“ANNESS IX

INVESTIGAZZJONI SPETTROFOTOMETRIKA FL-ULTRAVJOLA

DAĦLA

Eżaminazzjoni spettrofotometrika fl-ultravjola tista' tipprovdi tagħrif dwar il-kwalità ta' xaħma, l-istat ta' konservazzjoni tagħha, u t-tibdiliet miġjuba fiha minn proċessi teknologiċi. L-assorbiment tal-meded tat-tul ta' mewġa speċifikat fil-metodu huwa dovut għall-preżenza ta' sistemi konjugati ta' diene u triene, b'riżultat ta' proċessi ta' ossidazzjoni u/jew prattiċi ta' rfinar. Dawn l-assorbimenti huma espressi bħala estinzjonijiet speċifiċi (l-estinzjoni ta' soluzzjoni ta' 1 % w/v tax-xaħam fis-solvent speċifikat, f'ċellola ta' 10 mm), konvenzjonalment indikata b'K (imsejħa wkoll ‘koeffiċjent ta' estinzjoni’).

1.   KAMP TA' APPLIKAZZJONI

Dan l-Anness jiddeskrivi l-proċedura għat-twettiq ta' eżaminazzjoni spettrofotometrika ta' żejt taż-żebbuġa fl-ultravjola.

2.   PRINĊIPJU TAL-METODU

Kampjun jiddewweb fis-solvent meħtieġ, u l-assorbiment tas-soluzzjoni tiġi mbagħad titkejjel fil-meded tat-tul ta' mewġa speċifikati b'referenza għal solvent pur.

L-estinzjonijiet speċifiċi fi 232 nm u 268 nm fl-isoottan jew 232 nm u 270 nm fiċ-ċikloeżan huma kkalkulati għal konċentrazzjoni ta' 1 % w/v f'ċellola ta' 10 mm.

3.   TAGĦMIR

3.1.   Spettrofotometru xieraq għall-kejl f'meded tat-tul ta' mewġa tal-ultravjola (minn 220 nm sa 360 nm), bil-kapaċità li jaqra unitajiet nanometriċi individwali. Huwa rakkomandat li ssir verifika regolari għall-preċiżjoni u r-riproduċibbiltà tal-assorbiment u tal-iskali tal-medda tat-tul ta' mewġa, kif ukoll għad-dawl mhux iċċentrat.

3.1.1.   Skala tal-medda tat-tul ta' mewġa: Din tista' tiġi ċċekkjata bl-użu ta' materjal ta' referenza li jkun jikkonsisti minn filtru ottiku tal-ħġieġ li jkun fih l-ossidu tal-olmju jew soluzzjoni li jkun fiha l-ossidu tal-olmju (siġillat jew le) li għandu faxex distinti ta' assorbiment. Il-materjali ta' referenza huma ddisinjati għall-verifika u l-ikkalibrar tal-iskali tal-medda tat-tul tal-mewġa ta' spettrofotometri viżibbli u ultravjola li għandhom wisa' nominali tal-faxxa spettrali ta' 5 nm jew inqas. Il-kejl isir kontra vojt tal-arja fil-firxa tat-tul ta' mewġa ta' bejn 640 u 240 m, skont l-istruzzjonijiet inklużi mal-materjal ta' referenza. Issir korrezzjoni ta' bażi b'beam path vojta ma' kull alterazzjoni tal-medda tat-tul. Il-meded tat-tul ta' mewġa tal-istandard huma elenkati fiċ-ċertifikat tal-materjal ta' referenza.

3.1.2.   Skala tal-assorbenza: Din tista' tiġi ċċekkjata bl-użu ta' materjali ta' referenza siġillati u disponibbli fis-suq, li jkunu jikkonsistu minn soluzjonijiet ta' dikromat tal-potassju fl-aċidu, f'ċerti kunċentrazzjonijiet u valuri ċċertifikati ta' assorbiment fil-λmax tiegħu (ta' 4 soluzzjonijiet ta' dikromat tal-potassju fl-aċidu perkloriku siġillati f'erba' kuvetti UV tal-kwarz sabiex jitkejlu l-linearità u r-referenza tal-preċiżjoni fotometrika fl-UV). Is-soluzzjonijiet ta' dikromat tal-potassju jitkejlu kontra vojt tal-aċidu użat, wara l-korrezzjoni tal-bażi, skont l-istruzzjonijiet inklużi mal-materjal ta' referenza. Il-valuri ta' assorbiment huma elenkati fiċ-ċertifikat tal-materjal ta' referenza.

