Artículo 1

Objeto

El presente Reglamento establece medidas para erradicar Synchytrium endobioticum (Schilbersky) Percival y evitar su propagación en el territorio de la Unión.

Artículo 2

Definiciones

A los efectos del presente Reglamento, se entenderá por:

1)	«plaga especificada»: Synchytrium endobioticum (Schilbersky) Percival;

2)	«vegetales especificados»: los vegetales de Solanum tuberosum L., excepto las semillas.

Artículo 3

Prospecciones y pruebas de laboratorio de la plaga especificada

Artículo 4

Designación de lugares de producción como infestados y de vegetales especificados como infectados

1.	Las autoridades competentes designarán un sitio de producción como infestado por la plaga especificada cuando la presencia de la plaga especificada en dicho sitio haya sido oficialmente confirmada por las pruebas mencionadas en el artículo 3, apartado 2.

2.	Los vegetales especificados cultivados en un sitio de producción designado como infestado por la plaga especificada o que hayan estado en contacto con el suelo en el que se haya detectado la plaga especificada deberán ser designados oficialmente como infectados.

Artículo 5

Establecimiento de zonas demarcadas

Artículo 6

Medidas de erradicación

Artículo 7

Variedades de patata resistentes a los patotipos de la plaga especificada

Artículo 8

Notificación de la presencia confirmada de la plaga especificada en una variedad de patata resistente

Artículo 9

Revocación de las medidas

Artículo 10

Entrada en vigor

El presente Reglamento entrará en vigor a los tres días de su publicación en el Diario Oficial de la Unión Europea.

ANEXO I

Métodos de análisis para la detección e identificación de la plaga especificada a que se refiere el artículo 3, apartado 2

1.   Prueba por medio de las esporas

Para la detección e identificación se utilizan esporangios de verano y esporas latentes, que se obtienen del suelo después del tamizado, o directamente del material vegetal.

2.   Métodos de detección:

Para la extracción de esporas de la plaga especificada del suelo, se utilizará uno de los métodos siguientes:

a)	método de tamizado del suelo descrito por Pratt (1976) (1);

b)	método de tamizado del suelo descrito por Van Leeuwen et al. (2005) (2);

c)	técnica de centrifugación zonal para el tratamiento de muestras de alto rendimiento descrita por Wander et al. (2007) (3).

3.   Métodos de identificación

Tras la extracción, las esporas de la plaga especificada se identificarán mediante uno de los métodos siguientes:

a)	identificación morfológica con un microscopio óptico a 100-400 aumentos;

b)	PCR convencional utilizando cebadores basados en Lévesque et al. (2001) (4) y van den Boogert et al. (2005) (5);

c)	PCR en tiempo real utilizando cebadores y sondas conforme a Van Gent-Pelzer et al. (2010) (6);

d)	PCR en tiempo real utilizando cebadores y sondas conforme a Smith et al. (2014) (7).

4.   Viabilidad de las esporas latentes

La determinación de la viabilidad de las esporas latentes puede lograrse mediante un examen microscópico o un bioensayo. La viabilidad de los esporangios puede determinarse mediante un examen microscópico de los esporangios montados en lactofenol o en agua (Przetakiewicz 2015) (8). Los esporangios con contenido granular o protoplasma ligeramente esférico pueden considerarse viables. Aquellos en un estado de plasmólisis permanente o sin contenido aparente se considerarán muertos.

Como alternativa, o en caso de duda, podrá realizarse un bioensayo, tal como se describe en el punto 3 del anexo IV.

5.   Determinación de los patotipos

La determinación de los patotipos requerirá verrugas nuevas.

El inóculo para la prueba se producirá mediante uno de los métodos siguientes:

a)

