PRIMERA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN

de 15 de junio de 1971

por la que se determinan métodos de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales

( 71/250/CEE )

LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,

Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea ,

Vista la Directiva del Consejo de 20 de julio de 1970 relativa a la introducción de métodos de toma de muestras y de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales (1) y , en particular , su artículo 2 ,

Considerando que la Directiva antes mencionada prevé que los controles oficiales de los alimentos para animales dirigidos a comprobar si se respetan las condiciones establecidas en virtud de las disposiciones legales , reglamentarias y administrativas relativas a la calidad y la composición de los alimentos mencionados se efectuarán según métodos de toma de muestras y de análisis comunitarios ;

Considerando que es conveniente establecer lo antes posible todos los métodos de análisis necesarios , y que una primera etapa está constituida por el establecimiento de los métodos de determinación del ácido cianhídrico , del calcio , de los carbonatos , de las cenizas brutas , de las cenizas insolubles en HCl , del cloro de los cloruros , de la esencia de mostaza , de la lactosa , del potasio , del sodio , de los azúcares , de la teobromina , y de la urea , así como de los métodos de determinación de los alcaloides de los altramuces y de la actividad ureásica de los productos de la soja ;

Considerando que las medidas previstas en la presente Directiva se ajustan al dictamen del Comité permanente de la alimentación animal ,

HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :

Artículo 1

Los Estados miembros dispondrán que los análisis para los controles oficiales de los alimentos para animales , en lo que se refiere a sus contenidos en ácido cianhídrico , calcio , carbonato , cenizas brutas , cenizas insolubles en HCl , cloro de cloruros , esencia de mostaza , lactosa , potasio , sodio , azúcares , teobromina y urea , así como a la determinación de los alcaloides de los altramuces y de la actividad ureásica de los productos de soja , se efectúen según los métodos descritos en el Anexo de la presente Directiva .

Artículo 2

Los Estados miembros aplicarán , a más tardar , el 1 de julio de 1972 , las disposiciones legales , reglamentarias o administrativas necesarias para cumplir las disposiciones de la presente Directiva . Informarán de ello inmediatamente a la Comisión .

Artículo 3

Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros .

Hecho en Bruselas , el 15 de junio de 1971 .

Por la Comisión

El Presidente

Franco M. MALFATTI

(1) DO n º L 170 de 3 . 8 . 1970 , p. 2 .

ANEXO

MÉTODO DE ANÁLISIS DE LOS COMPONENTES DE LOS ALIMENTOS PARA ANIMALES

1 . INTRODUCCIÓN

Los métodos de análisis de los componentes de los alimentos para animales son aplicables , en general , a todos los piensos simples y compuestos . No obstante , determinados alimentos requieren , debido a particularidades inherentes a su composición , modalidades analíticas propias . Estos casos se prevén en « observaciones » en la descripción de los métodos .

Cuando estén indicados dos o más alimentos para la determinación de un mismo componente de un alimento , la elección del método aplicable , salvo indicación en contrario , corresponderá al laboratorio de control ; no obstante , se indicará en el boletín de análisis el método empleado .

Preparación de la muesta para análisis

El análisis químico debe hacerse necesariamente sobre una muestra homogénea . Por el contrario , ciertas determinaciones macroscópicas o microscópicas , así como la determinación de la humedad , deben hacerse sobre la muestra en el estado en que se encuentre al llegar al laboratorio . Para tener en cuenta esta doble exigencia , se dividirá la muestra en dos partes . Una de ellas será cortada en el estado en que se encuentra ; la otra se preparará para el análisis químico del modo que se indica seguidamente .

Dividir la muestra con ayuda de un aparato mecánico o manualmente , después de haber mezclado cuidadosamente la totalidad en una superficie limpia y seca . En el último caso , es conveniente aplicar el método de los cuartos , que consiste en tomar sucesivamente muestras en dos sectores opuestos . Por último , tomar para el análisis una porción de 100 g aproximadamente y triturar , si es preciso , para que la totalidad pase por un tamiz de malla redonda de 1 mm de diámetro . Introducir inmediatamente esta muestra en un recipiente seco provisto de cierre hermético al aire , y tapar .

Si la muestra está muy húmeda , hay que proceder a una predesecación , para que el grado de humedad se sitúe en un valor comprendido entre el 8 y el 12 % . Con este fin , desecar la muestra a una temperatura adecuada en el tiempo preciso .

Reactivos y aparatos

En la descripción de los métodos de análisis únicamente se indican los instrumentos o aparatos especiales o que exigen normas especiales . Se considera superfluo mencionar todos los aparatos o utensilios que forman parte de la instrumentación corriente de los laboratorios de control .

Por lo demás , cuando se haga referencia a agua para las diluciones o lavados , se entenderá siempre que se trata de agua destilada . Análogamente , cuando se haga referencia a una solución , sin más indicaciones , se entenderá que se trata de una solución en agua destilada .

Expresión de los resultados

El resultado que se mencionará en el boletín de análisis será el valor medio obtenido a partir de dos determinaciones por lo menos . Salvo disposición en contrario , se expresará en porcentaje de la muestra original , tal como haya llegado al laboratorio . El resultado no debe incluir más cifras significativas que lo que permita la precisión del método de análisis .

2 . DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO CIANHÍDRICO

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido en ácido cianhídrico libre y combinado en forma de glucósidos de la alimentación animal y , en particular , de los productos de semillas de lino , de harina de mandioca y de determinadas especies de judías .

2 . Principio

La muestra se suspende en el agua . El ácido cianhídrico se libera bajo la acción de fermentos , se arrastra por destilación al vapor de agua y se recoge en un volumen determinado de solución de nitrato de plata acidificada . El cianuro de plata se separa por filtrado y el exceso de nitrato de plata se valora mediante una solución de tioacinato al amonio .

3 . Reactivos

3.1 . Suspensión de almendras dulces : triturar 20 almendras dulces limpiadas en 100 ml de agua a una temperatura de 37 a 40 ° C . Comprobar la ausencia de ácido cianhídrico sobre 10 ml de la suspensión , con ayuda de un papel picro-sódico o efectuando una prueba en blanco como se indica en 5 en el último apartado .

3.2 . Solución al 10 % ( p/v ) de acetato de sodio , neutro a la fenolftaleína .

3.3 . Emulsión de antiespuma ( silicona , por ejemplo ) .

3.4 . Acido nítrico , d : 1,40 .

3.5 . Solución de nitrato de plata : 0,02 N .

3.6 . Solución de tiocianato de amonio : 0,02 N .

3.7 . Solución saturada de sulfato de amonio férrico .

3.8 . Amoniaco , d : 0,958 .

4 . Equipo

4.1 . Estufa provista de un termostato regulado a 38 ° C .

4.2 . Aparato de destilación por producción al vapor de agua provisto de un refrigerante con alargadera curvada .

4.3 . Matraces de fondo plano de 100 ml de tapón esmerilado .

4.4 . Baño de aceite .

4.5 . Bureta graduada a 1/20 ml .

5 . Método operatorio

Pesar , con precisión de 5 mg , 20 g de la muestra , introducirlos en un matraz de 1 l de fondo plano y añadir 50 ml de agua y 10 ml de suspensión de almendras dulces ( 3.1 ) . Tapar el matraz y mantenerlo durante dieciséis horas en la estufa a 38 ° C . Refrigerar a continuación a la temperatura ambiente y añadir 80 ml de agua , 10 ml de solución de acetato de sodio ( 3.2 ) y una gota de emulsión antiespuma ( 3.3 ) .

Conectar el matraz al aparato de destilación al vapor y situarlo en un baño de aceite previamente llevado a una temperatura ligeramente superior a 100 ° C . Destilar de 200 a 300 ml de líquido haciendo pasar en el matraz una poderosa corriente de vapor y calentando suavemente el baño de aceite . Recoger el destilado en un erlenmeyer situado al resguardo de la luz y que contenga 50 ml exactamente de solución de nitrato de plata 0,02 N ( 3.5 ) y 1 ml de ácido nítrico ( 3.4 ) . Prestar atención para que la alargadera del refrigerante se sumerja en la solución de nitrato de plata .

Trasvasar el contenido del erlenmeyer a un matraz aforado de 500 ml , completar el volumen con agua , agitar y filtrar . Tomar 250 ml del filtrado , añadir 1 ml aproximadamente de solución de sulfato de amonio férrico ( 3.7 ) y valorar en retroceso el exceso de nitrato de plata por la solución de tiocianato de amonio 0,02 N ( 3.6 ) suministrada por la bureta graduada a 1/20 ml .

Efectuar en el caso en que fuera necesario un ensayo en blanco aplicando el mismo método operatorio a 10 ml de suspensión de almendras blandas ( 3.1 ) , a falta de muestra para analizar .

6 . Cálculo de los resultados

Si la prueba en blanco indica un consumo de la solución de nitrato de plata 0,02 N , sustraer este valor del volumen consumido por el destilado de la muestra .

1 ml de AgNO30,02 N corresponde a 0,54 mg de HCN . Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

7 . Observaciones

Si la muestra contiene una cantidad importante de sulfuros ( judías , por ej. ) , se forma un precipitado negro de sulfuro de plata que se filtra con el sedimento de cianuro de plata . La formación de este precipitado entraña una pérdida de solución de nitrato de plata 0,02 N cuyo volumen debe sustraerse del volumen tomado en consideración para el cálculo del contenido en HCN . Con tal fin , proceder como se indica a continuación .

Tratar el sedimento sobre el filtro por 50 ml de amoniaco ( 3.8 ) para disolver el cianuro de plata . Lavar el residuo mediante amoniaco diluido y proceder a la determinación de su contenido en plata . Convertir el valor obtenido en ml de solución de nitrato de plata 0,02 N .

