Protokols Eiropas Līgumam

par asins grupu noteikšanas reaģentu apmaiņu

VISPĀRĪGI NOTEIKUMI

1. Specifiskums

Reaģentam asinsgrupu noteikšanai [1]

ir jāreaģē ar visiem pārbaudāmajiem asins paraugiem, kas satur antigēnu, kurš ir homologs antivielai vai citām uz etiķetes norādītām vielām.

Lietojot reaģentu saskaņā ar ražotāja ieteikto metodi, nav jābūt nevienam no šādiem faktoriem vai parādībām:

a) hemolītiskas īpašības;

b) antivielas vai citas vielas, kas nav norādītas uz etiķetes;

c) bakteriāli produkti, kas var radīt kļūdaini pozitīvu vai negatīvu reakciju;

d) pseidoaglutinācija, veidojot ruļļus;

e) bremzējoša ietekme.

2. Potenciālā iedarbība

Titru mēra, sagatavojot vairākus pētāmā reaģenta divkārtējus atšķaidījumus piemērotā vidē. Katram atšķaidījumam pievieno tādu pašu daudzumu sarkano asinsķermenīšu suspensijas. Titrs ir apgriezti proporcionāls skaitlim, kas izsaka vislielāko seruma atšķaidījumu, kurā notiek reakcija, atšķaidījuma kopējā apjoma aprēķinā neiekļaujot asinsķermenīšu suspensijas apjomu.

Attiecībā uz anti-A, anti-B un citiem reaģentiem, kas paredzēti darbam uz priekšmetstikliņiem, aktivitāti izsaka ar laiku, kas vajadzīgs, lai uz priekšmetstikliņa notiktu aglutinācijas reakcija.

3. Starptautiskie standarti un vienības

Pasaules Veselības organizācija noteikusi starptautiskos standartus anti-A, anti-B un nepilnīgiem anti-D reaģentiem asins grupu noteikšanai un pašlaik strādā pie standartu noteikšanas cita specifiskuma reaģentiem. Sagatavojot starptautiskos standartus, vienmēr nosaka konkrētas starptautiskas vienības uz mg vai ml, un tās nosaka neatkarīgi no titriem, kas novēroti, pētot noteiktu sarkano asinsķermenīšu preparātus [2]

4. Noturīgums un derīguma termiņš

Visiem reaģentiem, tos glabājot saskaņā ar ražotāja ieteiktajiem glabāšanas nosacījumiem, jāsaglabā vajadzīgās īpašības vismaz vienu gadu.

Reaģenta šķidrā formā derīguma termiņš, kas norādīts uz etiķetes, nav ilgāks par vienu gadu no dienas, kad veikts pēdējais potenciālās iedarbības tests ar apmierinošiem rezultātiem. Derīguma termiņu var pagarināt uz vienu gadu, atkārtoti vei cot potenciālās iedarbības testus.

Reaģentu sausā veidā derīguma termiņu, kas norādīts uz etiķetes, nosaka saskaņā ar rezultātiem, kas iegūti noturīguma pārbaudēs, un to apstiprina valsts kontroles iestādes.

5. Glabāšana

Reaģentus asinsgrupu noteikšanai var glabāt šķidrā vai sausā veidā. Sausus reaģentus glabā inertas gāzes atmosfērā vai vakuumā stikla iepakojumā, kurā tie izžāvēti un kuru noslēdz, lai novērstu mitruma iekļūšanu. Sausi reaģenti nedrīkst zaudēt vairāk kā 0,5 % svara, tos pārbaudot ar atkārtotu žāvēšanu ar fosfora pentoksīdu pie spiediena, kas nepārsniedz 0,02 mm dzīvsudraba, 24 stundas.

Reaģentus glabā, ievērojot dezinfekcijas pasākumus, un tajos nav bakteriālā piesārņojuma. Lai novērstu baktēriju vairošanos, kompetentā valsts iestāde var lemt, ka reaģentam jāpievieno antiseptiska un/vai antiobiotiska viela (vai arī tās pievieno šķīdinātājiem, kas ir komplektā ar sausajiem reaģentiem), ja vien reaģents ar pievienoto vielu joprojām atbilst specifiskuma un potenciālās iedarbības prasībām.

Cilvēka izcelsmes serumam asinsgrupu noteikšanai jāsatur vismaz 2,5 mg proteīna slāpekļa uz ml šķidra vai atjaunota seruma.

Šķidrajiem vai atjaunotajiem reaģentiem jābūt caurspīdīgiem un nav jāsatur nekādi nosēdumi, geli vai redzamas daļiņas.

6. Krāsojums

Reaģentus asinsgrupu noteikšanai, kas paredzēti starptautiskai apmaiņai, labāk mākslīgi neiekrāsot, kamēr nav noslēgta starptautiska vienošanās par vienotu sistēmu. Pievienotās krāsvielas nedrīkst traucēt īpašo reakciju.

