ANNEXE
L'annexe du règlement (CE) no 2870/2000 est modifiée comme suit:
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La table des matières est modifiée comme suit:
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Au chapitre III, le point suivant est ajouté: «III.3. DÉTERMINATION DES SUBSTANCES VOLATILES DANS LES BOISSONS SPIRITUEUSES 1. Champ d'application La méthode a été validée dans le cadre d'une étude interlaboratoires pour le rhum, le brandy, le marc et les eaux-de-vie de fruits, dans des proportions allant de 30 mg/l à 641 mg/l. 2. Références normatives ISO 3696:1987. Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécifications et méthodes d'essai. 3. Définitions 3.1. L'acidité volatile est calculée en déduisant l'acidité fixe de l'acidité totale. 3.2. L'acidité totale est la somme des acidités titrables. 3.3. L'acidité fixe est l'acidité du résidu après évaporation à sec de la boisson spiritueuse. 4. Principe L'acidité totale et l'acidité fixe sont déterminées par titrage ou par potentiométrie. 5. Réactifs et matériaux Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, n'utiliser que des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau de classe 3 au minimum, répondant à la définition de la norme ISO 3696:1987. 5.1. Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH) 0,01 M. 5.2. Solution d'indicateur mixte:
6. Appareil et équipement Appareil de laboratoire indirect, verrerie de catégorie A et ce qui suit.
7. Échantillonnage et échantillons Les échantillons sont entreposés à température ambiante avant d'être analysés. 8. Procédure 8.1. Acidité totale 8.1.1. Préparation de l'échantillon La boisson spiritueuse est irradiée par ultrasons ou agitée pendant deux minutes sous vide pour la débarrasser du dioxyde de carbone, si nécessaire. 8.1.2. Titrage Introduire à l'aide d'une pipette 25 ml de la boisson spiritueuse dans une fiole Erlenmeyer de 500 ml. Ajouter environ 200 ml d'eau distillée bouillie refroidie (préparée le jour même) et 2 à 6 gouttes de solution d'indicateur mixte (5.2). Titrer avec la solution d'hydroxyde de sodium 0,01 M (5.1) jusqu'à ce que la couleur jaune-vert vire au violet dans le cas des boissons spiritueuses incolores, ou que la couleur jaune-brun vire au rouge-brun dans le cas des boissons spiritueuses de couleur brune. Le titrage peut également être réalisé par potentiométrie, jusqu'à un pH égal à 7,5. Soit n1 ml le volume de solution 0,01 M d'hydroxyde de sodium ajouté. 8.1.3. Calcul L'acidité totale (AT) exprimée en milliéquivalents par litre de boisson spiritueuse est égale à 0,4 × n1. L'acidité totale (AT′) exprimée en mg d'acide acétique par litre de boisson spiritueuse est égale à 24 × n1. 8.2. Acidité fixe 8.2.1. Préparation de l'échantillon Laisser évaporer à sec 25 ml de la boisson spiritueuse:
8.2.2. Titrage Dissoudre le résidu obtenu après évaporation avec de l'eau distillée bouillie et refroidie (préparée le jour même), porter à un volume d'environ 100 ml et ajouter 2 à 6 gouttes de solution d'indicateur mixte (5.2). Titrer avec la solution d'hydroxyde de sodium 0,01 M (5.1). Le titrage peut également être réalisé par potentiométrie, jusqu'à un pH de 7,5. Soit n2 ml le volume de solution d'hydroxyde de sodium 0,01 M ajouté. 8.2.3. Calcul L'acidité fixe (AF) exprimée en milliéquivalents par litre de boisson spiritueuse est égale à 0,4 × n2. L'acidité fixe (AF) exprimée en mg d'acide acétique par litre de boisson spiritueuse est égale à 24 × n2. 9. Calcul de l'acidité volatile 9.1. Exprimée en milliéquivalents par litre: Soit:
L'acidité volatile (AV) en milliéquivalents par litre est égale à: AT – AF 9.2. Exprimée en mg d'acide acétique par litre: Soit:
L'acidité volatile (AV) en mg d'acide acétique par litre est égale à: AT′ – AF′ 9.3. Exprimée en acide acétique g/hl d'alcool à 100 % vol. pur est égale à: où A est le titre alcoométrique volumique de la boisson spiritueuse. 10. Caractéristiques de performance de la méthode (précision) 10.1. Résultats statistiques de l'essai interlaboratoires Les données suivantes proviennent d'une étude internationale sur les performances de la méthode, réalisée conformément aux procédures établies au niveau international (1) (2).