El contenido en HCN de la muestra puede determinarse igualmente mediante titulación del filtrado amoniacal acidificado por el ácido nítrico .

3 . DETERMINACIÓN DEL CALCIO

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido en calcio total de los alimentos para animales .

2 . Principio

La muestra se incinera , las cenizas se tratan con ácido clorhídrico y el calcio se precipita en forma de oxalato de calcio . Después de disolver el precipitado en el ácido sulfúrico , el ácido oxálico formado se titula mediante una solución de permanganato de potasio .

3 . Reactivos

3.1 . Ácido clorhídrico p.a. , d : 1,14 .

3.2 . Ácido nítrico p.a. , d : 1,40 .

3.3 . Ácido sulfúrico p.a. , d : 1,13 .

3.4 . Amoniaco p.a. , d : 0,98 .

3.5 . Solución saturada en frío de oxalato de amonio p.a.

3.6 . Solución al 30 % ( p/v ) de ácido cítrico p.a.

3.7 . Solución al 5 % ( p/v ) de cloruro de amonio p.a.

3.8 . Solución al 0,04 % ( p/v ) de verde de bromocresol .

3.9 . Solución de permanganato de potasio 0,1 N .

4 . Equipo

4.1 . Horno eléctrico , de circulación de aire y termostato .

4.2 . Crisoles de incineración de platino , cuarzo o porcelana .

4.3 . Crisoles filtrantes de cristal , porosidad G4 .

5 . Método operatorio

Pasar , con precisión de 1 mg , aproximadamente 5 g de la muestra ( o más si fuera necesario ) , calcinarlos a 550 ° C y trasvasar las cenizas a un vaso de 250 ml . Añadir 40 ml de ácido clorhídrico ( 3.1 ) , 6 ml de agua y algunas gotas de ácido nítrico ( 3.2 ) . Llevar a ebullición y mantenerla durante treinta minutos . Refrigerar , trasvasar la solución a un matraz aforado de 280 ml . Lavar , completar el volumen hasta enrasar con el indicador de nivel con agua , homogeneizar y filtrar .

Tomar con una pipeta , según el contenido supuesto en calcio , una cantidad alícuota que contenga de 10 a 40 mg de calcio e introducir en un vaso de 250 ml . Añadir 1 ml de solución de ácido cítrico ( 3.6 ) y 5 ml de solución de cloruro de amonio ( 3.7 ) . Completar el volumen a 100 ml aproximadamente mediante agua . Llevar a ebullición , añadir de 8 a 10 gotas de solución de verda de bromocresol ( 3.8 ) y 30 ml de solución caliente de oxalato de amonio ( 3.5 ) . Si aparece un precipitado , disolverlo mediante adición de algunas gotas de ácido clorhídrico ( 3.1 )

Neutralizar a continuación muy lentamente mediante amoniaco ( 3.4 ) , agitando constantemente , hasta la obtención de un pH del orden de 4,4 a 4,6 ( virado del indicador ) . Colocar el vaso en un baño de agua hirviendo , mantenerlo durante treinta minutos para dejar reposar el precipitado que se haya formado . Retirar el vaso del baño de agua . Dejar reposar durante una hora y filtrar en un crisol filtrante G4 .

Lavar el vaso y el crisol con agua hasta eliminar el exceso de oxalato de amonio ( la ausencia de cloruro en las aguas de lavado indica que el lavado ha sido suficiente ) .

Disolver el precipitado sobre el filtro mediante 50 ml de ácido sulfúrico ( 3.3 ) caliente . Lavar el crisol con agua caliente y llevar el filtrado a 100 ml aproximadamente . Llevar la temperatura a 70-80 ° C y titular gota a gota mediante la solución de permanganato de potasio ( 3.9 ) hasta la obtención de una coloración rosa persistente durante un minuto .

6 . Cálculo de los resultados

1 ml de permanganato de potasio 0,1 N corresponde a 2,004 mg de calcio . Expresar el resultado obtenido en porcentaje de la muestra .

7 . Observaciones

7.1 . Para los contenidos muy bajos en calcio , proceder como se indica a continuación . Filtrar el precipitado de oxalato de calcio sobre un papel filtro sin cenizas . Después de lavarlo , secar el filtro y calcinarlo a 550 ° C en un crisol de platino . Recoger el residuo mediante algunas gotas de ácido sulfúrico ( 3.3 ) , evaporar en seco , calcinar de nuevo a 550 ° C y pesar . Si p representa el peso de sulfato de calcio obtenido , el contenido en calcio de la cantidad alícuota tomada = p por 0,2944 .

7.2 . Si la muestra está constituida únicamente por materias minerales , proceder a la disolución mediante ácido clorhídrico sin previa incineración . Para los productos tales como los fosfatos aluminocálcicos , difíciles de disolver en los ácidos , proceder como se indica a una fusión alcalina antes de la disolución . Mezclar íntimamente en un crisol de platino la toma de muestra , con una mezcla de aproximadamente 5 veces su peso , a partes iguales , de carbonato de potasio y carbonato de sodio . Calentar con precaución hasta la fusión completa de la mezcla . Después de enfriar , disolver mediante ácido clorhídrico .

7.3 . Si el contenido en magnesio de la muestra es elevado , proceder a una segunda precipitación del oxalato de calcio .

4 . DETERMINACIÓN DE LOS CARBONATOS

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar los carbonatos , convencionalmente expresados en carbonato cálcico , en los alimentos para animales . En determinados casos , sin embargo ( carbonato de hierro , por ejemplo ) , es necesario emplear un método particular .

2 . Principio

Los carbonatos se descomponen por el ácido clorhídrico ; el gas carbónico liberado se recoge en un tubo graduado y su volumen se compara al liberado , en las mismas condiciones , por una cantidad conocida de carbonato cálcico p.a.

3 . Reactivos

3.1 . Ácido clorhídrico , d : 1,10 .

3.2 . Carbonato cálcico p.a.

3.3 . Ácido sulfúrico 0,1 N aproximadamente , coloreado por rojo de metilo .

4 . Equipo

Aparato según Scheibler-Dietrich ( v. esquema ) o aparato similar .

5 . Método operativo

Según el contenido en carbonatos de la muestra , pesar una toma de muestra tal como se indica a continuación :

0,5 g para los productos que contengan del 50 a 100 % de carbonatos , expresados en carbonato cálcico ;

1 g para los productos que contengan del 10 a 50 % de carbonatos , expresados en carbonato cálcico ;

2 g a 3 g para el resto de los productos .

Introducir la toma de muestra en el frasco especial ( 4 ) del aparato , provisto de un pequeño tubo de material irrompible con 10 ml de ácido clorhídrido ( 3.1 ) , y conectar el frasco al aparato . Girar el grifo de tres vías ( 5 ) de forma que el tubo ( 1 ) comunique con el exterior . Con ayuda de un tubo móvil ( 2 ) , con ácido sulfúrico coloreado en su interior ( 3.3 ) y conectado al tubo graduado ( 1 ) , llevar el nivel del líquido a la graduación cero . Girar el grifo ( 5 ) , de forma que se pongan en comunicación los tubos ( 1 ) y ( 2 ) , y comprobar el nivel cero .

Dejar correr lentamente el ácido clorhídrico ( 3.1 ) sobre la toma de muestra inclinando el frasco ( 4 ) . Igualar la presión bajando el tubo ( 2 ) . Agitar el frasco ( 4 ) hasta que cese el desprendimiento de gas carbónico .

Restablecer la presión llevando el líquido al mismo nivel en los tubos ( 1 ) y ( 2 ) . Hacer la lectura después de algunos minutos , cuando el volumen gaseoso se haya hecho constante .

Efectuar en las mismas condiciones una prueba de comparación sobre 0,5 g de carbonato cálcico ( 3.2 ) .

6 . Cálculo de los resultados

El contenido en g de carbonatos , expresados en carbonato cálcico , por cada cien de muestra vendrá dado por la relación :

V por 100 / T por 2 P

en el que :

V = ml de CO2 desprendidos por la toma de muestra .

T = ml de CO2 desprendidos por 0,5 g de CaCO3 p.a.

P = peso de la toma de muestra en g .

7 . Observaciones

7.1 . Cuando la muestra sea superior a 2 kg , introducir previamente 15 ml de agua destilada en el frasco ( 4 ) y mezclar antes de comenzar la prueba . Emplear el mismo volumen de agua para la mezcla de comparación .

7.2 . Si se emplea un aparato de un volumen diferente del de Scheibler-Dietrich , será necesario adaptar a dicho aparato la muestra y la sustancia de comparación así como el cálculo de los resultados .

APARATO SEGÚN SCHEIBLER-DIETRICH PARA DETERMINAR EL CO2 : Véase D.O.

5 . DETERMINACIÓN DE LAS CENIZAS BRUTAS

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido en cenizas brutas de los alimentos para animales .

2 . Principio

La muestra se incinera a 550 ° C ; el residuo se pesa .

3 . Reactivos

Solución al 20 % ( p/v ) de nitrato de amonio .

4 . Equipo

4.1 . Placa calorífera .

4.2 . Horno eléctrico , con termostato .

4.3 . Crisoles de incineración de platino o de aleación de platino y oro ( 10 % Pt , 90 % An ) , rectangulares ( 60 por 40 por 25 mm ) o redondos ( diámetro : 60 a 75 mm , altura : 20 a 25 mm ) .

5 . Método operatorio

Pesar , con precisión de 1 mg , 5 g aproximadamente de la muestra ( 2,5 g para los productos que tengan tendencia a hincharse ) en un crisol de incineración previamente calcinado y tarado . Situar el crisol sobre la placa carolífera y calentar progresivamente hasta la carbonización de la materia . Introducir el crisol en el horno regulado a 550 ° C más o menos 5 ° C . Mantener a dicha temperatura hasta obtener cenizas blancas , gris claro o rojizas , aparentemente desprovistas de partículas carbonosas . Situar el crisol en un desecador , dejar refrigerar y pesar inmediatamente .

