat bir-reqqa u analizza mingħajr dewmien.

2.2.   Porzjon tat-test

Malli tintemm l-operazzjoni tat-tħin, iżen madwar 10 g tal-kampjun sa l-eqreb 0,01 g għall-ittestjar.

2.3.   Tħejjija tat-tubu ta’ estrazzjoni

Qiegħed il-porzjon tat-test fit-tubu u sodd bit-tajjar. Jekk tiġi wżata karta filtru, qartas il-porzjon tat-test fiha.

2.4.   Tnixxif preliminari

Jekk il-fdal taż-żebbuġ huwa niedi ħafna (i.e., umdità u kontenut materjali volatili aktar minn 10 %), wettaq it-tnixxif preliminari billi tpoġġi l-ħolqa mgħobbija (jew karta filtru) fil-forn imsaħħan għal żmien xieraq f’temperatura ta’ mhux aktar minn 80 oC sabiex tnaqqas l-umdità u l-kontenut materjali volatili għal anqas minn 10 %.

2.5.   Tħejjija tal-flask bil-qiegħ tond

Iżen sa l-eqreb 1 mg il-flask li fih partikola waħda jew tnejn mill-ħaffiefa, imnixxfa minn qabel fil-forn f’103 ± 2 °C imbagħad mkessħa f’dessikatur għal mhux anqas minn siegħa.

2.6.   Estrazzjoni tal-bidu

Fl-apparat ta’ estrazzjoni deffes il-ħolqa (jew il-karta filtru) li fiha hemm il-porzjon tat-test. Ferragħ il-kwantita meħtieġa ta’ hexane fil-flask. Qiegħed il-flask fl-apparat ta’ estrazzjoni u qiegħed kollox fuq il-banju msaħħan b’mod elettriku. Irregola r-rata tas-sħana b’mod li r-rata ta’ rifluss ma tkunx anqas minn tliet qatriet kull sekonda (togħlija moderata, mhux bil-qawwa). Wara erba’ sigħat ta’ estrazzjoni, ħalliħ jiksaħ. Neħħi l-ħolqa mill-apparat ta’ estrazzjoni u qegħdha f’kurrent ta’ arja biex tneħħi ħafna mis-solvent li jkun ippenetra.

2.7.   It-tieni estrazzjoni

Aqleb il-kontenut tal-ħolqa fil-micro-grinder u itħan fin kemm jista’ jkun. Qiegħed lura t-taħlita mitħuna fil-ħolqa minngħajr ma twaqqa’ u poġġiha lura fl-apparat ta’ estrazzjoni.

Issokta bl-estrazzjoni għal sagħtejn oħra billi tuża l-istess flask bil-qiegħ tond li fih hemm l-estratt tal-bidu.

Is-soluzzjoni miksuba fil-flask ta’ estrazzjoni trid tkun ċara. Jekk le, iffiltra minn karta filtru u aħsel il-flixkun oriġinali u l-karta filtru għal bosta drabi bil-hexane. Iġbor il-filtrat u s-solvent tal-ħasil fi flask ieħor bil-qiegħ tond li jkun ġie mnixxef u ttarat sa l-eqreb 1 mg.

2.8.   Tneħijja tas-solvent u l-użin tal-estratt.

Neħħi l-parti l-kbira tas-solvent billi tiddistilla fuq banju imsaħħan bl-elettriku. Neħħi l-aħħar traċċi tas-solvent billi ssaħħan il-flask fil-forn f’103 ± 2 oC għal 20 minuta. Għin il-proċess ta’ eliminazzjoni jew billi tonfoħ l-arja fih, jew preferibbilment xi gass inerti, f’intervalli jew billi tuża pressjoni mnaqqsa

Ħalli l-flixkun f’dessikatur biex jiksaħ għal mill-inqas siegħa w iżen sa l-eqreb 1 mg.

Erġa’ saħħan għal 10 minuti taħt l-istess kondizzjonijiet, kessaħ f’dessikatur u erġa’ iżen.

Id-differenza bejn iż-żewġ piżijiet ma għandix taqbeż 10 mg. Jekk jiġri hekk, erġa’ saħħan għal perjodi ta’ 10 minuti u wara kessaħ u iżen sakemm id-differenza fil-piż tkun 10 mg jew inqas. Ħu nota tal-aħħar piż tal-flixkun.

Wettaq determinazzjonijiet doppji fuq il-kampjun tat-test.

3.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI:

3.1.   Metodu ta’ determinazzjoni u l-formula

(a) L-estratt mfisser bħala perċentwali bil-piż tal-prodott kif irċevut huwa ugwali għal:

image



fejn:

S ja l-perċentwali bil-piż ta’ estratt tal-prodott kif irċevut,

m0 = wa l-piż, fi grammi, tal-porzjon tat-test,

m1 = huwa l-piż, fi grammi, tal-estratt wara li jinxef,

Ħu bħala riżultat il-medja aritmetika tal-determinazzjonijiet duplikati, sakemm il-kondizzjonijiet ta’ ripetibilità jiġu sodisfatti.

Agħti r-riżultat sa punt deċimali wieħed.

(b) L-estratt huwa mfisser fuq bażi ta’ materja niexfa bl-użu tal-formula:

image

fejn

:

S = il-perċentwali ta’ estratt permezz tal-prodott kif irċevut (ara (a)),AT

U = hija l-umdità u l-kontenut tal-materja volatili.

3.2.   Ripetibilità

Id-differenza bejn il-determinazzjonijiet duplikati mwettqa fl-istess ħin jew eżatt wara xulxin mill-istess analista ma għandiex taqbeż 0,2 g ta’ estratt ta’ hexane għal kull 100 g ta’ kampjun.

Jekk din il-kondizzjoni ma tiġix sodisfatta, irrepeti l-analiżi fuq żewġ porzjonijiet oħra tat-test. Jekk, anki f’dan il-każ, id-differenza taqbeż 0,2 g, ħu bħala riżultat il-medja aritmetika tal-erba’ determinazzjonijiet.




ANNESS XVI

DETERMINAZZJONI TAL-VALUR TA’ JODJU

1.   SKOP

Dan l-Istandard Internazzjonali jispeċifika metodu għad-determinazzjoni tal-valur ta’ jodju tax-xaħmijiet u żjut tal-annimali u veġetali, minn issa ’l quddiem imsejjħin xaħmijiet.

2.   DEFINIZZJONI

Għall-għanijiet ta’ dan l-Istandard Internazzjonali, tapplika d-definizzjoni li ġejja:

2.1.

valur ta’ jodju. Il-piż ta’ jodju assorbit mill-kampjun taħt il-kondizzjonijiet ta’ tħaddim speċifikati f’dan l-I standard Internazzjonali.

Il-valur ta’ jodju huwa mfisser bħala grammi ta’ jodju għal 100 g ta’ kampjun

3.   PRINĊIPJU

Dissoluzzjoni ta’ porzjon tat-test f’solvent u ż-żjieda tar-reaġent Wijs. Wara ħin speċifikat, żjieda ta’ soluzzjoni ta’ jodju tal-potassju w ilma, u titrazzjoni tal-jodju liberat b’soluzzjoni ta’ sodium thiosulfate.

4.   REAĠENTI

Ir-reaġenti kollha għandhom ikunu ta’ grad analitiku magħruf:

4.1.

ilma, li jissodisfa l-kondizzjonijiet meħtieġa ta’ ISO 3696, Grad 3.

4.2.

jodur tal-potassju, soluzzjoni 100 g/l, li ma fihiex jodat jew jodju ħieles.

4.3.

lamtu, soluzzjoni.

Ħallat 5 g ta’ lamtu li jinħall fi 30 ml ta’ ilma, żid din it-taħlita ma’ 1 000 ml ta’ ilma jagħli, agħalli għal tliet minuti u ħallih jiksaħ.

4.4.

soluzzjoni volumetrika standard c (Na2S2O3.5H2O) ta’ s odium thiosulfate = 0,1 mol/l, standardizzata mhux aktar minn sebat ijiem qabel l-użu.

4.5.

solvent, imħejji bit-taħlit ta’ volumi ugwali ta’ cyclohexane u aċidu aċetiku.

4.6.

Reaġent Wijs, li fih il-monoklorur tal-jodju fl-aċidu aċetiku. Għandu jintuża r-reaġent Wijs disponibbli kummerċjalment.

5.   APPARAT

Apparat tal-laboratorju tas-soltu u, b’mod partikolari, dan li ġej:

5.1.

sassla tal-ħġieġ għall-użin, xierqa għall-porzjon tat-test u biex tiddeffes fil-flasks (6.2).

5.2.

flasks koniċi li jesgħu 500 ml, b’tappijiet tal-ħġieġ immolat u xotti għal kollox.

6.   TĦEJJIJA TAL-KAMPJUN TAT-TEST

Il-kampjun omoġenizzat jitnixxef fuq is-sulfat tas-sodju u jiġi ffiltrat.

7.   PROĊEDURA

7.1.

Porzjon tat-test

Il-piż tal-porzjon tat-test ivarja skond il-valur ta’ jodju mistenni kif muri fit-Tabella 1.



Tabella 1.

Várhat’ “j” 'dszám

A vizsgált mennyiség tömege

(ġ)

kevesebb, mint 5

3,00

5-20

1,00

21-50

0,40

51-100

0,20

101-150

0,13

151-200

0,10

Iżen il-porzjon tat-test sa l-eqreb 0,1 mg f’sassla tal-użin tal-ħġieġ (5.1).

7.2.

Determinazzjoni

Qiegħed il-porzjon tat-test fi flask ta’ 500 ml (6.2). Żid 20 ml tas-solvent (4.5) biex iddewweb ix-xaħam. Żid eżattament 25 ml tar-reaġent Wijs (4.6), poġġi t-tapp, għati dawra lill-kontenut u qiegħed il-flixkun fid-dlam. Tużax pipetta tal-ħalq għar-reaġent Wijs.

Bl-istess mod, ħejji blank bis-solvent u r-reaġent iżda mingħajr il-porzjon tat-test.

Għal kampjuni li għandhom valur ta’ jodju taħt il-150, ħalli l-flasks fid-dlam għal siegħa, għal dawk b’valur ta’ jodju ’l fuq minn 150 u għal prodotti polimerizzati jew prodotti ossidati sa ċertu punt, ħallihom għal sagħtejn.

Meta jgħaddi l-ħin, żid 20 ml ta’ soluzzjoni (4.2) ta’ jodur tal-potassju u 150 ml ta’ ilma (4.1) f’kull flask

Ittitra bis-soluzzjoni volumetrika standard (4.4) ta’ sodium thiosulfate sakemm l-isfar ta l-jodju kważi jisparixxi. Żid erba’ qatriet mis-soluzzjoni tal-lamtu (4.3) u ssokta bit-titrazzjoni sakemm l-ikħal jisparixxi wara taħwid bis-saħħa ħafna.

Nota: Determinazzjoni potenzjometrika tal-punt aħħari hija permissibbli.

7.3.

Numru ta’ determinazzjonijiet

Wettaq żewġ determinazzjonijiet fuq l-istess kampjun tat-test.

8.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI:

Il-valur tal-jodju jingħata bit-tifsira

image

fejn:

ċ

=

huwa l-valur numeriku tal-konċentrazzjoni eżatta, f’moli għal kull litru, tas-soluzzjoni volumetrika standard (4.4) ta’ sodium thiosulfate wżat;

V1

=

huwa l-valur numeriku tal-volum, f’millimetri, tas-soluzzjoni volumetrika standard (4.4) ta’ sodium thiosulfate wżat għall-blank test;

V2

=

huwa l-valur numeriku tal-volum, f’millimetri, tas-soluzzjoni volumetrika standard (4.4) ta’ sodium thiosulfate użat għad-determinazzjoni;

m

=

huwa l-valur numeriku tal-piż, fi grammi, tal-porzjon tat-test (7.1).

Ħu bħala riżultat il-medja aritmetika taż-żewġ determinazzjonijiet, sakemm il-ħtiġiet ta’ ripetibilità (9.2) jiġu sodisfatti.

▼M11




ANNESS XVII

METODU GĦAD-DETERMINAZZJONI TAS-STIGMASTADIENES FIŻ-ŻJUT TAL-ĦAXIX

1.   INTENZJONI

Determinazzjoni tas-stigmastadienes fiż-żjut tal-ħaxix li jkollhom konċentrazzjonijiet baxxi ta' dawn il-hydrocarbons, b'mod partikolari fiż-żejt verġni taż-żebbuġa u l-fdalijiet taż-żejt taż-żebbuġ mhux raffinati.

