ANNEXE I
Spécifications techniques visées à l'article 3, paragraphe 1, à l'article 4 et à l'article 5, paragraphe 2, point b)
1. SCHÉMA DE L'ÉTUDE
L'étude doit être accomplie conformément au schéma de la figure 1.
Figure 1: schéma de l'étude
x «exploitations de reproduction», 10 échantillons de routine par exploitation (partie 1)
Étude
Sélection de 10 exploitations pour l'estimation de la prévalence intra-exploitation, prélèvement de 100 échantillons individuels
y «exploitations de production», 10 échantillons de routine par exploitation (partie 2)
2. BASE D’ÉCHANTILLONNAGE
2.1. Délimitation de la population
Les exploitations concernées par l'étude doivent héberger ensemble 80 % au moins de la population de porcs reproducteurs d'un État membre. L'échantillonnage doit porter de préférence sur des exploitations ayant cinquante porcs reproducteurs au moins. Toutefois, si ces exploitations d'au moins cinquante porcs reproducteurs n'hébergent pas ensemble 80 % au minimum du cheptel national de porcs reproducteurs, l'échantillonnage est étendu aux exploitations détenant moins de cinquante porcs reproducteurs.
Les exploitations détenant des porcs reproducteurs doivent être classées soit parmi les «exploitations de reproduction» soit parmi les «exploitations de production». Les exploitations de reproduction vendent des cochettes et/ou des verrats destinés à la reproduction. Généralement, 40 % au moins des cochettes qui y sont élevées sont vendues pour la reproduction, les autres étant vendues pour être abattues. En revanche, les exploitations de production vendent surtout des porcs d'engraissement ou d'abattage.
La prévalence de Salmonella doit être mesurée de manière distincte dans les exploitations de reproduction (partie 1 de l'étude) et dans les exploitations de production (partie 2 de l'étude), de manière à ce que les exploitations soient représentées comme indiqué dans la figure 2, à l'exclusion des exploitations de type postsevreur-engraisseur.
Figure 2: Description générale des exploitations
Exploitations de reproduction de l'étage sélection
Exploitations de reproduction de l'étage multiplication (croisements)
Exploitations de type naisseur-engraisseur
Exploitations de type naisseur (ou naisseur-postsevreur)
Exploitations de type postsevreur-engraisseur
Reproduction
Production
2.2. Échantillon et stratégie d'échantillonnage
Les deux parties de l'étude doivent avoir un plan d'échantillonnage similaire en deux étapes. Au cours de la première étape, un échantillon aléatoire d'exploitations est sélectionné dans chaque État membre parmi les exploitations de reproduction et un second échantillon aléatoire d'exploitations est sélectionné parmi les exploitations de production. La question du nombre d'exploitations requis est examinée au point 2.3. Au cours de la seconde étape, un certain nombre de salles est sélectionné en vue de l'échantillonnage au sein de chaque exploitation sélectionnée (voir point 2.2.2).
2.2.1. Première étape: sélection des exploitations
Chaque État membre doit créer deux bases d'échantillonnage. La première énumère l'ensemble des exploitations de reproduction entrant en considération (normalement, les exploitations détenant au moins cinquante porcs reproducteurs, voir point 2.1) et la seconde énumère l'ensemble des exploitations de production entrant en considération. Le nombre d'exploitations requis pour chaque partie de l'étude est ensuite sélectionné aléatoirement à partir de chaque liste. L'échantillon aléatoire doit garantir que l'étude porte sur des exploitations qui ont des troupeaux de tailles différentes et sont établies dans toutes les régions d'un État membre où l'élevage de porcs est pratiqué. Il est avéré que certains États membres peuvent avoir peu d'exploitations (par exemple, moins de 10 % des exploitations entrant en considération) ayant un troupeau de très grande taille. Il se peut dès lors qu'aucun de ces troupeaux de très grande taille ne soit choisi lors de la sélection aléatoire. Un État membre peut utiliser un critère de stratification avant de sélectionner les exploitations (il peut, par exemple, définir une strate contenant les 10 % de troupeaux les plus grands et sélectionner 10 % de l'échantillon requis à partir de cette strate). De la même manière, un État membre peut stratifier les échantillons de ses différentes régions administratives en tenant compte de la proportion que représentent les troupeaux entrant en considération dans chaque région. Toute stratification envisagée doit être décrite dans le rapport que l'État membre présente à la Commission conformément au point 5.1.
