«I»

:

για διαμετακόμιση μέσω του εδάφους τρίτης χώρας ζώων που προορίζονται για άμεση σφαγή ή ζώντων βοοειδών για πάχυνση, τα οποία έχουν αποσταλεί από ένα κράτος μέλος και προορίζονται για ένα άλλο κράτος μέλος σε φορτηγά τα οποία έχουν σφραγισθεί με σφραγίδα που φέρει αριθμό σειράς.

Ο αριθμός της σφραγίδας πρέπει να αναγράφεται στο υγειονομικό πιστοποιητικό που εκδίδεται σύμφωνα με το υπόδειγμα το οποίο ορίζεται στο Παράρτημα ΣΤ της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ (6) για τα ζώντα βοοειδή τα οποία προορίζονται για σφαγή και πάχυνση και σύμφωνα με το Υπόδειγμα Ι του Παραρτήματος Ε της οδηγίας 91/68/ΕΟΚ (7) για τα αιγοπρόβατα που προορίζονται για σφαγή.

Επιπλέον, η σφραγίδα θα πρέπει να είναι άθικτη κατά την άφιξη στον καθορισμένο σταθμό συνοριακού ελέγχου εισόδου στην Ένωση και ο αριθμός σφραγίδας να καταγραφεί στο ενοποιημένο μηχανογραφικό κτηνιατρικό σύστημα TRACES της Ένωσης.

Το πιστοποιητικό πρέπει να σφραγισθεί στο σημείο εξόδου της Ένωσης από τις αρμόδιες κτηνιατρικές αρχές, πριν διαμετακομιστεί από μία ή περισσότερες τρίτες χώρες, με την ακόλουθη διατύπωση «ΜΟΝΟ ΓΙΑ ΔΙΑΜΕΤΑΚΟΜΙΣΗ ΜΕΤΑΞΥ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΩΝ ΣΗΜΕΙΩΝ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΑΪΚΗΣ ΕΝΩΣΗΣ ΜΕΣΩ ΤΗΣ ΠΡΩΗΝ ΓΙΟΥΚΟΣΛΑΒΙΚΗΣ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑΣ ΤΗΣ ΜΑΚΕΔΟΝΙΑΣ/ΜΑΥΡΟΒΟΥΝΙΟΥ/ΣΕΡΒΙΑΣ (8)  (9)».

Τα βοοειδή που προορίζονται για πάχυνση πρέπει να μεταφέρονται απευθείας στην εκμετάλλευση προορισμού που έχει οριστεί από την αρμόδια κτηνιατρική αρχή του τόπου προορισμού. Απαγορεύεται η μετακίνηση αυτών των ζώων από την εν λόγω εκμετάλλευση παρά μόνον για άμεση σφαγή.

«II»

:

περιοχή αναγνωρισμένη ως επίσημα απαλλαγμένη από φυματίωση για σκοπούς εξαγωγής προς την Ένωση ζώων πιστοποιημένων σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού BOV-X.

«III»

:

περιοχή αναγνωρισμένη ως επίσημα απαλλαγμένη από βρουκέλλωση για σκοπούς εξαγωγής προς την Ένωση ζώων πιστοποιημένων σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού BOV-X.

«IVa»

:

περιοχή αναγνωρισμένη ως επίσημα απαλλαγμένη από ενζωοτική λεύκωση των βοοειδών (EBL) για σκοπούς εξαγωγής προς την Ένωση ζώων πιστοποιημένων σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού BOV-X.

«IVβ»

:

περιοχή με εγκεκριμένες εκμεταλλεύσεις που έχουν αναγνωρισθεί ως επίσημα απαλλαγμένες από ενζωοτική λεύκωση των βοοειδών (EBL) για σκοπούς εξαγωγής προς την Ένωση ζώων πιστοποιημένων σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού BOV-X.

«V»

:

περιοχή αναγνωρισμένη ως επίσημα απαλλαγμένη από βρουκέλλωση για σκοπούς εξαγωγής προς την Ένωση ζώων πιστοποιημένων σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού OVI-X.

«VI»

:

Γεωγραφικοί περιορισμοί:

«VII»

:

περιοχή αναγνωρισμένη ως επίσημα απαλλαγμένη από φυματίωση για σκοπούς εξαγωγής προς την Ένωση ζώων πιστοποιημένων σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού RUM.