2.   GĦAN

L-istandard jista' jiġi applikat fiż-żjut kollha tal-ħaxix għalkemm il-kejl tista' toqgħod fuqu biss fejn il-kontenut ta' dawn il-hydrocarbons ikun bejn 0,01 u 4,0 mg/kg. Dan il-metodu hu partikolarment adattat biex tinstab il-preżenza taż-żejt tal-ħaxix raffinat (żebbuġ, fdalijiet taż-żebbuġa, fjuri tax-xemx, palmi, eċċ.) fiż-żejt verġni taż-żebbuġa peress li ż-żjut raffinati jkun fihom is-stigmastadienes u ż-żjut verġni ma jkollhomx.

3.   PRINĊIPJU

Iżolament ta' materja li m'hix saponifikata. Separazzjoni ta' steroidal hydrocarbon fraction permezz tal-kolonna kromatografika fuq silika ġel u analiżi permezz ta' gass kromatografiku kapillarju.

4.   APPARATUS

4.1.

Flasks tal-250 ml tajjeb biex tużah b'reflux condenser.

4.2.

Lembut li jissepara ta' kapaċità ta' 500 ml.

4.3.

Lembut b'qiegħ tond ta' 100 ml.

4.4.

Evaporatur li jdur.

4.5.

Kolonna kromatografika tal-ħġieġ (1,5 sa 2,0 ċm b'dijametru intern ta' 50 ċm tul) b'tap tat-Teflon u tappiera tal-ħġieġ suf tal-fibre jew disk tal-ħġieġ sintered fil-qiegħ. Biex tipprepara kolonna tas-silika ġel, itfa' hexane fil-kolonna kromatagrafika għal għoli ta' madwar 5 ċm u mbagħad imla' bi slurry ta' silika ġel fil-hexane (15 g f'40 ml) bil-għajnuna ta' porzjonijiet ta' hexane. Ħalli biex joqgħod u spiċċa l-qiegħa billi tapplika vibrazzjoni żgħira. Żid anhydrous sodium sulphate sa għoli ta' madwar 0,5 ċm, fl-aħħar ħallat il-hexane li tkun żejda.

4.6.

Kromatografu tal-gass bi flame ionization detector, maqsum jew on-column injector u forn ipprogrammat sa ± 1 °C.

4.7.

Kolonna kapillarja ta' silika fused għal kromatografija tal-gass (0,25 jew 0,32 mm b'dijametru intern ta' 25 m tul) miksi b'fażi ta' 5 %-phenylmethylsilicone, 0,25 mm film oħxon.

Nota 1:

Jistgħu jiġu użati kolonni oħrajn ta' polarità simili jew inqas.

4.8.

Integrator-recorder bil-possibilità ta' għamla ta' valley-valley integration.

4.9.

5 sa 10 ml microsyringe għal kromatografija tal-gass b'labra mkaħħla.

4.10.

Mantle ta' l-eletriku li jsaħħan jew post jaħraq.

5.   REAĠENTI

Ir-reaġenti kollha għandhom ikunu ta' grad analitiku sakemm jiġi speċifikat mod ieħor. L-ilma użat għandu jkun ilma distillat, jew ilma ta' għall-inqas purità ekwivalenti.

5.1.

Hexane jew taħlita ta' alkanes b'intervall bp 65 sa 70 °C, distillat b' kolonna rettifikata.

Nota 2:

Is-solvent għandu jkun distillat biex jitineħħew l-impuritajiet.

5.2.

96 v/v ethanol.

5.3.

Anhydrous sodium sulphate.

5.4.

Soluzzjoni ta' potassium hydroxide alkolika f'10 %. Żid 10 ml ta' ilma ma' to 50 g potassium hydroxide, ħawwad, u mbagħad dewweb it-taħlita fl-ethanol sa 500 ml.

Nota 3:

Potash alkoliku isir kannella meta joqgħod. Għandu jkun ippraparat frisk kuljum u miżmum tajjeb fi fliexken tal-ħġieġ skuri magħluqin.

5.5.

Silika ġel 60 għal kolonna kromatografika, 70 sa 230 mesh, (Merck, riferenza 7734 jew simili).

Nota 4:

Normalment, silika ġel tista' tintuża direttament mill-kontenitur mingħajr ebda trattament. Madanakollu, xi gruppi ta' silika ġel jistgħu juru attività baxxa li tirriżulta f'separazzjonijiet ħżiena kromatografiċi. Taħt din iċ-ċirkustanza, is-silika ġel għandha tkun ittrattat b'dan il-mod: Attiva s-silika ġel billi ssaħħan għal mill-inqas erba' sigħat f'550 °C. Wara li ssaħħan, poġġi s-silika ġel f'dessikatur sakemm il-ġel ikun qed jiksaħ u mbagħad ittrasferixxi s-silika ġel fi flask magħluq. Żid 2 % ta' l-ilma u ħawwad sakemm l-ebda għoqiedi ma jkunu jidhru u t-trab jimxi liberalment.

Jekk gruppi ta' silika ġel jirriżultaw f'kromatgrammi b'quċċati li jintervjenu, is-silika ġel għandha tkun ittrattata kif indikat fuq. Alternattiva tista' tkun l-użu ta' silika ġel aktar pura 60 (Merck, riferenza 7754).

5.6.

Ħażniet ta' soluzzjoni (200 ppm) ta' cholesta-3,5-diene (Sigma, 99 % purità) f'hexane (10 mg f'50 ml).

5.7.

Soluzzjoni standard ta' cholesta-3,5-diene hexane f'konċentrazzjoni ta' 20 ppm, miksuba permezz ta' diluzzjoni tas-soluzzjoni ta' fuq.

Nota 5:

Is-soluzzjonijiet 5.6 u 5.7 huma stabbli għal perjodu ta' mill-inqas erba' xhur jekk miżmuma fl-inqas minn 4 °C.

5.8.

Soluzzjoni ta' nonacosane f'hexane f'konċentrazzjoni ta' madwar 100 ppm.

5.9.

Carrier gass għall-kromatografija: helium jew idroġenu ta' 99,9990 % purità.

5.10.

Gassijiet awżiljarji għal flame ionization detector: idroġenu ta' 99,9990 % purità u arja ippurifikata.

6.   PROĊEDURA

6.1.   Preparazzjoni għall-materja li mhix saponifikata

6.1.1.

Iżen 20 ± 0, 1 g ta' żejt fi flask ta' 250-ml (4.1), żid 1 ml ta' soluzzjoni standard ta' cholesta-3,5-diene (20 μg) u 75 ml ta' potash alkoliku ta' 10 %, iffitja r-reflux condenser, u saħħan sakemm jagħli ftit għal 30 minuta. Neħħi l-flask li jkollu l-kampjun mis-sħana u ħalli s-soluzzjoni tiksaħ ftit (tħallix li tiksaħ kompletament għax inkella l-kampjun joqgħod). Żid 100 ml ta' ilma u ittrasferixxi s-soluzzjoni fl-lembut separanti (4.2) bil-għajnuna ta' 100 ml ta' hexane. Ħawwad din it-taħlita sew għal 30 sekonda u ħalliha tissepara.

Nota 6:

Jekk tkun prodotta l-emulsion li ma tisparixxix malajr, żid kwanitajiet żgħar ta' ethanol.

6.1.2.

Ittrasferixxi l-fażi aqueous taħt it-tieni lenbut separanti u neħħi għal darb'oħra b' 100 ml ta' hexane. Għal darb' oħra erġa' agħmel il-fażi t'isfel u aħsel l-estratti tal-hexane (kombinati f'lembut separanti ieħor) għal tliet darbiet b'100 ml kull darba b'taħlita ta' ilma-ethanol (1: 1) sakemm in-newtrali pH jiġi milħuq.

6.1.3.

Għaddi s-soluzzjoni hexane minn anhydrous sodium sulphate (50 g), aħsel b'20 ml hexane u evapora f'evaporatur li jdur f'30 °C taħt pressa mnaqqsa sa kemm jinxef.

6.2.   Separazzjoni ta' frazzjoni ta' steroidal hydrocarbon

6.2.1.

Ħu l-fdal tal-kolonna frazzjonata bil-għajnuna tal-porzjonijiet 1-ml ta' hexane, għaddi l-kampjun f'kolonna billi tħalli l-livell tas-soluzzjoni taqa' sa fuq is-sodium sulphate u jibda l-eluzzjoni kromatografika bil-hexane f'rata ta' flow ta' madwar1ml/min. Għarmi l-ewwel 25 sa 30 ml ta' eluate u mbagħad iġbor il-frazzjon ta' 40 ml li jmiss. Wara li tiġbor, ittrasferixxi din il-frazzjoni fi flask li jkollu qiegħ tond ta' 100-ml (4.3).

Nota 7:

L-ewwel frazzjoni jkollha hydrocarbons saturati (Figura 1 a) u t-tieni frazzjoni jkollha dawk steroidal. Iktar elution tipprovdi squalene u komposti relatati. Biex takkwista separazzjoni tajba bejn hydrocarbons saturati u steroidal, l-ottimtizazzjoni tal-volumi frazzjonati huma meħtieġa. Għal dan, il-volum ta' l-ewwel frazzjoni għandu jkun aġġustat sabiex meta t-tieni frazzjoni tkun analizzata l-quċċati li jirrapreżentaw il-hydrocarbons saturati jkunu baxxi (ara Figura 1ċ); jekk ma jidhrux iżda l-intensità tal-quċċata standard tkun baxxa, il-volum għandu jkun imnaqqas. Xorta waħda, separazzjoni kompleta bejn l-ewwel u t-tieni frazzjoni mhix meħtieġa; għax mhemmx soppravenzjoni ta' quċċati matul l-analiżi GC jekk il-kundizzjonijiet GC huma aġġustati kif indikat f'6.3.1. L-ottimatizazzjoni tal-volum tat-tieni frazzjoni jekk ġeneralment mhemmx bżonnha bħala separazzjoni tajba b'iżjed komponenti. Madanakollu, il-preżenza ta' quċċata kbira ta' madwar 1,5 minuta inqas mir-ritenzjoni tal-ħin indas mill-istandard minħabba squalene, u hi indikattiva ta' separazzjoni ħażina.

6.2.2.

Evapora t-tieni frazzjoni f'evaporatur li jdur f'30 °C taħt pressa ridotta sakemm jinxef, u minnufih iddisolvi l-fdal f'0,2 ml ta' hexane. Żomm is-soluzzjoni f'refriġeratur sakemm issir l-analiżi.

Nota 8:

Il-fdalijiet 6.1.3 u 6.2.2 m'għandhomx jinżammu nixfin u f'temparatura tal-kamra. Malli jkunu miksubin, is-solvent għandu jiżdied u s-soluzzjonijiet għandhom jinżammu f'refriġeratur.

6.3.   Il-kromatografija tal-gass

6.3.1.

Kondizzjonijiet tax-xogħol għal split injection:

 temperatura ta' l-injettur: 300 °C,

 temperatura tad-detector: 320 °C,

  integrator-recorder: il-parametri għall-integrazzjoni għandhom ikunu ffissati biex jagħtu stima tajba taż-żoni. Hija rakkomandata valley-valley integration mode,

 sensitività: madwar 16-il darba l-attenwazzjoni minima,

 ammont ta' soluzzjoni injettata: 1 μl,

 programmar tat-temperaturi tal-forn: fil-bidu 235 °C għal sitt minuti mbagħad ogħlli sa 2 °C/minuta sa 285 °C,

 injettur b'1: 15 flow divider,

 kontenitur: helium jew hydrogen ta' pressa ta' madwar 120 kPa.

Dawn il-kondizzjonijiet għandhom ikunu aġġustati skond il-karatteristiċi tal-kromatografu u l-kolonna biex tagħti l-kromatrogrammi tilħaq il-ħtiġijiet li ġejjin: standard tal-quċċata interna sa madwar ħames minuti tal-ħin mogħti f'6.3.2; u standard tal-quċċata interna għandha tkun ta' mill-inqas 80 % ta' l-iskala sħiħa.

Is-sistema kromatografika tal-gass trid tkun iċċekjata billi tinjetta taħlita ta' ħażna tas-soluzzjoni ta' cholestadiene (5.6) u s-soluzzjoni nonacosane (5.8). Il-quċċata tal-cholesta-3,5-diene għandha tidher qabel n-nonacosane (Figura 1ċ); jekk ma jiġrix hekk għandhom jittieħdu żewġ azzjonijiet: naqqas it-temperatura tal-forn u/jew uża kolonna polari inqas.