Possibbiltà oħra biex jiġi vverifikat ir-rispons tal-fotoċellula u l-fotomultiplikatur hija li wieħed jipproċedi kif ġej: iżen 0,2000 g ta' kromat tal-potassju pur għall-ispettrofotometrija u dewweb f'soluzzjoni ta' 0,05 N ta' soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju fi flask gradat ta' 1 000 ml, u żid sal-marka. Ħu eżattament 25 ml tas-soluzzjoni miksuba, ferra' fi flask gradat ta' 500 ml u ddilwa sal-marka billi tuża l-istess soluzzjoni ta' idrossidu tal-potassju.

Kejjel l-estinzjoni tas-soluzzjoni hekk miksuba f'275 nm, billi tuża s-soluzzjoni ta' idrossidu tal-potassju bħala referenza. L-estinzjoni mkejla permezz ta' kuvetta ta' 1 cm għandha tkun ta' 0,200 ± 0,005.

3.2.   Kuvetti tal-kwarz rettangolari, bl-għotjien, xierqa għal kejl fil-meded tat-tul ta' mewġa ultravjola (bejn 220 u 360 mm), li jkollhom traġitt ottimu ta' 10 mm. Meta mimlijin bl-ilma jew solvent ieħor xieraq, il-kuvetti m'għandhomx juru differenzi ta' aktar minn 0,01 unità ta' estinzjoni bejniethom.

3.3.   Flasks volumetriċi ta' marka waħda, b'kapaċità ta' 25 ml, il-klassi A.

3.4.   Miżien analitiku, li jista' jaqra sal-eqreb 0,0001 g.

4.   REAĠENTI

Matul l-analiżi, sakemm mhux speċifikat mod ieħor, uża biss reaġenti ta' grad analitiku rikonoxxut, kif ukoll ilma distillat jew demineralizzat, ta' purità ekwivalenti.

Solvent: Iso-ottan (2,2,4 trimetilpentan) għal kejl fi 232 nm u 268 nm jew ċikloessan għal kejl fi 232 nm u 270 nm, b'assorbiment ta' inqas minn 0,12 fi 232 nm u inqas minn 0,05 fi 270 nm b'riferiment għall-ilma distillat, imkejjel f'ċellola ta' 10 mm.

5.   PROĊEDURA

5.1.   Il-kampjun imsemmi għandu jkun perfettament omoġenju u mingħajr impuritajiet sospiżi. Jekk mhuwiex, għandu jiġi ffiltrat bil-karta, f'temperatura ta' madwar 30 °C.

5.2.   Iżen bi preċiżjoni madwar 0,25 g (sal-eqreb 1 mg) tal-kampjun hekk imħejji fi flask gradat ta' 25 ml, żid sal-marka bis-solvent speċifikat u omoġenizza. Is-soluzzjoni miksuba għandha tkun perfettament ċara. Jekk ikun hemm opalexxenza jew torbidezza, iffiltra malajr bil-karta.

NOTA: Ġeneralment, massa ta' 0,25-0,30 g tkun biżżejjed għall-kejl tal-assorbiment taż-żjut taż-żebbuġa verġni u straverġni f'268 nm u f'270 nm. Għall-kejl f'232 nm, is-soltu jkun jeħtieġ kampjun ta' 0,05 g, għalhekk is-soltu jitħejjew żewġ soluzzjonijiet distinti. Għall-kejl tal-assorbiment taż-żjut mir-residwi taż-żebbuġ, taż-żjut taż-żebbuġa raffinati, u taż-żjut taż-żebbuġa adulterati, is-soltu jkun jeħtieġ porzjon iżgħar tal-kampjun, eż. 0,1 g, minħabba l-assorbiment aħjar tagħhom.

5.3.   Jekk meħtieġ, ikkoreġi l-linja bażi (220-290 nm) bis-solvent fiż-żewġ ċelloli tal-kwarz (il-kampjun u r-referenza), imbagħad imla ċ-ċellola tal-kwarz kampjun bis-soluzzjoni tat-test u kejjel l-estinzjonijiet f'232, 268 u 270 nm kontra s-solvent użat bħala referenza.

Il-valuri tal-estinzjoni li jiġu rreġistrati għandhom jaqgħu fil-medda ta' bejn 0,1 u 0,8, jew fil-firxa tal-linearità tal-ispettrofotometru li għandha tiġi vverifikata. Jekk le, għandu jerġa' jsir il-kejl billi jintużaw soluzzjonijiet aktar konċentrati jew aktar dilwiti, kif ikun xieraq.

5.4.   Wara l-kejl tal-assorbiment f'268 jew 270 nm, kejjel l-assorbiment fi λmax, λmax + 4 u λmax – 4. Dawn il-valuri ta' assorbiment jintużaw biex tiġi ddeterminata l-varjazzjoni fl-estinzjoni speċifika (ΔΚ).

NOTA: λmax huwa meqjus ta' 268 nm għall-isoottan użat bħala solvent, u ta' 270 nm għas-cikloeżan.