7. Izsniegšana un daudzums

Reaģentus asinsgrupu noteikšanai izsniedz tādā veidā un daudzumā, ka vienā iepakojumā esoša reaģenta daudzums ir pietiekams, lai papildus testiem ar nezināmām daļiņām veiktu arī testus ar pozitīvām un negatīvām kontroldaļiņām. Reaģenta daudzums vienā iepakojumā ir tāds, ka to vajadzības gadījumā var izmantot šajā protokolā aprakstīto potenciālās iedarbības testu veikšanai.

8. Reģistri un paraugi

Ražošanas laboratorija glabā rakstveida reģistrus par visiem posmiem asinsgrupu noteikšanai paredzēto reaģentu ražošanā un kontrolē. Laboratorija saglabā visu saražoto reaģentu paraugus, līdz var pieņemt, ka attiecīgā reaģentu partija vairs nav lietošanā.

9. Reaģentu klasifikācija

Reaģenti asinsgrupu noteikšanai var saturēt cilvēku, dzīvnieku, augu (vai minerālu) izcelsmes vielas, no kurām dažas veido aktīvo vielu un citas ir palīgvielas reaģenta aktivitātes veicināšanai vai noturīguma saglabāšanai.

Tehnisku iemeslu dēļ šie reaģenti iedalīti trīs kategorijās atbilstīgi to aktīvās vielas izcelsmei. Tas nenozīmē, ka cilvēka izcelsmes reaģenti satur vienīgi cilvēka izcelsmes vielas vai ka dzīvnieku vai augu izcelsmes reaģenti nevar saturēt cilvēka izcelsmes vielas.

10. Etiķetes, lietošanas instrukcijas un apliecinājumi

Katram galīgajam iepakojumam piestiprina etiķeti angļu un franču valodā, drukātu ar melniem burtiem uz balta papīra, un tajā ietver šādu informāciju:

1) ražotāja nosaukums un adrese;

2) reaģenta nosaukums, kā tas formulēts attiecīgā apraksta virsrakstā;

3) ja pievienota antiseptiska un/vai antibiotiska viela, tās nosaukums un daudzums vai arī norāde, ka šādas vielas nav pievienotas;

4) reaģenta daudzums vai, ja reaģents ir sausā veidā, tā atjaunošanai vajadzīgā šķidruma daudzums un sastāvs;

5) derīguma termiņš;

6) partijas numurs.

Turklāt šajā etiķetē vai etiķetē uz kastes, kurā ir vairāki galīgie iepakojumi, vai arī iepakojumiem pievienotajā lietošanas instrukcijā norāda šādu informāciju:

1) ražotāja pilns nosaukums un adrese;

2) reaģenta nosaukums, kā tas ir formulēts attiecīgā apraksta virsrakstā;

3) reaģenta daudzums vai, ja reaģents ir sausā veidā, tā atjaunošanai vajadzīgā šķidruma daudzums un sastāvs;

4) pēdējā potenciālās iedarbības testa datums;

5) derīguma termiņš (ja ir);

6) partijas numurs;

7) ražotāja ieteiktā lietošanas veida apraksts;

8) neatvērtu ampulu glabāšanas nosacījumi un piesardzības pasākumi, kas veicami pēc ampulu atvēršanas;

9) precīzs sastāvs, ietverot arī antiseptiskas un/vai antibiotiskas vielas, ja tādas pievienotas;

10) paziņojums par to, ka ražojums satur vai nesatur cilvēka izcelsmes vielas.

Visiem sūtījumiem pievieno apliecinājumu, kas paredzēts Līguma 4. pantā un šā protokola pielikumā. Etiķešu un lietošanas instrukciju paraugi ir pievienoti šim protokolam.

ĪPAŠI NOTEIKUMI

A. CILVĒKA IZCELSMES SERUMS ASINSGRUPU NOTEIKŠANAI

a) CILVĒKA IZCELSMES SERUMS AB0 ASINSGRUPU NOTEIKŠANAI

i) Anti-A asinsgrupu noteikšanas serums (cilvēka izcelsmes)

Anti-A serumu iegūst no tādu atlasītu personu B grupas asinīm, kurām ir vai nav vakcinēti A grupas sarkanie asinsķermenīši vai A grupas īpaša viela. Anti-A serums rada aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur A antigēnu, t.i., A un AB grupas, ieskaitot A1, A2, A1B un A2B apakšgrupas asinsķermenīšiem, un nerada aglutinācijas reakciju ar cilvēka asinsķermenīšiem, kas nesatur A antigēnu, t.i., 0 un B grupas asinsķermenīšiem.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Anti-A serumu titrē atsevišķi attiecībā pret A1, A2, un A2B grupas asinsķermenīšu suspensiju paralēli atjaunotam, bet neatšķaidītam anti-A asinsgrupu noteikšanas seruma starptautiskajam standarta preparātam vai līdzvērtīgam salīdzināmajam preparātam. Seruma potenciālā iedarbība katru reizi nav mazāka par 64 starptautiskajām vienībām uz ml.