6.3.2.

Identifikazzjoni tal-quċċata

L-istandard tal-quċċata interna jidher għal madwar 19-il minuta u t-3,5-stigmastadiene fi żmien relattiv ta' ritensjoni ta' madwar 1,29 (ara Figura 1b). It-3,5-stigmastadiene tiġri fi kwantitajiet żgħar ta' isomer, u normalment, it-tnejn jitħaltu flimkien bħala quċċata kromatografika waħda. Madanakollu, jekk il-kolonna hi polari wisq jew turi qawwa għolja ta' riżoluzzjoni, l-isomer jista' jidher bħala quċċata żgħira qabel u viċin dik ta' stigmasta-3,5-diene (Figura 2). Biex tassigura li l-i stigmastadienes huma mħalltin f'quċċata waħda, hu rakkomandat li tbiddel il-kolonna b'waħda li hi jew inqas polari jew għandha dijametru intern iktar wiesa.

Nota 9:

Stigmastadienes għar-riferenza jistgħu jinkisbu mill-analiżi taż-żejt tal-ħaxix raffinat billi tuża' ammont inqas ta'kampjun (1 sa 2 g). Stigmastadienes joriġinaw quċċata prominenti u faċli li tkun identifikata.

6.3.3.

Analiżi kwantitattiva

Il-kontenut stigmastadienes hu determinat skond il-formula:

mg/kg ta’ stigmastadienes =

image



fejn:

As = iż-żona tal-quċċata stigmastadienes (jekk il-quċċata hija riżolta f'żewġt isomers, is-somma taż-żewġ żoni taż-żewġ quċċati),

Ac = żona ta' l-istandard intern (cholestadiene),

Mc = mass ta' l-istandard miżjud, f'mikrogrammi,

Mo = massa taż-żejt meħud, fi grammi.

Limitu ta' l-għarfien: xi 0,01 mg/kg. madwar 0,01 mg/kg.

image

image Figura 1

Gas chromatograms miksuba minn kampjun taż-żejt taż-żebbuġ analizzati fuq kolonna kapillari tas-silika fused (0,25 mm dijametru intern b'25 m) miksi b'5 %-phenylmethylsilicone, 0,25 μm ħxuna tal-film.

(a) L-ewwel frazzjoni (30 ml) minn żejt verġni, imħassar bl-istandard.

(b) It-tieni frazzzjoni (40 ml) minn żejt taż-żebbuġa li jkollu 0,10 mg/kg ta' stigmastadienes.

(ċ) It-tieni frazzjoni (40 ml) li jkollha porzjonijiet żgħar ta' l-ewwel frazzjoni.

image Figura 2

Kromatogramm tal-gass miksub minn kampjun taż-żejt taż-żebbuġa raffinat analizzat fuq kolonna DB-5 li turi l-isomer ta' 3,5-stigmastadiene.

▼M25




ANNESS XVIII

ID-DETERMINAZZJONI TAD-DIFFERENZA BEJN IL-KONTENUT ATTWALI U TEORETIKU TAT-TRIAĊILGLIĊEROLI MAL-ECN 42

1.   AMBITU

Determinazzjoni tad-differenza assoluta bejn il-valuri sperimentali tat-TRIAĊILGLIĊEROLI (TAGs) man-numru tal-karbonju ekwivalenti 42 (ECN42HPLC) miksub mid-determinazzjoni fiż-żejt bil-kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja u l-valur teoretiku tat-TAGS b'numru tal-karbonju ekwivalenti 42 (ECN 42theoretical) ikkalkulat mill-kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi.

2.   SETTUR TAL-APPLIKAZZJONI

Dan il-metodu applikabbli għaż-żjut taż-żebbuġa. Il-metodu applikabbli għall-għarfien tal-preżenza ta' ammonti żgħar ta' żjut taż-żrieragħ (rikki fl-aċidu linolejku) f'kull klassi ta' żjut taż-żebbuġa.

3.   IL-PRINĊIPJU

Il-kontneut tat-triasilgiċeroli bl-ECN42 iddeterminat mill-analiżi u l-kontenut teoretiku tat-triasilgiċeroli bl-ECN42 (ikkalkulat abbażi tad-determinazzjoni GLC tal-kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi) tikkorrispondi fi ħdan ċertu limitu għaż-żjut taż-żebbuġa ġenwini. Differenza akbar mill-valuri adottati għal kull tip ta' żejt turi jekk dak iż-żejt fihx żjut taż-żrieragħ.

4.   METODU

Il-metodu għall-kalkolu tal-kontenut teoretiku tat-triaċilgiċeroli mal-ECN 42 u tad-differenza fir-rigward tad-dejta HPLC huwa essenzjalemnt magħmul mill-koordinazzjoni tad-dejta analitika miksuba b'metodi oħra. Huwa possibbli li jintgħarfu tliet fażijiet: id-determinazzjoni tal-kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi bil-kromatografija kapillari bil-gass, il-kalkolu tal-kompożizzjoni teoretika tat-triaċilgiċeroli bl-ECN42, id-determinazzjoni HPLC ta' triaċilgiċeroli ECN42.

4.1.    Apparat

4.1.1.

Flasks bil-qiegħ tond, 250 and 500 ml.

4.1.2.

Tazzi taż-żennuna, 100 ml

4.1.3.

4.1.3. Kolonna kromatografika tal-ħġieġ, dijametru intern 21 mm, tul 450 mm, b'vit u kon normalizzat (female) fuq.

4.1.4.

4.1.4. Imbiibet għas-separazzjoni, 250 ml, b'kon normalizzat (male) fin-naħ ta' isfel, tajjeb biex jitqabbad man-naħa ta' fuq tal-kolonna.

4.1.5.

Virga tal-ħġieġ, tul 600 mm.

4.1.6.

Lembut tal-ħġieġ, dijametru 80 mm.

4.1.7.

Flasks volumetriċi, 50 ml

4.1.8.

Flasks volumetriċi, 20 ml

4.1.9.

Evaporatur rotatorju.

4.1.10.

4.1.10. Kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja, li tippermetti l-kontroll termostatiku tat-temperatura tal-kolonna.

4.1.11.

Unitajiet tal-injezzjoni li jagħti 10 μl.

4.1.12

Rilevatur refrattometeru differenzjali. Is-sensittività fuq l-iskala kollha għandha tkun ta' mill-inqas 10–4 unità tal-indiċi refrattiv.

4.1.13

Kolonna: tubu tal-istainless steel tube ta' tul ta' 250 mm u dijamteru intern ta' 4.5 mm ippakkjat b'partiċelli tas-silika ta' dijametru ta' 5 μm bi 22 to 23 % karbonju fil-forma ta' oktaedesilsilan (nota 2).

4.1.14

Software għall-ipproċessar tad-dejta.

4.1.15

Fjali, ta' volumi ta' madwar 2mm, b'septum b'saff ta' Teflon u tapp bil-kamin.

4.2.    Reaġenti

Ir-reaġenti għandhom ikunu ta' purezza analitika. Is-solventi għall-elużjoni għandhom ikunu degassifkati, u jistgħu jiġu rriċiklati bosta drabi mingħajr effett fuq is-separazzjonijiet.

4.2.1.

Eteru tal-pitrolju 40-60 °C grad kromatografiku jew essan

4.2.2.

Etereu etililku, iddistillat frisk, ħieles mill-perossidu.

4.2.3.

Solvent tal-elużjoni biex jippurifika taż-żejt bil-kolonna kromatografika: taħlita etru tal-pitrolju/eteru etiiliku 87/13 (v/v).

4.2.4.

4.2.4. Ġell tas-silika, 70-230, tip Merck 7734, b'kontenut tal-ilma standardizzat għal 5 % (w/w).

4.2.5.

Fibri tal-ħġieġ (Glass wool)

4.2.6.

Aċetun għal HPLC.

4.2.7.

Aċetonitril jew propionitril għal HPLC.

4.2.8.

Solvent tal-elużjoni HPLC: acetonitril + aċetun (il-proporzjonijiet jiġu aġġustati biex tinkiseb is-separazzjoni mixtieqa; ibda b'taħlita 50:50) jew proprionitril.

4.2.9.

Solvent tas-solubilizzazzjoni: aċetun.

4.2.10.

Triġliċeridi ta' referenza: trigliċeridi kummerċjali (triplamitin, triolein, eċċ.) jistgħu jintużaw u l-ħinijiet tar-retenzjoni tagħhom imbagħad jiġu pplottjati skont in-numru tal-karbonju ekwivalenti, jew alternattivament kromatogrammi ta' referenza miksuba miż-żejt tas-sojja, taħlita 30:70 żejt tas-sojja – żejt taż-żebbuġa u żejt pur taż-żebbuġa (ara n-noti 1u 2 u l-grafika 1 sa 4).

4.2.11.

Kolonna tal-estrazzjoni f'fażi solida b'fażi silika 1 g, 6 ml.

4.3.    It-tħejjija tal-kampjun

Billi għadd ta' sustanzi li jinterferixxu jagħtu lok għal riżultati pożittivi foloz, il-kampjun għandu dejjem jiġi ppurifkat skont il-metodu IUPAC 2.507, użat għad-determinazzjoni tal-komposti polari fiż-żjut tal-qali.

4.3.1.    It-tħejjija tal-kolonna kromatografika

Fill the column (4.1.3.) Imla l-kolonna (4.1.3) b'madwar 30 ml solvent tal-elużjoni (4.2.3), imbagħad daħħal fil-kolonna ftit glass wool (4.2.5) u mbuttah sa qiegħ il-kolonna bil-virga tal-ħġieġ (4.1.5).

F'tazza ta' 100 ml, issospendi 25g ġell tas-silika (4.2.4) fi 80 ml tat-taħlita tal-eluzzjoni (4.2.3), u mbagħad ittrasferiha għall-kolonna permezz ta' lembut tal-ħġieġ (4.1.60>

Biex tiżgura t-trasferiment komplut tal-ġell tas-silika lill-kolonna, aħsel it-tazza bit-taħlita tal-eluzzjoni u ttrasferixxi l-fdalijiet tal-ħasil lill-kolonna wkoll.

Iftaħ il-vit u ħalli s-solvent jelwixxi mill-kolonna sakemm il-livell tiegħu jkun ta' madwar 1 ċm fuq il-ġell tas-silika.

4.3.2    Kromatografija bil-kolonni

Iżen bi preċiżjoni ta' 0,001 g, 2,5 ± 0,1 g ta' żejt, iffiltrat minn qabel, omoġenizzat u anidrifikat, jekk meħtieġ, fi flask volumetriku ta' 50 ml (4.1.7).

Ħoll f'madwar 20 ml solvent tal-elużjoni (4.2.3). Jekk meħtieġ, saħħan kemxejn biex idub faċilment. Berred f'temperatura ambjentali u aġġusta l-volum bis-solvent tal-elużjoni.

B'pipetta volumetrika, daħħal 20 ml tas-soluzzjoni fil-kolonna mħejjija skont 4.3.1, iftaħ il-vit u ħalli s-solvent jelwixxi sal-livell tas-saff tal-ġell tas-silika.

Imbagħad elwixxi b'150 ml solvent tal-elużjoni (4.2.3), billi taġġusta r-rata tas-solvent għal madwar 2 ml/min (150 ml jieħdu madwar 60 sa 70 minuta biex jgħaddu mill-kolonna).

The eluated is recovered in a 250 ml round bottom flask (4.1.1) previously tared in an oven and exactly weighted. Elimina s-solvent bi pressjoni mnaqqsa f'evaporatur rotatorju (4.1.9) u iżen ir-residwu li se jintuża biex iħejji s-soluzzjoni għall-analiżi HPLC u għall-preparazzjoni tal-ester metiliku.

L-irkupru kampjun mill-kolonna għandu jkun ta' mill-inqas 90 % għall-kategoriji taż-żejt taż-żebbuġa ekstra verġni, verġni, ordinarju, raffinat, u minimu ta' 80 % għal żjut taż-żebbuġa lampante u residwi.

4.3.3    Purifikazzjoni tal-SPE

Il-kolonna tas-silika SPE tiġi attivita billi jiġi mgħoddija 6m ta' essan (4.2.3) f'vakwu, biex ma jkunx hemm nixfa.

Iżen sa eżatezza ta’ 0,001 g, 0,12 g fi fjala ta' 2 ml (4.1.15), u ħoll f' 0,5 ml essan (4.2.3).