6.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

6.1.   Irreġistra l-estinzjonijiet speċifiċi (koeffiċjenti ta' estinzjoni) fuq it-tuliet tal-mewġa differenti ikkalkolati kif ġej:

fejn:

Kλ	=	estinzjoni speċifika fuq it-tul tal-mewġa λ;
Eλ	=	estinzjoni mkejla fuq it-tul tal-mewġa λ;
c	=	konċentrazzjoni tas-soluzzjoni fi g/100 ml;
s	=	tul tat-traġitt taċ-ċellola tal-kwarz f'cm;

espressi sa żewġ ċifri deċimali.

6.2.   Varjazzjoni tal-estinzjoni speċifika (ΔΚ)

Il-varjazzjoni tal-valur assolut tal-estinzjoni (ΔΚ) tinħadem hekk:

fejn Km hija l-estinzjoni speċifika fil-medda tat-tul ta' mewġa għall-assorbiment massimu fi 270 mm u 268 mm, skont is-solvent użat.

Ir-riżultati għandhom jiġu espressi sa żewġ ċifri deċimali.”

ANNESS X

DETERMINAZZJONI TAL-ESTERI METILIĊI TAL-AĊIDI XAĦMIN PERMEZZ TAL-KROMOTOGRAFIJA B'FAŻI GASSUŻA

1.   KAMP TA' APPLIKAZZJONI

Dan l-Anness jagħti gwida dwar id-determinazzjoni tal-kromotografija b'fażi gassuża tal-aċidi xaħmin ħielsa u marbuta fix-xaħmijiet u ż-żjut veġetali, wara l-konverżjoni tagħhom f'esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin (FAME).

L-aċidi xaħmin marbuta tat-triaċilgliċeroli (TAGs) u, skont il-metodu ta' esterifikazzjoni, l-aċidi xaħmin ħielsa (FFA), jiġu kkonvertiti f'esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin (FAME), li jiġu ddeterimati permezz tal-kromotografija kapillari b'fażi gassuża.

Il-metodu deskritt f'dan l-Anness jippermetti d-determinazzjoni tal-FAME minn C12 sa C24, inklużi l-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin li jkunu saturati, ċismonoinsaturati u transmonoinsaturati, u ċispoliinsaturati u transpoliinsaturati.

2.   PRINĊIPJU

Il-kromotografija b'fażi gassuża (GC) tintuża għall-analiżi kwantitattiva tal-FAME. Il-FAME jitħejjew skont il-Parti A. Imbagħad jiġu injettati u vaporizzati fl-injettur. Is-separazzjoni tal-FAME ssir fuq kolonni analitiċi ta' polarità u ta' tul speċifiċi. Jintuża Individwatur tal-Jonizzazzjoni bi Fjamma (FID) għad-detezzjoni tal-FAME. Il-kundizzjonijiet tal-analiżi jingħataw fil-Parti B.

L-idroġenu jew l-elju jistgħu jintużaw bħala l-gass trasportatur (il-fażi mobbli) fil-kromotografija b'fażi gassuża tal-FAME bil-FID. L-idroġenu jħaffef is-separazzjoni u jwassal għal qċaċet iktar akuti. Il-fażi stazzjonarja hija saff mikroskopiku ta' rita likwida rqiqa fuq wiċċ sod inerti magħmul mis-silika mdewba.

Hekk kif jgħaddu mill-kolonna kapillarja, il-komposti volatilizzati li qed jiġu analizzati jinteraġixxu mal-fażi stazzjonarja, u b'hekk jiksu l-wiċċ ta' ġewwa tal-kolonna. Minħabba din l-interazzjoni differenti ta' komposti differenti, jelwixxu f'ħin differenti, u dan il-ħin jissejjaħ il-ħin ta' retenzjoni tal-komposta għal sett determinat ta' paramentri tal-analiżi. It-tqabbil tal-ħinijiet ta' retenzjoni jintuża għall-identifikazzjoni tal-komposti differenti.

PARTI A

TĦEJJIJA TAL-ESTERI METILIĊI TAL-AĊIDI XAĦMIN MIŻ-ŻJUT TAŻ-ŻEBBUĠA U MIŻ-ŻJUT MIR-RESIDWI TAŻ-ŻEBBUĠA

1.   KAMP TA' APPLIKAZZJONI

Din il-parti tispeċifika t-tħejjija tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin. Tinkludi metodi għat-tħejjija tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin miż-żjut taż-żebbuġa u miż-żjut mir-residwi taż-żebbuġa.