6 . Cálculo de los resultados

Calcular el peso del resíduo deduciendo la tara .

Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

7 . Observaciones

7.1 . Las cenizas de las materias difíciles de quemar deben someterse a una primera incineración de tres horas al menos , refrigerarse y añadir algunas gotas de una solución al 20 % de nitrato de amonio ( prudentemente , para evitar la dispersión o pegadura de las cenizas ) . Continuar la calcinación después de desecar la estufa .

Repetir si fuera necesario la operación hasta la completa incineración .

7.2 . Para las materias que resistan el tratamiento indicado en 7.1 , operar como se indica a continuación . Después de una incineración de tres horas , recoger las cenizas mediante agua caliente y filtrar sobre un pequeño filtro sin cenizas . Incinerar el filtro y su contenido en el crisol inicial . Llevar el filtrado al crisol refrigerado , evaporar en seco , incinerar y pesar .

7.3 . En el caso de aceites y grasas , pesar con exactitud una toma de muestra del orden de 25 g en un crisol de capacidad apropiada . Carbonizar inflamando la materia por medio de una mezcla de papel filtro sin cenizas . Después de la combustión , humedecer mediante el mínimo necesario de agua . Secar e incinerar como se indica en 5 .

6 . DETERMINACIÓN DE LAS CENIZAS INSOLUBLES EN EL ÁCIDO CLORHÍDRICO

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido en materias minerales insolubles en el ácido clorhídrico de los alimentos para animales . Se preven dos procedimientos en función de la naturaleza de la muestra .

1.1 . Procedimiento A : aplicable a los alimentos orgánicos simples y a la mayor parte de los piensos compuestos completos ;

1.2 . Procedimiento B : aplicable a los compuestos y mezclas minerales , así como a los piensos compuestos completos cuyo contenido en insoluble clorhídrico , determinado según el procedimiento A , sea superior al 1 % .

2 . Principio

2.1 . Procedimiento A : se incinera la muestra , se tratan las cenizas por ebullición mediante el ácido clorhídrico y el residuo insoluble se filtra y se pesa .

2.2 . Procedimiento B : la mezcla se trata mediante ácido clorhídrico . La solución se filtra , el residuo se incinera y las cenizas obtenidas se tratan como el procedimiento A .

3 . Reactivos

3.1 . Acido clorhídrico 3 N .

3.2 . Solución al 20 % ( p/v ) de ácido tricloracético .

3.3 . Solución al 1 % ( p/v ) de ácido tricloracético .

4 . Equipo

4.1 . Placa calorífera .

4.2 . Horno eléctrico , con termostato .

4.3 . Crisoles de incineración de platino o de aleación de platino y oro ( 10 % Pt , 90 % Au ) , rectangulares ( 60 por 40 por 25 mm ) o redondos ( diámetro : 60 a 75 mm , altura : 20 a 25 mm ) .

5 . Método operatorio

5.1 . Procedimiento A

Incinerar la toma de muestra según el método operatorio descrito para la determinación de las cenizas brutas . Se podrán emplear igualmente las cenizas obtenidas al efectuar dicha determinación .

Introducir las cenizas en un vaso de 250 a 400 ml de ácido clorhídrico 3 N ( 3.1 ) . Llevar el líquido con prudencia a ebullición suave y mantener ésta durante quince minutos . Filtrar la solución caliente sobre un papel de filtro sin cenizas y lavar el residuo con agua caliente hasta la desaparición de reacción ácida . Secar el filtro que contiene al residuo e incinerar en un crisol tarado a una temperatura de 550 ° C como mínimo y de 700 ° C como máximo . Refrigerar en desecador y pesar .

5.2 . Procedimiento B

Pesar , con precisión de 1 mg , 5 g de la muestra e introducirlos en un vaso de 250 a 400 ml . Añadir sucesivamente 25 ml de agua y 25 ml de ácido clorhídrico 3 N ( 3.1 ) , mezclar y esperar el final de la efervescencia . Añadir 50 ml de ácido clorhídrico 3 N ( 3.1 ) . Esperar al final de un posible desprendimiento de gases , colocar a continuación el vaso en un baño de agua hirviendo y mantenerlo allí durante treinta minutos o más , si fuera necesario , con el fin de hidrolizar completamente el almidón que pueda estar presente .

Filtrar en caliente sobre filtro sin cenizas y lavar el filtro mediante 50 ml de agua caliente ( v. observación 7 ) . Colocar el filtro que contiene el residuo en un crisol de incineración , secar e incinerar a una temperatura de 550 ° C como mínimo y 700 ° C como máximo . Introducir a continuación las cenizas en un vaso de 250 a 400 ml mediante 75 ml de ácido clorhídrico 3 N ( 3.1 ) ; continuar tal como se indica en 5.1 , párrafo segundo .

6 . Cálculo de los resultados

Calcular el peso del residuo deduciendo la tara . Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

7 . Observaciones

Si la filtración se mostrara difícil , volver a comenzar la determinación sustituyendo los 50 ml de ácido clorhídrico 3 N por 50 ml de ácido tricloracético al 20 % ( 3.2 ) y lavando el filtro con ayuda de una solución caliente de ácido tricloracético al 1 % ( 3.3 ) .

7 . DETERMINACIÓN DEL CLORO DE LOS CLORUROS

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el cloro de los cloruros solubles en el agua , expresado convencionalmente en cloruro de sodio . Es aplicable a los alimentos para animales en conjunto .

2 . Principio

Los cloruros se disuelven en agua . Si el producto contiene materias orgánicas , se procede a una defecación . La solución se acidifica ligeramente mediante el ácido nítrico y los cloruros se precipitan en forma de cloruro de plata con ayuda de una solución de nitrato de plata . El exceso de nitrato de plata se titula mediante una solución de tiocianato de amonio , según el método de Volhard .

3 . Reactivos

3.1 . Solución de tiocianato de amonio 0,1 N .

3.2 . Solución de nitrato de plata 0,1 N .

3.3 . Solución saturada de sulfato de amonio férrico .

3.4 . Ácido nítrico , d : 1,38 .

3.5 . Eter dietílico p.a .

3.6 . Acetona p.a .

3.7 . Solución de Carrez I : disolver en agua 24 g de acetato de zinc , Zn (CH3COO)2 · 2 H2O y 3 g de ácido acético glacial . Completar a 100 ml con agua .

3.8 . Solución de Carrez II : disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de potasio K4(Fe (CN)6) · 3 H2O . Completar a 100 ml con agua .

3.9 . Carbón activo p.a. exento de cloruros y no absorbente .

4 . Equipo

Mezclador ( balancín ) : de aproximadamente 35 a 40 revoluciones por minuto .

5 . Método operatorio

5.1 . Preparación de la solución

Según la naturaleza de la muestra , preparar una solución como se indica en 5.1.1 . , 5.1.2 . o 5.1.3 .

Efectuar en paralelo una prueba en blanco exenta de muestra para analizar .

5.1.1 . Muestras exentas de materia orgánica

Pesar , con precisión de 1 mg , una toma de muestra ( no más de 10 g ) , que no contenga más de 3 g de cloro en forma de cloruros e introducirla en un frasco aforado de 500 ml con 400 ml de agua a 20 ° C aproximadamente . Mezclar durante treinta minutos en el balancín , completar al volumen , homogeneizar y filtrar .

5.1.2 . Muestras que contengan materias orgánicas , excepto los productos mencionados en 5.1.3

Pesar , con precisión de 1 mg , 5 g aproximadamente de la muestra e introducirlos con 1 g de carbón activo en un frasco aforado de 500 ml . Añadir 400 ml de agua a 20 ° C aproximadamente y 5 ml de solución de Carrez I ( 3.7 ) , agitar y añadir a continuación 5 ml de solución de Carrez II ( 3.8 ) . Mezclar durante treinta minutos en el balancín , completar al volumen , homogeneizar y filtrar .

5.1.3 . Alimentos cocidos , torta y harina de lino , productos ricos en harina de lino y el resto de los productos ricos en mucílagos o en substancias coloidales ( por ejemplo , almidón dextrinado )

Prepara la solución como se indica en 5.1.2 . pero no filtrar . Decantar ( si fuera necesario , centrifugar ) , tomar 100 ml del líquido sobrenadante e introducirlos en un matraz aforado de 200 ml . Mezclar con acetona , ( 3.6 ) y completar el volumen con dicho disolvente , homogeneizar y filtrar .

5.2 . Titulación

Introducir mediante la pipeta en un erlenmeyer de 25 a 100 ml del filtrado ( según el contenido supuesto en cloro ) obtenido en 5.1.1 . , 5.1.2 . ó 5.1.3 . La porción alícuota no debe contener más de 150 mg de cloro ( Cl ) . Diluir , si fuera necesario , a 50 ml como mínimo con el agua , añadir 5 ml de ácido nítrico ( 3,4 ) , 20 ml de solución saturada de sulfato de amonio férrico ( 3.3 ) y dos gotas de solución de triocianato de amonio ( 3.1 ) suministradas mediante una bureta llena hasta la marca de aforo cero . Suministrar a continuación mediante una bureta la solución de nitrato de plata ( 3.2 ) de forma que se pueda obtener un exceso de 5 ml . Añadir 5 ml de éter dietílico ( 3.5 ) y agitar fuertemente para concentrar el precipitado .

Titular el exceso de nitrato de plata mediante la solución de tiocianato de amonio ( 3.1 ) hasta que el virado al ocre persista durante un minuto .