Għabbi l-kolonna SPE bis-soluzzjoni u elwixxi b' 10 ml ta' eteru essan-dietil (87: 13 v/v) (4.2.3) f'vakwu.

Il-frazzjoni miġbura tiġi evaporata sa ma tinxef f'evaporatur rotatorju (4.1.9) taħt pressjoni mnaqqsa f'temperatura ambjentali. Ir-residwu jinħall fi 2 ml aċetun (4.2.6) għall-analiżi tat-triagliċerol (TAG).

4.4.    Analiżi tal-HPLC

4.4.1    Tħejjija tal-kampjuni għall-analiżi kromatografika

A 5 % solution of the sample to be analysed is prepared by weighing 0,5 ± 0,001 g of the sample into a 10 ml graduated flask and making up to 10 ml with the solubilization solvent (4.2.9).

4.4.2    Il-Proċedura

Arma s-sistema kromatografika. Ippompja s-solvent tal-elużjoni (4.2.8) b'rata ta' 1.5 ml/min sabiex tnaddaf is-sistema kollha. Stenna sakemm tinkiseb linja bażi stabbli.

Injetta 10 μl tal-kapmjun imħejji bħal fil-punt 4.3.

4.4.3    Kalkolu u tifsira tar-riżultati

Uża l-metodu tan-normalizzazzjoni tal-erja, i.e. assumi li s-somma tal-erja tal-qċaċet li tikkorrispondi għat-TAGs minn ECN42 sa ECN52 hija ugwali għal 100 %.

Ikkalkula l-perċentwal relattiv ta' kull trigliċerid billi tuża l-formula:

image

.

Ir-riżultati għandhom jingħataw sa mill-inqas żewġ postijiet deċimali.

Ara n-noti 1 sa 4.

4.5.    Kalkolu tal-kompożizzjoni tat-trijaċilgliċeroli (moles%) minn dejta dwar il-kompożizzjoni ta’ aċidu xaħmi (erja%)

4.5.1    Determinazzjoni tal-kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi

Il-kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi hija ddeterminata bl-ISO 5508 permezz ta’ kolonna kapillari. L-esteri tal-metil huma ppreparati skont COI/T.20/Doc. No 24.

4.5.2.    Aċidi xaħmin għall-kalkolu

Il-gliċeridi jintgħażlu skont in-Numru tal-Karbonju Ekwivalenti tagħhom (ECN), bili jitqiesu l-ekwivalenti li ġejjin bejn l-ECN u l-aċidi xaħmin. Tqiesu bissa l-aċidi xaħmin b'16 u 18-il atomu, għaliex dawn biss importanti għaż-żejt taż-żebbuġa. L-aċidi xaħmin għandhom ikunu normalizzati għal 100%.



Fatty acid (FA)

Taqsira

Piż molekolari

(MW)

ECN

Aċidu palmitiku

P

256,4

16

Aċidu palmitolejku

Po

254,4

14

Aċidu steariku

S

284,5

18

Aċidu olejku

O

282,5

16

Aċidu linolejku

L

280,4

14

Aċidu lineoleiku

Ln

278,4

12

4.5.3    Konverżjoni ta' erja % f'moles għall-aċidi xaħmin kollha (1)



image

image

image

image

image

image

4.5.4    Normalizzazzjoni tal-moles tal-aċidu xaħmi sa 100% (2)

image

image

image

image

image

image

Ir-riżultat jagħti l-perċentwal ta' kull aċidu xaħmi f moles % fil-pożizzjoni globali (1,2,3-) tat-TAGs.

Imbagħad tiġi kkalkulata s-somma tal-aċidi xaħmin saturati P and S (SFA) u l-aċidi xaħmin nonsaturati Po, O, L u Ln (UFA):

image

image

4.5.5    Il-kalkolu tal-kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi fil-pożizzjonijiet 2- u 1, 3- tat-TAGs

L-aċidi xaħmin jitqassmu fi tliet gruppi kif ġej: wieħed għall-pożizzjoni 2- u tnejn identiċi għall-pożizzjonijiet 1- u 3-, b'koeffiċjenti differenti għall-aċidi saturati (P u S) u nonsaturati (Po, O, L u Ln).

4.5.5.1   4.5.5.1. Aċidi xaħmin saturati fil-pożizzjoni 2- [P(2) u S(2)]

image

image

4.5.5.2   Aċidi xaħmin nonsaturati fil-pożizzjoni 2- [Po(2), O(2), L(2) u Ln(2)]:

image

image

image

image

4.5.5.3   Aċidi xaħmin fil-pożizzjonijiet 1,3- [P(1,3), S(1,3), Po(1,3), O(1,3), L(1,3) u Ln(1,3)] (6):

image

image

image

image

image

image

4.5.6    Kalkolu ta’trijaċikliċeroli

4.5.6.1   TAGs b’aċidu grass wieħed (AAA, hawnhekk LLL, PoPoPo) (7)

image

4.5.6.2   TAGs b’żewġ aċidi grassi (AAB, hawnhekk PoPoL, PoLL) (8)

image

image

4.5.6.3   TAGs bi tliet aċidi xaħmin differenti (ABC, hawnhekk OLLn, PLLn, PoOLn, PPoLn) (9)

image

image

image

4.5.6.4   Trijaċilgliċeroli b’ECN42

It-trijaċilgliċeroli b’ECN42 huma kkalkolati skont l-ekwazzjonijiet 7, 8 u 9 u huma mbagħad mogħtija fl-ordni ta’eluzzjoni mistenni f’HPLC (normalment tliet qċaċet biss).

LLL

PoLL u l-iżomeru pożizzjonali LPoL

OLLn u l-iżomeri pożizzjonali OLnL u LnOL

PoPoL u l-iżomeru pożizzjonali PoLPo

PoOLn u l-iżomeri pożizzjonali OPoLn u OLnPo

PLLn u l-iżomeri pożizzjonali LLnP u LnPL

PoPoPo

SLnLn u l-iżomeru pożizzjonali LnSLn

PPoLn u l-iżomeri pożizzjonali PLnPo u PoPLn

It-triaċilgliċeroli b'ECN42 jingħataw mis-somma tad-disa' triaċilgliċeroli inkluż l-iżomeri pożizzjonali tagħhom. Ir-riżultati għandhom jingħataw sa mill-inqas żewġ postijiet deċimali.

5.   L-EVALWAZZJONI TAR-RIŻULTATI

The calculated theoretical content and the content determined by the HPLC analysis are compared. Jekk id-differenza fil-valur assolut tad-dejta HPLC nieqes id-dejta teoretika hija akbar mill-valuri ddikjarati fil-kategorija xierqa taż-żejt fl-istandrad tal-kummerċjalizzazzjoni, il-kampjun fih żejt taż-żrieragħ.

Ir-riżultati jingħataw sa żewġ ċifri deċimali.

6.   EŻEMPJU (IN-NUMRI JIRREFERU GĦAT-TAQSIMIET FIT-TEST TAL-METODU)

— 4.5.1.    Il-kalkolu tal-moles % tal-aċidi xaħmin mid-dejta GLC (erja normalizzata %)

Id-dejta li ġejja tinkiseb għall-kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi mill-GLC:



FA

P

S

Po

O

L

Ln

MW

256,4

284,5

254,4

282,5

280,4

278,4

Erja %

10,0

3,0

1,0

75,0

10,0

1,0

— 4.5.3    Konverżjoni ta' erja % f'moles għall-aċidi xaħmin kollha (ara l-formula (1))

moles P

=

image

moles S

=

image

moles Po

=

image

moles O

=

image

moles L

=

image

moles Ln

=

image

Total

=

0,35821 moles TAGs

— 4.5.4    Normalizzazzjoni tal-moles tal-aċidu xaħami għal 100% (ara formula (2))

moles % P(1,2,3)

=

image

moles % S(1,2,3)

=

image

moles % Po(1,2,3)

=

image

moles % O(1,2,3)

=

image

moles % L(1,2,3)

=

image

moles % Ln(1,2,3)

=

image

Total moles %

=

100 %

Total ta’ aċidi grassi saturati u nonsaturati fil-pożizzjoni1,2,3- tat-TAGs (ara formula (3)):

image

image

— 4.5.5    Kalkolu tal-kompożizzjoni tal-aċidu xaħmi fil-pożizzjonijiet 2- u 1,3- tat-TAGs

— 4.5.5.1   Aċidi xaħmin saturati fil-pożizzjoni 2- [P(2) u S(2)] (ara l-formula (4))

image

image

— 4.5.5.2   Aċidi xaħmin nonsaturati fil-pożizzjoni 2- [Po(1,3), O(1,3), L(1,3) u Ln(1,3)] (ara l-formula (5))

image

image

image

image

— 4.5.5.3   Aċidi xaħmin fil-pożizzjonijiet 1,3- [P(1,3), S(1,3), Po(1,3), O(1,3), L(1,3) u Ln(1,3)] (ara l-formula (6))

image

image

image

image

image

image

— 4.5.6.    Kalkolu ta’trijaċikliċeroli

Mill-kompożizzjoni kkalkulata tal-aċidu xaħmi fil-pożizzjonijiet sn-2- u sn-1,3-:



FA in

1.3-pos.

2-pos.

P

16,004 %

0,653 %

S

4,325 %

0,177 %

Po

1,015 %

1,262 %

O

68,526 %

85,296 %

L

9,204 %

11,457 %

Ln

0,927 %

1,153 %

Sum

100,0 %

100,0 %

u t-triagliċeroli li ġejjin jiġu kkalkulati kif ġej:

LLL

PoPoPo

PoLL SLnLn b'iżomeru pożizzjonali wieħed (1) PoLL SLnLn b'iżomeru pożizzjonali wieħed (1)

SLnLn b'iżomeru pożizzjonali wieħed (1)

PoPoL b'iżomeru pożizzjonali wieħed (1)

PPoLn b’żewġ (2) isomeri pożizzjonali PPoLn b’żewġ (2) isomeri pożizzjonali

OLLn b’żewġ (2) isomeri pożizzjonali

PLLn b’żewġ (2) isomeri pożizzjonali

PoOLn b’żewġ (2) isomeri pożizzjonali

— 4.5.6.1.   TAGs b'aċidu xaħmi wieħed (LLL, PoPoPo) (ara l-formula (7))

image , = 0,09706 mol LLL

image

— 4.5.6.2   TAGs b'żewġ aċidi xaħmin (PoLL, SLnLn, PoPoL) (ara l-formula (8))

image

image

0,03210 mol PoLL

image

image

0,00094 mol SLnLn

image

image

0,00354 mol PoPoL

— 4.5.6.3   TAGs bi tliet aċidi xaħmin differenti (PoPLn, OLLn, PLLn, PoOLn) Ara l-formula (9)

image

image

image

0,00761 mol PPoLn

image

image

image

0,43655 mol OLLn

image

image

image

0,06907 mol PLLn

image

image

image

0,04812 mol PoOLn

ECN42 = 0,69512 mol TAGs

Nota 1: L-ordni tal-elużjoni jista’ jiġi ddeterminat billi jiġu kkalkolati n-numri ekwivalenti tal-karbonju, ħafna drabi definiti bir-relazzjoni image , fejn CN huwa numru tal-karbonju u n huwa n-numru ta' bonds doppji; jista 'jiġi kkalkolat b’mod iktar preċiż billi titqies l-oriġini tal-bond doppja. Jekk no, nl u nln homa n-numri tal-bonds doppji attribwitu lill-aċidu olejku, linolejku u linoleniku rispettivament, in-numru tal-karbonju ekwivalenti jista' jiġi kkalkulat permezz tar-relazzjoni tal-formula:

image

fejn il-koeffiċjent do, dl and dln jista' jiġi kkalkulat bis-saħħa tat-trigliċeridi ta' referenza. Taħt il-kundizzjonijiet speċifikati f'dan il-metodu, ir-relazzjoni miksuba tkun qrib:

image

Nota 2: B'bosta trigliċeridi ta' referenza, huwa wkoll possibbli tikkalkula r-riżoluzzjoni fir-rigward tat-triolein:

image

trioleinbl-użu tal-ħin ridott tar-retenzjoni

image

.

Il-graff ta' log α kontra f (numru ta' bonds doppji) jippermetti li jiġu ddeterminati l-valuri ta' retenzjoni għat-triġliċeridi kollha tal-aċidi xaħmin fit-trigliċeridi ta' referenza – ara l-Grafika 1.