método de SASA (Science and Advice for Scottish Agriculture), que consta de las dos etapas siguientes: i) producción del inóculo El tejido viejo (pardo) de la verruga deberá descomponerse en unidades más pequeñas y secarse al aire a temperatura ambiente hasta que se vuelva duro. El tejido duro se triturará manual o mecánicamente. El material triturado se tamizará en seco, recogiendo la fracción de 25 a 75 μm, y posteriormente se extraerá utilizando el método de cloroformo de Pratt (1976)1; ii) producción de verrugas nuevas Se rociarán unos 10 mg de esporas latentes extraídas sobre la superficie de 10 ml de agua destilada estéril en una pequeña placa de Petri de plástico y se incubarán en un lugar oscuro a 20 °C hasta su germinación. Los tubérculos de patata con brotes pequeños de entre 1 y 2 mm de longitud se colocarán en cajas de plástico transparentes revestidas de un pañuelo de papel humedecido con los brotes anillados orientados hacia arriba. Los brotes se anillarán con vaselina fundida utilizando una jeringa. El anillo deberá no tener fisuras y tener la suficiente altura como para mantener la suspensión de esporas sin fugas. Los 10 ml de esporas latentes en germinación se diluirán hasta los 20 ml con agua estéril y se introducirán en los anillos utilizando una pipeta o una botella flexible hasta que el brote quede completamente sumergido en la suspensión de esporas. Las cajas de plástico se taparán y se incubarán durante 4 días a 10 °C, transcurridos los cuales se destaparán, el inóculo y los anillos de vaselina se retirarán y las cajas se colocará en un invernadero con condiciones de humedad a una temperatura de entre 15 y 18 °C (16 h de luz);

b)	método de Spiekermann & Kothoff (1924) (9);

c)	método de Potoček et al. (1991) (10);

d)	método de Glynne-Lemmerzahl (Glynne 1925 (11); Lemmerzahl 1930 (12); Noble & Glynne 1970 (13)).

Para la determinación de todos los patotipos que se sabe que son pertinentes para la Unión [1(D1), 2(G1), 6(O1), 18(T1) y 38 (Nevşehir)] se utilizará una prueba de infección diferencial con diversas variedades del vegetal especificado tal como se indica en el cuadro. La prueba de infección se realizará siguiendo el protocolo mencionado en la letra d) (método Glynne-Lemmerzahl).

Sensibilidad selectiva de los cultivares de patata para la determinación de los patotipos de S. endobioticum

Cultivar	Patotipos de S. endobioticum
	1(D1)	2(G1)	6(O1)	18(T1)	38(Nevşehir)
Tomensa/Evora/Deodara	S	S	S	S	S
Irga/Producent	R	S	S	S	S
Talent	R	R*	R*	S	S
Saphir	R	S	R	R	S
Ikar/Gawin/Karolin/Belita	R	R	R	R	R
«S»: sensible «R»: resistente *: Indica una sensibilidad débil de la variedad a S. endobioticum («presencia de superficies de soros no necróticos sin formación de verrugas»).

---

(1)  Pratt M.A. 1976. A wet-sieving and flotation technique for the detection of resting sporangia of Synchytrium endobioticum in soil. Annals of Applied Biology 82: 21-29.

(2)  Van Leeuwen G.C.M., Wander J.G.N., Lamers J., Meffert J.P., van den Boogert P.H.J.F., Baayen R.P. 2005. Direct examination of soil for sporangia of Synchytrium endobioticum using chloroform, calcium chloride and zinc sulphate as extraction reagents. EPPO Bulletin 35: 25-31.

(3)  Wander J.G.N., van den Berg W., van den Boogert P.H.J.F., Lamers J.G., van Leeuwen G.C.M., Hendrickx G., Bonants P. 2007. A novel technique using the Hendrickx centrifuge for extracting winter sporangia of Synchytrium endobioticum from soil. European Journal of Plant Pathology 119: 165-174.

(4)  Lévesque C.A., de Jong S.N., Ward L.J. & de Boer S.H. (2001) Molecular phylogeny and detection of Synchytrium endobioticum, the causal agent of potato wart. Canadian Journal of Plant Pathology 23: 200-201.

(5)  Van den Boogert P.H.J.F., van Gent-Pelzer M.P.E., Bonants P.J.M., de Boer S.H., Wander J.G.N., Lévesque C.A., van Leeuwen G.C.M., Baayen R.P. 2005. Development of PCR-based detection methods for the quarantine phytopathogen Synchytrium endobioticum, causal agent of potato wart disease. European Journal of Plant Pathology 113: 47-57.

(6)  Van Gent-Pelzer M.P.E., Krijger M., Bonants P.J.M. 2010. Improved real-time PCR assay for the detection of the quarantine potato pathogen, Synchytrium endobioticum, in zonal centrifuge extracts from soil and in plants. European Journal of Plant Pathology 126: 129-133.