6 . Cálculo de los resultados

La cantidad de cloro ( p ) , expresada en cloruro de sodio , presente en el volumen de filtrado tomado para la titulación viene dada por la fórmula siguiente :

p = 5,845 ( V1 - V2 ) mg

donde :

V1 = ml de solución de nitrato de plata 0,1 añadidos

V2 = ml de solución de tiocianato de amonio 0,1 N empleados al efectuar la titulación .

Si la prueba en blanco indica un consumo de solución de nitrato de plata 0,1 N , restar dicho valor del volumen ( V1 - V2 ) .

Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

7 . Observaciones

7.1 . La titulación podrá igualmente efectuarse mediante potenciometria ;

7.2 . Para los productos muy ricos en materias grasas , proceder a un desengrasado previo mediante el éter dietílico o el éter de petroleo ;

7.3 . Para las harinas de pescado , la titulación puede efectuarse mediante el método de Mohr .

8 . DETERMINACIÓN DE LA ESENCIA DE MOSTAZA

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido en esencia de mostaza arrastable por el vapor de agua , expresado en isotiocianato de alilo , de la torta de las especies Brassica y Sinapis y de los piensos completos compuestos que la contienen .

2 . Principio

La muestra se pone en suspensión en agua . Las esencias de mostaza se liberan bajo la acción de fermentos , se arrastran por destilación en presencia de etanol y se recogen en el amoniaco diluido . La solución se trata en caliente con un volumen determinado de solución de nitrato de plata , refrigerado y filtrado . El exceso de nitrato de plata se titula mediante una solución de tiocianato de amonio .

3 . Reactivos

3.1 . Mostaza blanca ( Sinapis alba ) .

3.2 . Etanol , del 95 al 96 % ( v/v ) .

3.3 . Emulsión de antiespuma ( silicona , por ejemplo ) .

3.4 . Amoniaco , d : 0,958 .

3.5 . Solución de nitrato de plata 0,1 N .

3.6 . Solución de tiocianato de amonio 0,1 N .

3.7 . Ácido nítrico , d : 1,40 .

3.8 . Solución saturada de sulfato de amonio férrico .

4 . Equipo

4.1 . Matraces de 500 ml , de fondo plano y tapón esmerilado .

4.2 . Aparato de destilar provisto de un refrigerante y de un dispositivo que permita evitar el arrastre de gotitas .

5 . Método operatorio

Pesar , con precisión en 1 mg , 10 g de la muestra , introducirlos en un matraz de 500 ml de fondo plano y añadir 2 g de mostaza blanca triturada finamente ( fuente de fermento ) ( 3.1 ) y 200 ml de agua a 20 ° C . Tapar el matraz y mantenerlo durante dos horas aproximadamente a 20 ° C agitándolo frecuentemente . Añadir a continuación 40 ml de etanol ( 3.2 ) y una gota de emulsión antiespuma ( 3.3 ) . Destilar 150 ml aproximadamente y recoger el destilado en un matraz aforado de 250 ml que contenga 20 ml de amoniaco ( 3.4 ) prestando atención para que la extremidad del refrigerante se sumerja en el líquido . Añadir a la solución amoniacal 50 ml de solución de nitrato de plata 0,1 N ( 3.5 ) ( o más si fuera necesario ) , coronar el matraz aforado con un pequeño embudo y calentar la mezcla durante una hora en un baño de agua hirviendo . Dejar enfriar , completar al volumen con agua , agitar y filtrar . Tomar 100 ml del filtrado límpido , añadir 5 ml de ácido nítrico ( 3.7 ) y 5 ml aproximadamente de solución de sulfato de amonio férrico ( 3.8 ) . Titular en retroceso el exceso de nitrato de plata por la solución de tiocianato de amonio 0,1 N ( 3.6 ) .

Efectuar una prueba en blanco aplicando el mismo método operatorio a 2 g de mostaza blanca triturada finamente , a falta de la mezcla por analizar .

6 . Cálculo de los resultados

Sustraer el volumen de solución de nitrato de plata 0,1 N consumido en la prueba en blanco del consumido por la solución de la muestra . El valor obtenido da el número de ml de solución de nitrato de plata 0,1 N consumidos por la esencia de mostaza de la toma de muestra . 1 ml de AgNO3 0,1 N corresponde a 4,956 mg de isotiocianato de alilo . Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

9 . DETERMINACIÓN DE LA LACTOSA

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido en lactosa de los alimentos constituidos en más del 0,5 % por este elemento .

2 . Principio

Los azúcares se disuelven en el agua . La solución se somete a la fermentación por la levadura Saccharomycers cerevisiae , que deja intacta la lactosa . Previa defecación de la filtración , el contenido en lactosa del filtrado se determina por el método Luff-Schoorl .

3 . Reactivos

3.1 . Suspensión de Saccharomycers cerevisiae : Poner en suspensión 25 g de levadura fresca en 100 ml de agua . La suspensión se conserva una semana como máximo en el refrigerador .

3.2 . Solución Carrez I :

Disolver en agua 24 g de acetato de cinc Zn(CH3COO)2 · 2 H2O y 3 g de ácido acético glacial . Completar a 100 ml con agua .

3.3 . Solución de Carrez II : Disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de potasio K4 ( Fe ( CN6 ) ) · 3 H2O . Completar a 100 ml con agua .

3.4 . Reactivo según Luff-Schoorl :

Verter , agitando siempre con prudencia , la solución de ácido cítrico ( 3.4.2 ) en la solución de carbonato de sodio ( 3.4.3 ) . Añadir a continuación la solución de sulfato de cobre ( 3.4.1 ) y completar a 1 l con agua . Dejar reposar una noche y filtrar . Controlar la normalidad del reactivo así obtenido ( Cu 0,1 N ; Na2 CO3 2 N ) . El pH de la solución deberá ser 9,4 aproximadamente .

3.4.1 . Solución de sulfato de cobre : Disolver 25 g de sulfato de cobre p.a. Cu SO4 · 5 H2O , exento de hierro , en 100 ml de agua .

3.4.2 . Solución de ácido cítrico :

Disolver 50 g de ácido cítrico p.a. C6H8O7 · H2O en 50 ml de agua .

3.4.3 . Solución de carbonato de sodio : Disolver 143,8 g de carbonato de sodio anhidro p.a. en 300 ml aproximadamente de agua caliente . Dejar enfriar .

3.5 . Granulados de piedra pómez hervidos en el ácido clorhídrico , lavados en el agua y secados .

3.6 . Solución al 30 % ( p/v ) de yoduro de potasio .

3.7 . Ácido sulfúrico 6 N .

3.8 . Solución de tiosulfato de sodio 0,1 N .

3.9 . Solución de almidón : Añadir una mezcla de 5 g de almidón soluble en 30 ml de agua a 1 l de agua hirviendo . Hacer hervir durante tres minutos , dejar enfriar , añadir si fuera necesario 10 mg de yoduro mercúrico como agente conservador .

4 . Equipo

Baño de agua provisto de un termostato , regulado de 38 a 40 ° C .

5 . Método operatorio

Pesar , con precisión de 1 g , 1 g de la muestra e introducir esta toma de muestra en un matraz aforado . Añadir de 25 a 30 ml de agua . Colocar el matraz durante treinta minutos en un baño de agua hirviendo y refrigerar a continuación a 35 ° C aproximadamente . Añadir 5 ml de suspensión de levadura ( 3.1 ) y homogeneizar . Dejar reposar el matraz durante dos horas en un baño de agua , a la temperatura de 38 a 40 ° C . Refrigerar a continuación hasta 20 ° C aproximadamente .

Añadir 2,5 ml de solución de Carrez I ( 3.2 ) y agitar durante treinta segundos ; añadir a continuación 2,5 ml de solución de Carrez II ( 3.3 ) y agitar de nuevo durante treinta segundos . Completar a 100 ml con agua mezclar y filtrar . Tomar con la pipeta una cantidad de filtrado que no exceda de 25 ml y que contenga con preferencia de 40 a 80 mg de lactosa e introducir ésta en un erlenmeyer de 300 ml . Si fuera necesario , completar a 25 ml con agua .

Proceder de la misma manera a un ensayo en blanco en 5 ml de suspensión de levadura ( 3.1 ) .

Determinar tal como se indica el contenido en lactosa según Luff-Schoorl . Añadir 25 ml exáctamente del reactivo según Luff-Schoorl ( 3.4 ) y dos granulados de piedra pómez ( 3.5 ) . Calentar , agitando manualmente , sobre una llama libre de media altura y llevar el líquido a ebullición durante dos minutos aproximadamente . Colocar inmediatamente el erlenmeyer sobre una tela metálica provista de una pantalla de amianto con un agujero de 6 cm de diámetro aproximadamente , bajo la que se ha encendido previamente una llama . Esta se regula de forma que sólo se caliente el fondo del erlenmeyer . Adaptar a continuación un refrigerante a reflujo sobre el erlenmeyer . A partir de este momento , hacer hervir durante diez minutos exáctamente . Refrigerar inmediatamente en agua fría y , después de aproximadamente cinco minutos , titular tal como se indica :

Añadir 10 ml de solución de yoduro de potasio ( 3.6 ) e inmediatamente después , y con prudencia ( debido al riesgo de formación de espuma abundante ) , 25 ml de ácido sulfúrico 6 N ( 3.7 ) . Titular a continuación con la solución de tiosulfato de sodio 0,1 N ( 3.8 ) hasta la aparición de una coloración amarilla clara , añadir el indicador al almidón ( 3.9 ) y concluir la titulación .

Efectuar la misma titulación sobre una mezcla medida con exactitud de 25 ml de reactivo según Luff-Schoorl ( 3.4 ) y 25 ml de agua , después de haber añadido 10 ml de solución de yoduro de potasio ( 3.6 ) y 25 ml de ácido sulfúrico 6 N ( 3.7 ) , sin llevar a ebullición .