2.   QASAM TA' APPLIKAZZJONI

It-tħejjija tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin minn żjut taż-żebbuġa u minn żjut mir-residwi taż-żebbuġa ssir bit-transesterifikazzjoni b'soluzzjoni metanolika tal-idrossidu tal-potassju f'temperatura tal-ambjent. Il-ħtieġa ta' purifikazzjoni tal-kampjun qabel it-transesterifikazzjoni tiddependi mill-kontenut ta' aċidi xaħmin ħielsa tal-kampjun, u mill-parametru analitiku li għandu jiġi ddeterminat, li jista' jintgħażel skont it-tabella li ġejja:

Kategorija taż-żejt	Metodu
Żejt taż-żebbuġa verġni b'aċidità ≤ 2,0 %	1. Aċidi xaħmin 2. Aċidi xaħmin trans 3. ΔECN42 (wara l-purifikazzjoni bil-ġell tas-silika SPE)
Żejt taż-żebbuġa raffinat
Żejt taż-żebbuġa magħmul minn żejt taż-żebbuġa raffinat u żjut taż-żebbuġa verġni
Żejt mir-residwi taż-żebbuġa raffinat
Żejt mir-residwi taż-żebbuġa
Żejt taż-żebbuġa verġni b'aċidità > 2,0 % Żejt mir-residwi taż-żebbuġa mhux raffinat	1. Aċidi xaħmin (wara l-purifikazzjoni bil-ġell tas-silika SPE) 2. Aċidi xaħmin trans (wara l-purifikazzjoni bil-ġell tas-silika SPE) 3. ΔECN42 (wara l-purifikazzjoni bil-ġell tas-silika SPE)

3.   METODOLOĠIJA

3.1.   Transesterifikazzjoni b'soluzzjoni metanolika ta' idrossidu tal-potassju f'temperatura tal-ambjent.

3.1.1.   Prinċipju

L-esteri metiliċi huma fformati bit-transesterifikazzjoni bl-idrossidu tal-potassju metanoliku bħala stadju intermedju qabel ma ssir is-sapunifikazzjoni.

3.1.2.   Reaġenti

3.1.2.1.   Metanol b'mhux iktar minn 0,5 % (m/m) kontenut tal-ilma.

3.1.2.2.   Eżan, kwalità kromatografika.

3.1.2.3.   Ettan, kwalità kromatografika.

3.1.2.4.   Eteru djetiliku, stabilizzat għall-analiżi.

3.1.2.5.   Aċeton, kwalità kromatografika.

3.1.2.6.   Solvent tal-elużjoni biex jippurifika ż-żejt bil-kolonna kromatografika/SPE, taħlita ta' eżan u eteru djetiliku 87/13 (v/v).

3.1.2.7.   Idrossidu tal-potassju, soluzzjoni metanolika ta' madwar 2 M: dewweb 11,2 g idrossidu tal-potassju f'100 ml metanol.

3.1.2.8.   Skrataċ tal-ġell tas-silika, 1 g (6 ml), għall-estrazzjoni f'fażi solida.

3.1.3.   Tagħmir

3.1.3.1.   Tubi tat-testijiet bit-tapp tal-kamin (b'volum ta' 5 ml), b'tapp li jkun fih ġunta PTFE.

3.1.3.2.   Pipetti gradati jew awtomatiċi, 2 ml u 0,2 ml.

3.1.4.   Purifikazzjoni tal-kampjuni taż-żejt

Fejn meħtieġ, il-kampjuni se jiġu ppurifikati billi ż-żejt jingħadda minn skartoċċ tal-estrazzjoni tal-ġell tas-silika b'fażi solida. Skartoċċ tal-ġell tas-silika (3.1.2.8) jitqiegħed f'apparat għall-elużjoni b'vakwu u jinħasel f'vakwu b'6 ml ta' eżan (3.1.2.2); il-ħasil isir mingħajr vakwu. Wara dan, soluzzjoni taż-żejt (madwar 0,12 g) f'0,5 ml ta' eżan (3.1.2.2) titgħabba fuq il-kolonna. Is-soluzzjoni tinġibed 'l isfel u mbagħad tiġi elwita b'10 ml ta' eżan/eteru djetiliku (87:13 v/v) (3.1.2.6). L-elwiti mħallta jiġu omoġenizzati u jinqasmu f'żewġ volumi simili. Alikwota tiġi evaporata sakemm tinxef f'evaporatur rotanti taħt pressjoni ridotta u f'temperatura tal-ambjent. Ir-residwu jiddewweb f'1 ml ta' etan u s-soluzzjoni tkun lesta għall-analiżi għall-aċidi xaħmija mill-GC. It-tieni alikwota tiġi evaporata u r-residwu jiddewweb f'1 ml ta' aċeton għall-analiżi għat-trigliċeridi bl-HPLC, jekk meħtieġ.