(7)  Smith D.S., Rocheleau H., Chapados J.T., Abbott C., Ribero S., Redhead SA, Lévesque C.A., De Boer S.H. 2014. Phylogeny of the genus Synchytrium and the development of TaqMan PCR assay for sensitive detection of Synchytrium endobioticum in soil. Phytopathology 104: 422-432.

(8)  Przetakiewicz, J. 2015. The Viability of Winter Sporangia of Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. From Poland. American Journal of Potato Research 92: 704-708.

(9)  Spieckermann A., Kothoff P. 1924. Testing potatoes for wart resistance. Deutsche Landwirtschaftliche Presse 51: 114-115.

(10)  Potoček J., Krajíčková K., Klabzubová S., Krejcar Z., Hnízdil M., Novák F., Perlová V. 1991. Identification of new Synchytrium endobioticum (Schilb.) Perc. pathotypes in Czech Republic. Ochrana Rostlin 27: 191-205.

(11)  Glynne M.D. 1925. Infection experiments with wart disease of potatoes. Synchytrium endobioticum. Annals of Applied Biology 12: 34-60.

(12)  Lemmerzahl J. 1930. A new simplified method for inoculation of potato cultivars to test for wart resistance. Züchter 2: 288-297.

(13)  Noble M., Glynne M.D. 1970. Wart disease of potatoes. FAO Plant Protection Bulletin 18: 125-135.

ANEXO II

Modelo de prospecciones a que se refiere el artículo 3

Modelo para la presentación de los resultados de las prospecciones relativas a la sarna verrugosa de la cosecha de patata del año anterior al año de notificación.

Utilice este cuadro únicamente para los resultados de prospecciones de patatas cosechadas en su país.

Estado miembro o zona

Categoría de patatas

Superficie total de cultivo(ha)

Inspección visual de los tubérculos

Pruebas de laboratorio

Otros datos

Número de muestras

Número de lotes

Tamaño de la muestra

Período de muestreo

N.o de sospechosos

Número de muestras

Tamaño de las muestras

Tipo de prueba

N.o de positivos

Muestras

Lotes

Muestras

Lotes

Patatas destinadas a la producción de tubérculos para la plantación

De consumo y destinadas a la transformación

Otras  (1) (especifíquense)

---

(1)  En el caso de los países con brotes, podría ser pertinente, por ejemplo, indicar por separado de las prospecciones generales la cantidad de muestras utilizadas para investigar los brotes o hacer un seguimiento de ellos.

ANEXO III

Protocolo para evaluar la resistencia de una variedad a que se refiere el artículo 7, apartado 2

El protocolo para evaluar la resistencia de una variedad incluirá los pasos siguientes.

1)	Se someterán a una prueba un mínimo de 40 tubérculos o fragmentos de patata con un ojo por variedad del vegetal especificado. Se dividirán en dos grupos (réplicas).

2)	La prueba tendrá una duración general de dos años. Solo en caso de que una variedad demuestre ser extremadamente sensible a un patotipo de la plaga especificada, la duración de la prueba podrá reducirse a un año.

3)	Antes de que comience una temporada de pruebas, se comprobará la pureza del inóculo utilizando los métodos descritos en el anexo I.

4)	En la prueba se incluirá siempre un control positivo en forma de una variedad del vegetal especificado que sea extremadamente sensible al patotipo de la plaga especificada que se vaya a analizar.

5)