Si une exploitation sélectionnée ne peut être échantillonnée (parce que, par exemple, elle n'existe plus au moment de l'échantillonnage), une autre exploitation est sélectionnée aléatoirement à partir de la même base d'échantillonnage. Si un critère de stratification a été appliqué lors de la sélection (par exemple: taille du troupeau ou région), la nouvelle exploitation doit être sélectionnée dans la même strate que la première.
La taille de l'échantillon primaire (nombre d'exploitations à échantillonner) doit être plus ou moins constante tout au long de l'année pour couvrir, dans la mesure du possible, les différentes saisons. Des échantillons sont prélevés sur environ un douzième du nombre d'exploitations chaque mois.
L'étude doit également porter sur des exploitations en plein air, mais il n'est pas prévu de stratification obligatoire pour ce type de production.
2.2.2. Seconde étape: échantillonnage dans l'exploitation
Dans chaque exploitation de reproduction et de production, les salles, enclos ou groupes de porcs reproducteurs âgés de plus de six mois à échantillonner sont sélectionnés aléatoirement.
Le nombre de salles, d'enclos ou de groupes à échantillonner doit être ventilé proportionnellement au nombre de porcs reproducteurs se trouvant aux différents stades de production (truies gravides et non gravides et autres catégories de porcs reproducteurs). Il n'y a pas de prescriptions concernant les classes d'âge exactes à échantillonner, mais les informations y afférentes doivent être collectées au cours de l'échantillonnage.
Les porcs reproducteurs qui ont rejoint récemment l'exploitation et sont maintenus en quarantaine ne sont pas concernés par l'étude.
2.3. Calcul de la taille de l'échantillon
2.3.1. Taille de l'échantillon primaire (taille de l'échantillon lors de la première étape)
Il est procédé au calcul de la taille d'un échantillon primaire régulier pour les exploitations de reproduction et de la taille d'un second échantillon primaire régulier pour les exploitations de production. La taille de l'échantillon primaire équivaut au nombre d'exploitations de reproduction à échantillonner et au nombre d'exploitations de production à échantillonner dans chaque État membre et elle est déterminée, dans l'hypothèse d'un échantillonnage aléatoire simple, compte tenu des critères suivants:
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a) |
le nombre total d'exploitations de reproduction (exploitations de reproduction, partie 1 de l'étude) |
|
b) |
le nombre total d'exploitations de production (exploitations de production, partie 2 de l'étude) |
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c) |
la prévalence annuelle supposée (p): 50 % |
|
d) |
le niveau de confiance souhaité (Z): 95 %, correspondant à une valeur Zα de 1,96 |
|
e) |
la précision (L): 7,5 % |
|
f) |
ces valeurs sont utilisées dans la formule suivante:
|
Le calcul est effectué premièrement pour les exploitations de reproduction et deuxièmement pour les exploitations de production. Dans les deux cas, les hypothèses des points c)-e) ci-dessus sont identiques.
Pour des raisons pratiques, si la base d’échantillonnage des exploitations de reproduction ou des exploitations de production compte 100 000 exploitations ou plus, cette population peut être considérée comme infinie et le nombre d'exploitations à sélectionner aléatoirement dans cette base d'échantillonnage est fixé à 171 (voir tableau 1). Lorsque le nombre d'exploitations de reproduction ou d'exploitations de production est inférieur à 100 000, un facteur de correction en population finie est appliqué et un nombre inférieur d'exploitations doit être échantillonné (voir tableau 1).
À titre d'exemple, si un État membre compte 1 000 exploitations dans le groupe des exploitations de production et 250 exploitations dans le groupe des exploitations de reproduction, 147 exploitations doivent être échantillonnées dans le groupe des exploitations de production et 102 dans le groupe des exploitations de reproduction.
Tableau 1
Nombre d'exploitations détenant des porcs reproducteurs à échantillonner dans l'une ou l'autre partie de l'étude en fonction de la taille de la population finie (nombre total d'exploitations détenant des porcs reproducteurs dans l'État membre)
|
Nombre d'exploitations détenant des porcs reproducteurs (N) |
Taille de l'échantillon (n) pour une population finie, 7,5 % de précision |
|
100 000 |
171 |
|
10 000 |
169 |
|
5 000 |
166 |
|
2 000 |
158 |
|
1 000 |
147 |
|
500 |
128 |
|
250 |
102 |
|
150 |
80 |
|
125 |
73 |
|
100 |
64 |
|
90 |
59 |
|
80 |
55 |
|
70 |
50 |
|
60 |
45 |
|
50 |
39 |
|
40 |
33 |
|
30 |
26 |
|
20 |
18 |
|
10 |
10 |
Il convient d'anticiper le défaut de réponse, par exemple en augmentant de 10 % la taille de l'échantillon dans chaque groupe. Toute exploitation ne convenant pas doit être remplacée dans le processus de réalisation de l'étude (voir point 2.2.1).