«VIII»

:

περιοχή αναγνωρισμένη ως επίσημα απαλλαγμένη από βρουκέλλωση για σκοπούς εξαγωγής προς την Ένωση ζώων πιστοποιημένων σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού RUM.

«IX»

:

περιοχή αναγνωρισμένη ως επίσημα απαλλαγμένη από τη νόσο του Aujeszky για σκοπούς εξαγωγής προς την Ένωση ζώων πιστοποιημένων σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού POR-X.

«BOV-X»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για κατοικίδια βοοειδή (συμπεριλαμβανομένων των ειδών Bubalus και Bison και των διασταυρώσεών τους) που προορίζονται για αναπαραγωγή και/ή παραγωγή κρέατος μετά την εισαγωγή.

«BOV-Y»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για κατοικίδια βοοειδή (συμπεριλαμβανομένων των ειδών Bubalus και Bison και των διασταυρώσεών τους) που προορίζονται για άμεση σφαγή μετά την εισαγωγή.

«OVI-X»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για κατοικίδια πρόβατα (Ovis aries) και κατοικίδιες αίγες (Capra hircus) που προορίζονται για αναπαραγωγή και/ή παραγωγή κρέατος μετά την εισαγωγή.

«OVI-Y»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για κατοικίδια πρόβατα (Ovis aries) και κατοικίδιες αίγες (Capra hircus) που προορίζονται για άμεση σφαγή μετά την εισαγωγή.

«POR-X»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για κατοικίδιους χοίρους (Sus scrofa) που προορίζονται για αναπαραγωγή και/ή παραγωγή κρέατος μετά την εισαγωγή.

«POR-Y»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για κατοικίδιους χοίρους (Sus scrofa) που προορίζονται για άμεση σφαγή μετά την εισαγωγή.

«RUM»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για ζώα που ανήκουν στην τάξη Αρτιοδάκτυλα (εκτός από τα βοοειδή [συμπεριλαμβανομένων των ειδών Bubalus και Bison και των διασταυρώσεών τους], Ovis aries, Capra hircus, Suidae και Tayassuidae), και στις οικογένειες Rhinocerotidae και Elephantidae

«SUI»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για μη κατοικίδια ζώα των οικογενειών Suidae, Tayassuidae και Tapiridae.

«CAM»

:

Υπόδειγμα ειδικής βεβαίωσης για ζώα που εισάγονται από το Σαιν Πιέρ και Μικελόν σύμφωνα με τους όρους που προβλέπονται στο Μέρος 7 του παραρτήματος Ι.

«A»

:

εγγυήσεις σχετικά με τη διενέργεια δοκιμών καταρροϊκού πυρετού του προβάτου και επιζωοτικής αιμορραγικής νόσου σε ζώα πιστοποιημένα σύμφωνα με το υπόδειγμα του πιστοποιητικού BOV-X (σημείο Ι12.8 Β), OVI-X (σημείο II.2.6 Δ) και RUM (σημείο II.2.6).

«B»

:

εγγυήσεις σχετικά με τη διενέργεια δοκιμών φυσαλιδώδους νόσου των χοίρων και κλασικής πανώλης των χοίρων σε ζώα πιστοποιημένα σύμφωνα με το υπόδειγμα του πιστοποιητικού POR-X (σημείο II.2.4 B) και SUI (σημείο II.2.4 B).

«Γ»

:

εγγυήσεις σχετικά με τη διενέργεια δοκιμών βρουκέλλωσης σε ζώα πιστοποιημένα σύμφωνα με το υπόδειγμα του πιστοποιητικού POR-X (σημείο II.2.4 Γ) και SUI (σημείο II.2.4 Γ).

I.

Να τελούν υπό τον έλεγχο επίσημου κτηνιάτρου.

II.

Πρέπει να βρίσκονται στο κέντρο περιοχής διαμέτρου τουλάχιστον 20 χιλιομέτρων στην οποία, σύμφωνα με τα επίσημα πορίσματα, δεν υπήρξε κρούσμα αφθώδους πυρετού για διάστημα τουλάχιστον 30 ημερών πριν να χρησιμοποιηθούν ως εγκεκριμένα κέντρα συγκέντρωσης.