3.1.5.   Proċedura

F'tubu tat-testijiet bit-tapp tal-kamin ta' 5 ml (3.1.3.1), iżen madwar 0,1 g mill-kampjun taż-żejt. Żid 2 ml etan (3.1.2.2), u ħawwad. Żid 0,2 ml ta' soluzzjoni tal-idrossidu tal-potassju metanoliku (3.1.2.7), agħlaq bit-tapp li jkun fih ġunta PTFE, issikka t-tapp, u ħawwad sew għal 30 sekonda. Ħalli t-taħlita tistratifika ruħha sakemm is-soluzzjoni ta' fuq tiċċara. Ferra' s-saff ta' fuq li jkun fih l-esteri metiliċi. Is-soluzzjoni tal-etan hija lesta għall-injezzjoni fil-kromatografu b'fażi gassuża. Huwa rakkomandabbli li s-soluzzjoni tinżamm fil-friġġ sal-mument tal-analiżi bil-kromatografija b'fażi gassuża. Mhux rakkomandabbli li s-soluzzjoni tinħażen għal iktar minn 12-il siegħa.

PARTI B

DETERMINAZZJONI TAL-ESTERI METILIĊI TAL-AĊIDI XAĦMIN PERMEZZ TAL-KROMOTOGRAFIJA B'FAŻI GASSUŻA

1.   KAMP TA' APPLIKAZZJONI

Din il-parti tagħti gwida ġenerali għall-applikazzjoni tal-kromatografija b'fażi gassuża f'kolonna kapillari, għad-determinazzjoni tal-kompożizzjoni kwalitattiva u kwantitattiva ta' taħlita ta' esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin miksuba skont il-metodu speċifikat fil-Parti A.

Din il-parti ma tapplikax għall-aċidi xaħmin polimerizzati.

2.   REAĠENTI

2.1.   Gass trasportatur

Gass inerti (l-elju jew l-idroġenu), imnixxef sewwa u b'kontenut ta' ossiġenu ta' inqas minn 10 mg/kg.

Nota 1:

L-idroġenu jista' jirdoppja l-veloċità tal-analiżi, iżda huwa perikoluż. Mezzi ta' sikurezza huma disponibbli.

2.2.   Gassijiet awżiljarji

2.2.1.   Idroġenu (purità ≥ 99,9 %), ħieles mit-tniġġis organiku.

2.2.2.   Arja jew ossiġenu, ħielsa mit-tniġġis organiku.

2.2.3.   Nitroġenu (purità > 99 %).

2.3.   Standard ta' referenza

Taħlita ta' esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin puri, jew l-esteri metiliċi ta' xaħam ta' kompożizzjoni magħrufa, li jekk jista' jkun jixbah lil dak tal-materja xaħmija li għandha tiġi analizzata. Isomeri ċis u trans ta' esteri metiliċi ottadekenojċi, ottadekadienojċi u ottadekatrienojċi huma utli għall-identifikazzjoni tal-isomeri trans tal-aċidi insaturati.

Wieħed għandu joqgħod attent li jimpedixxi l-ossidazzjoni tal-aċidi xaħmin poliinsaturati.

3.   TAGĦMIR

L-istruzzjonijiet mogħtija għandhom x'jaqsmu mat-tagħmir normali użat għall-kromatografija b'fażi gassuża, bl-użu ta' kolonni kapillari u ta' detettur tal-jonizzazzjoni bil-fjamma.

3.1.   Kromatografu b'fażi gassuża

Il-kromatografu b'fażi gassuża għandu jkollu l-elementi li ġejjin.

3.1.1.   Sistema ta' injezzjoni

Użu ta' sistema ta' injezzjoni b'kolonni kapillari, f'liema każ is-sistema ta' injezzjoni għandha tkun iddisinjata b'mod speċjali għall-użu ma' tali kolonni. Tista' tkun tat-tip li tifred jew tista' tkun tat-tip li ma tifridx fuq tip ta' injezzjoni tal-kolonna.

3.1.2.   Forn

Il-forn għandu jkun kapaċi jsaħħan il-kolonna kapillari sa temperatura ta' mill-inqas 260 °C, u li jżomm it-temperatura mixtieqa f'firxa ta' 0,1 °C. Dan l-aħħar rekwiżit huwa partikolarment importanti meta jintuża tubu tas-silika mdewba.

L-użu tat-tisħin bit-temperatura pprogrammata huwa rrakkomandat fil-każijiet kollha, u b'mod partikolari għall-aċidi grassi b'inqas minn 16-il atomu tal-karbonju.

3.1.3.   Kolonna kapillari

3.1.3.1.   Tubu, magħmul minn materjal inerti għas-sustanzi li għandhom jiġu analizzati (ġeneralment tal-ħġieġ jew tas-silika mdewba). Id-djametru intern għandu jkun bejn 0,20 u 0,32 mm. Il-wiċċ intern għandu jiġi ttrattat b'mod xieraq (eż. tħejjija tal-wiċċ, diżattivazzjoni) qabel ma jirċievi l-kisja tal-fażi stazzjonarja. Tul ta' 60 m ikun biżżejjed għall-aċidu xaħmi u għall-isomeri ċis u trans tal-aċidi xaħmin.