S'il est impossible d'estimer le nombre d'«exploitations de reproduction» avant le début de l'étude, le nombre d'exploitations à sélectionner en vue de l'échantillonnage conformément au tableau 1 doit être déterminé en fonction du nombre total d'exploitations détenant des truies (X exploitations). Le nombre d'exploitations à échantillonner doit être augmenté d'au moins 30 % [(X + 30 %) exploitations]. Avant l'étude, l'autorité compétente identifie un nombre d'exploitations de reproduction au moins égal à ce pourcentage de 30 % additionnel. Lors de la visite des exploitations, chacune de celles-ci est classée parmi les exploitations de reproduction ou de production conformément aux définitions données ci-avant.
2.3.2. Taille de l'échantillon secondaire (taille de l'échantillon lors de la seconde étape)
Des échantillons de routine de matières fécales (voir point 3.1) sont prélevés dans dix salles, enclos ou groupes de porcs reproducteurs choisis aléatoirement dans chaque exploitation sélectionnée. Si nécessaire (par exemple, dans les installations de naissage ou lorsque les truies sont hébergées en petits groupes de moins de dix individus), un groupe peut être composé de plus d'une salle. Chaque échantillon de routine devrait provenir d'au moins dix porcs reproducteurs différents.
Toutefois, si, dans de petites exploitations ou dans des exploitations ayant un grand nombre de porcs reproducteurs détenus dans des parcs extérieurs, le nombre de salles, d'enclos ou de groupes est inférieur à dix, il est nécessaire d'échantillonner la même salle, le même enclos ou le même groupe de manière à parvenir à un total de dix échantillons de routine.
3. PRÉLÈVEMENT D'ÉCHANTILLONS DANS LES EXPLOITATIONS
3.1. Type et caractéristiques de l'échantillon de routine
Le matériel prélevé pour l'analyse bactériologique consiste en matières fécales récemment exonérées représentatives de l'ensemble de l'exploitation, qui est l'unité ciblée. Chaque exploitation étant unique, il convient de déterminer, avant d'entamer l'échantillonnage, quelles salles, quels enclos ou quels groupes doivent être échantillonnés dans l'exploitation. L'échantillon prélevé est placé dans un récipient distinct qui empêche toute contamination croisée et il est envoyé au laboratoire.
Chaque échantillon groupé doit avoir un poids total d'au moins 25 g et deux méthodes de prélèvement de ces échantillons collectifs de matières fécales peuvent être utilisées:
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1) |
en cas d'accumulation de matières fécales mélangées dans une zone d'une salle ou d'un enclos, une chiffonnette (par exemple de 20 cm x 20 cm) peut être passée dans la masse fécale de manière à ce qu'au moins 25 grammes de matières mélangées soient prélevées. À cet effet, la chiffonnette peut, par exemple, être déplacée en zigzag sur une distance de deux mètres de manière à ce qu'elle soit bien imprégnée de matières fécales. Au besoin, par exemple par temps chaud ou sur caillebotis, la chiffonnette peut être humidifiée au moyen d'un liquide approprié comme de l'eau potable. |
|
2) |
en l'absence d'une telle accumulation de matières fécales, par exemple dans une prairie, un grand enclos, un centre de naissage, des salles ou d'autres installations hébergeant de petits groupes de porcs, des pincées individuelles sont prélevées des masses fécales individuelles fraîches ou des lieux de défécation individuels de manière à ce que dix porcs au minimum contribuent à un échantillon pesant au total 25 g au moins. Les endroits de prélèvement de ces pincées doivent être répartis de manière représentative de la zone concernée. |
La première méthode doit être privilégiée lorsqu'elle peut être pratiquée. Cette méthode suppose que dix porcs au moins contribuent à chaque échantillon prélevé, sinon la deuxième méthode est appliquée.