Nota 3: L-effiċjenza tal-kolonna għandha tippermetti separazzjoni tal-quċċata tat-trilinoein mill-qċaċet tat-trigliċeridi b'RT maġenbhom. L-eluzzjoni ssir sa quċċata ta' ECN 52.

Note 4: Kejl korrett tal-erjas għall-qċaċet kollha ta' interess għad-determinazzjoni preżenti hija żgurata jekk it-tieni quċċata li tikkorrispondi għal ECN 50 hija 50% tal-iskala sħiħa tar-rikorder.

Grafika 1

Grafika ta' log a kontra f (numru ta' bonds doppji)

image

Numru ta' bonds doppji

La: aċidu lawriku My: aċidu miristiku; P: aċidu palmitiku; S: aċidu steariku; O: aċidu olejku; L: aċidu linolejku; Ln: aċidu linolejku

Grafika 2

Żejt taż-żebbuġa b'element linoleiku baxx

(a)

image

B'solvent: Aċetun /Acetonitril.

PROFIL a: Komponenti ewlenin tal-qċaċet kromatografiċi: ECN42 (1) LLL+PoLL; (2) OLLn+PoOLn; (3) PLLn; ECN44: (4) OLL+PoOL; (5) OOLn +PLL; (6) POLn+PPoPo; (7) OOL+PoOO; ECN46: (8) OOL+LnPP; (9) PoOO; (10) SLL+PLO; (11) PoOP+SPoL+SOLn+SPoPo; (12) PLP; ECN48: (13) OOO+PoPP; (14+15) SOL+POO; (16) POP; ECN50: (17) SOO; (18) POS+SLS.

(b)

image

B'solvent: Propionitril

PROFILE b: Main components of chromatographic peaks: ECN42 (1) LLL; (2) OLLn+PoLL; (3) PLLn; ECN44: (4) OLL; (5) OOLn+PoOL; (6) PLL+PoPoO; (7) POLn+PPoPo+PPoL; ECN46: (8) OOL+LnPP; (9) PoOO; (10) SLL+PLO; (11) PoOP+SPoL+SOLn+SPoPo; (12) PLP; ECN48: (13) OOO+PoPP; (14) SOL; (15) POO; (16) POP; ECN50: (17) SOO; (18) POS+SLS

Grafika 3

Żejt taż-żebbuġa b'element linoleiku għoli

(a)

image

B'solvent: Aċetun/acetonitril (50: 50).

Profil a: Komponenti ewlenin tal-qċaċet kromatografiċi: ECN42 (1’) LLL+PoLL; (2’) OLLn+PoOLn; (3’) PLLn; ECN44:: (4’) OLL+PoOL; (5’) OOLn +PLL; (6’) POLn+PPoPo; ECN46:: (7’) OOL+PoOO; (8’) PLO+SLL+ PoOP; (9’) PLP+PoPP; ECN48:: (10’) OOO; (11’) POO+SLL+PPoO; (12’) POP+PLS; ECN50:: (13’) SOO; (14’) POS+SLS

(b)

image

B'solvent: Propionitrile.

Profil b: Komponenti ewlenin tal-qċaċet kromatografiċi: ECN42 (1) LLL; (2+2’) OLLn+PoLL; (3) PLLn; ECN44: (4) OLL; (5) OOLn+PoOL; (6) PLL+PoPoO; (7) POLn+PPoPo+PPoL; ECN46: (8) OOL+LnPP; (9) PoOO; (10) SLL+PLO; (11) PoOP+SPoL+SOLn+SPoPo; ECN48: (12) PLP; (13) OOO+PoPP; (14) SOL; (15) POO; (16) POP; ECN50: (17) SOO; (18) POS+SLS; ECN52: (19) AOO.

▼M19




ANNEX XIX

▼M28

DETERMINAZZJONI TAL-KONTENUT TAL-ALKOĦOL ALIFATIKU U TRITERPENIKU PERMEZZ TAL-KROMATOGRAFIJA KAPILLARI B'FAŻI GASSUŻA

1.   SUĠĠETT

Dan l-Anness jiddeskrivi metodu għad-deterimnazzjoni tal-alkoħol alifatiku u triterpeniku fiż-żjut u fix-xaħmijiet.

▼M19

2.   PRINCIPLE OF THE METHOD

The fatty substance, with 1-eicosanol added as internal standard, is saponified with ethanolic potassium hydroxide and then the unsaponifiable matter extracted with ethyl ether. The alcoholic fraction is separated from the unsaponifiable matter by chromatography on a basic silica gel plate; the alcohols recovered from the silica gel are transformed into trimethylsilyl ethers and analysed by capillary gas chromatography.

3.   EQUIPMENT

3.1. 250 ml round-bottomed flask fitted with a reflux condenser having ground-glass joints.

3.2. 500 ml separating funnel.

3.3. 250 ml round-bottomed flasks.

3.4. Chromatographic tank for thin-layer chromatographic analysis, for glass plates of dimensions 20 x 20 cm.

3.5. Ultraviolet lamp having a wavelength of 366 or 254 nm.

3.6. 100 μl and 500 μl microsyringes.

3.7. A cylindrical filter funnel with a G3 porous septum (porosity 15 to 40 μm) of diameter approximately 2 cm and a depth of some 5 cm, with an attachment suitable for filtration under vacuum and a 12/21 male ground glass joint.

3.8. 50 ml vacuum conical flask with a 12/21 ground-glass female joint which can be fitted to the filter funnel (3.7).

3.9. A 10 ml test tube with a tapering bottom and a sealing stopper.

3.10. Gas chromatograph for use with a capillary column, and provided with a splitting system composed of:

3.10.1. Thermostatic chamber for columns (column oven) to hold the temperature desired with a precision of ± 1 °C.

3.10.2. A temperature-adjustable injection unit with a persilanised glass vaporising element.

3.10.3. A flame ionisation detector and converter-amplifier.

3.10.4. Recorder-integrator for operation with the converter-amplifier (3.10.3), with response time not exceeding one second and with variable paper-speed.

3.11. Glass or fused silica capillary column, of length 20 to 30 m, internal diameter 0,25 to 0,32 mm, with SE-52 or SE-54 liquid phase or equivalent, with a film thickness between 0,10 and 0,30 μm.

3.12. Microsyringe for gas chromatography, of 10 μl capacity with hardened needle.

3.13. Analytical balance sensitive to 1 mg (with 0,1 mg display).

4.   REAGENTS

4.1. Potassium hydroxide, approximately 2 N ethanolic solution: 130 g potassium hydroxide (minimum concentration 85 %) is dissolved, with cooling, in 200 ml distilled water and then made up to one litre with ethanol. The solution should be stored in a well-stoppered opaque glass bottle.

4.2. Ethyl ether, pure for analysis.

4.3. Anhydrous sodium sulphate, analytical purity.

4.4. Glass plates coated with silica gel, without fluorescence indicator, thickness 0,25 mm (commercially available ready for use).

4.5. Potassium hydroxide, approximately 0,2 N ethanolic solution; 13 g of potassium hydroxide are dissolved in 20 ml of distilled water and made up to one litre with ethanol.

4.6. Benzene, for chromatography (see 5.2.2).

4.7. Acetone, for chromatography (See 5.2.2).

4.8. Hexane, for chromatography (see 5.2.2).

4.9. Ethyl ether, for chromatography (see 5.2.2).

4.10. Chloroform, for chromatography.

▼M28

4.11. Soluzzjoni ta' referenza għall-kromatografija b'saff irqiq: alkoħol C20-C28 0,5 % fil-kloroform, jew frazzjoni ta' alkoħol miksub kif indikat fil-punt 5.2 mill-materja li ma tistax tiġi ssaponifikata minn żejt mir-residwi taż-żebbuġ.

▼M19

4.12. 0,2 % solution of 2', 7'-dichlorofluorescein in ethanol. Make slightly basic by adding a few drops of 2 N alcoholic potassium hydroxide solution.

4.13. Anhydrous pyridine, for chromatography.

4.14. Hexamethyl disilazane.

4.15. Trimethylchlorosilane.

4.16. Standard solutions of trimethylsilyl ethers of aliphatic alcohols from C20 to C28. They may be prepared from mixtures of pure alcohols at the time they are required for use.

4.17. A 0,1 % (m/v) solution of 1-eicosanol in chloroform (internal standard).

4.18. Carrier gas: hydrogen or helium, gas-chromatographic purity.

4.19. Auxiliary gas: nitrogen, gas-chromatographic purity.

5.   PROCEDURE

5.1.   Preparation of the unsaponifiables

5.1.1.

Using a 500 μl microsyringe place, into a 250 ml round-bottom flask, a volume of 0,1 % 1-eicosanol solution in chloroform (4.17) containing a quantity of 1-eicosanol approximately equal to 10 % of the aliphatic alcohols content in that portion of sample to be taken for analysis. For example, to 5 g of sample add 250 μl of the 0,1 % 1-eicosanol solution if olive oil and 1 500 μl if olive pomace oil.

Evaporate to dryness in current of nitrogen and then weigh accurately 5 g of the dry filtered sample into the same flask.

5.1.2.

Add 50 ml of 2 N potassium hydroxide ethanolic solution, fit the reflux condenser and heat the apparatus to slight boiling on a steam bath, stirring continuously throughout the heating process until saponification has taken place (the solution becomes clear). Continue heating for a further 20 minutes and then add 50 ml of distilled water through the condenser. The condenser is then disconnected and the flask cooled to approximately 30 °C.

5.1.3.

The contents of the flask are quantitatively transferred to a separating funnel of 500 ml capacity by adding distilled water several times, using a total of around 50 ml distilled water. Add approximately 80 ml of ethyl ether, shake vigorously for approximately 30 seconds and allow to settle (Note 1).

Separate off the lower aqueous phase collecting it in a second separating funnel. Two further extractions are effected on the aqueous phase, in the same manner, using each time 60 to 70 ml ethyl ether.

Note 1: Emulsions may be eliminated by adding, using as a spray, small quantities of ethyl alcohol or methyl alcohol.

5.1.4.

The ethyl ether extracts are combined in a separating funnel and washed with distilled water (50 ml at a time) until the washing water gives a neutral reaction.

Discard the washing water, dry with anhydrous sodium sulphate and filter, into a flask of 250 ml capacity which has been weighed beforehand, the funnel and filter being washed with small quantities of ethyl ether which are added to the total.

5.1.5.

Distil the ether down to a few ml, then bring to dryness under a slight vacuum or in a current of nitrogen, completing drying in an oven at 100 °C for approximately a quarter of an hour, and then weigh after cooling in a desiccator.

5.2.   Separation of alcoholic fractions

5.2.1.

Preparation of basic TLC plates: the silica gel plates (4.4) are immersed completely, in 0,2 N potassium hydroxide solution (4.5) for 10 seconds, and then left to dry for two hours under an extractor hood and finally placed in an oven at 100 °C for one hour.

Remove from the oven and keep in a calcium chloride desiccator until required for use (plates treated in this way must be used within 15 days).

Note 2:

When basic silica gel plates are used to separate the alcoholic fraction there is no need to treat the unsaponifiables with alumina. It follows that all acid compounds (fatty acids and others) are retained at the origin thereby obtaining both aliphatic alcohol and terpenic alcohol bands which are both separated distinctly from the sterol band.

5.2.2.

Place a 65/35 by volume hexane/ethyl ether mixture in the plate-developing chamber to a depth of approximately 1 cm ( 6 ).

Close the chamber using an appropriate cover and leave for half an hour to allow equilibration between vapour and liquid. Strips of filter paper dipping into the eluent may be affixed to the inside surfaces of the tank to reduce the development time by approximately one third and obtain more uniform, regular elution of the components.

Note 3: The developing solution must be replaced for each analysis in order to obtain reproducible developing conditions.

5.2.3.

An approximately 5 % solution of unsaponifiable matter (5.1.5) in chloroform is prepared and 0,3 ml of the solution is streaked as a uniform strip of minimum thickness, using the 100 μl microsyringe, on a TLC plate at approximately 2 cm from the bottom of the TLC plate. Aligned with the origin, 2 to 3 μl of the aliphatic alcohols reference solution (4.11) are spotted for the identification of the aliphatic alcohols band after development has been completed.

5.2.4.

Place the plate inside the development tank as stated in 5.2.2. The ambient temperature should be maintained between 15 and 20 °C. Immediately close the chamber with the cover and allow to elute until the solvent front reaches approximately 1 cm from the upper edge of the plate.

The plate is then removed from the development chamber and the solvent evaporated under a hot air current or the plate is left for a while under the extractor hood.