Aktivitātes noteikšana

Anti-A serumu sajaucot uz priekšmetstikliņa ar līdzvērtīgu daudzumu A1, A2 un A2B šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,05 līdz 0,1, katras suspensijas aglutinācijas reakcijai pirmo reizi jāparādās ne vēlāk kā pēc laika, kas divreiz pārsniedz laiku, kurā šī reakcija novērojama, veicot to pašu testu ar atjaunoto, bet neatšķaidīto anti-A asinsgrupu noteikšanas seruma starptautisko standarta preparātu vai ar līdzvērtīgas aktivitātes salīdzināmā standarta preparātu.

ii) Anti-B asinsgrupu noteikšanas serums (cilvēka izcelsmes)

Anti-B serumu iegūst no tādu atlasītu personu A grupas asinīm, kurām ir vai nav vakcinēti B grupas sarkanie asinsķermenīši vai B grupas īpaša viela. Anti-B serums veido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur B antigēnu, t.i., B un AB grupas asinsķermenīšiem, un neveido aglutinācijas reakciju ar cilvēka asinsķermenīšiem, kas nesatur B antigēnu, t.i., 0 un A grupas asinsķermenīšiem.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Anti-B serumu titrē atsevišķi attiecībā pret B grupas asinsķermenīšu suspensiju paralēli atjaunotam, bet neatšķaidītam anti-B asinsgrupu noteikšanas seruma starptautiskajam standarta preparātam vai līdzvērtīgam salīdzināmajam preparātam. Seruma potenciālā iedarbība katru reizi nav mazāka par 64 starptautiskajām vienībām uz ml.

Aktivitātes noteikšana

Anti-B serumu sajaucot uz priekšmetstikliņa ar līdzvērtīgu daudzumu B šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,05 līdz 0,1, aglutinācijas reakcijai pirmo reizi jāparādās ne vēlāk kā pēc laika, kas divreiz pārsniedz laiku, kurā šī reakcija novērojama, veicot to pašu testu ar atjaunoto, bet neatšķaidīto anti-B asinsgrupu noteikšanas seruma starptautisko standarta preparātu vai ar līdzvērtīgas aktivitātes salīdzināmā standarta preparātu.

iii) anti-A + anti-B(0 grupas) asinsgrupu noteikšanas serums (cilvēka izcelsmes)

Anti-A + anti-B (0 grupas) serumu iegūst no tādu atlasītu personu 0 grupas asinīm, kurām ir vai nav vakcinēti A un B grupas sarkanie asinsķermenīši vai A un B grupas īpašas vielas. Anti-A + anti-B (0 grupas) serums veido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur A vai B grupas vai abu aglutinogēnus, t.i., A grupas, ieskaitot apakšgrupas A1 un A2, B grupas un AB grupas, ieskaitot apakšgrupas A1B un A2B, un neveido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas nesatur A vai B aglutinogēnus, t.i., ar 0 grupas asinsķermenīšiem. Tas veido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur Ax (Ay vai Ao) antigēnu (ar ko parasti neveido aglutinācijas reakciju anti-A serums, kas iegūts no B grupas donoriem).

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Anti-A + anti-B (0 grupas) serumu titrē atsevišķi attiecībā pret A1 un A2 grupas asinsķermenīšu suspensiju paralēli atjaunotam, bet neatšķaidītam anti-A asinsgrupu noteikšanas seruma starptautiskajam standarta preparātam vai līdzvērtīgam salīdzināmajam preparātam. Anti-B serumu titrē atsevišķi attiecībā pret B grupas asinsķermenīšu suspensiju paralēli atjaunotam, bet neatšķaidītam anti-B asinsgrupu noteikšanas seruma starptautiskajam standarta preparātam vai līdzvērtīgam salīdzināmajam preparātam.

Seruma potenciālā iedarbība katru reizi nav mazāka par 64 starptautiskajām vienībām uz ml.

Anti-A + anti-B (0 grupas) asinsgrupu noteikšanas serums, ko izmanto neatšķaidītu, arī izraisa uzreiz konstatējamu Ax (Ay vai Ao) grupas daļiņu aglutināciju.