3.2. Échantillonnage supplémentaire pour l'étude sur la prévalence à l'intérieur des exploitations
Dix exploitations choisies aléatoirement dans l'échantillon général d'exploitations de reproduction et d'exploitations de production sont soumises à un échantillonnage plus intensif. Dans ces exploitations, dix échantillons de routine doivent être prélevés comme indiqué ci-avant (point 3.1). En outre, dix échantillons individuels d'au moins 30 g doivent être prélevés dans chaque salle sélectionnée et doivent être identifiés de manière à pouvoir être associés à l'échantillon de routine provenant de la même salle. Au total, dix échantillons de routines et cent (10 × 10) échantillons individuels doivent donc être prélevés dans chacune de ces dix exploitations. Le traitement de ces échantillons est décrit au point 4.3.1.
Cet échantillonnage doit être pratiqué en République tchèque, au Danemark, en Roumanie, en Slovénie, en Suède et au Royaume-Uni.
3.3. Informations sur les échantillons
Toutes les informations utiles concernant l’échantillon doivent être consignées sur un formulaire d’échantillonnage fourni par l’autorité compétente afin que soient respectées les obligations en matière de communication de données énoncées au point 5.
Tout échantillon et son formulaire d’accompagnement doivent être munis d'une étiquette portant un numéro unique à utiliser de l’échantillonnage à l’analyse ainsi que le code de la salle. L’autorité compétente doit veiller à la mise en place et à l’utilisation d’un système de numérotation unique.
3.4. Transport des échantillons
Durant le transport, les échantillons sont conservés de préférence à une température comprise entre + 2 et + 8 °C et à l'abri de toute contamination extérieure. Les échantillons sont envoyés au laboratoire dès que possible, sans dépasser un délai de 36 heures à compter du prélèvement, par courrier prioritaire ou service de messagerie et doivent parvenir au laboratoire au plus tard 72 heures après le prélèvement.
4. MÉTHODES D'ANALYSE DES LABORATOIRES
4.1. Laboratoires
L’analyse et le sérotypage sont effectués par le laboratoire national de référence (LNR). Si le LNR n’a pas la capacité de réaliser toutes les analyses ou n’est pas le laboratoire qui effectue habituellement la détection, les autorités compétentes peuvent décider de désigner un nombre limité d’autres laboratoires participant au contrôle officiel de Salmonella pour effectuer les analyses. Ces laboratoires doivent justifier d’une expérience dans l’utilisation de la méthode de détection requise, appliquer un système d’assurance qualité conforme à la norme ISO 17025 et être soumis à la supervision du LNR.
4.2. Réception des échantillons
Au laboratoire, les échantillons sont maintenus réfrigérés jusqu’au moment de l’examen bactériologique, qui doit être effectué de préférence dans les 24 heures suivant leur réception et, en tout cas, au plus tard 96 heures après leur prélèvement.
4.3. Analyse des échantillons
Les États membres doivent garantir que toutes les parties concernées ont suivi une formation suffisante pour effectuer les analyses.
4.3.1. Préparation
Au laboratoire, les échantillons sont mélangés minutieusement après quoi 25 g sont prélevés aux fin de l'analyse.
Dans le cadre de l'évaluation de la prévalence intra-exploitation conformément au point 3.2, chacun des échantillons individuels prélevés (de 30 g) doit être divisé en deux. Une part, pesant au moins 25 g, est mélangée minutieusement et mise ensuite individuellement en culture. La seconde part doit servir à la préparation d'un échantillon groupé artificiellement à partir des dix échantillons individuels prélevés dans la salle, le groupe ou l'enclos sélectionné. Cette préparation consiste à prendre 2,5 g de chacun des dix échantillons individuels pour former un échantillon groupé artificiellement de 25 g. Les échantillons groupés artificiellement sont mélangés minutieusement avant d'être analysés. Au total, dix échantillons de routine, dix échantillons groupés artificiellement et cent échantillons individuels provenant de chacune des dix exploitations choisies aux fins de l'estimation de la prévalence intra-exploitation doivent être analysés.
4.3.2. Méthodes de détection et d’identification
4.3.2.1. Détection des salmonelles
Il convient d’utiliser la méthode recommandée par le laboratoire communautaire de référence (LCR) pour les salmonelles, situé à Bilthoven, aux Pays-Bas. Cette méthode est décrite à l'annexe D de la norme ISO 6579: «Recherche de Salmonella spp. dans les matières fécales des animaux et dans des échantillons au stade de la production primaire». Il convient d'utiliser la version de l'annexe D la plus récente.