3.1.3.2.   Kolonni fil-fażi stazzjonarja u marbutin bil-polisiloksan polari (ċjanopropilsilikon) huma xierqa.

Nota 2:

Hemm riskju li l-polisiloksani polari jagħtu lok għal xi diffikultajiet fl-identifikazzjoni u s-separazzjoni tal-aċidu linoleniku u l-aċidi C20.

Il-kisjiet għandhom ikunu rqaq, jiġifieri bejn 0,1 u 0,2 μm.

3.1.3.3.   Assemblaġġ u kondizzjonament tal-kolonna

Irrispetta l-prekawzjonijiet normali għall-assemblaġġ tal-kolonni kapillari, jiġifieri t-tqegħid tal-kolonna fil-forn (support), l-għażla u l-assemblaġġ tal-ġonot (nuqqas ta' tnixxijiet), it-tqassim tat-truf tal-kolonna fl-injettur u d-detettur (tnaqqis tal-ispazji moħlija). Qiegħed il-kolonna taħt kurrent tal-gass trasporatur (eż. 0,3 bar (30 kPa) f'każ ta' kolonna ta' tul ta' 25 m u djametru intern ta' 0,3 mm).

Ikkundizzjona l-kolonna billi tipprogramma t-temperatura tal-forn fi 3 °C/min mit-temperatura tal-ambjent sat-temperatura ta' 10 °C taħt il-limiti ta' dekompożizzjoni tal-fażi stazzjonarja. Żomm il-forn f'din it-temperatura għal siegħa sakemm tiġi stabbilita l-linja bażi. Reġġa' t-temperatura għal 180 °C biex taħdem f'kundizzjonijiet isotermiċi.

Nota 3:

Kolonni kkundizzjonati minn qabel b'mod xieraq huma disponibbli kummerċjalment.

3.1.4.   Detettur u tal-jonizzazzjoni bi fjamma u konvertur-amplifikatur.

3.2.   Siringa

Is-siringa għandu jkollha kapaċità massima ta' 10 μl, u tkun iggradata f'diviżjonijiet ta' 0,1 μl.

3.3.   Sistema ta' ksib tad-dejta

Sistema ta' ksib tad-dejta mqabbda fuq l-internet bid-detetturi, imħaddma bi programm tas-softwer xieraq għall-integrazzjoni u n-normalizzazzjoni tal-qċaċet.

4.   PROĊEDURA

L-operazzjonijiet deskritti f'4.1 sa 4.3 huma marbutin mal-użu ta' detettur tal-jonizzazzjoni tal-fjamma.

4.1.   Kundizzjonijiet tat-test

4.1.1.   Għażla tal-kundizzjonijiet ottimi tal-operazzjoni għall-kolonni kapillari

Minħabba l-effiċjenza u l-permeabbiltà tal-kolonni kapillari, is-separazzjoni bejn il-kostitwenti u t-tul ta' żmien tal-analiżi jiddependu ħafna mir-rata ta' ċirkolazzjoni tal-gass trasportatur fil-kolonna. Għaldaqstant, se jkun meħtieġ li l-kundizzjonijiet tal-operazzjoni jiġu ottimizzati billi dan il-parametru jiġi aġġustat (jew sempliċiment it-telf mit-tarf ta' fuq tal-kolonna), skont jekk l-għan huwiex li tittejjeb is-separazzjoni jew li titħaffef l-analiżi.

Il-kundizzjonijiet li ġejjin sfaw xierqa għas-separazzjoni tal-FAMEs (C4 sa C26). Eżempji ta' kromatogrammi jintwerew fl-Appendiċi B:

Temperatura tal-injettur:	250 °C
Temperatura tad-detettur:	250 °C
Temperatura tal-forn:	minn 165 °C (8 min) sa 210 °C fi 2 °C/min
Idroġenu tal-gass trasportatur:	pressjoni tat-tarf ta' fuq tal-kolonna, 179 kPa
Fluss totali:	154,0 ml/min;
Proporzjon tal-firda:	1:100
Volum tal-injezzjoni:	1 μl

4.1.2.   Determinazzjoni tar-riżoluzzjoni (ara l-Appendiċi A)

Ikkalkula r-riżoluzzjoni R ta' żewġ qċaċet ġirien I u II, permezz tal-formola:

R = 2 × ((dr(II) – d r(I))/(ω(I) + ω(II))) jew R = 2 × ((tr(II) – t r(I))/(ω(I) + ω(II))) (USP) (United States Pharmacopeia),