III.

Πρέπει, πριν από κάθε χρησιμοποίησή τους ως εγκεκριμένα κέντρα συγκέντρωσης, να καθαρίζονται και απολυμαίνονται με επίσημα εγκεκριμένο απολυμαντικό στη χώρα εξαγωγής ως αποτελεσματικό για την καταπολέμηση του αφθώδους πυρετού.

IV.

Να διαθέτουν, λαμβανομένης υπόψη της χωρητικότητάς τους σε ζώα:

V.

Κατά τη λειτουργία τους, πρέπει να διαθέτουν επαρκή αριθμό κτηνιάτρων για να εκτελούν τα καθήκοντα που ορίζονται στο Μέρος 5.

VI.

Πρέπει να δέχονται μόνο ζώα που έχουν ταυτοποιηθεί ατομικά, ώστε να παρέχονται εγγυήσεις για την ανιχνευσιμότητα της προέλευσής τους. Προς τούτο, ο ιδιοκτήτης ή ο υπεύθυνος του κέντρου οφείλει να εξασφαλίζει τη σωστή ταυτοποίηση των ζώων κατά την είσοδό τους στο κέντρο και ότι συνοδεύονται από τα υγειονομικά έγγραφα ή πιστοποιητικά που αντιστοιχούν στα συγκεκριμένα είδη και κατηγορίες ζώων.

Επιπλέον, ο ιδιοκτήτης ή ο αρμόδιος του κέντρου συγκέντρωσης πρέπει να καταγράφει σε μητρώο ή σε βάση δεδομένων και να διατηρεί επί τουλάχιστον τρία έτη το όνομα του ιδιοκτήτη, την καταγωγή των ζώων, τις ημερομηνίες εισόδου και εξόδου, τον αριθμό ταυτοποίησης των ζώων ή τον αριθμό καταχώρησης της αγέλης καταγωγής και την εκμετάλλευση προορισμού καθώς και τον αριθμό μητρώου του μεταφορέα και τον αριθμό κυκλοφορίας του φορτηγού που παραδίδει ή παραλαμβάνει τα ζώα από το κέντρο συγκέντρωσης.

VII.

Όλα τα ζώα που διέρχονται από τα κέντρα πρέπει να πληρούν τους υγειονομικούς όρους εισαγωγής της συγκεκριμένης κατηγορίας ζώων στην Ένωση.

VIII.

Τα ζώα που προορίζονται να εισαχθούν στην Ένωση και διέρχονται από κέντρα συγκέντρωσης πρέπει, εντός έξι ημερών από την άφιξή τους στο κέντρο, να φορτώνονται και να αποστέλλονται άμεσα στα σύνορα της χώρας εξαγωγής:

IX.

Όταν οι όροι εξαγωγής των ζώων προς την Ένωση απαιτούν τη διενέργεια δοκιμής εντός συγκεκριμένης περιόδου πριν από τη φόρτωση, η εν λόγω χρονική περίοδος περιλαμβάνει το διάστημα της συγκέντρωσης, έως έξι ημέρες, μετά την άφιξη των ζώων στο εγκεκριμένο κέντρο.

X.

Η χώρα εξαγωγής πρέπει να ορίζει τα κέντρα που είναι εγκεκριμένα για ζώα που προορίζονται για αναπαραγωγή και παραγωγή και εκείνα που είναι εγκεκριμένα για ζώα που προορίζονται για άμεση σφαγή και κοινοποιεί στην Επιτροπή και τις αρμόδιες κεντρικές αρχές των κρατών μελών την επωνυμία και τη διεύθυνση των εγκαταστάσεων αυτών και να μεριμνά για την τακτική επικαιροποίηση αυτών των στοιχείων.

XI.

Η χώρα εξαγωγής καθορίζει τη διαδικασία επίσημης επιθεώρησης των εγκεκριμένων κέντρων συγκέντρωσης και διασφαλίζει την υλοποίηση της εν λόγω επιθεώρησης.

XII.