Aktivitātes noteikšana

Anti-A + anti-B (0 grupas) serumu sajaucot uz priekšmetstikliņa ar līdzvērtīgu daudzumu A1 un A2 šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,05 līdz 0,1, aglutinācijas reakcijai pirmo reizi jāparādās ne vēlāk kā pēc laika, kas divreiz pārsniedz laiku, kurā šī reakcija novērojama, veicot to pašu testu ar atjaunoto, bet neatšķaidīto anti-A asinsgrupu noteikšanas seruma starptautisko standarta preparātu vai ar līdzvērtīgas aktivitātes salīdzināmā standarta preparātu. Anti-A + anti-B (0 grupas) serumu sajaucot uz priekšmetstikliņa ar līdzvērtīgu daudzumu B šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,05 līdz 0,1, aglutinācijas reakcijai pirmo reizi jāparādās ne vēlāk kā pēc laika, kas divreiz pārsniedz laiku, kurā šī reakcija novērojama, veicot to pašu testu ar atjaunoto, bet neatšķaidīto anti-B asinsgrupu noteikšanas seruma starptautisko standarta preparātu vai ar līdzvērtīgas aktivitātes salīdzināmā standarta preparātu. Anti-A + anti-B (0 grupas) serumu sajaucot uz priekšmetstikliņa ar līdzvērtīgu daudzumu Ax (Ay vai Ao) šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,05 līdz 0,1, aglutinācijai pirmo reizi jāparādās ne vēlāk kā piecās minūtēs pie 18 līdz 25 °C temperatūras.

b) CILVĒKA IZCELSMES SERUMS Rh NOTEIKŠANAI

Anti-Rh asinsgrupu noteikšanas serumi neatkarīgi no to specifiskuma var būt divu veidu, kuri atšķiras ar apstākļiem, kādos notiek homologu daļiņu aglutinācija. Daži serumi, ko pazīst kā "pilnīgus", veido aglutinācijas reakciju ar asinsķermenīšiem, kas suspendēti fizioloģiskajā šķīdumā. Ar citiem, ko parasti apzīmē kā "nepilnīgus", aglutinācija var notikt tikai tad, ja ir klāt noteikti koloīdi, piemēram, liellopu albumīns, vai, izmantojot citas īpašas metodes. Serumus jālieto saskaņā ar nosacījumiem, ko precizējusi to ražotāja laboratorija.

Daži "nepilnīgi" serumi arī veido aglutinācijas reakciju uz priekšmetstikliņa ar homologiem sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas suspendēti savā serumā vai plazmā.

Kad būs pieejami starptautiskie standarta preparāti, var rasties vajadzība pārstrādāt šādas prasības attiecībā uz Rh grupu noteikšanas serumu potenciālo iedarbību:

i) Anti-D (anti-Rho) asinsgrupu noteikšanas serums (cilvēka izcelsmes)

Anti-D serumu iegūst no vienas vai vairāku tādu personu asinīm, kas ir vakcinētas ar Rh sistēmas D antigēnu. Tas reaģē ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur D antigēnu, bet ne ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas nesatur D antigēnu.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

"Pilnīga" anti-D seruma titrs ir ne mazāk par 32 pret CcDee šūnām šķīdumā, kas satur 9 gramus nātrija hlorīda uz litru.

"Nepilnīgu" anti-D serumu titrē attiecībā pret CcDee daļiņām paralēli atjaunotam, bet neatšķaidītam nepilnīga anti-D (anti-Rho) starptautiskajam standarta preparātam vai līdzvērtīgam salīdzināmajam preparātam. Tā potenciālā iedarbība ir ne mazāka par 32 starptautiskajām vienībām. Papildus reaģēšanai ar visiem sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur D antigēnu, serumam, cik vien iespējams, jāreaģē ar asinsķermenīšiem, kas satur Du antigēnu.

Aktivitātes noteikšana

Anti-D serumi, kas paredzēti izmantošanai Diamonda un Abelsona testā uz priekšmetstikliņa, tos sajaucot ar līdzvērtīgu daudzumu 40 līdz 50 % CcDee daļiņu suspensijas pie apmēram 40 °C, izraisa redzamu aglutinācijas reakciju 30 sekundēs, un aglutinācijai jābūt pabeigtai 120 sekundēs.

ii) Anti-C (anti-Rh') asinsgrupu noteikšanas serums (cilvēka izcelsmes)

Anti-C serumu iegūst no vienas vai vairāku tādu personu asinīm, kas vakcinētas ar Rh sistēmas C aglutinogēnu. Tas veido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur C antigēnu, bet ne ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas nesatur C antigēnu. Šajā sakarā uzskata, ka C antigēns satur Cw antigēnu.

Lielākā daļa diagnostisko anti-C serumu satur "pilnīgu" anti-C kopā ar "nepilnīgu" anti-D. Tādēļ šie serumi ir specifiski tikai C antigēnam, ja pārbaudāmās šūnas ir suspendētas šķīdumā, kas satur 9 gramus nātrija hlorīda uz litru.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Anti-C serumu ("pilnīgu" vai "nepilnīgu") titram jābūt ne mazāk par 8 pret Ccddee daļiņām.