6 . Cálculo de los resultados

Establecer mediante la tabla aneja la cantidad de lactosa en mg que corresponda a la diferencia entre los resultados de las dos titulaciones , expresados en ml de tiosulfato de sodio 0,1 N .

Expresar los resultados en partes de lactosa anhidro por cada cien de la muestra .

7 . Observaciones

Para los productos que contengan más del 40 por ciento de los azúcares fermentados , emplear más de 5 ml de suspensión de levadura ( 3.1 )

Tabla de valores para 25 ml de reactivo según Luff-Schoorl

ml de Na2S2O3 0,1 N , dos minutos de calentamiento , diez de ebullición

Na2S2O3 0,1 N * Glucosa , fructosa , azúcares invertidos C6H12O6 * Lactosa C12H22O11 * Maltosa C12H22O11 * Na2S2O3 0,1 N *

ml * mg * diferencia * mg * diferencia * mg * diferencia * ml *

1 * 2,4 * 2,4 * 3,6 * 3,7 * 3,9 * 3,9 * 1 *

2 * 4,8 * 2,4 * 7,3 * 3,7 * 7,8 * 3,9 * 2 *

3 * 7,2 * 2,5 * 11,0 * 3,7 * 11,7 * 3,9 * 3 *

4 * 9,7 * 2,5 * 14,7 * 3,7 * 15,6 * 4,0 * 4 *

5 * 12,2 * 2,5 * 18,4 * 3,7 * 19,6 * 3,9 * 5 *

6 * 14,7 * 2,5 * 22,1 * 3,7 * 23,5 * 4,0 * 6 *

7 * 17,2 * 2,6 * 25,8 * 3,7 * 27,5 * 4,0 * 7 *

8 * 19,8 * 2,6 * 29,5 * 3,7 * 31,5 * 4,0 * 8 *

9 * 22,4 * 2,6 * 33,2 * 3,8 * 35,5 * 4,0 * 9 *

10 * 25,0 * 2,6 * 37,0 * 3,8 * 39,5 * 4,0 * 10 *

11 * 27,6 * 2,7 * 40,8 * 3,8 * 43,5 * 4,0 * 11 *

12 * 30,3 * 2,7 * 44,6 * 3,8 * 47,5 * 4,1 * 12 *

13 * 33,0 * 2,7 * 48,4 * 3,8 * 51,6 * 4,1 * 13 *

14 * 35,7 * 2,8 * 52,2 * 3,8 * 55,7 * 4,1 * 14 *

15 * 38,5 * 2,8 * 56,0 * 3,9 * 59,8 * 4,1 * 15 *

16 * 41,3 * 2,9 * 59,9 * 3,9 * 63,9 * 4,1 * 16 *

17 * 44,2 * 2,9 * 63,8 * 3,9 * 68,0 * 4,2 * 17 *

18 * 47,1 * 2,9 * 67,7 * 4,0 * 72,2 * 4,3 * 18 *

19 * 50,0 * 3,0 * 71,7 * 4,0 * 76,5 * 4,4 * 19 *

20 * 53,0 * 3,0 * 75,7 * 4,1 * 80,9 * 4,5 * 20 *

21 * 56,0 * 3,1 * 79,8 * 4,1 * 85,4 * 4,6 * 21 *

22 * 59,1 * 3,1 * 83,9 * 4,1 * 90,0 * 4,6 * 22 *

23 * 62,2 * 3,1 * 88,0 * * 94,6 * * 23 *

10 . DETERMINACIÓN DEL POTASIO

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido en potasio de los alimentos para animales

2 . Principio

La muestra se incinera y las cenizas se ponen en solución en ácido clorhídrico . El contenido en potasio de la solución se determina por fotometría de llama en presencia de cloruro de cesio y de nitrato de aluminio . La adición de dichas substancias elimina , en una amplia medida , la interferencia de elementos perturbadores .

3 . Reactivos

3.1 . Ácido clorhídrico p.a. , d : 1,12 .

3.2 . Cloruro de cesio p.a.

3.3 . Nitrato de aluminio Al (NO3)3 · 9 H2O , químicamente puro .

3.4 . Cloruro de potasio p.a. , anhidro .

3.5 . Solución tampón : disolver en el agua 50 g de cloruro de cesio ( 3.2 ) y 250 g de nitrato de aluminio ( 3.3 ) , completar a 1 l con agua y homogeneizar . Conservar en frascos de material plástico .

3.6 . Solución patrón de potasio : disolver en el agua 1,907 g de cloruro de potasio ( 3.4 ) , añadiendo 5 ml de ácido clorhídrico ( 3.1 ) , completar a 1 l con agua y homogeneizar . Conservar en frascos de material plástico . 1 ml de dicha solución contiene 1,00 mg de potasio .

4 . Equipo

4.1 . Crisoles de incineración de platino , cuarzo o porcelana , en su caso provistos de tapaderas .

4.2 . Horno eléctrico , con termostato .

4.3 . Fotómatro de llama .

5 . Método operatorio

5.1 . Análisis de la muestra

Pesar , como norma general , con precisión de 10 mg , 10 g de la muestra , en un crisol de incineración e incinerar la substancia a 450 ° C durante tres horas . Después de refrigerar , transvasar cuantitativamente el residuo de incineración con la ayuda de 250 a 300 ml de agua , y después de 50 ml de ácido clorhídrico ( 3.1 ) , a un matraz aforado de 500 ml . Después de cesar el posible desprendimiento de gas carbónico , calentar la solución y mantenerla durante dos horas a una temperatura cercana a los 90 ° C , agitando de vez en cuando . Dejar refrigerar a la temperatura ambiente , anrasar , agitar y filtrar . Introducir en un matraz aforado de 100 ml una parte alícuota de filtrado que contenga como máximo 1,0 mg de potasio , añadir 10,0 ml de solución tampón ( 3.5 ) , enrasar con agua y homogeneizar . En presencia de más altos contenidos en potasio , diluir la solución por analizar en proporciones adecuadas , antes de la adición de la solución tampón . El cuadro siguiente se da a título indicativo para una toma de muestras de 10 g aproximadamente .

Contenido supuesto de la muestra en potasio ( % K ) * Factor de dilución * Parte alícuota en ml de la solución *

hasta 0,1 * - * 50 *

0,1 a 0,5 * - * 10 *

0,5 a 1,0 * - * 5 *

1,0 a 5,0 * 1 : 10 * 10 *

5,0 a 10,0 * 1 : 10 * 5 *

10,0 a 20,0 * 1 : 20 * 5 *

Efectuar la medición por fotometría de llama a la longitud de onda de 768 nm . Calcular el resultado con ayuda de la curva de calibrado .

5.2 . Curva de calibrado

Introducir 10 ml exactamente de la solución de calibrado ( 3.6 ) en un matraz aforado de 250 ml , enrasar con agua y homogeneizar . Introducir en matraces aforados de 100 ml exáctamente 5 , 10 , 15 , 20 y 25 ml de dicha solución , que corresponden respectivamente a cantidades de potasio de 0,2 , 0,4 , 0,6 , 0,8 y 1,0 mg . Completar la serie por un matraz testigo exento de solución de calibrado . Añadir en cada matraz 10,0 ml de solución tampón ( 3.5 ) , enrasar con agua y homogeneizar . Efectuar las medidas como se indica en 5.1 . El trazado de la curva de calibrado es en general lineal hasta una concentración en potasio de 1 mg en 100 ml de solución .

6 . Cálculo de los resultados

Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

7 . Observaciones

La adición de solución tampón ( 3.5 ) para eliminar la interferencia de elementos perturbadores no es siempre necesaria .

11 . DETERMINACIÓN DEL SODIO

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido en sodio de los alimentos para animales .

2 . Principio

La muestra se incinera y las cenizas se ponen en solución en el ácido clorhídrico . El contenido en sodio de la solución se determina por fotometría de llama en presencia de cloruro de cesio y de nitrato de aluminio . La adición de estas substancias elimina , en una amplia medida , la interferencia de elementos perturbadores .

3 . Reactivos

3.1 . Ácido clorhídrico p.a. , d : 1,12 .

3.2 . Cloruro de cesio , p.a.

3.3 . Nitrato de aluminio Al (NO3)3 · 9 H2O , químicamente puro .

3.4 . Cloruro de sodio p.a. , anhidro .

3.5 . Solución tampón : disolver en el agua 50 g de cloruro de cesio ( 3.2 ) y 250 g de nitrato de aluminio ( 3.3 ) , completar a 1 l con agua y homogeneizar . Conservar en frascos de material plástico .

3.6 . Solución de calibrado de sodio . Disolver en el agua 2,542 g de cloruro de sodio ( 3.4 ) añadiendo 5 ml de ácido clorhídrico ( 3.1 ) , completar a 1 l con agua y homogeneizar . Conservar en frascos de material plástico . 1 ml de dicha solución contiene 1,00 mg de sodio .

4 . Equipo

4.1 . Crisoles de incineración de platino , cuarzo o porcelana , en su caso provistos de tapaderas .

4.2 . Horno eléctrico , con termostato .

4.3 . Fotómetro de llama .

5 . Método operatorio

5.1 . Análisis de la muestra

Pesar , como norma general , 10 g de la muestra con precisión de 10 mg en un crisol de incineración de incinerar la substancia a 450 ° C durante tres horas . Evitar el recalentamiento ( inflamación ) . Previo enfriamiento , transvasar cuantitativamente el residuo de incineración con ayuda de 250 a 300 ml de agua , y después con 50 ml de ácido clorhídrico ( 3.1 ) , a un matraz aforado de 500 ml .