Se utilizará uno de los métodos de pruebas siguientes: i) el método Glynne-Lemmerzahl (Glynne 1925, Lemmerzahl 1930, Noble & Glynne 1970); ii) el método Spieckermann (Spieckermann & Kothoff 1924), o iii) el método SASA (Science and Advice for Scottish Agriculture), que consta de todas las etapas siguientes: — preparación de los tubérculos: Los tubérculos se retirarán del almacén frigorífico unos diez días antes de la inoculación prevista, se lavarán con cuidado, se secarán y se almacenarán en un lugar oscuro a temperatura ambiente para inducir la germinación. En cada inoculación se incluirá una variedad muy sensible («Morene» o una variedad de una sensibilidad equiparable) para que sirva de control positivo; — germinación de las esporas latentes: Las condiciones para inducir la germinación de las esporas latentes se generarán 21 días antes de la inoculación. Se rociarán unos 10 mg de esporas extraídas sobre la superficie de 10 ml de agua destilada estéril en pequeñas placas de Petri de plástico y se incubarán en la oscuridad a 20 °C hasta su germinación. El contenido de cada placa de Petri se diluirá con otros 10 ml de agua destilada estéril para la inoculación; — inoculación e incubación de los brotes: Cuando los brotes alcancen 1 mm de longitud, se anillarán con vaselina fundida. El anillo de vaselina deberá no tener fisuras para mantener la suspensión de las esporas sin fugas y tener la suficiente altura como para que la suspensión cubra el brote. En cada tubérculo se anillará un único brote o una única agrupación de brotes. Los tubérculos se colocarán en cajas de plástico revestidas de un pañuelo de papel humedecido con los brotes anillados orientados hacia arriba. Los anillos de vaselina se llenarán con la suspensión de esporas utilizando una pipeta o una botella flexible hasta que el brote quede totalmente sumergido. Las cajas de plástico se taparán y se incubarán durante 4 días a 10 °C en un lugar oscuro, transcurridos los cuales los anillos de vaselina se retirarán y las cajas se colocarán destapadas en un invernadero a 15-18 °C en condiciones de humedad inducidas periódicamente (3 veces al día durante 30 minutos). En los casos en que no se haya producido la infección, por ejemplo porque el brote se haya podrido o no se haya desarrollado, el tubérculo podrá someterse a una nueva prueba utilizando otro brote; — evaluación: Los brotes se examinarán para detectar la infección 28 días después de la inoculación, utilizando un microscopio estereoscópico a 10-15 aumentos y un microscopio óptico. Deberán observarse reacciones con una puntuación de 4 o 5, como se indica en el cuadro, en al menos el 80 % de los tubérculos utilizados como control positivo. Al menos un tubérculo deberá obtener una puntuación de 5.

6)	Todos los tubérculos se evaluarán y recibirán una puntuación del baremo de resistencia del 1 a 5, como se indica en el cuadro.

7)

Cada variedad que haya sido sometida a la prueba se clasificará en un grupo de resistencia («muy resistente», «resistente», «ligeramente sensible» o «extremadamente sensible»), según el margen de puntuaciones observadas dentro de la población respectiva de tubérculos individuales o fragmentos de patata con un ojo analizados: i) se considerará que una variedad es «muy resistente» si todos los tubérculos de todas las réplicas tienen una puntuación de 1; ii) se considerará que una variedad es «resistente» si todos los tubérculos de todas las réplicas tienen una puntuación comprendida entre 1 y 3; iii) se considerará que una variedad es «ligeramente sensible» si uno o más tubérculos obtienen una puntuación de 4 (si solo un tubérculo obtiene una puntuación de 4, podrá repetirse la prueba para excluir la impureza en el lote de la variedad); iv) se considerará que una variedad es «extremadamente sensible» si al menos un tubérculo de una réplica obtiene una puntuación de 5. Baremo de puntuación estándar para las poblaciones de patatas sometidas a pruebas Puntuación estándar Grupo de resistencia Descripción de la resistencia Descripción 1 R1 Extremadamente resistente Necrosis de defensa temprana; no hay formación de soros visible. 2 R1 Resistente Necrosis de defensa tardía; formación de soros parcialmente visible, soros inmaduros o necróticos antes de la maduración. 3 R2 Poco resistente Necrosis de defensa muy tardía; soros individuales maduros o superficie de soros maduros desarrollados, pero totalmente rodeados de necrosis; hasta cinco soros de verano no necróticos admitidos, necrosis clara en otras zonas del mismo trozo de tubérculo. No hay formación de verrugas ni esporas latentes. Para decidir entre los grupos 3 y 4 puede ser necesario preparar portaobjetos con láminas finas de tejido infectado: si no hay esporas latentes, la puntuación será de 3. 4 S1 Ligeramente sensible Infecciones dispersas; soros o superficies de soros no necróticos, muy pocos; la necrosis tardía puede estar presente en otros focos de infección en el brote; el brote puede haber sufrido una ligera deformación (aumento del grosor). Hay esporangios latentes (de invierno). Para decidir entre los grupos 3 y 4 puede ser necesario preparar portaobjetos con láminas finas de tejido infectado: si hay esporas latentes, la puntuación será de 4. 5 S2 Extremadamente sensible Superficies densas de infección, numerosos soros o superficies de soros no necróticos maduros, superficies con focos densos de infección no necrótica, formación de verrugas predominante.

ANEXO IV

Condiciones para la revocación de las medidas a que se refiere el artículo 9

1.   Condiciones para la revocación de las medidas

1.1.