Τα εγκεκριμένα κέντρα συγκέντρωσης πρέπει να επιθεωρούνται τακτικά από την αρμόδια αρχή της τρίτης χώρας, έτσι ώστε να ελέγχεται αν ικανοποιούνται οι απαιτήσεις έγκρισης που ορίζονται στα σημεία Ι έως ΧΙ.

Εάν κατά τις επιθεωρήσεις αυτές διαπιστωθεί ότι δεν πληρούνται πλέον αυτοί οι όροι, αναστέλλεται η έγκριση της λειτουργίας του κέντρου. Η έγκριση πρέπει να χορηγείται εκ νέου μόνο αν η αρμόδια αρχή της τρίτης χώρας βεβαιωθεί ότι το κέντρο συμμορφώνεται πλήρως με τους όρους που ορίζονται στα σημεία Ι έως ΧΙ.

1.

Ενδεδειγμένα τρυβλία μικροτιτλοδότησης ELISA.

2.

Αντιγόνο: υπό μορφή συμπυκνώματος εκχυλίσματος κυττάρων, παρασκευαζόμενο όπως περιγράφεται κατωτέρω, και διατηρημένο στους –20 °C ή στους –70 °C.

3.

Παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα: ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών ιόντων (PBS), που περιέχει αρνητικό ορό BTV ενήλικου βοοειδούς σε αναλογία 0,3 % και Tween-20 σε αναλογία 0,1 % (ο/ο) (υπό μορφή σιροπίου του πολυοξυαιθυλενοσορβιτόνιου του μονολαυρικού οξέος) σε PBS.

4.

Μονοκλωνικό αντίσωμα: 3-17-A3 (υπό μορφή υπερκειμένου ιστοκαλλιέργειας υβριδώματος) κατά της ομάδας ειδικού πολυπεπτιδίου VP7, διατηρημένο στους –20 °C ή λυοφιλιμένο, αραιωμένο κατά 1/100 με παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα πριν από τη χρήση.

5.

Συζευκτικό: αντιγλοβουλίνη ποντικού από κόνικλο (απορροφηθείσα και εκχυλισθείσα) συνεζευγμένη με υπεροξειδάση αγριοραπανιού και διατηρούμενη στο σκοτάδι στους 4 °C.

6.

Υπόστρωμα και χρωμογόνο: Ορθοφαινυλενοδιαμίνης (χρωμογόνο OPD) σε τελική συγκέντρωση 0,4mg/ml σε αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό. Ακριβώς πριν από τη χρήση, προστίθεται υπεροξείδιο του υδρογόνου (υπόστρωμα 30 % β/ο) σε αναλογία 0,05 % ο/ο (5μl H2 O2 ανά 10ml OPD). (Να χειρίζεστε προσεκτικά το OPD - Να φορούνται πλαστικά γάντια - πιθανό μεταλλαξιογόνο).

7.

Ένα γραμμομόριο θειικού οξέος: 26,6 ml οξέος προστίθενται σε 473,4 ml απεσταγμένου νερού. (Υπενθύμιση: πάντα πρέπει να προστίθεται οξύ σε νερό, ποτέ νερό σε οξύ).

8.

Περιστροφικά παλινδρομούμενος αναδευτήρας.

9.

Τρυβλίο ανάγνωσης για Elisa (η δοκιμή μπορεί να αναγνωριστεί οπτικά).

Μάρτυρας συζευτικού (Cc)

:

οι στήλες 1A και 1B συνιστούν τον μάρτυρα αναφοράς που αποτελείται από αντιγόνο BTV και συζευτικό. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να ουδετεροποιήσει το τρυβλίο ανάγνωσης ELISA.

Έλεγχος Mab (Cm)

:

οι στήλες 1 και 2, γραμμές Ζ και Η, είναι ο έλεγχος του μονοκλωνικού αντισώματος και περιέχουν αντιγόνο BTV, μονοκλωνικό αντίσωμα και συζευτικό. Οι στήλες αυτές αντοπροσωπεύουν το μέγιστο χρώμα. Ο μέσος όρος των τιμών οπτικής πυκνότητας από τον έλεγχο αυτό αποτελεί 0 % της τιμής αναστολής.

Θετικός έλεγχος (C++, C+)

:

οι στήλες 1 και 2, γραμμές Γ-Δ-Ε-ΣΤ περιέχουν αντιγόνο BTV, ισχυρό και ασθενή θετικό αντιορό BTV αντίστοιχα, Mab και συζευτικό.