Después de haber cesado el posible desprendimiento de gas carbónico , calentar la solución y mantenerla durante dos horas a una temperatura cercana a 90 ° C , agitando de vez en cuando . Dejar refrigerar a la temperatura ambiente , enrasar con agua agitar y filtrar . Introducir en un matraz aforado de 100 ml la parte alícuota del filtrado que contenga como máximo 1,0 mg de solución tampón ( 3.5 ) , enrasar con agua y homogeneizar . En presencia de contenidos más altos en sodio , diluir la solución que deba analizarse en proporciones adecuadas , antes de la adición de la solución tampón . La tabla siguiente se da a título informativo para una toma de muestras de 10 g aproximadamente

Contenido supuesto de la muestra en solución ( % Na ) * Factor de dilución * Parte alícuota en ml de la solución *

hasta 0,1 * - * 50 *

0,1 a 0,5 * - * 10 *

0,5 a 1,0 * - * 5 *

1,0 a 5,0 * 1 : 10 * 10 *

5,0 a 10,0 * 1 : 10 * 5 *

10,0 a 20,0 * 1 : 20 * 5 *

Efectuar la medición mediante fotometría de llama a una longitud de onda de 589 mm .

Calcular el resultado de calibrado .

5.2 . Curva de calibrado

Introducir 10 ml exáctamente de la solución patrón ( 3.6 ) en un matraz aforado de 250 ml , enrasar con agua y homogeneizar . Introducir en matraces aforados de 100 ml exáctamente 5 , 10 , 15 , 20 y 25 ml de dicha solución que corresponda respectivamente a unas cantidades de sodio de 0,2 , 0,4 , 0,6 , 0,8 y 1,0 mg . Completar la serie mediante un matraz testigo exento de solución patrón . Añadir en cada matraz 10,0 ml de solución tampón ( 3.5 ) , enrasar con agua y homogeneizar . Efectuar las mediciones como se indica en 5.1 . El trazado de la curva de muestro es en general lineal hasta una concentración en sodio de 1 mg en 100 ml de solución .

6 . Cálculo de resultados

Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

7 . Observaciones

7.1 . Para los productos cuyo contenido en sodio sea superior al 4 % , es preferible incinerar la substancia durante dos horas en un crisol provisto de una tapadera . Después de proceder a un enfriamiento , añadir agua , poner el residuo en suspensión con la ayuda de un hilo de platino , secar e incinerar de nuevo durante dos horas en el crisol provisto de su tapadera .

7.2 . Si la muestra está constituida únicamente por materiales minerales , proceder a la disolución , sin previa incineración .

12 . DETERMINACIÓN DE LOS AZÚCARES

1 . Objetivos y ámbito de aplicación

El método permite determinar los azúcares reductores y los azúcares totales previa inversión , expresados en glucosa o , en su caso en sacarosa , por conversión con ayuda del factor 0,95 . Este método es aplicable a los piensos completos compuestos . Se prevén modalidades especiales para otros alimentos . En su caso , procede determinar por separado la lactosa y tenerlo en cuenta al calcular los resultados .

2 . Principio

Los azúcares se disuelven en etanol diluido ; la solución se defeca mediante los reactivos de Carrez I y II . Tras la eliminación del etanol , se efectúan las determinaciones antes y después de la inversión , según el método de Luff-Schoorl .

3 . Reactivos

3.1 . Etanol al 40 % ( v/v ) , d : 0,948 a 20 ° C , llevado al punto de virado de la fenolftaleína .

3.2 . Solución de Carrez I :

Disolver en agua 24 g de acetato de cinc Zn (CH3COO)2 · 2 H2O y 3 g de ácido acético glacial . Completar a 100 ml con agua .

2 H2O y 3 g de ácido acético glacial . Completar a 100 ml con agua .

3.3 . Solución de Carrez II : Disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de potasio K4 [ Fe(CN6) ] 3 H2O . Completar a 100 ml con agua .

3.4 . Solución al 0,1 % ( p/v ) de naranja de metilo .

3.5 . Acido clorhídrico 4 N .

3.6 . Acido clorhídrico 0,1 N .

3.7 . Solución de hidróxido de sodio 0,1 N .

3.8 . Reactivo según Luff-Schoorl :

Verter , agitando siempre con prudencia , la solución de ácido cítrico ( 3.8.2 ) en la solución de carbonato de sodio ( 3.8.3 ) . Añadir a continuación la solución de sulfato de cobre ( 3.8.1 ) y completar a 1 l con agua . Dejar reposar una noche y filtrar . Controlar la normalidad del reactivo obtenido de esta forma Cu 0,1 N : Na2CO32N ) . El pH de la solución debe ser de 9,4 aproximadamente .

3.8.1 . Solución de sulfato de cobre : disolver 25 g de sulfato de cobre p.a. , Cu SO4 · 5 H2O , exento de hierro , en 100 ml de agua .

3.8.2 . Solución de ácido cítrico : disolver 50 g de ácido cítrico p.a. C6H8O7 · H2O , en 50 ml de agua .

3.8.3 . Solución de carbonato de sodio : disolver 143,8 g de carbonato de sodio anhidro p.a. en 300 ml aproximadamente de agua caliente . Dejar enfriar .

3.9 . Solución de tiosulfato de sodio 0,1 N .

3.10 . Solución de almidón : Añadir una mezcla de 5 g de almidón soluble en 30 ml de agua a 1 l de agua hirviendo . Hacer hervir durante tres minutos , dejar enfriar , añadir en su caso 10 mg de yoduro mercúrico como agente conservador .

3.11 . Ácido sulfúrico 6 N .

3.12 . Solución al 30 % ( p/v ) de yoduro de potasio .

3.13 . Granulados de piedra pómez hervidos en el ácido clorhídrico , lavados con agua y secados .

3.14 . Isopentanol .

4 . Equipo

Mezclador ( balancín ) : aproximadamente de 35 a 40 revoluciones por minuto .

5 . Método operatorio

5.1 . Puesta en solución

Pesar , con precisión de 1 mg , 2,5 g de la muestra , e introducirlos en un matraz aforado de 250 ml . Añadir 200 ml de etanol ( 3.1 ) y mezclar durante una hora en el balancín . Añadir 5 ml de solución de Carrez ( 3.3 ) y agitar de nuevo durante un minuto . Llevar al volumen con etanol ( 3.1 ) , homogeneizar y filtrar . Tomar 200 ml del filtrado y evaporar alrededor de la mitad del volumen , con el fin de eliminar la mayor parte del etanol . Transvasar cuantitativamente el residuo de evaporación , con la ayuda de agua caliente , a un matraz aforado de 200 ml , refrigerar , llevar el volumen con agua , homogeneizar y filtrar si fuera necesario . Dicha solución se empleará para la determinación de los azúcares reductores y , previa inversión , para la determinación de los azúcares totales .

5.2 . Determinación de los azúcares reductores

Tomar por medio de la pipeta una cantidad de solución que no exceda de 25 ml y que contenga menos de 60 mg de azúcares reductores , expresados en glucosa . Si fuere necesario , completar a 25 ml con agua destilada y determinar el contenido en azúcares reductores según Luff-Schoorl . El resultado se expresará en glucosa por ciento .

5.3 . Determinación de los azúcares totales tras inversión

Tomar por medio de la pipeta 50 ml de solución y llevarlos en un matraz aforado de 100 ml . Añadir algunas gotas de solución de naranja de metilo ( 3.4 ) después , agitando siempre con prudencia , de ácido clorhídrico 4 N ( 3.5 ) hasta virado claro al rojo . Añadir 15 ml de ácido clorhídrico 0,1 N ( 3.6 ) , sumergir el matraz en un baño de agua en fuerte ebullición y mantenerlo allí durante treinta minutos . Refrigerar rápidamente a 20 ° C aproximadamente y añadir 15 ml de solución de hidróxido de sodio 0,1 N ( 3.7 ) . Completar a 100 ml con agua y homogeneizar . Tomar una cantidad que no exceda de 25 ml y que contenga menos de 60 mg de azúcares reductores , expresados en glucosa . Si fuera necesario , completar a 25 ml con agua destilada y determinar el contenido en azúcares reductores según Luff-Schoorl . El resultado se expresa en glucosa por ciento o , en su caso , en sacarosa , multiplicando por el factor 0,95 .

5.4 . Titulación según Luff-Schoorl

Tomar por medio de la pipeta 25 ml del reactivo según Luff-Schoorl ( 3.8 ) y llevarlos a un Erlenmeyer de 300 ml ; añadir 25 ml , medidos con exactitud , de la solución defecada de azúcares . Añadir dos granulados de piedra pómez ( 3.13 ) , calentar , agitando manualmente , sobre una llama libre de altura media y llevar el líquido a ebullición en dos minutos aproximadamente . Colocar inmediatamente el erlenmeyer sobre una tela metálica provista de una pantalla de amianto con un agujero de 6 cm aproximadamente de diámetro , bajo cuya tela se ha encendido previamente una llama . Esta se regula de forma que sólo se caliente el fondo del erlenmeyer . Adaptar a continuación un refrigerante de reflujo sobre el erlenmeyer . A partir de este momento , hacer hervir durante diez minutos exáctamente . Refrigerar inmediatamente en agua fría y , después de aproximadamente cinco minutos , titular tal como se indica a continuación :

Añadir 10 ml de solución de yoduro de potasio ( 3.12 ) e , inmediatamente después y con prudencia ( debido al riesgo de formación de espuma abundante ) , 25 ml de ácido sulfúrico 6 N ( 3.11 ) . Titular a continuación por la solución de tiosulfato de sodio 0,1 N ( 3.9 ) hasta la aparición de una coloración amarilla clara , añadir el indicador al almidón ( 3.10 ) y concluir la titulación .