Transcurrido un mínimo de 50 años desde la última detección de la plaga especificada, si existe un registro ininterrumpido de los cultivos de la zona infestada que muestre que se han cumplido las disposiciones del artículo 6, apartados 2 y 3, durante todo ese tiempo y que la zona infestada no se ha utilizado como pasto permanente.

1.2.

Transcurrido un mínimo de 20 años desde la última detección de la plaga especificada, si existe un registro ininterrumpido de cultivos que muestre que se han cumplido las disposiciones del artículo 6, apartados 2 y 3, durante todo ese tiempo y que la zona infestada no se ha utilizado como pasto permanente; y — no se han detectado signos de infección por la plaga especificada en dos bioensayos, como se describe en el punto 3, con cultivares de patata sensibles; o — no se han descubierto signos de infección por la plaga especificada en un bioensayo, como se describe en el punto 3, con cultivares de patata sensibles y no se han encontrado esporas latentes viables durante un examen directo por microscopio del suelo de la zona infestada tras una extracción de esporas con uno de los métodos establecidos en el punto 2 del anexo I. El régimen que se utilizará para obtener el suelo para el ensayo incluirá todas las etapas siguientes: — la zona infestada se dividirá en unidades de 0,33 ha; — se tomarán 60 submuestras de cada unidad de una profundidad de hasta 20 cm, distribuidas uniformemente por toda la zona o acumuladas según los focos de infestación conocidos; — las submuestras se mezclarán a fondo para obtener 3 muestras por ha.

2.   Revocación parcial de las medidas

Transcurrido un mínimo de 10 años desde la última detección de la plaga especificada en áreas de la zona infestada, podrá considerarse la revocación parcial de las medidas establecidas en el artículo 6 para estas zonas cuando exista un registro ininterrumpido de cultivos que muestre que se han cumplido las disposiciones del artículo 6, apartados 2 y 3, durante todo ese tiempo y que la zona infestada no se ha utilizado como pasto permanente; y:

a)	no se hayan detectado signos de infección por la plaga especificada en dos bioensayos, como se describe en el punto 3, con cultivares de patata sensibles, o

b)

no se hayan descubierto signos de infección por la plaga especificada en un bioensayo (como se describe en el punto 3) con cultivares de patata sensibles y se hayan encontrado menos de 5 esporas latentes viables por gramo de suelo durante un examen directo por microscopio del suelo de la zona infestada tras una extracción de esporas con uno de los métodos establecidos en el punto 2 del anexo I.

El régimen que se utilizará para obtener el suelo para el ensayo incluirá todas las etapas siguientes:

—	la zona infestada se dividirá en unidades de 0,33 ha;

—	se tomarán 60 submuestras de cada unidad de una profundidad de hasta 20 cm, distribuidas uniformemente por toda la zona o acumuladas según los focos de infestación conocidos;

—	las submuestras se mezclarán a fondo para obtener 3 muestras por ha.

Si no se cumplen estas condiciones, la revocación parcial de las medidas podrá reconsiderarse tras un período de espera mínimo de 2 años. A la hora de determinar la duración de dicho período de espera, los Estados miembros tendrán en cuenta el nivel de infección y/o el número de esporas viables detectadas.

3.   Bioensayos a efectos de la revocación de las medidas

Se incubarán varios tubérculos de los vegetales especificados en macetas junto con al menos 5 litros de suelo en condiciones de temperatura, humedad y luz favorables al crecimiento de la patata. Se utilizará un cultivar altamente sensible a todos los patotipos (como Deodara, Evora, Morene, Tomensa, Maritiema o Arran Chief).

Los vegetales de patata en crecimiento se cortarán cuando alcancen una altura de aproximadamente 60 cm. Al cabo de unos 100 días se examinará la presencia de verrugas en los tubérculos de nueva formación.

En la prueba siempre deberán incluirse controles negativos del suelo libre de la plaga especificada y controles positivos del suelo infestado. La prueba se considerará válida si se producen verrugas en tubérculos del control positivo y no se producen verrugas en tubérculos del control negativo. Se registrarán las condiciones de temperatura y humedad del invernadero. Se examinarán las verrugas producidas al microscopio para detectar la presencia de esporangios de verano y/o esporas latentes.

La prueba en su totalidad se llevará a cabo en condiciones que impidan una mayor propagación de la plaga especificada.