Αρνητικος έλεγχος (C-)

:

οι στήλες 2Α και 2Β είναι οι αρνητικοί έλεγχοι που περιέχουν αντιγόνο BTV, αρνητικό αντιορό BTV, Mab και συζευκτικό.

Δοκιμαστικός ορός

:

Για ορολογικές μελέτες μεγάλης κλίμακας και γρήγορο διαχωρισμό, ο ορός θα μπορούσε να εξετασθεί σε μία μόνον αραίωση 1/5 (προσάρτημα 1). Εναλλακτικά, μπορούν να εξετασθούν 10 οροί σε λόγους αραίωσης από 1/5 έως 1/640 (προσάρτημα 2). Αυτό θα δώσει κάποια ένδειξη του τίτλου του αντισώματος στο δοκιμαστικό ορό.

1.

Αραιώνεται αντιγόνο BTV σε προτιτλοδοτημένη συγκέντρωση σε PBS, υπερηχείται σύντομα για να διασπαρούν συσπειρωμένα σωματίδια ιού (εάν δεν υπάρχει υπερηχητής, γίνεται ζωηρός σιφωνισμός) και προστίθενται 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου ELISA. Οι πλευρές του τρυβλίου κτυπούνται ελαφρά για να διασκορπιστεί το αντιγόνο.

2.

Επώαση στους 37 °C επί 60 λεπτά πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. Τα τρυβλία πλένονται τρεις φορές υπερχειλίζοντας και αδειάζοντας τις κοιλότητες με μη αποστειρωμένο PBS και αποστύπτονται σε απορροφητικό χαρτί.

3.

Κοιλότητες ελέγχου: Προστίθενται 100 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος σε κοιλότητες Cc. Προστίθενται 50 μl ορού θετικού και αρνητικού ελέγχου, σε αραίωση 1/5 (10 μl ορού +40 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος), στις αντίστοιχες κοιλότητες C-, C+ και C++. Προστίθενται 50 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος σε κοιλότητες ελέγχου Mab.

Μέθοδος δοκιμής της κηλίδας: Σε διπλή σειρά κοιλοτήτων των στηλών 3 έως 12, προστίθενται 50 μl από κάθε ορό δοκιμής αραιωμένο 1 προς 5 με παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα (10 μl ορού +40 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος),

ή

Μέθοδος τιτλοδότησης του ορού: Από κάθε δείγμα δοκιμής παρασκευάζεται σειρά αραιώσεων στο διπλάσιο (1 προς 5 έως 1 προς 640) με παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα, μέσα σε οκτώ κοιλότητες χωριστών στηλών 3 έως 12.

4.

Αμέσως μετά την προσθήκη του δοκιμαστικού ορού, αραιώνεται 1:100 Mab σε παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα και προστίθενται 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου εκτός από το μάρτυρα αναφοράς.

5.

Επώαση στους 37 °C επί 60 λεπτά πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. Έκπλυση τρεις φορές με PBS και απόστυψη.

6.

Αραίωση συμπυκνώματος αντιποντικού από κόνικλο σε 1/5000 σε ρυθμιστικό διάλυμα παρεμπόδισης και προσθήκη 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου.

7.

Επώαση στους 37 °C επί 60 λεπτά πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα. Έκπλυση τρεις φορές με PBS και απόστυψη.

8.

Το OPD αποψύχεται και αμέσως πριν από τη χρήση προστίθενται 5 μl 30 % υπεροξειδίου του υδρογόνου σε κάθε 10 ml OPD. Προστίθενται 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου. Αφήνεται να αναπτυχθεί το χρώμα επί 10 περίπου λεπτά και η αντίδραση διακόπτεται με ένα γραμμομόριο θειικού οξέος (50 μl ανά κοιλότητα). Το χρώμα πρέπει να αναπτυχθεί στις κοιλότητες ελέγχου Mab και σε αυτές τις κοιλότητες που περιέχουν ορό χωρίς κανένα αντίσωμα του BTV.

9.

Εξετάζονται τα τρυβλία και μετρούνται τα αποτελέσματα είτε οπτικά είτε χρησιμοποιώντας φασματοφωτομετρικό αναγνωστήρα.