Efectuar la misma titulación sobre una mezcla exáctamente medida de 25 ml de reactivo según Luff-Schoorl ( 3.8 ) y 25 ml de agua , después de haber añadido 10 ml de solución de yoduro de potasio ( 3.12 ) y 25 ml de ácido sulfúrico 6 N ( 3.11 ) sin llevar a ebullición .

6 . Cálculo de los resultados

Establecer con la ayuda de la tabla la cantidad de glucosa en mg correspondiente a la diferencia entre los valores de las dos titulaciones , expresados en ml de tiosulfato de sodio 0,1 N .

Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

7 . Métodos operatorios particulares

7.1 . Para los alimentos muy ricos en melaza y otros alimentos poco homogéneos , pesar 20 g e introducirlos en un matraz aforado de 1 l con 500 ml de agua . Mezclar durante una hora en el balancín . Defecar por medio de los reactivos de Carrez I ( 3.2 ) y II ( 3.3 ) tal como se describe en 5.1 . empleando , sin embargo , una cantidad 4 veces más elevada de cada reactivo . Llevar al volumen con el etanol al 80 % ( v/v ) .

Homogeneizar y filtrar . Eliminar el etanol tal como se describe en 5.1 . En ausencia de almidón dextrinado , llevar al volumen con agua destilada .

7.2 . Para las melazas y los alimentos simples , ricos en azúcares y prácticamente exentos de almidón ( algarrobos , peladuras desecadas de remolachas , etc. ) pesar 5 g introducirlos en un matraz aforado de 250 ml , añadir 200 ml de agua destilada y mezclar durante una hora o más , si fuera necesario , en el balancín . Defecar a continuación por medio de los reactivos de Carrez I ( 3.2 ) y II ( 3.3 ) , tal como se describe en 5.1 llevar al volumen con agua , homogeneizar y filtrar . Para determinar los azúcares totales , actuar tal como se describe en 5.3 .

8 . Observaciones

8.1 . Se recomienda añadir aproximadamente 1 ml de isopentanol ( 3.14 ) ( sin tomar el volumen en consideración ) antes de la ebullición con el reactivo de Luff-Schoorl , con el fin de evitar la formación de espuma .

8.2 . La diferencia entre el contenido en azúcares totales después de la inversión , expresados en glucosa , y el contenido en azúcares reductores , expresados en glucosa , multiplicada por 0,95 , da el contenido en sacarosa por ciento .

8.3 . Para determinar el contenido en azúcares reductores , excluida , la lactosa podrán adoptarse dos vías :

9.3.1 . Para un cálculo aproximativo , se multiplica por 0,675 el contenido en lactosa establecido para una determinación separada y se resta el resultado obtenido del contenido en azúcares reductores .

8.3.2 . Para un cálculo preciso de los aceites reductores , excluida la lactosa , es necesario partir de la misma toma de muestras para las dos determinaciones finales . Uno de los análisis se efectúa sobre una parte en la solución obtenida en 5.1 . en otro sobre una parte de la solución obtenida al realizarse la determinación de la lactosa según el método previsto con tal fin ( previa fermentación de las otras especies de azúcares y defecación ) .

En ambos casos , la cantidad de azúcar presente se determina según el método de Luff-Schoorl y se calcula en mg de glucosa . Los dos valores se restan el uno del otro y la diferencia se expresa en porcentaje de la muestra .

Ejemplo

Los dos valores tomados corresponden , para cada determinación , a una toma de muestras de 250 mg .

En el primer caso , se consumen 17 ml de solución de tiosulfato de sodio 0,1 N , lo que corresponde a 44,2 mg de glucosa , en el segundo caso 11 ml , lo que corresponde a 27,6 mg de glucosa .

La diferencia se eleva a 16,6 mg de glucosa .

El contenido en azúcares reductores ( exceptuando la lactosa ) , calculado en glucosa es pues de :

( 4 por 16,6 ) /10 = 6,64 %

Tabla de los valores para 25 ml de reactivo según Luff-Schoorl

ml de Na2S2O3 0,1 N , dos minutos de calentamiento , diez de ebullición .

Na2S3O3 0,1 N * Glucosa , fructosa , azúcares invertidos C6H12O6 * Lactosa C12H22O11 * Maltosa C12H22O11 * Na2S2O3 0,1 N *

ml * mg * diferencia * mg * diferencia * mg * diferencia * ml *

1 * 2,4 * 2,4 3,6 * 3,7 * 3,9 * 3,9 * 1 *

2 * 4,8 * 2,4 * 7,3 * 3,7 * 7,8 * 3,9 * 2 *

3 * 7,2 * 2,5 * 11,0 * 3,7 * 11,7 * 3,9 * 3 *

4 * 9,7 * 2,5 * 14,7 * 3,7 * 15,6 * 4,0 * 4 *

5 * 12,2 * 2,5 * 18,4 * 3,7 * 19,6 * 3,9 * 5 *

6 * 14,7 * 2,5 * 22,1 * 3,7 * 23,5 * 4,0 * 6 *

7 * 17,2 * 2,6 * 25,8 * 3,7 * 27,5 * 4,0 * 7 *

8 * 19,8 * 2,6 * 29,5 * 3,7 * 31,5 * 4,0 * 8 *

9 * 22,4 * 2,6 * 33,2 * 3,8 * 35,5 * 4,0 * 9 *

10 * 25,0 * 2,6 * 37,0 * 3,8 * 39,5 * 4,0 * 10 *

11 * 27,6 * 2,7 * 40,8 * 3,8 * 43,5 * 4,0 * 11 *

12 * 30,3 * 2,7 * 44,6 * 3,8 * 47,5 * 4,1 * 12 *

13 * 33,0 * 2,7 * 48,4 * 3,8 * 51,6 * 4,1 * 13 *

14 * 35,7 * 2,8 * 52,2 * 3,8 * 55,7 * 4,1 * 14 *

15 * 38,5 * 2,8 * 56,0 * 3,9 * 59,8 * 4,1 * 15 *

16 * 41,3 * 2,9 * 59,9 * 3,9 * 63,9 * 4,1 * 16 *

17 * 44,2 * 2,9 * 63,8 * 3,9 * 68,0 * 4,2 * 17 *

18 * 47,1 * 2,9 * 67,7 * 4,0 * 72,2 * 4,3 * 18 *

19 * 50,0 * 3,0 * 71,7 * 4,0 * 76,5 * 4,4 * 19 *

20 * 53,0 * 3,0 * 75,7 * 4,1 * 80,9 * 4,5 * 20 *

21 * 56,0 * 3,1 * 79,8 * 4,1 * 85,4 * 4,6 * 21 *

22 * 59,1 * 3,1 * 83,9 * 4,1 * 90,0 * 4,6 * 22 *

23 * 62,2 * * 88,0 * * 94,6 * * 23 *

13 . DETERMINACIÓN DE LA TEOBROMINA

1 . Objetivo y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido en teobromina de los subproductos de transformación de granos de cacao .

2 . Principio

La teobromina se extrae mediante el cloroformo . El extracto se evapora en seco , se pone en solución agua y se trata por un volumen determinado de solución de nitrato de plata .

El ácido nítrico liberado se titula por una solución de hidróxido de sodio .

3 . Reactivos

3.1 . Cloroformo p.a .

3.2 . Amoniaco , d : 0,958 .

3.3 . Sulfato de sodio p.a. , anhídrido .

3.4 . Solución de hidrócido de sodio 0,1 N .

3.5 . Solución de nitrato de plata 0,1 N .

3.6 . Solución etanólica al 1 % ( p/v ) de rojo de fenol .

3.7 . Eter dietílico .

4 . Equipo

Matraces de 500 ml de fondo plano y tapón esmerilado .

5 . Método operatorio

Pesar , con precisión de 1 mg , una toma de muestras de 10 g como máximo , que no contenga más de 80 mg de teobromina . Introducir la toma en un matraz de 500 ml de fondo plano y tapón esmerilado , añadir 270 ml de cloroformo ( 3.1 ) y 10 ml de amoniaco ( 3.2 ) Tapar el matraz y agitar enérgicamente durante cinco minutos . Añadir a continuación 12 g de sulfato de sodio anhidro ( 3.3 ) , agitar de nuevo y dejar reposar hasta el día siguiente . Filtrar en un erlenmeyer de 500 ml y lavar el residuo con 100 ml de cloroformo ( 3.1 ) . Destilar el disolvente y eliminar de él los últimos restos en un baño de agua hirviendo . volver a tomar el extracto por 50 ml de agua y llevar a ebullición .

Refrigerar , neutralizar exactamente por la solución de hidróxido de sodio ( 3.4 ) en presencia de 0,5 ml de solución de rojo de fenol ( 3.6 ) Añadir a continuación 20 ml de solución de nitrato de plata ( 3.5 ) . Titular el ácido nítrico liberado por la solución de hicróxido de sodio ( 3.4 ) hasta el virado del indicador ( pH 7,4 ) .

6 . Cálculo de los resultados

1 ml de NaOH 0,1 N corresponde a 18 mg de teobromina .

Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

7 . Observaciones

Los productos cuyo contenido en materias grasas brutas exceda del 8 % deben ser previamente desgrasados por extracción durante seis horas con éter de petróleo ( Eb. 40 ° C ) .

14 . DETERMINACIÓN DE LA UREA

1 . Objetivo y campo de aplicación

El método permite determinar el contenido en urea de los alimentos para animales

2 . Principio

La muestra se pone en suspensión en agua en presencia de un defecante . La suspensión se filtra . El contenido en urea del filtrado se determina , tras la adición de 4-dimetilaminobenzaldehido ( 4-DMAB ) , por medio de la densidad óptica a la longitud de onda de 420 mm .

3 . Reactivos

3.1 . Solución de 4-dimetilaminobenzaldehido : disolver 1,6 g de 4-DMAB p.a. en 100 ml de etanol al 96 % y añadir 10 ml de ácido clorhídrico p.a. ( D : 1,19 ) . Dicho reactivo se conserva como máximo durante dos semanas .