Types d'échantillons:
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Le chapitre VIII suivant est inséré: «VIII. SUCRES TOTAUX 1. Champ d'application La méthode CLHP-IR permet de doser les sucres totaux (exprimés en sucres invertis) dans les boissons spiritueuses à l'exclusion des liqueurs contenant des œufs et des produits laitiers. Elle a été validée dans le cadre d'une étude interlaboratoires pour le pastis, l'anis distillé, la liqueur de cerises, la crème de (suivie du nom d'un fruit ou de la matière première utilisée) et la crème de cassis, à des niveaux compris dans une fourchette allant de 10,86 g/l à 509,7 g/l. Toutefois, la linéarité de la réponse de l'instrument a été démontrée pour des concentrations comprises entre 2,5 g/l et 20,0 g/l. Cette méthode n'est pas conçue pour doser de faibles niveaux de sucres. 2. Références normatives ISO 3696:1987. Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécifications et méthodes d'essai. 3. Principe Analyses par chromatographie liquide à haute performance de solutions de sucre afin de déterminer leur concentration en glucose, fructose, saccharose, maltose et lactose. Cette méthode utilise une phase stationnaire d'alkylamine, et la détection à l'aide d'un réfractomètre différentiel est citée à titre d'exemple. L'utilisation de résines échangeuses d'anions pour la phase stationnaire serait également possible. 4. Réactifs et matériaux 4.1. Glucose (CAS 50-99-7), d'une pureté d'au moins 99 %. 4.2. Fructose (CAS 57-48-7), d'une pureté d'au moins 99 %. 4.3. Saccharose (CAS 57-50-1), d'une pureté d'au moins 99 %. 4.4. Lactose (CAS 5965-66-2), d'une pureté d'au moins 99 %. 4.5. Monohydrate de maltose (CAS 6363-53-7), d'une pureté d'au moins 99 %. 4.6. Acétonitrile pur (CAS 75-05-8) pour l'analyse CLHP. 4.7. Eau distillée ou déminéralisée, microfiltrée de préférence. 4.8. Solvants (exemple) Le solvant d'élution est composé de:
Dégazer par barbotage d'hélium à faible débit pendant 5 à 10 minutes avant utilisation. Si l'eau utilisée n'a pas été microfiltrée, il est recommandé de filtrer le solvant avec un filtre pour solvants organiques d'un diamètre de pores inférieur ou égal à 0,45 μm. 4.9. Éthanol absolu (CAS 64-17-5). 4.10. Solution d'éthanol (5 %, v/v). 4.11. Préparation de la solution mère étalon (20 g/l) Peser 2 g de chacun des sucres à analyser (4.1 à 4.5), les transférer sans perte dans une fiole jaugée de 100 ml. (NB 2,11 g de monohydrate de maltose correspondent à 2 g de maltose). Ajuster à 100 ml avec une solution d'alcool à 5 % vol. (4.10), agiter et stocker à environ + 4 °C. Préparer une nouvelle solution mère une fois par semaine. 4.12. Préparation de solutions étalons de travail (2,5 g/l, 5,0 g/l, 7,5 g/l, 10,0 g/l et 20,0 g/l) Diluer la solution mère, 20 g/l, (4.11) de manière adéquate avec une solution d'alcool de 5 % (4.10) pour obtenir cinq solutions standard de 2,5 g/l, 5,0 g/l, 7,5 g/l, 10,0 g/l et 20,0 g/l. Filtrer avec un filtre d'un diamètre de pores inférieur ou égal à 0,45 μm (5.3). 5. Appareil et équipement 5.1. Système CLHP capable de réaliser le retour à la ligne de base de l'ensemble des sucres. 5.1.1. Chromatographe liquide à haute performance avec une vanne d'injection à six voies munie d'une boucle de 10 μl ou de tout autre dispositif, automatique ou manuel, pour l'injection fiable de microvolumes. 5.1.2. Système de pompage permettant l'obtention et le maintien d'un débit constant ou programmé avec une grande précision. 5.1.3. Réfractomètre différentiel. 5.1.4. Intégrateur-calculateur ou enregistreur fonctionnant en toute compatibilité avec l'ensemble du système. 5.1.5. Précolonne: il est recommandé de joindre une précolonne appropriée à la colonne d'analyse. 5.1.6. Colonne (exemple):