▼M28

5.2.5.

Il-folja tiġi sprejjata ftit u b'mod uniformi bis-soluzzjoni ta' 2′, 7′-diklorofluworeskein meta l-folja hija osservata taħt dawl ultravjola. Il-faxxa tal-alkoħol alifatiku tista' tiġi identifikata permezz ta' allinjament mat-tebgħa miksuba mis-soluzzjoni ta' referenza: immarka l-limiti tal-faxxa b'lapes iswed; immarka l-parti ta' barra tal-faxxa tal-alkoħol alifatiku u l-faxxa li tinsab immedjatament fuqha, li hija l-faxxa tal-alkoħol terpeniku, flimkien.

Nota 4:

Il-faxxa tal-alkoħol alifatiku u l-faxxa tal-alkoħol terpeniku għandhom jiġu miġbura flimkien minħabba l-migrazzjoni possibbli ta' xi alkoħol alifatiku fil-faxxa tal-alkoħol terpeniku. Eżempju tas-separazzjoni TLC jingħata fil-Figura 1 tal-Appendiċi.

5.2.6.

Permezz ta' spatula tal-metall aqla' l-ġell tas-silika fiż-żona mmarkata. Poġġi l-materjal mitħun fin li jkun tneħħa fil-lembut tal-filter (3.7). Żid 10 ml ta' kloroform sħun, ħawwad sew bl-ispatula tal-metall u ffiltra taħt vakwu, u iġbor il-filtrat fil-flask koniku (3.8) imwaħħal mal-lembut tal-filtrazzjoni.

Aħsel ir-residwu fil-flask tliet darbiet bl-eteru tal-etil (madwar 10 ml kull darba) u iġbor il-filtrat fl-istess flask imwaħħal mal-lembut. Evapora l-filtrat għal volum ta' 4 sa 5 ml, ittrasferixxi s-soluzzjoni residwa għat-tubu tat-testijiet ta' 10 ml imwieżen qabel (3.9), evaporah sakemm jinxef permezz ta' sħana ħafifa fi fluss ħafif ta' nitroġenu, imbagħad erġa' żid permezz ta' ftit qatriet ta' aċeton, erga' evapora sakemm jinxef, poġġi ġo forn ta' 105 °C għal madwar 10 minuti imbagħad ħalli joqgħod fid-dessikatur u iżen.

Ir-residwu fit-tubu tat-testijiet huwa magħmul mill-frazzjoni alkoħolika.

▼M19

5.3.   Preparation of the trimethylsilyl ethers

5.3.1.

The reagent for silylation, consisting of a mixture of 9:3:1 by volume (Note 5) of pyridine-hexamethyldisilazane-trimethylchlorosilane in the proportion of 50 μl for each milligram of aliphatic alcohols, is added to the test tube containing the alcoholic fraction, avoiding all absorption of moisture (Note 6).

Note 5:

Solutions which are ready for use are available commercially. Other silanising reagents such as, for example, bis-trimethylsilyl, trifluor acetamide + 1 % trimethyl chlorosilane, which has to be diluted with an equal volume of anhydrous pyridine, are also available.

Note 6:

The slight opalescence which may form is normal and does not cause any interference. The formation of a white floc or the appearance of a pink colour are indicative of the presence of moisture or deterioration of the reagent. If these occur the test must be repeated.

5.3.2.

Stopper the test tube, shake carefully (without overturning) until the aliphatic alcohols are completely dissolved. Stand for at least 15 minutes at ambient temperature and then centrifuge for a few minutes. The clear solution is ready for gas chromatographic analysis.

5.4.   Gas chromatography analysis

5.4.1.   Preliminary operations, column packing

5.4.1.1.

Fit the column in the gas chromatograph, attaching the inlet end to the injector connected to the splitting system and the outlet end to the detector. Carry out a general check of the gas chromatography assembly (tightness of gas fittings, efficiency of the detector, efficiency of the splitting system and of the recording system, etc.).

5.4.1.2.

If the column is being used for the first time it is recommended that it should be subjected to conditioning. A little carrier gas is passed through the capillary column and then the gas chromatography assembly is switched on and gradually heated until a temperature not less than 20 °C above the operating temperature (see Note 7) is attained. That temperature is held for not less than two hours and then the assembly is brought to the operating conditions (regulation of gas flow, split flame ignition, connection to the electronic recorder, adjustment of the temperature of the capillary column oven, the detector and the injector, etc.) and the signal is adjusted to a sensitivity not less than twice the highest level contemplated for the execution of the analysis. The course of the base line must be linear, without peaks of any kind, and must not drift. A negative straight-line drift indicates leakage from the column connections; a positive drift indicates inadequate conditioning of the column.

Note 7:

The conditioning temperature shall be at least 20 °C less than the maximum temperature contemplated for the liquid phase employed.

5.4.2.   Choice of operating conditions

5.4.2.1. The guideline operating conditions are as follows:

 column temperature: the initial isotherm is set at 180 °C for eight minutes and then programmed at 5 °C/minute to 260 °C and a further 15 minutes at 260 °C,

 temperature of evaporator: 280 °C,

 temperature of detector: 290 °C,

 linear velocity of carrier gas: helium 20 to 35 cm/s, hydrogen 30 to 50 cm/s,

 splitting ratio: 1:50 to 1:100,

 sensitivity of instrument: 4 to 16 times the minimum attenuation,

 sensitivity of recording: 1 to 2 mV fs,

 paper speed: 30 to 60 cm/h,

 quantity of substance injected: 0,5 to 1 μl of TMSE solution.

The above conditions may be modified according to the characteristics of the column and of the gas chromatograph to obtain chromatograms satisfying the following conditions:

 alcohol C26 retention time shall be 18 ± 5 minutes,

 the alcohol C22 peak shall be 80 ± 20 % of the full scale value for olive oil and 40 ± 20 % of the full scale value for seed oil.

5.4.2.2. The above requirements are checked by repeated injection of the standard TMSE mixture of alcohols and the operating conditions are adjusted to yield the best possible results.

5.4.2.3. The parameters for the integration of peaks shall be set so that a correct appraisal of the areas of the peaks considered is obtained.

5.4.3.   Analytical procedure

5.4.3.1. Using the microsyringe of 10 μl capacity draw in 1 μl of hexane followed by 0,5 μl of air and subsequently 0,5 to 1 μl of the sample solution; raise the plunger of the syringe further so the needle is emptied. Push the needle through the membrane of the injection unit and after one to two seconds inject rapidly, then slowly remove the needle after some five seconds.

5.4.3.2. Recording is effected until the TMSE of the aliphatic alcohols present have been eluted completely. The base line shall always correspond to the requirements of 5.4.1.2.

▼M28

5.4.4.    Identifikazzjoni tal-quċċata.

L-identifikazzjoni tal-qċaċet individwali ssir skont il-ħinijiet ta' retenzjoni u bi tqabbil mat-taħlita standard TMSE, analizzata taħt l-istess kundizzjonijiet.

Eżempji ta' kromatogramma tal-frazzjoni alkoħolika ta' żejt taż-żebbuġa raffinat jintwerew fil-Figuri 2 u 3 tal-Appendiċi.

▼M19

5.4.5.   Quantitative evaluation

5.4.5.1. The peak areas of 1-eicosanol and of the aliphatic alcohols C22, C24, C26 and C28 are calculated by electronic integration.

5.4.5.2. The contents of each aliphatic alcohol, expressed in mg/1 000 g fatty substance, are calculated as follows:

image

where:

Ax

=

area of the alcohol peak x

As

=

area of 1-eicosanol

ms

=

mass of 1-eicosanol in milligrams

m

=

mass of sample drawn for determination, in grams.

6.   EXPRESSION OF THE RESULTS

The contents of the individual aliphatic alcohols in mg/1 000 g of fatty substance and the sum of the total aliphatic alcohols are reported.

▼M28




Appendiċi

Eżempju ta' separazzjoni TLC u eżempji ta' kromatogramma

Figura 1

Platt tal-kromatografija b'saff irqiq tal-frazzjoni li ma tistax tiġi ssapunifikata miż-żejt taż-żebbuġa elwit bl-eteru tal-eżan/etiliku (65/35)

image



1

Alkoħol C26

A

Steroli

2

Alkoħol C30

B

Alkoħol alfatiku

3

Alkoħol C20

C

Alkoħol triterpeniku

4

Taħlita ta' Alkoħol C20-22-26-30

D

Skwalin

5

Straverġni mhux saponifikabbli

 

 

Figura 2

Kromatogramma tal-frazzjoni alkoħolika ta' żejt taż-żebbuġa raffinat

image



1 = Fitol

5 = Alkoħol C24

9 = 24-Metilen-ċikloartenol

2 = Ġeranil ġeranjol

6 = Alkoħol C26

10 = Ċitrostadjenol

3 = Alkoħol C20 (IS)

7 = Alkoħol C28

11 = Ciklobranol

4 = Alkoħol C22

8 = Ċikloartenol

 

Figura 3

Alkoħol alifatiku u triterpreniku ta' żejt taż-żebbuġa raffinat u ta' żejt taż-żebbuġa wara t-tieni ċentrifugazzjoni

image



1 = Fitol

5 = Alkoħol C24

9 = 24-Metilen-ċikloartenol (24MeCA)

2 = Ġeranil ġeranjol (CX)

6 = Alkoħol C26

10 = Ċitrostadjenol

3 = Alkoħol C20

7 = Alkoħol C28

11 = Ciklobranol

4 = Alkoħol C22

8 = Ċikloartenol (CA)

 

▼M23




ANNESS XX

Metodu biex jiġi determinat il-kontenut ta' xema', esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin, u esteri etiliċi tal-aċidi xaħmin permezz ta' kromatografija b'fażi gassuża f'kolonna kapillari

1.   L-GĦAN

Dan il-metodu huwa biex jiddetermina l-kontenut ta' xema', esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin, u esteri etiliċi tal-aċidi xaħmin fiż-żjut taż-żebbuġa. Ix-xemgħat u l-esteri alkiliċi individwali huma separati skont l-għadd ta' atomi tal-karbonju. Il-metodu huwa rrakkomandat bħala għodda biex tiddistingwixxi bejn żejt taż-żebbuġa u żejt mir-residwi taż-żebbuġa u bħala parametru ta' kwalità għaż-żjut taż-żebbuġa extra verġni, billi jippermetti li jinstabu taħliliet frodulenti ta' żjut taż-żebbuġa extra verġni ma' żjut ta' kwalità inferjuri kemm jekk huma verġni, lampanti jew ċerti żjut deodorizzati.

2.   IL-PRINĊIPJU

Żieda ta’ standards interni addattati għaż-żejt u għall-frazzjonar permezz tal-kromatografija fuq kolonna idrata tal-ġell siliku. Irkuprar tal-frazzjoni miksub taħt il-kondizzjonijiet tal-eżaminar (li l-polarità tiegħu tkun inqas minn dik ta’ trijaċilgliċeroli), u analiżi diretta permezz ta' kromatografija b'fażi gassuża f'kolonna kapillari.

3.   L-APPARAT

3.1.

Kontenitur Erlenmeyer, 25 ml.

3.2.

Kolonna tal-ħġieġ għal kromatografija likwida, dijametru intern ta' 15 mm, tul ta' 30-40 ċm, bi stopkokk adattat imwaħħal magħha.

3.3.

Kromatografija b'fażi gassuża adattata għall-użu ma' kolonna kapillari, mgħammra b'sistema għal injezzjoni diretta fuq il-kolonna li tikkonsisti minn:

3.3.1.

Forn ikkontrollat termostatikament bi programmar tat-temperatura.

3.3.2.

Injettur kiesaħ biex jagħti l-injezzjoni dirett fuq il-kolonna

3.3.3.

Detettur u konvertur-amplifikatur tal-jonizzazzjoni bi fjamma.

3.3.4.

Integratur-reġistratur (Nota 1) għall-użu mal-konvertur amplifikatur (punt 3.3.3), b'ħin ta' rispons ta' mhux aktar minn 1 s u b'veloċità varjabbli għal karta.

Nota 1:  Jistgħu jintużaw ukoll sistemi kompjuterizzati meta d-dejta tal-kromatorgrafija b'fażi gassuża jiddaħħlu fil-kompjuter.

3.3.5.

Kolonna kapillari, bis-silika fużjonata (għall-analiżi tax-xema' u l-esteri metiliċi/etiliċi tal-aċidi xaħmin), tul 8-12 m, dijametru intern 0.25-0.32 mm, miksija minn ġewwa b'fażi likwida (Nota 2) għal ħxuna uniformi ta' 0.10-0.30 μm.