1.

Εκπλύονται 40-60 σειρές συνενωμένων κυττάρων ΒΗΚ-21 τρεις φορές με μέσο Eagle ελεύθερο ορού και μολύνονται με ορότυπο 1 του ιού της κυανής γλώσσας με μέσο Eagle ελεύθερο ορού.

2.

Επωάζονται στους 37 °C και εξετάζονται καθημερινά για κυτοπαθολογικό σύμπτωμα (ΚΠΣ).

3.

Όταν το ΚΠΣ έχει φανεί στο 90 μέχρι 100 % της κυτταρικής στρώσης κάθε σειράς, ο ιός συλλέγεται με δόνηση κάθε ακινητοποιημένου κύτταρου από το γυαλί.

4.

Φυγοκέντρηση στις 2 000 - 3 000 rpm προς ιζηματοποίηση των κυττάρων.

5.

Το υπερκείμενο απορρίπτεται και τα κύτταρα επαναιωρούνται σε περίπου 30 ml PBS που περιέχει 1 % «Sarkosyl» και 2 ml φαινυλομεθυλοσουλφονυλοφθορίδιο (ρυθμιστικό διάλυμα λύσης). Αυτό μπορεί να κάνει τα κύτταρα να σχηματίζουν ένα πήγμα και περισσότερο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης μπορεί να προστεθεί για να μειώσει το φαινόμενο αυτό. (Σημείωση: το φαινυλομεθυλοσουλφονυλοφθορίδιο είναι επικίνδυνο - να χρησιμοποιείται με εξαιρετική προσοχή.)

6.

Τα κύτταρα αποκόπτονται επί 60 δευτερόλεπτα χρησιμοποιώντας στέλεχος υπερηχητή με πλάτος 30 μικρών.

7.

Φυγοκέντρηση στις 10 000 rpm επί 10 λεπτά.

8.

Το υπερκείμενο αποθηκεύεται στους +4 °C και το εναπομείναν κυτταρικό ίζημα επαναιωρείται σε 10 μέχρι 20 ml ρυθμιστικού διαλύματος λύσης.

9.

Υπερήχηση και διαύγαση, διατηρώντας το υπερκείμενο σε κάθε στάδιο, τρεις φορές συνολικά.

10.

Τα υπερκείμενα συγκεντρώνονται και φυγοκεντρούνται στις 24 000 rpm (100,000 g) επί 120 λεπτά στους +4 °C πάνω από ένα στρώμα 5 ml 40 % σουκρόζης (β/ο σε PBS) χρησιμοποιώντας σωλήνες φυγόκεντρου Becχλμ.ann των 30 ml και κινητήρα SW 28.

11.

Το υπερκείμενο απορρίπτεται, οι σωλήνες στεγνώνονται εντελώς και το ίζημα επαναιωρείται σε PBS με υπερήχηση. Το αντιγόνο διατηρείται σε επιμέρους δόσεις στους –20 °C.

1.

Τιτλοδοτείται αραίωση 1/20 αντιγόνου BTV σε PBS κατά μήκος του τρυβλίου μικροτιτλοδότησης σε σειρά διπλασιαζόμενης αραίωσης (50 μl/κοιλότητα) χρησιμοποιώντας σιφώνιο πολλών διαύλων.

2.

Επώαση επί μία ώρα στους 37 °C πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα.

3.

Τα τρυβλία εκπλύονται τρεις φορές με PBS.

4.

Προστίθενται 50 μl μονοκλωνικού αντισώματος 3-17-Α3 (αραιωμένου κατά 1/100) σε κάθε κοιλότητα του τρυβλίου μικροτιτλοδότησης.

5.

Επώαση επί μία ώρα στους 37 °C πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα.

6.

Τα τρυβλία εκπλύονται τρεις φορές με PBS.

7.

Προστίθενται 50 μl αντιγλοβουλίνης ποντικού από κόνικλο συνεζευγμένη με υπεροξειδάση αγριοραπανιού, αραιωμένη σε μία προτιτλοδοτημένη βέλτιστη συγκέντρωση, σε κάθε κοιλότητα του τρυβλίου μικροτιτλοδότησης.

8.