Aktivitātes noteikšana

Anti-C serumi, kas paredzēti izmantošanai Diamonda un Abelsona testā uz priekšmetstikliņa (un kas nedrīkst saturēt nevienu anti-D veidu), tos sajaucot ar līdzvērtīgu daudzumu Ccddee šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,4 līdz 0,5 pie apmēram 40 °C, izraisa redzamu aglutinācijas reakciju 30 sekundēs, un aglutinācijai jābūt pabeigtai 120 sekundēs.

iii) Anti-E (anti-rh”) asinsgrupu noteikšanas serums (cilvēka izcelsmes)

Anti-E serumu iegūst no vienas vai vairāku tādu personu asinīm, kas ir vakcinētas ar Rh sistēmas E anti gēnu. Tas reaģē ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur E antigēnu.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Anti-E serumu ("pilnīgu" vai "nepilnīgu") titram jābūt ne mazāk par 8 pret ccddEe daļiņām.

Aktivitātes noteikšana

Anti-E serumi, kas paredzēti izmantošanai Diamonda un Abelsona testā uz priekšmetstikliņa (un kas nedrīkst saturēt nevienu anti-D veidu), tos sajaucot ar līdzvērtīgu daudzumu ccddEe šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,4 līdz 0,5 pie apmēram 40 °C, izraisa redzamu aglutinācijas reakciju 30 sekundēs, un aglutinācijai jābūt pabeigtai 120 sekundēs.

iv) Anti-D + C (anti-Rhorh') asinsgrupu noteikšanas serums (cilvēka izcelsmes)

Anti-D + E (anti-Rhorh) asinsgrupu noteikšanas serums (cilvēka izcelsmes)

Serumus ar specifiskumu anti-D + C un anti-D + E var iegūt tieši no vakcinētu personu asinīm vai sagatavot, sajaucot anti-D ar anti-C vai anti-E serumu. Minētajā serumā abām antivielām jābūt vienlaicīgi aktīvām, ievērojot ražotāja paredzētos reakcijas nosacījumus. Visiem serumiem ir jāreaģē ar visiem sarkano asinsķermenīšu veidiem, kas reaģētu ar jebkuru no to sastāvā esošajām antivielām, un nav jāreaģē ar sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas nesatur C un D antigēnu attiecībā uz anti-D + C, ne arī D un E antigēnu attiecībā uz anti-D + E. Titriem ir jābūt ne mazākiem par tiem, kas precizēti sastāvā esošajām antivielām, bet attiecībā uz anti-D + C (kas ir biežs savienojums vakcinētu personu serumā) ir vēlams, ka anti-C titrs ir ne mazāks par 32, un attiecībā uz anti-D + E ir vēlams, kas anti-E titrs ir ne mazāks par 8. Ja serums paredzēts lietošanai Diamonda un Abelsona testā uz priekšmetstikliņa, aglutinācijas laikam ar visiem sarkano asinsķermenīšu reaģējošajiem veidiem ir jābūt ne mazākam par laiku, kas paredzēts sastāvā esošajām antivielām.

B. REAĢENTI, KAS NAV CILVĒKA IZCELSMES

a) DZĪVNIEKU IZCELSMES SERUMI

i) Anti-A asinsgrupu noteikšanas serums (dzīvnieku izcelsmes)

Anti-A serumu iegūst no tādu atlasītu dzīvnieku asinīm, kuriem ir vai nav vakcinēti A grupas sarkanie asinsķermenīši vai A grupas īpašas vielas. Anti-A serums veido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur A antigēnu, t.i., A un AB asinsgrupas, ieskaitot A1, A2, A1B un A2B apakšgrupas, asinsķermenīšiem, un neveido aglutinācijas reakciju ar cilvēka asinsķermenīšiem, kas nesatur A antigēnu, t.i., 0 un B grupas asinsķermenīšiem.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Anti-A serumu titrē atsevišķi attiecībā pret A1, A2, un A2B grupas asinsķermenīšu suspensiju, paralēli atjaunotam, bet neatšķaidītam anti-A asinsgrupu noteikšanas seruma starptautiskajam standarta preparātam vai līdzvērtīgam salīdzināmajam preparātam [3] Seruma potenciālā iedarbība katru reizi nav mazāka par 64 starptautiskajām vienībām uz ml.

Aktivitātes noteikšana

Anti-A serumu sajaucot uz priekšmetstikliņa ar līdzvērtīgu daudzumu A1, A2 un A2B šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,05 līdz 0,1, katras suspensijas aglutinācijas reakcijai pirmo reizi jāparādās ne vēlāk kā pēc laika, kas divreiz pārsniedz laiku, kurā šī reakcija novērojama, veicot to pašu testu ar atjaunoto, bet neatšķaidīto anti-A asinsgrupu noteikšanas seruma starptautisko standarta preparātu vai ar līdzvērtīgas aktivitātes salīdzināmā standarta preparātu.

ii) Anti-B asinsgrupu noteikšanas serums (dzīvnieku izcelsmes)

Anti-B serumu iegūst no tādu atlasītu dzīvnieku asinīm, kuriem ir vai nav vakcinēti B grupas sarkanie asinsķermenīši vai B grupas īpašas vielas. Anti-B serums veido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur B antigēnu, t.i., B un AB grupas asinsķermenīšiem, un neveido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas nesatur B antigēnu, t.i., 0 un A grupas asinsķermenīšiem.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Anti-B serumu titrē atsevišķi attiecībā pret B grupas ķermenīšu suspensiju paralēli atjaunotam, bet neatšķaidītam anti-B asinsgrupu noteikšanas seruma starptautiskajam standarta preparātam vai līdzvērtīgam salīdzināmajam preparātam [4] Seruma potenciālā iedarbība katru reizi nav mazāka par 64 starptautiskajām vienībām uz ml.