Nota 2:  Fażijiet likwidi kummerċjali adatti huma disponibbli għal dan il-għan, bħal SE52, SE54, eċċ.

3.4.

Siringa mikro, 10 μl, b'labra mwebbsa, biex tiġi injettata direttament fil-kolonna.

3.5.

Xejker tal-elettriku.

3.6.

Evaporatur rotatorju.

3.7.

Forn Muffle.

3.8.

Miżien analitiku b'eżattezza ta' ± 0.1 mg.

3.9.

Oġġetti normali tal-ħġieġ tal-laboratorju.

4.   REAĠENTI

4.1.

Ġell siliku, 60-200 μm qiesu xibka. Poġġi l-ġell siliku fil-forn muffle f'temperatura ta' 500 C għal mill-inqas 4 siegħat. Ħalliħ jibred u mbagħad żid 2 % ilma relattivament mal-kwantità ta' ġell siliku użat. Ixxejkja sew biex it-taħlita tiġi omoġena u żomm fid-dessikatur għal mill-inqas 12-il siegħa qabel l-użu.

4.2.

n-essan, grad ta' kromatografija jew grad tal-fdal (trid tiġi vverifikata l-purità).

TWISSIJA – Il-fwar jista' jieħu n-nar. Żomm ’il bogħod minn sorsi ta' sħana, xrarat jew fjammi mikxufa tan-nar. Kun ċert li l-flixken dejjem jingħalqu tajjeb. Matul l-użu, ara li jkun hemm ventilazzjoni tajba. Evita li jinġema' l-fwar u neħħi kull periklu possibbli ta' nar, bħal ħiters jew tagħmir elettriku mhux manifatturat minn materjal li ma jiħux nar. Jekk jittieħed man-nifs huwa perikuluż, għax jista' jikkawża ħsara fiċ-ċelloli tan-nervituri. Evita li tibla’ l-fwar. Uża apparat respiratorju adattat jekk hemm bżonn. Evita l-kuntatt mal-għajnejn jew mal-ġilda.

4.3.

Etere etiliku, grad ta' kromatografija.

TWISSIJA – Fjammabbli ħafna u moderatament tossiku. Jirrita l-ġilda. Perikoluż jekk jittieħed man-nifs. Jista' jagħmel ħsara lill-għajnejn. L-effetti tiegħu jistgħu jdumu ma jinħassu. Jista' jifforma perossidi esplussivi. Il-fwar jista' jieħu n-nar. Żomm ’il bogħod minn sorsi ta' sħana, xrarat jew fjammi mikxufa tan-nar. Kun ċert li l-flixken dejjem jingħalqu tajjeb. Matul l-użu, ara li jkun hemm ventilazzjoni tajba. Evita li jinġema' l-fwar u neħħi kull periklu possibbli ta' nar, bħal ħiters jew tagħmir elettriku mhux manifatturat minn materjal li ma jiħux nar. Tħallix li jkun hemm evaporazzjoni san-nixfa jew kważi nixfa. Jekk iżżid l-ilma jew aġent adattat li jnaqqas l-effett tista' tnaqqas il-formazzjoni tal-perossidu. Tixorbux. Evita li tibla’ l-fwar. Evita kuntatt fit-tul, jew repetut, mal-ġilda.

4.4.

n-ettan, grad ta' kromatografija, jew iso-ottan.

TWISSIJA – fjammabbli. Perikoluż jekk jittieħed man-nifs. Żomm ’il bogħod minn sorsi ta' sħana, xrarat jew fjammi mikxufa tan-nar. Kun ċert li l-flixken dejjem jingħalqu tajjeb. Matul l-użu, ara li jkun hemm ventilazzjoni tajba. Evita li tibla’ l-fwar. Evita kuntatt fit-tul, jew repetut, mal-ġilda.

4.5.

Soluzzjoni standard ta’ lawril araċidat (Nota 3), f’ 0.05 % (m/V) fil-ettan (standard intern għax-xema').

Nota 3:  Jistgħu jintużaw ukoll Palmitat tal-palmitil, stearat tal-miristil jew lawreat tal-araċidil.

4.6.

Soluzzjoni standard ta’ ettodeċanoat metiliku, f’0.02 % (m/V) fil-ettan (standard intern għal esteri metiliċi/etiliċi).

4.7.

Sudan 1 (1-fenilażo-2-naftol).

4.8.

Gass trasportatur: idroġenu jew elju, pur, gass grad tal-kromatografija.

TWISSIJA

Idroġenu. Fjammabbli ħafna meta taħt pressjoni. Żomm ’il bogħod minn sorsi ta' sħana, xrarat, fjammi mikxufa tan-nar jew apparat elettriku mhux manifatturat minn materjal li ma jiħux nar. Kun ċert li l-valv tal-flixkun jkun magħluq meta ma jkunx qed jintuża. Uża dejjem ma' apparat li jnaqqas il-pressjoni. Irrilaxxa t-tensjoni tal-molla tal-apparat li jnaqqas il-pressjoni qabel ma tiftaħ il-valv tal-flixkun. Toqgħodx quddiem l-għonq tal-flixkun meta tiftaħ il-valv. Matul l-użu, ara li jkun hemm ventilazzjoni tajba. Tittrasferix l-idroġenu minn flixkun għal ieħor. Tħallatx gass fil-flixkun. Kun ċert li l-flixken ma jkunux jinqelbu. Żommhom ’il bogħod mix-xemx jew sorsi ta' sħana. Aħżinhom f'ambjent mhux korrossiv. Tużax flixken li huma difettużi jew mingħajr tikketta.

Elju. Gass ikkumpressat fi pressjoni għolja. Inaqqas l-ammont ta' ossiġnu disponibbli għan-nifs. Żomm il-flixkun magħluq. Matul l-użu, ara li jkun hemm ventilazzjoni tajba. Tidħolx fi mħażen ta' dan il-prodott jekk ma jkollhomx ventilazzjoni tajba. Uża dejjem apparat li jnaqqas il-pressjoni. Irrilaxxa t-tensjoni tal-molla tal-apparat li jnaqqas il-pressjoni qabel ma tiftaħ il-valv tal-flixkun. Titfrasferix l-gass minn flixkun għal ieħor. Kun ċert li l-fliexken ma jkunux jistgħu jinqalbu. Toqgħodx faċċata tal-għonq tal-flixkun meta tiftaħ il-valv. Żommhom ’il bogħod mix-xemx jew sorsi tas-sħana. Aħżinhom f'ambjent mhux korrossiv. Tużax fliexken li huma difettużi jew mingħajr tikketta. Tieħdux man-nifs. Użah biss għal għanijiet tekniċi.

4.9.

Gassijiet awżiljarji:

 Idroġenu, pur, gass grad tal-kromatografija.

 Arja, pura, gass grad tal-kromatografija.

TWISSIJA

Arja. Gass ikkumpressat fi pressjoni għolja. Fil-preżenza ta' sustanzi kombustibbli uża b'kawtela, għaliex it-temperatura li jieħdu n-nar minnhom infishom bosta mill-komposti organiċi fl-arja hija konsiderevolment aktar baxxa taħt pressjoni għolja. Kun ċert li l-valv tal-flixkun jkun magħluq meta ma jkunx qed jintuża. Uża dejjem apparat li jnaqqas il-pressjoni. Irrilaxxa t-tensjoni tal-molla tal-apparat li jnaqqas il-pressjoni qabel ma tiftaħ il-valv tal-flixkun. Toqgħodx faċċata tal-għonq tal-flixkun meta tiftaħ il-valv. Titfrasferix l-gass minn flixkun għal ieħor. Tħallatx gass fil-flixkun. Kun ċert li l-flixken ma jkunux jistgħu jinqalbu. Żommhom ’il bogħod mix-xemx jew sorsi tas-sħana. Aħżinhom f'ambjent mhux korrossiv. Tużax flixken li huma difettużi jew mingħajr tikketta. L-arja intenzjonata għal għanijiet tekniċi ma għandhiex tittieħed bin-nifs jew f'apparat respiratorju.

5.   IL-PROĊEDURA

5.1.    Preparazzjoni tal-kolonna kromatografika

Issospendi 15 g ta' ġell siliku (punt 4.1) fil-n-essan (punt 4.2) u introduċi fil-kolonna (punt 3.2). Ħallih joqgħod spontanjament. Kompli t-tqegħid bl-għajnuna ta’ xejker elettriku biex tagħmel il-qiegħ kromotografiku iktar omoġenu. Ipperkola 30 ml ta' n-essan biex tneħħi l-impuritajiet. Iżen eżattament madwar 500 mg tal-kampjun fi flask ta’ 25 ml (punt 3.1), permezz tal-miżien analitiku (punt 3.8), u żid ammont xieraq ta’ standard intern (punt 4.5), skont il-kontenut tax-xama ssopponut, eż. żid 0.1 mg ta' lawril araċidat fil-każ ta’ żejt taż-żebbuġa, 0.25 sa 0.50 mg fil-każ ta’ żejt mir-residwi taż-żebbuġ, u 0.05 mg ta' ettodeċanoat metiliku għaż-żejt taż-żebbuġa (punt 4.6).

Ittrasferixxi l-kampjun ippreparat għall-kolonna kromatografika bil-għajnuna ta’ żewġ porzjonijiet ta' 2-ml ta’ n-essan (punt 4.2).

Ħalli s-solvent inixxi sa 1 mm ’il fuq mill-ogħla livell tal-assorbent. Erġa’ pperkola l-n-essan/etere etiliku (99:1) u iġbor 220 ml bi tnixxija ta' madwar 15-il taqtira kull 10 sekondi. (Din il-frazzjoni fiha l-esteri metiliċi u etiliċi, u x-xema'). (Nota 4) (Nota 5).

Nota 4:  It-taħlita ta' n-essan/etere etiliku (99:1) trid tiġi ppreparata mill-ġdid kuljum

Nota 5:  100 μl ta' kulur Sudan I ta' 1 % fit-taħlita tal-elużjoni tista' tiġi miżjuda mat-taħlita tal-kampjun biex teżamina viżwalment li x-xemgħat huma elużi sew.

Il-ħin tar-retenzjoni tal-kulur huwa bejn dak tax-xema' u t-trijaċilgliċeroli. Għalekk, meta l-kulur jinżel fil-qiegħ tal-kolonna kromatografika, l-elużjoni trid tiġi sospiża għaliex ix-xemgħat kollha jkunu ġew elużi.

Evapora l-frazzjonijiet riżultanti f'evaporatur rotatorju sakemm is-solvent jiġi kważi eliminat. Neħħi l-aħħar 2 ml taħt kurrent ħafif ta' nitroġenu. Iġbor il-frazzjoni li fiha l-esteri metiliċi u etiliċi u ħallatha b'2-4 ml ta' n-ettan jew iso-ottan.

5.2.    Analiżi bil-kromatografija b'fażi gassuża

5.2.1.    Proċedura preliminari

Waħħal il-kolonna mal-kromatografija b'fażi gassuża (punt 3.3), u għaqqad il-bokka mas-sistema ta' fuq il-kolonna u l-iżbokk mad-detettur. Iċċekkja l-apparat tal-kromatografija b'fażi gassuża (operazzjoni ta’ gass loops, effiċjenza ta' detettur u sistema ta' rikording, eċċ.).

Jekk il-kolonna tkun qed tintuża għall-ewwel darba, huwa aħjar tiġi kundizzjonata. Għaddi nixxija ħafifa ta’ gass mill-kolonna, imbagħad ixgħel l-apparat tal-kromatografija b'fażi gassuża. Saħħan bil-mod sakemm tintlaħaq temperatura ta' 350 C wara madwar 4 siegħat.

Żomm din it-temperatura għal mill-inqas sagħtejn, imbagħad irregola l-apparat għall-kundizzjonijiet operattivi (irregola l-fluss tal-gass, ixgħel fjamma, qabbad ma’ rikorder elettroniku (punt 3.3.4), irregola t-temperatura tal-forn għall-kolonna, irregola d-detettur, eċċ.). Irrekordja s-sinjal fi stat sensittiv mill-anqas darbtejn ogħla minn dak meħtieġ biex tagħmel l-analiżi. Il-linja bażi għandha tkun lineari, mingħajr ebda tip ta’ qċaċet, u ma jridx ikollha xi tip ta’ devjazzjoni.