Jew

R = 1,18 × ((tr(II) – tr(I))/(ω0,5(I) + ω0,5(II))) (EP, BP, JP, DAB), (JP (Japanese Pharmacopeia), EP (Pharmacopée Européenne), BP (British Pharmacopeia))

fejn:

d r(I) hija d-distanza ta' retenzjoni tal-quċċata I;

d r(II) hija d-distanza ta' retenzjoni tal-quċċata II;

t r(I) hija l-ħin ta' retenzjoni tal-quċċata I;

t r(II) hija l-ħin ta' retenzjoni tal-quċċata II;

ω(I) hija l-wisa' tal-bażi tal-quċċata I;

ω(II) hija l-wisa' tal-bażi tal-quċċata II;

ω0,5 hija l-wisa' tal-quċċata tal-kompost speċifikat, f'nofs il-għoli tal-quċċata;

Jekk ω(I) ≈ ω (II), ikkalkula R permezz tal-formoli li ġejjin:

R = (dr(II) – d r(I))/ω = (dr(II) – d r(I))/4σ

fejn:

σ hija d-devjazzjoni standard (ara l-Appendiċi A, il-Figura 1).

Jekk id-distanza dr bejn iż-żewġ qċaċet d r(II) - d r(I) hija ugwali għal 4σ, il-fattur ta' riżoluzzjoni huwa R = 1.

Jekk żewġ qċaċet ma jkunux għalkollox mifrudin, it-tanġenti għall-punti ta' inflezzjoni taż-żewġ qċaċet jaqsmu 'l xulxin fil-punt C. Sabiex iż-żewġ qċaċet jinfirdu għalkollox, id-distanza bejn iż-żewġ qċaċet għandha tkun ugwali għal:

d r(II) - d r(I) = 6 σ li minnu R = 1,5 (ara l-Appendiċi A, il-Figura 3).

5.   ESPRESSJONI TAR-RIŻULTATI

5.1.   L-analiżi kwalitattiva

Identifika l-qċaċet tal-esteri metiliċi tal-kampjun mill-kromatogramma fl-Appendiċi B, figura 1, jekk meħtieġ b'interpolazzjoni, jew bi tqabbil ma' dawk tat-taħlitiet ta' referenza ta' esteri metiliċi (kif indikat fil-punt 2.3).

5.2.   Analiżi kwantitattiva

5.2.1.   Determinazzjoni tal-kompożizzjoni

Ikkalkula l-frazzjoni tal-massa wi tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin individwali, espressi bħala perċentwal bil-massa tal-esteri metiliċi, kif ġej:

5.2.2.   Il-metodu tal-kalkolu

5.2.2.1.   Każ ġenerali

Ikkalkula l-kontenut ta' komponent partikolari i, espress bħala perċentwal skont il-massa tal-esteri metiliċi, billi tiddetermina l-perċentwal irrappreżentat mill-erja tal-quċċata korrispondenti relattiva għat-total tal-erja tal-qċaċet kollha, permezz tal-formula li ġejja:

wi = (Ai/ΣA) × 100

fejn:

Ai hija l-erja taħt il-quċċata tal-esteru metiliku tal-aċidu xaħmi individwali i;

ΣA hija s-somma tal-erji taħt il-qċaċet kollha tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin individwali.

Ir-riżultati għandhom jingħataw sa żewġ punti deċimali.

Nota 4:

Għax-xaħmijiet u ż-żjut, il-frazzjoni tal-massa tal-esteri metiliċi tal-aċidi xaħmin hija ugwali għall-frazzjoni tal-massa tat-triaċilgliċeroli fi grammi għal kull 100 g. Għall-każijiet li fihom din l-ipoteżi mhix permessa, ara 5.2.2.2.

5.2.2.2.   L-użu ta' fatturi ta' korrezzjoni

F'ċerti każijiet, ngħidu aħna fil-preżenza ta' aċidi xaħmin b'inqas minn tmien atomi tal-karbonju, jew ta' atomi bi gruppi sekondarji, l-erji għandhom jiġu kkoreġuti permezz ta' fatturi ta' korrezzjoni speċifiċi (Fci). Dawn il-fatturi għandhom jiġu ddeterminati għal kull strument għalih. Għal dan il-għan, għandhom jintużaw materjali ta' referenza speċifiċi b'kompożizzjoni ċertifikata ta' aċidu xaħmi fil-firxa korrispondenti.

Nota 5:

Dawn il-fatturi ta' korrezzjoni mhumiex identiċi għall-fatturi ta' korrezzjoni FID teoretiċi, li jingħataw fl-Appendiċi A, billi jinkludu wkoll il-prestazzjoni tas-sistema ta' injezzjoni, eċċ. Madankollu, fil-każ ta' differenzi ikbar, is-sistema kollha għandha tiġi vverifikata għall-prestazzjoni tagħha.