5.1.7. Conditions de la chromatographie (exemple):
Pour s'assurer que le détecteur est parfaitement stable, il convient de l'activer quelques heures avant l'emploi. La cellule de référence doit être remplie avec le solvant d'élution. 5.2. Balance d'analyse précise à 0,1 mg près. 5.3. Dispositif de filtration pour petits volumes utilisant une micromembrane de 0,45 μm. 6. Stockage de l'échantillon Dès réception, les échantillons sont entreposés à température ambiante avant d'être analysés. 7. Procédure 7.1. PARTIE A: préparation de l'échantillon 7.1.1. Secouer l'échantillon. 7.1.2. Filtrer l'échantillon avec un filtre d'un diamètre de pores inférieur ou égal à 0,45 μm (5.3). 7.2. PARTIE B: CLHP 7.2.1. Détermination Injecter 10 μl des solutions étalons (4.12) et les échantillons (7.1.2). Effectuer l'analyse dans les conditions appropriées de chromatographie, par exemple celles décrites ci-dessus. 7.2.2. Si un échantillon présente un pic d'une surface (ou d'une hauteur) supérieure au pic correspondant à la solution étalon la plus concentrée, il convient de diluer l'échantillon avec de l'eau distillée et de procéder à une nouvelle analyse. 8. Calcul Comparer les deux chromatogrammes obtenus pour la solution étalon et la boisson spiritueuse. Recenser les pics en fonction de leur temps de rétention. Mesurer leur surface (ou leur hauteur) pour calculer les concentrations par la méthode de référence externe. Tenir compte de toutes les dilutions opérées lors de la préparation de l'échantillon. Le résultat final est la somme de saccharose, de maltose, de lactose, de glucose et de fructose, exprimée en sucre inverti en g/l. Le sucre inverti est égal à la somme de tous les monosaccharides, moins les disaccharides présents, plus la quantité stœchiométrique de glucose et de fructose calculée à partir du saccharose présent.
9. Caractéristiques de performance de la méthode (précision) 9.1. Résultats statistiques de l'essai interlaboratoires Les données suivantes proviennent d'une étude internationale sur les performances de la méthode, réalisée conformément aux procédures établies au niveau international (1) (2).
Tableau 1 Fructose, glucose, maltose
Tableau 2 Saccharose
Tableau 3 Sucres totaux (Remarque: Ces données ont été calculées pour les sucres totaux, et non pour le sucre inverti tel que défini au point 8).
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Le chapitre X suivant est ajouté: «X. DÉTERMINATION DES COMPOSÉS DE BOIS SUIVANTS DANS LES BOISSONS SPIRITUEUSES PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE À HAUTE PERFORMANCE (CLHP): FURFURAL, 5-HYDROXYMÉTHYLFURFURAL, 5-MÉTHYLFURFURAL, VANILLINE, SYRINGALDÉHYDE, CONIFÉRALDÉHYDE, SINAPALDÉHYDE, ACIDE GALLIQUE, ACIDE ELLAGIQUE, ACIDE VANILLIQUE, ACIDE SYRINGIQUE ET SCOPOLÉTINE 1. Champ d'application La méthode a pour objet le dosage du furfural, du 5-hydroxyméthylfurfural, du 5-méthylfurfural, de la vanilline, de la syringaldéhyde, de la coniféraldéhyde, de la sinapaldéhyde, de l'acide gallique, de l'acide ellagique, de l'acide vanillique, de l'acide syringique et de la scopolétine par chromatographie en phase liquide à haute performance. 2. Références normatives Méthode d'analyse reconnue par l'assemblée générale de l'Organisation internationale de la vigne et du vin (OIV) et publiée par l'OIV sous la référence OIV-MA-BS- 16: R2009. 3. Principe Dosage par chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP), avec détection par spectrophotométrie UV à plusieurs longueurs d'ondes et par la spectrofluorimétrie. 