3.2 . Solución de Carrez I :

disolver en agua 24 g de acetato de cinc , Zn (CH3COO)2 · 2 H2O y 3 g de ácido acético glacial . Completar a 100 ml con agua .

3.3 . Solución de Carrez II : disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de potasio K4 Fe(CN)6 · 3 H2O . Completar a 100 ml con agua .

3.4 . Carbón activo p.a. , que no absorba la urea ( que habrá de controlarse )

3.5 . Solución al 0,1 % ( p/v ) de urea p.a .

4 . Equipo

4.1 . Mezclador ( balancín ) : de alrededor de 35 a 40 revoluciones por minuto .

4.2 . Tubos de ensayo : 160 por 16 mm , de tapones esmerilados .

4.3 . Espectrofotómetro .

5 . Método operatorio

5.1 . Análisis de la muestra

Pesar , con precisión de 1 mg , 2 g de la muestra e introducirlos con 1 g de carbón activo ( 3.4 ) en un frasco aforado de 500 ml . Añadir 400 ml de agua y 5 ml de las soluciones de Carrez I ( 3.2 ) y II ( 3.3 ) . Mezclar durante treinta minutos en el balancín . Completar el volumen con agua , agitar y filtrar .

Tomar 5 ml de los filtrados límpidos e incoloros , introducirlos en los tubos de ensayo de tapón esmerilado , añadir 5 ml de solución de 4-DMAB ( 3.1 ) y mezclar . Colocar los tubos en un baño de agua a 20 ° C . Tras quince minutos , medir la densidad óptica de la solución de la muestra al espedtómetro a 420 mm por comparación con la solución del ensayo en blanco de los reactivos .

5.2 . Curva de calibrado

Tomar volúmenes de 1 , 2 , 4 , 5 y 10 ml de la solución de urea ( 3.5 ) , introducirlos en los matraces esmerilados de 100 ml y completar al volumen con agua . Tomar 5 ml de cada solución , añadir respectivamente 5 ml de solución de 4-DMAB ( 3.1 ) homogeneizar y medir la densidad óptoca como se indica más arriba por comparación con una solución testigo que contenga 6 ml de 4-DMAB y 5 ml de agua , exenta de urea . Trazar la curva de calibrado .

6 . Cálculo de los resultados

Determinar la cantidad de urea de la toma de muestra en lo que se refiere a la curva de calibrado .

Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

7 . Observaciones

7.1 . Para los contenidos de urea superiores al 3 % , reducir la muestra de ensayo a 1 g o diluir la solución inicial para que no haya más de 50 mg de urea en 500 ml .

7.2 . Para los pequeños contenidos de urea , aumentar la muestra de ensayo , si bien el filtrado debe ser límpido e incoloro .

7.3 . Si la muestra contiene compuestos nitrogenados simples , tales como aminoácidos , es conveniente realizar la medida de la densidad óptica a 435 nm .

15 . DETERMINACIÓN DE LOS ALCALOIDES DE LOS ALTRAMUCES

1 . Objeto y ámbito de aplicación

El método permite determinar el contenido de alcaloides de las semillas de altramuces .

2 . Principio

Los alcaloides se disuelven en una mezcla de éter dietílico y cloroformo , y se extraen con ácido clorhídrico . Los alcaloides se precipitan con ácido silico-túngstico , el precipitado se incinera , y se pesa el residuo .

3 . Reactivos

3.1 . Eter dietílico .

3.2 . Cloroformo .

3.3 . Solución de hidróxido de sodio 4 N .

3.4 . Acido clorhídrico 0,3 N .

3.5 . Cloruro de sodio p.a .

3.6 . Solución al 10 % ( p/v ) de ácido silico-túngstico Si O2 · 12 WO3 · 26 H2O .

4 . Equipo

4.1 . Agitador mecánico .

4.2 . Crisoles de incineración , de platino , cuarzo o porcelana .

4.3 . Horno eléctrico .

5 . Método operativo

Pesar , con precisión de 5 mg , 15 g de la muestra e introducirlos en un recipiente de 200 ml aproximadamente , provisto de tapón esmerilado ( p. ej. , ampolla de decantar ) . Añadir 100 ml de éter dietílico ( 3.1 ) y 50 ml de cloroformo ( 3.2 ) medidos exactamente y enseguida , con ayuda de una bureta graduada , 10 ml de solución de hidróxido sódico ( 3.3 . ) . Agitar vigorosamente para evitar la formación de aglomerados . Sacudir enseguida varias veces y dejar reposar hasta el día siguiente . Si el líquido sobrenadante no está absolutamente límpido , añadir algunas gotas de agua . Filtrar la capa de éter-cloroformo . Recoger 50 ml de filtrado en un matraz aforado de 50 ml de y transvasarlos cuantitativamente con ayuda de 50 ml de éter dietílico ( 3.1 ) en una ampolla de decantar de 150 ml . Extraer 3 veces sucesivamente mediante 20 ml de ácido clorhídrico ( 3.4 ) ; dejar decantar y recoger 1 extracto ácido después de cada extracción . Reunir los extractos ácidos en un vaso de 250 ml y eliminar los últimos residuos de éter y de cloroformo calentado ligeramente . Añadir 1 g aproximadamente de cloruro sódico ( 3.5 ) , dejar enfriar y precipitar los alcaloides con la solución de ácido silico-túngstico ( 3.6 ) . Agitar mecánicamente durante treinta minutos .

Dejar reposar durante una noche , filtrar sobre filtro sin cenizas y lavar el precipitado sucesivamente con 2 veces 10 ml y 2 veces 5 ml de ácido clorhídrico ( 3.4 ) .

Colocar el filtro que contiene el precipitado con un crisol de incineración e incinerar a 900 ° C . Dejar refrigerar y pesar .

6 . Cálculo de los resultados

El contenido en alcaloides de la toma de muestras se obtiene multiplicando el peso de las cenizas por el factor 0,2 .

Expresar el resultado en porcentaje de la muestra .

16 . DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD UREASICA DE PRODUCTOS DERIVADOS DE LA SOJA

1 . Objetivo y campo de aplicación

La prueba permite determinar la actividad de ureasa de los productos derivados de la soja y poner de manifiesto la cocción insuficiente de dichos productos .

2 . Principio

La actividad ureásica se determina por la cantidad de nitrógeno amoniacal liberado por 1 g de producto en un minuto , a 30 ° C , a partir de una solución de urea .

3 . Reactivos

3.1 Acido clorhídrico 0,1 N .

3.2 Solución de hidróxido de sodio 0,1 N .

3.3 Solución tampón de fosfatos 0,05 M conteniendo en 100 ml 4,45 g de fosfato disódico ( Na2HPO4 · 2 H2O ) y 3,40 g de fosfato monopotásico ( KH2PO4 ) .

3.4 Solución tamponada de urea , preparada recientemente , conteniendo 30,0 g de urea por 1 000 ml de solución tampón ( 3.3 ) ; pH 6,9-7,0 .

4 . Equipo

4.1 Aparato de titulación potenciométrica o pH-metro muy sensible ( 0,02 pH ) , con agitador magnético .

4.2 Baño de agua provisto de un termostato regulado a 30 ° C exactamente .

4.3 Tubos de ensayo : 150 por 18 mm , con tapones esmerilados .

5 . Método operatorio

Triturar ( en un molino de café , por ejemplo ) 10 g aproximadamente de la muestra , de forma que pase a través de un tamiz de mallas de 0,2 mm . En un tubo de ensayo de tapón esmerilado , pesar , con precisión de 1 mg , 0,2 g de la muestra triturada y añadir 10 ml de la solución tamponada de urea ( 3.4 ) . Tapar inmediatamente y agitar vigorosamente . Llevar el tubo al baño de agua regulado a 30 ° C exactamente y dejarlo allí treinta minutos exáctamente . Inmediatamente después , añadir 10 ml de ácido clorhídrico 0,1 N ( 3.1 ) , refrigerar rápidamente a 20 ° C y transvasar cuantitativamente el contenido del tubo a un recipiente de titulación , limpiando dos veces con 5 ml de agua . Titular inmediatamente y con rapidez por medio de la solución de hidróxido de sodio 0,1 N ( 3.2 ) por electrometría con la ayuda de un electrodo de cristal , hasta pH 4,7 .

Efectuar una prueba en blanco , operando tal como se indica .

Introducir rapida y sucesivamente en un tubo de ensayo de tapón esmerilado una toma de muestras de 0,2 g , pesada con precisión de 1 mg , 10 ml de ácido clorhídrico 0,1 N ( 3.1 ) y 10 ml de solución tamponada de urea ( 3.4 ) . Refrigerar inmediatamente el tubo en agua helada y dejarlo allí treinta minutos . Transvasar a continuación , en las condiciones indicadas anteriormente , el contenido del tubo al recipiente de titulación por medio de la solución de hidróxido de sodio 0,1 N ( 3.2 ) hasta pH 4,7 .

6 . Cálculo de los resultados

La actividad ureásica viene dada por la fórmula :

mg N/g min. a 30 ° C = 1,4 ( b - a ) /30 · E

donde

a = ml de solución de hidróxido de sodio 0,1 N consumidos por la toma de muestras .

b = ml de solución de hidróxido de sodio 0,1 N consumidos por la toma de muestras en blanco .

E = toma de muestras en g .

7 . Observaciones

7.1 . El método es conveniente para una actividad ureásica que pueda alcanzar 1 mg de N/g min a 30 ° C . Para productos más activos , la toma de muestras puede reducirse hasta 50 mg .

7.2 . Los productos cuyo contenido en materias grasas brutas sobrepase el 10 % deben haber sido desgrasados en frío previamente .