Aktivitātes noteikšana

Anti-B serumu sajaucot uz priekšmetstikliņa ar līdzvērtīgu daudzumu B šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,05 līdz 0,1, aglutinācijas reakcijai pirmo reizi jāparādās ne vēlāk kā pēc laika, kas divreiz pārsniedz laiku, kurā šī reakcija novērojama, veicot to pašu testu ar atjaunoto, bet neatšķaidīto anti-B asinsgrupu noteikšanas seruma starptautisko standarta preparātu vai ar līdzvērtīgas aktivitātes salīdzināmā standarta preparātu.

iii) Cilvēka antiglubolīna serums (dzīvnieku izcelsmes) [5]

Cilvēka antiglobulīna serumam, kas paredzēts izmantošanai asinsgrupu seroloģijā, jāsatur aglutinācijas reakciju izraisošas antivielas pret IgG globulīnu un aglutinācijas reakciju izraisošas antivielas pret komplementa faktoriem. To iegūst no tādu dzīvnieku asinīm, kas ir vakcinēti, injicējot cilvēku seruma proteīnu. Tam jāveido aglutinācijas reakcija ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas pārklāti ar cilvēka IgG un/vai komplementa faktoriem. Apstākļos, ko noteicis ražotājs, serums neveido aglutinācijas reakciju ar nepārklātiem cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem neatkarīgi no to grupas.

Specifiskums

Izmantošanai asinsgrupu seroloģijā paredzētā cilvēka antiglobulīna seruma specifiskums ir jāpārbauda ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas pārklāti ar dažādām antivielām, t.i., ar sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas sensibilizēti ar cilvēka nepilnīgām antivielām anti-D, anti-K un anti-Fya, sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas sensibilizēti ar komplementa saistīšanas nepilnīgām antivielām anti-Lea svaiga cilvēka seruma klātbūtnē, un sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas sensibilizēti ar tā saucamajām "nepilnīgajām aukstā tipa antivielām", un ar iekrāsotiem sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas sensibilizēti ar cilvēka IgG un, visbeidzot, ar 10 dažādiem nepārklātu cilvēka sarkano asinsķermenīšu paraugiem ar vai bez A un B antigēniem.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Cilvēka antiglobulīna serums tādā veidā, kādā to piegādā, vai uz etiķetes norādītajā atšķaidījumā, rada spēcīgu aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas pārklāti ar cilvēka nepilnīgu anti-D serumu ar titru 4 (vai mazāk) pret D-pozitīvām daļiņām, veicot titrēšanu ar albumīna aizstāšanas metodi. Tajā pašā atšķaidījumā tas izraisa aglutinācijas reakciju ar K-pozitīviem cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas sensibilizēti ar atlasītām vājām anti-K antivielām un Fya pozitīvām sarkanajām daļiņām, kas sensibilizētas ar atlasītām vājām anti-Fya antivielām.

Tas arī tādā pašā vai citādā atšķaidījumā (atbilstīgi norādījumiem uz etiķetes) izraisa aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem ar vājām komplementa saistīšanas nepilnām anti-Lea antivielām svaiga seruma klātbūtnē.

Klīniskiem nolūkiem ir vēlams, lai minēto nepilno antivielu visu veidu pārklājums ir nosakāms ar vienu cilvēka antiglobulīna seruma atšķaidījumu.

b) AUGU IZCELSMES REAĢENTI ASINSGRUPU NOTEIKŠANAI

i) Anti-A asinsgrupu noteikšanas serums (augu izcelsmes)

Anti-A reaģentu sagatavo, veicot ekstrakciju no piemērota auga sēklām vai citām daļām un vajadzības gadījumā pēc tam veicot attīrīšanu. Anti-A serums veido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur A antigēnu, t.i., A un AB asinsgrupas, ieskaitot A1, A2, A1B un A2B apakšgrupas, asinsķermenīšiem, un neveido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas nesatur A antigēnu, t.i., 0 un B asinsgrupas asinsķermenīšiem.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Anti-A reaģentu titrē atsevišķi attiecībā pret A1, A2, un A2B grupas ķermenīšu suspensiju, paralēli atjaunotam, bet neatšķaidītam anti-A asinsgrupu noteikšanas seruma starptautiskajam standarta preparātam vai līdzvērtīgam salīdzināmajam preparātam [6].