Għal din it-taħlita ta' referenza, il-perċentwal tal-massa tal-FAME i jingħata permezz tal-formula:

wi = (mi /Σm) × 100

fejn:

mi hija l-massa tal-FAME i fit-taħlita ta' referenza;

Σm hija t-total tal-mases tal-komponenti varji bħala FAMEs tat-taħlita ta' referenza.

Mill-kromatogramma tat-taħlita ta' referenza, ikkalkula l-perċentwal skont l-erja għall-FAME i, kif ġej:

wi = (Ai/ΣA) × 100

fejn:

Ai hija l-erja tal-FAME i fit-taħlita ta' referenza;

ΣA hija s-somma tal-erji kollha tal-FAMEs kollha tat-taħlita ta' referenza.

Għaldaqstant, il-fattur ta' korrezzjoni Fc huwa

Fc = (mi × ΣA)/(Ai/Σm)

Għall-kampjun, il-perċentwal skont il-massa ta' kull FAME i huwa:

wi = (Fi × Ai)/Σ (Fi × Ai)

Ir-riżultati għandhom jingħataw sa żewġ punti deċimali.

Nota 6:

Il-valur ikkalkulat jikkorrispondi għall-perċentwal tal-massa tal-aċidu xaħmi individwali kkalkulat bħala triaċilgliċeroli għal kull 100 g ta' xaħam.

5.2.2.3.   L-użu ta' standard intern

F'ċerti analiżi (pereżempju meta mhux l-aċidi xaħmin kollha jkunu kkwantifikati, bħal meta xi aċidi b'erba' karbonji jew sitta jkunu preżenti flimkien ma' aċidi b'16 u 18-il karbonju, jew meta jeħtieġ jiġi ddeterminat l-ammont assolut ta' xi aċidu xaħmi f'kampjun), jeħtieġ li jintuża Standard Intern. Spiss jintużaw aċidi xaħmin b'5, 15 jew 17-il karbonju. Il-fattur ta' korrezzjoni (jekk ikun hemm) għall-Istandard Intern għandu jiġi ddeterminat.

Il-perċentwal bil-massa tal-komponent i, espress bħala esteri metiliċi, jingħata mbagħad permezz tal-formula:

wi = (mIS × Fi × Ai)/(m × FIS × AIS)

fejn:

A i hija l-erja tal-FAME i;

A IS hija l-erja tal-istandard intern;

F i hija l-fattur ta' korrezzjoni tal-aċidu xaħmi i, espress bħala FAME;

F IS hija l-fattur ta' korrezzjoni tal-istandard intern;

m hija l-massa tal-porzjon tat-test, f'milligrammi;

m IS hija l-massa tal-istandard intern, f'milligrammi.

Ir-riżultati għandhom jingħataw sa żewġ punti deċimali.

6.   RAPPORT TAT-TEST

Ir-rapport tat-test għandu jispeċifika l-metodi użati għat-tħejjija tal-esteri metiliċi għall-analiżi tal-kromatografija b'fażi gassuża. Għandu wkoll isemmi d-dettalji kollha operattivi mhux speċifikati f'dan il-Metodu Standard, jew meqjusa mhux obbligatorji, flimkien ma' dettalji ta' kull inċident li seta' kellu influwenza fuq ir-riżultati.

Ir-rapport tat-test għandu jinkludi l-informazzjoni kollha meħtieġa għall-identifikazzjoni sħiħa tal-kampjun.

7.   PREĊIŻJONI

7.1.   Riżultati tat-test interlaboratorju

Id-dettalji ta' test interlaboratorju fuq il-preċiżjoni tal-metodu jingħataw fl-Anness C tal-istandard IOC/T.20/Doc. Nru 33. Il-valuri mnissla minn dan it-test interlaboratorju aktarx ma jkunux applikabbli għall-firxiet ta' konċentrazzjoni u għall-matriċi għajr dawk mogħtija.

7.2.   Ripetibbiltà

Id-differenza assoluta bejn żewġ riżultati ta' testijiet singoli indipendenti, miksuba bl-użu tal-istess metodu fuq materjal identiku għall-eżami fl-istess laboratorju mill-istess operatur bl-użu tal-istess tagħmir f'perjodu qasir ta' żmien, għandha tkun f'mhux aktar minn 5 % tal-każijiet akbar mill-valur r, mogħti fit-tabelli 1 sa 14 fl-Anness C tal-istandard IOC/T.20/Doc. Nru 33.

7.3.   Riproduċibbiltà

Id-differenza assoluta bejn żewġ riżultati ta' testijiet singoli, miksuba bl-użu tal-istess metodu fuq materjal identiku għall-eżami f'laboratorji differenti b'operaturi differenti u bl-użu ta' tagħmir differenti, għandha tkun f'mhux aktar minn 5 % tal-każijiet akbar mill-valur R, mogħti fit-tabelli 1 sa 14 fl-Anness C tal-istandard IOC/T.20/Doc. Nru 33.