4.3.2.2. Sérotypage des salmonelles
Toutes les souches isolées et identifiées comme Salmonella spp. sont soumises à un sérotypage effectué, selon la classification de Kaufmann-White, par le LNR pour les salmonelles.
Aux fins de l'assurance qualité, seize souches typables et seize isolats non typables sont envoyés au LCR pour les salmonelles. Une partie de ces isolats doit être envoyée au LCR chaque trimestre. Si le nombre de souches isolées est moindre, toutes doivent être envoyées au laboratoire.
4.3.2.3. Lysotypage des salmonelles
Pour le lysotypage d’isolats de Salmonella Enteritidis et de Salmonella Typhimurium (analyse facultative), il convient d’utiliser les méthodes décrites par le centre de référence de l'OMS pour le lysotypage de Salmonella de l’agence de protection sanitaire (Health Protection Agency — HPA), située à Colindale (Londres).
5. RAPPORTS DES ÉTATS MEMBRES
5.1. Description générale de la réalisation de l'étude
Un rapport au format texte doit comprendre au moins les informations suivantes:
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a) |
État membre |
|
b) |
Description de la population d'exploitations détenant des porcs reproducteurs
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c) |
Nombre d'échantillons obtenus et analysés:
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d) |
Résultats globaux
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e) |
Liste des laboratoires responsables de l'étude de référence pour les salmonelles
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5.2. Données complètes concernant chaque exploitation échantillonnée et résultats des tests y afférents
Les États membres communiquent par voie électronique les résultats de l’étude qu'ils présentent sous forme de données brutes en utilisant le dictionnaire de données et les formulaires de collecte de données fournis par la Commission. Ce dictionnaire et ces formulaires sont établis par la Commission.
5.2.1. Pour chaque exploitation sélectionnée en vue de l'échantillonnage, les États membres recueillent les informations suivantes:
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a) |
Code de l'exploitation |
|
b) |
Type de production de l'exploitation
|
|
c) |
Taille de l'exploitation: le nombre de porcs reproducteurs présents lors de l'échantillonnage (recensement des adultes) |
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d) |
Stratégie de remplacement: achat de tous les porcs reproducteurs de remplacement; élevage interne d'un certain nombre de porcs reproducteurs de remplacement ou élevage interne de tous les porcs reproducteurs de remplacement |
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e) |
(Facultatif) Symptômes cliniques de diarrhée: y avait-il des symptômes de diarrhée au cours des trois mois précédant l'échantillonnage? |
5.2.2. Pour chaque échantillon envoyé au laboratoire, les États membres recueillent les informations suivantes:
|
a) |
Code de l'échantillon |
|
b) |
Code du laboratoire participant à l'analyse initiale |
|
c) |
Date du prélèvement d'échantillons |
|
d) |
Date du début de l'analyse en laboratoire |
|
e) |
Détection de Salmonella: résultat qualitatif (positif/négatif) |
|
f) |
Sérotypage de Salmonella: sérotype(s) détecté(s) (il peut y en avoir plusieurs) |
|
g) |
Âge des porcs: toutes des cochettes par opposition à des porcs reproducteurs d'âge différent |
|
h) |
Sexe: uniquement des truies; des truies et des verrats ou uniquement des verrats |
|
i) |
Stade de production: maternité; saillie, gestation (autre?) |
|
j) |
Logement: caillebotis (complet/partiel); sol dur; paille ou autre |
|
k) |
Alimentation: les porcs de cette salle, de cet enclos ou de ce groupe sont-ils nourris exclusivement avec des aliments composés? |
|
l) |
Complément alimentaire: une substance réduisant la prévalence de Salmonella (telle qu'un acide organique ou un probiotique) est-elle ajoutée aux aliments? |
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m) |
Utilisation systématique d'antibiotiques: des antibiotiques sont-ils administrés selon un mode quelconque à tous les animaux de ce groupe? |
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n) |
Date de la dernière administration d'antimicrobiens aux animaux (au cours des quatre dernières semaines) |
5.2.3. Pour chaque échantillon individuel envoyé au laboratoire aux fins de l'étude sur la prévalence intra-exploitation, les États membres recueillent les informations supplémentaires suivantes:
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a) |
Code de l'échantillon groupé |
|
b) |
Détection de Salmonella dans chaque échantillon individuel: résultat qualitatif (positif/négatif) |
|
c) |
Sérotypage de Salmonella dans chaque échantillon individuel: sérotype(s) détecté(s) (il peut y en avoir plusieurs) |