Reaģenta potenciālā iedarbība katru reizi nav mazāka par 64 starptautiskajām vienībām uz ml.

Aktivitātes noteikšana

Anti-A reaģentu sajaucot uz priekšmetstikliņa ar līdzvērtīgu daudzumu A1, A2 un A2B šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,05 līdz 0,1, katras suspensijas savienošanās reakcijai pirmo reizi jāparādās ne vēlāk kā pēc laika, kas divreiz pārsniedz laiku, kurā šī reakcija novērojama, veicot to pašu testu ar atjaunoto, bet neatšķaidīto anti-A asinsgrupu noteikšanas seruma starptautisko standarta preparātu vai ar līdzvērtīgas aktivitātes salīdzināmā standarta preparātu.

ii) Anti-B asinsgrupu noteikšanas reaģents (augu izcelsmes)

Anti-B reaģentu sagatavo, veicot ekstrakciju no piemērota auga daļām un vajadzības gadījumā pēc tam veicot attīrīšanu. Anti-B reaģents veido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas satur B antigēnu, t.i., B un AB grupas asinsķermenīšiem, un neveido aglutinācijas reakciju ar cilvēka sarkanajiem asinsķermenīšiem, kas nesatur B antigēnu, t.i., 0 un A grupas asinsķermenīšiem.

Potenciālā iedarbība

Titrēšana

Anti-B reaģentu titrē atsevišķi attiecībā pret B grupas ķermenīšu suspensiju paralēli atjaunotam, bet neatšķaidītam anti-B asinsgrupu noteikšanas seruma starptautiskajam standarta preparātam vai līdzvērtīgam salīdzināmajam preparātam [7]. Reaģenta potenciālā iedarbība katru reizi nav mazāka par 64 starptautiskajām vienībām uz ml.

Aktivitātes noteikšana

Anti-B reaģentu sajaucot uz priekšmetstikliņa ar līdzvērtīgu daudzumu B šūnu suspensijas ar tilpuma frakciju 0,05 līdz 0,1, aglutinācijas reakcijai pirmo reizi jāparādās ne vēlāk kā pēc laika, kas divreiz pārsniedz laiku, kurā šī reakcija novērojama, veicot to pašu testu ar atjaunoto, bet neatšķaidīto anti-B asinsgrupu noteikšanas seruma starptautisko standarta preparātu vai ar līdzvērtīgas aktivitātes salīdzināmā standarta preparātu.

[1] Protokola un tā pielikumu pašreizējās redakcijas apstiprināšanas laikā Līgumslēdzēju pušu pārstāvji ar Līguma angļu tekstā lietoto izteicienu "blood incompatibilities" (asins nesaderība) domāja "blood grouping incompatibilities" (asinsgrupu noteikšanas nesaderība).

[2] Pārstāvji vienojās arī par to, ka Līguma un protokola angļu tekstā izteiciens "blood-grouping" (asinsgrupu noteikšana) ir jāraksta "blood grouping" bez defises.Lielākās daļas asinsgrupu noteikšanai paredzēto reaģentu potenciālo iedarbību izsaka kā aglutinācijas titru, kas novērots vairākkārtējās atšķaidīšanas gaitā attiecībā pret sarkano asinsķermenīšu suspensiju. Titrs norāda reaģenta atšķaidījumu pēdējā vairākkārtējās atšķaidīšanas maisījumā, kurā aglutinācija ir redzama ar mikroskopu.To asinsgrupu noteikšanai paredzēto reaģentu potenciālo iedarbību, kuriem ir noteikti starptautiskie standarti (pašlaik anti-A, anti-B un nepilnīgam anti-D), var izteikt starptautiskajās vienībās (skat. Bull, Wld. Hlth. Org. 1954, 10, 937, 941-1950, 3, 301), pamatojoties uz nezināma reaģenta titrēšanu salīdzinājumā ar starptautisko standartu vai valsts apakšstandartu.Asinsgrupu noteikšanai paredzētā seruma starptautiskos standartpreparātus izplata ampulās, kas satur cilvēka serumu sausā veidā. Sagatavojot 1 ml apjomā, anti-A un anti-B serumam jāsatur 256 starptautiskās vienības uz ml. Tos var iegūt bez maksas no PVO Starptautiskās Bioloģisko standartu laboratorijas, Statens Seruminstitut, Kopenhāgenā.Tabulā redzams piemērs salīdzinošajai titrēšanai – starptautiskais standarta anti-A serums (S) un "nezināms" anti-A reaģents (U) attiecībā pret A1 un A2B sarkanajiem asinsķermenīšiem

[3] Starptautiskais standarta preparāts ir cilvēka izcelsmes; ja izmanto līdzvērtīgu salīdzināmo preparātu, tas var būt cilvēka vai citas izcelsmes.