4. Réactifs Les réactifs doivent être de qualité analytique. L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou de l'eau ayant une pureté au moins équivalente. Il est préférable d'utiliser de l'eau microfiltrée d'une résistivité de 18,2 M Ω.cm. 4.1. Alcool à 96 % vol. 4.2. Méthanol de qualité CLHP (solvant B). 4.3. Acide acétique dilué à 0,5 % vol. (solvant A). 4.4. Phases mobiles (à titre d'exemple uniquement) Solvant A (acide acétique à 0,5 %) et solvant B (méthanol pur). Filtrer à travers une membrane (porosité 0,45 μm). Dégazer dans une cuve à ultrasons, si nécessaire. 4.5. Étalons de référence d'une pureté minimale de 99 %: furfural, 5-hydroxyméthylfurfural, 5-méthylfurfural, vanilline, syringaldéhyde, coniféraldéhyde, sinapaldéhyde, acide gallique, acide ellagique, acide vanillique, acide syringique et scopolétine 4.6. Solution de référence: les substances étalons sont dissoutes dans une solution hydroalcoolique à 50 % vol. Les concentrations finales dans la solution de référence devraient être de l'ordre de: furfural: 5 mg/l; 5-hydroxyméthylfurfural: 10 mg/l; 5-méthylfurfural: 2 mg/l; vanilline: 5 mg/l; syringaldéhyde: 10 mg/l; coniféraldéhyde: 5 mg/l; sinapaldéhyde: 5 mg/l; acide gallique: 10 mg/l; acide ellagique: 10 mg/l; acide vanillique: 5 mg/l; acide syringique: 5 mg/l; scopolétine: 0,5 mg/l. 5. Appareillage Matériel courant de laboratoire 5.1. Un chromatographe en phase liquide à haute performance capable de fonctionner en mode gradient binaire et équipé des éléments suivants.
5.2. Des seringues pour CLHP. 5.3. Un dispositif de filtration sur membrane de petits volumes. 5.4. Un calculateur-intégrateur ou enregistreur dont les performances sont compatibles avec l'ensemble de l'appareillage; il doit disposer, en particulier, de plusieurs canaux d'acquisition. 6. Procédure 6.1. Préparation de la solution à injecter La solution de référence et la boisson spiritueuse sont filtrées, le cas échéant, sur une membrane dont le diamètre des pores est de 0,45 μm au maximum. 6.2. Conditions opératoires chromatographiques: effectuer l'analyse à température ambiante avec l'équipement décrit au point 5.1 et en utilisant les phases mobiles (4.4) à un débit d'environ 0,6 ml par minute selon le gradient ci-dessous (donné à titre d'exemple uniquement) Temps: 0 min 50 min 70 min 90 min Solvant A (eau-acide): 100 % 60 % 100 % 100 % Solvant B (méthanol): 0 % 40 % 0 % 0 % Notez que, dans certains cas, il y a lieu de modifier ce gradient pour éviter des coélutions. 6.3. Détermination 6.3.1. Injecter les étalons de référence séparément, puis mélangés. Adapter les conditions opératoires de sorte que les facteurs de résolution des pics de tous les composés soient au moins égaux à 1. 6.3.2. Injecter l'échantillon tel qu'élaboré au point 6.1. 6.3.3. Mesurer la surface des pics dans la solution de référence et dans la boisson spiritueuse et calculer les concentrations. 7. Expression des résultats Exprimer la concentration de chaque constituant en mg/l. 8. Caractéristiques de performance de la méthode (précision) Les données suivantes ont été obtenues en 2009 à partir d'une étude internationale relative à la performance de la méthode sur différentes boissons spiritueuses, réalisée selon les procédures convenues au niveau international (1) (2). 8.1. Furfural
8.2. 5-Hydroxyméthylfurfural
8.3. 5-Méthylfurfural
8.4. Vanilline
8.5. Syringaldéhyde
8.6. Coniféraldéhyde
8.7. Sinapaldéhyde
8.8. Acide gallique
8.9. Acide ellagique
8.10. Acide vanillique
8.11. Acide syringique
8.12. Scopolétine
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(*1) Fraction.
(*2) Fraction.»