Devjazzjoni negattiva f'linja dritta tindika li l-konnessjonijiet mal-kolonna mhumiex tajbin, waqt li devjazzjoni pożittiva tindika li l-kolonna ġietx ikkundizzjonata sew.

5.2.2.    Għażla ta' kundizzjonijiet ta' operar għax-xema', il-esteri metiliċi u etiliċi (Nota 6).

Il-kundizzjonijiet tal-operar ġeneralment huma kif ġej:

Temperatura tal-kolonna :

20 °C/min 5 °C/min

80 °C għall-ewwel (1′) image 140 °C image 335 °C (20)

Temperatura tad-detettur : 350 °C.

Ammont injettat : 1 μl ta' soluzzjoni n-ettan (2-4 ml).

Gass trasportatur : elju jew idroġenu bil-veloċità linjari ottima għall-gass magħżul (ara l-Appendiċi A).

Sensittività tal-istrument : adattat biex jilħaq il-kundizzjonijiet ta' hawn fuq.

Nota 6: Minħabba t-temperatura għolja finali, devjazzjoni pożittiva hija permessa, iżda ma tistax taċċedi iktar minn 10 % tal-valur massimu tal-iskala.

Dawn il-kundizzjonijiet jistgħu jiġu mmodifikati skont il-karatteristiċi tal-kolonna u l-kromatografija b'fażi gassuża biex jiġu sseparati x-xemgħat u esteri metiliċi u etiliċi tal-aċidi xaħmin kollha, u biex tintlaħaq separazzjoni sodisfaċenti fil-quċċata (ara l-Grafiċi 2, 3 u 4), u ħin ta' retenzjoni ta' 18 ± 3 minuta għall-istandard intern tal-lawril araċidat. Il-quċċata l-iktar rappreżentattiva tax-xema' trid tkun iktar minnn 60 % tal-valur massimu tal-iskala, filwaqt li l-istandard intern tal-ettodeċanoat metiliku għall-esteri metiliċi u etiliċi jrid jilħaq il-valur massimu tal-iskala.

Il-parametri tal-integrazzjoni tal-qċaċet għandhom jiġu ddeterminati b’tali mod li tikseb evalwazzjoni korretta tal-erjas tal-qċaċet ikkunsidrati.

5.3.    Prestazzjoni tal-analiżi

Ħu 10 μl tas-soluzzjoni permezz ta' siringa mikro ta' 10 μl, waqt li tiġbed lura l-manku tas-siringa sakemm il-labbra titbattal kompletament. Introduċi l-labbra fis-sistema ta' injezzjoni u injetta malajr wara 1-2 sekondi. Wara għal xi 5 sekondi oħroġ il-labbra bil-mod.

Wettaq l-irrekordjar sakemm ix-xema' jew l-istigmastadeini jiġu elużi kompletament, skont il-frazzjoni li tkun qed tiġi analizzata.

Il-linja bażi trid dejjem tissodisfa l-kondizzjonijiet meħtieġa.

5.4.    Identifikazzjoni tal-qċaċet

Identifika l-qċaċet mill-ħinijiet tar-retenzjoni billi tikkomparahom mat-taħlit tax-xema' b'ħinijiet ta’ retenzjoni magħrufa, analizzati taħt l-istess kundizzjonijiet. L-esteri alkiliċi jiġu identifikati minn taħlitiet ta' esteri metiliċi u etiliċi tal-aċidi xaħmin ewlenin fiż-żjut taż-żebbuġa (palmitiċi u taż-żejt).

Il-Grafika 1 tagħti l-kromatogramma tax-xema' fiż-żejt taż-żebbuġa verġni. Il-Grafiċi 2 u 3 juru l-kromatogrammi ta' żewġ żjut taż-żebbuġa verġni għall-bejgħ bl-imnut, wieħed bl-esteri metiliċi u etiliċi u l-ieħor mingħajrhom. Il-Grafika 4 turi l-kromatogrammi għal żejt taż-żebbuġa extra verġni tal-ogħla kwalità, u l-istess żejt mħallat 20 % b'żejt deodorizzat.

5.5.    Analiżi kwantitattiva tax-xema'

Iddetermina l-erjas tal-qċaċet li jikkorrispondu mal-istandard intern tal-lawril araċidat, u l-esteri alifatiċi minn C40 sa C46 bl-għajnuna tal-integratur.

Iddetermina l-kontenut totali tax-xema' billi tgħodd kull xema' individwali, f'mg/kg ta' xaħam, kif ġej:

image

fejn:

Ax

=

erja li tikkorrispondi għall-quċċata tal-esteru individwali, fl-unità użata mill-kompjuter

As

=

erja li tikkorrispondi għall-quċċata tal-istandard intern tal-lawril araċidat, fl-unità użata mill-kompjuter

ms

=

massa miżjuda tal-istandard intern tal-lawril araċidat, f’milligrammi;

m

=

massa tal-kampjun meħud għad-determinazzjoni, fi grammi.

5.5.1.    Analiżi kwantitattiva tal-esteri metiliċi u etiliċi

Bl-għajnuna tal-integratur, iddetermina l-erjas tal-qċaċet li jikkorrispondu għall-istandard intern tal-ettodeċanoat metiliku, l-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin C16 u C18, u l-esteri eteliċi tal-aċidi xaħmin C16 u C18.

Iddetermina l-kontenut ta' kull esteru alkiliku f'mg/kg ta' xaħam, kif ġej:

image

fejn:

Ax

=

erja li tikkorrispondi għall-quċċata tal-esteru individwali C16 u C18, fl-unità użata mill-kompjuter

As

=

l-erja li tikkorrispondi għall-quċċata tal-istandard intern tal-ettodeċanoat metiliku, fl-unità użata mill-kompjuter

ms

=

massa miżjuda tal-istandard intern tal-ettodeċanoat metiliku, f’milligrammi;

m

=

massa tal-kampjun meħud għad-determinazzjoni, fi grammi.

6.   L-ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

Irraporta s-somma tal-kontenuti tax-xemgħat differenti minn C40 sa C46 (Nota 7) f'milligrammi kull kilogramma ta' xaħam.

Irraporta s-somma tal-kontenuti tal-esteri metiliċ u l-esteri etiliċi minn C16 sa C18 u t-total tat-tnejn.

Ir-riżultati għandhom jiġu espressi għall-eqreb mg/kg.

Nota 7:  Il-komponenti għal kwantifikazzjoni jirreferi għall-qċaċet b'numri pari tal-karbonju fost l-esteri C40 – C46, skont il-kromatogramma kampjun tax-xemgħat fiż-żejt taż-żebbuġa provdut fil-grafika mehmuża. Għall-għanijiet ta' identifikazzjoni, jekk l-esteri C46 jinqasam, huwa rrakkomandat li tiġi analizzata l-frazzjoni tax-xema' ta' żejt mir-residwu taż-żebbuġa fejn il-quċċata C46 tista' tiġi ddistingwata, għaliex hija evidentement predominanti.

Irraporta l-proporzjon bejn l-esteri etiliċi u l-esteri metiliċi.

Grafika 1

Eżempju ta' kromatogramma tal-ġass tal-frazzjoni tax-xema' ta' żejt taż-żebbuġa ( 7 )

image

Il-qċaċet b'ħin ta' retenzjoni minn 5 sa 8 minuti tal-esteri metiliċi u etiliċi tal-aċidi xaħmin

Elementi ewlenin:

I.S.

=

Lawril araċidat

1

=

Esteri diterpeniċi

2+2′

=

Esteri C40

3+3′

=

Esteri C42

4+4′

=

Esteri C44

5

=

Esteri C46

6

=

Esteri steroli u alkoħol triterpeniku

Grafika 2

Esteri metiliċi, esteri etiliċi u xema' fiż-żejt taż-żebbuġa verġni

image

Elementi ewlenin:

1

Metil C16

2

Etil C16

3

Standar intern tal-ettodeċanoat metiliku

4

Metil C18

5

Etil C18

6

Squalene

7

Standard intern tal-lawril araċidat

A

Esteri diterpeniċi

B

Xema'

C

Esteri steroli u esteri triterpeniċi

Grafika 3

Esteri metiliċ, esteri etiliċi u xema' fiż-żejt taż-żebbuġa extra verġni

image

Elementi ewlenin:

1

Standard intern tal-ettodeċanoat metiliku

2

Metil C18

3

Etil C18

4

Squalene

5

Standard intern tal-lawril araċidat

A

Esteri diterpeniċi

B

Xema'

C

Esteri steroli u esteri triterpeniċi

Grafika 4

Parti tal-kromatogrammi għal żejt extra verġni taż-żebbuġa u l-istess żejt mħallat b'żejt deodorizzat

image

Elementi ewlenin:

1

Standard intern tal-metil miristato

2

Metil palmitat

3

Etil palmitat

4

Standar intern tal-ettodeċanoat metiliku

5

Metil linoleat

6

Methyl oleate

7

Methyl stearate

8

Ethyl linoleate

9

Ethyl oleate

10

Ethyl stearate




Appendiċi A

Determinazzjoni tal-veloċità linjari tal-gass

Injetta 1:3 μl metan (jew propan) fl-apparat kromatografiku b'fażi gassuża, wara li tirregolah għall-kundizzjonijiet normali ta' operar. Ħu l-ħin li l-gass jieħu biex jgħaddi mill-kolonna mill-mument li jiġi injettat sakemm tidher l-quċċata (tM).

Il-veloċità lineari f’ċm/sekonda tinsab bil-formola L/tM fejn L huwa l-għoli tal-kolonna, f’ċm, u tM huwa l-ħin imkejjel f’sekondi.

▼M28 —————

▼M25




ANNESS XXI



Riżultati tal-verifiki tal-konformità mwettqa fuq iż-żjut taż-żebbuġa msemmija fl-Artikolu 8(2)

 

Tikkettar

Parametri kimiċi

Karatteristiċi organolettiċi (4)

Konklużjoni finali

kampjun

Kategorija

Pajjiż tal-oriġini

Post tal-ispezzjoni (1)

Isem Legali

Denominazzjoni tal-oriġini

Kundizzjonijiet tal-ħżin

Informazzjoni żbaljata

Leġġibilità

C/NC (3)

Parametri lil hinn mil-limitu

Iva/Le

Jekk iva, jekk jogħġbok indika liema waħda (i) (2)

C/NC (3)

Difett medjan

Fruttat medjan

C/NC (3)

Azzjoni meħtieġa

Sanzjoni

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(1)   Suq intern (mitħna, ibbottiljar, stadju tal-bejgħ bl-imnut), esportazzjoni, importazzjoni.

(2)   Kull karatteristika taż-żejt taż-żebbuġa stipulata fl-Anness I għandu jkollha kodiċi.

(3)   Konformi/mhux konformi.

(4)   Mhux meħtieġa għaż-żejt taż-żebbuġa u żejt mhux raffinat mir-residwi taż-żebbuġ.



( 1 ) ĠU L 228, 1.9.2009, p. 3.

( 2 ) Id-Direttiva 2011/91/UE tal-Parlament Ewropew u tal-Kunsill tat-13 ta’ Diċembru 2011 dwar l-indikazzjonijiet jew il-marki li jidentifikaw il-lott li għalih jappartjeni oġġett tal-ikel (ĠU L 334, 16.12.2011, p. 1).

( 3 ) Wara l-eluzzjoni ta’ l-isterol esters, il-linja kromatografika ma għandhiex ikollha qċaċet sinifikattivi (triglycerides)

( 4 ) Ir-Regolament (UE) Nru 1308/2013 tal-Parlament Ewropew u tal-Kunsill tas-17 ta' Diċembru 2013 li jistabbilixxi organizzazzjoni komuni tas-swieq fi prodotti agrikoli u li jħassar ir-Regolamenti tal-Kunsill (KEE) Nru 922/72, (KEE) Nru 234/79, (KE) Nru 1037/2001 u (KE) Nru 1234/2007 (ĠU L 347, 20.12.2013, p. 671).

( 5 ) Huma jistgħu ma jduqux iż-żejt meta jinnutaw attribut negattiv intens ferm bis-sens dirett tax-xamm u f’dak il-każ għandhom iniżżlu din iċ-ċirkustanza eċċezzjonali fil-folja tal-profil.

( 6 ) In these cases in particular, a 95/5 by volume benzene/acetone eluent mixture must be used to obtain distinct band separation.

( 7 ) Wara l-elużjoni tal-esteri steroli, il-kromatogramma ma għandha turi ebda quċċata sinifikanti (trijaċilgliċeroli).