[4] Starptautiskais standarta preparāts ir cilvēka izcelsmes; ja izmanto līdzvērtīgu salīdzināmo preparātu, tas var būt cilvēka vai citas izcelsmes.

[5] Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. and Race, R.R. (1945), Lancet, iii 5.Coombs, R.R.A., Mourant, A.E. and Race, R.R. (1945), Brit. J. exp. Path, 26, 255.

[6] Starptautiskais standarta preparāts ir cilvēka izcelsmes; ja izmanto līdzvērtīgu salīdzināmo preparātu, tas var būt cilvēka vai citas izcelsmes.

[7] Starptautiskais standarta preparāts ir cilvēka izcelsmes; ja izmanto līdzvērtīgu salīdzināmo preparātu, tas var būt cilvēka vai citas izcelsmes.

--------------------------------------------------

ETIĶETES PARAUGS

EIROPAS PADOME

EIROPAS LĪGUMS PAR ASINSGRUPU NOTEIKŠANAS REAĢENTU APMAIŅU

a) serums šķidrā veidā

1. Laboratorija, Amsterdama

2. Anti-A serums (cilvēka izcelsmes)

3. Nātrija azīds 0,1 %

4. 5 ml

5. 1965. gada 7. septembris

6. Nr. 1 2 3 4

b) serums sausā veidā

1. Laboratorija, Amsterdama

2. Anti-B serums (dzīvnieku izcelsmes)

3. Mersalāts 0,1 %

4. Atjaunojams, izšķīdinot 5 ml destilēta ūdens

5. 1968. gada 31. decembris

6. Nr. 1 2 3 4

--------------------------------------------------

LIETOŠANAS INSTRUKCIJAS PARAUGS

EIROPAS PADOME

EIROPAS LĪGUMS PAR ASINSGRUPU NOTEIKŠANAS REAĢENTU APMAIŅU

1. Central Blood Transfusion Laboratory,

1 Main Street,

Metropolis,

Westland

2. Anti-E ("anti-rh") serums (cilvēka izcelsmes)

3. 10 ml

4. Pēdējās pārbaudes datums: 1961. gada 30. maijs

5. Derīguma termiņš: 1962. gada 30. maijs

6. Nr. 5432

7. Pārbaudāmos sarkanos asinsķermenīšus vienu vai vairākas reizes mazgā ar NaCl 9 g/l šķīdumu. Eritrocītu suspensiju ar tilpuma frakciju apmēram 0,03 sagatavo, sajaucot vienu tilpuma vienību vai pilienu sarkano asinsķermenīšu ar 30 tilpuma vienībām vai pilieniem izotoniska NaCl šķīduma. Iegūstot nedaudz pieredzes, suspensijas stiprumu var novērtēt ar pārbaudi.

Mazu pilienu seruma ar Pastēra pipeti iepilina precipitīna mēģenē (6 mm × 30 mm) un tam pievieno tādu pašu pilienu sarkano asinsķermenīšu suspensijas. (Prakses gaitā var ievērojami ietaupīt, pilinot serumu un šūnu suspensiju no pipetēm, uz kurām atzīmēts 10 μl tilpums). Caurules saturu samaisa un tur 37 °C temperatūrā divas stundas. Pēc tam caurules saturu uzmanīgi pārvieto uz mikroskopa priekšmetstikliņa un viegli izvieno. Ja vien aglutināciju nevar skaidri novērot ar neapbruņotu aci, ar mikroskopu pārbauda uz priekšmetstikliņa notiekošo aglutināciju un tās pakāpi.

8. Glabā –20°C vai zemākā temperatūrā. Ja serumu paredzēts izmantot arī pēc atvēršanas dienas, tam pievieno 0,1 ml šķīduma, kas satur 100 gramu nātrija azīda uz litru.

9. Cilvēka anti-E ("anti-rh") serums: 5 ml; šķīdums, kas satur 300 gramu liellopu albumīna uz litru 5 ml.

10. Šis produkts satur cilvēka izcelsmes vielas.

--------------------------------------------------

PROTOKOLA PIELIKUMS

EIROPAS PADOME

EIROPAS LĪGUMS PAR ASINSGRUPU NOTEIKŠANAS REAĢENTU APMAIŅU

APLIECINĀJUMS

(4. pants)

SŪTA TIKAI KOPĀ AR SŪTĪJUMU

… (vieta) | … 19… (datums) |

|

Iepakojumu skaits | Apakšā parakstījusies persona apliecina, ka šis sūtījums, kurš precizēts ailē … |

… | … |

Marķēts | un par kura sagatavošanu atbild … |

… | … |

… | … |

Partijas Nr. | viena no Līguma 6. pantā minētajām iestādēm atbilst Līguma protokola specifikācijām un to var nekavējoties nosūtīt saņēmējam …(nosaukums un vieta) |

… | … |

| … (zīmogs) | … (paraksts) | … (titrs) |

--------------------------------------------------