Επώαση επί μία ώρα στους 37 °C πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα.

9.

Προστίθεται χρωμογόνο και υπόστρωμα όπως περιγράφηκε προηγούμενα. Η αντίδραση διακόπτεται μετά από 10 λεπτά με την προσθήκη ενός γραμμομορίου θειικού οξέος (50 μl/κοιλότητα).

Διαδικασία

:

1 % αγαρόζη παρασκευασμένη σε ρυθμιστικό διάλυμα βορικού οξέος ή βαρβιτολικού νατρίου pH 8,5 με 9,0, εκχύεται σε τρυβλία με ελάχιστο βάθος 3,0 mm. Ένα σχέδιο δοκιμής επτά κοιλοτήτων ελεύθερων υγρασίας, η καθεμία με διάμετρο 5,0 mm, κόβεται μέσα στο άγαρ. Η διάταξη δοκιμής αποτελείται από μία κεντρική κοιλότητα και έξι κοιλότητες σε κυκλική διάταξη γύρω από αυτήν, ακτίνας 3 εκατοστών. Η κεντρική κοιλότητα γεμίζει με το πρότυπο αντιγόνο. Οι περιφερειακές κοιλότητες 2, 4 και 6 πληρούνται με γνωστό θετικό ορό, οι κοιλότητες 1, 3 και 5 πληρούνται με δοκιμαστικό ορό. Το σύστημα επωάζεται έως 72 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου σε κλειστό υγρό θάλαμο.

Ερμηνεία

:

Ένας ορός υπό δοκιμή είναι θετικός όταν σχηματίζει μια ειδική γραμμή ιζήματος με το αντιγόνο και όταν σχηματίζει πλήρη γραμμή ταυτοποίησης με τον ορό ελέγχου. Ο δοκιμαστικός ορός είναι αρνητικός εάν δεν σχηματίζει μια ειδική γραμμή με το αντιγόνο και δεν κάμπτει τη γραμμή του ορού αναφοράς. Τα τρυβλία πρέπει να εξετάζονται σε σκοτεινό φόντο με τη χρήση έμμεσου φωτισμού.

Διαδικασία

:

1 % αγαρόζη παρασκευασμένη σε ρυθμιστικό διάλυμα βορικού οξέος ή βαρβιτολικού νατρίου pH 8,5 με 9,0, εκχύεται σε τρυβλία με ελάχιστο βάθος 3,0 mm. Ένα σχέδιο δοκιμής επτά κοιλοτήτων ελεύθερων υγρασίας, η καθεμία με διάμετρο 5,0 mm, κόβεται μέσα στο άγαρ. Η διάταξη δοκιμής αποτελείται από μία κεντρική κοιλότητα και έξι κοιλότητες σε κυκλική διάταξη γύρω από αυτήν, ακτίνας 3 εκατοστών. Η κεντρική κοιλότητα γεμίζει με το πρότυπο αντιγόνο. Οι περιφερειακές κοιλότητες 2, 4 και 6 πληρούνται με γνωστό θετικό ορό, οι κοιλότητες 1, 3 και 5 πληρούνται με δοκιμαστικό ορό. Το σύστημα επωάζεται έως 72 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου σε κλειστό υγρό θάλαμο.

Ερμηνεία

:

Ένας ορός υπό δοκιμή είναι θετικός όταν σχηματίζει μια ειδική γραμμή ιζήματος με το αντιγόνο και όταν σχηματίζει πλήρη γραμμή ταυτοποίησης με τον ορό ελέγχου. Ο δοκιμαστικός ορός είναι αρνητικός εάν δεν σχηματίζει μια ειδική γραμμή με το αντιγόνο και δεν κάμπτει τη γραμμή του ορού αναφοράς. Τα τρυβλία πρέπει να εξετάζονται σε σκοτεινό φόντο με τη χρήση έμμεσου φωτισμού.

Ορός

:

Όλοι οι οροί αδρανοποιούνται με θέρμανση στους 56 °C επί 30 λεπτά πριν χρησιμοποιηθούν.

Διαδικασία

:

Η δοκιμή ουδετεροποίησης σταθερού ιού-μεταβλητού ορού σε τρυβλία μικροτιτλοδότησης χρειάζεται MDBK ή άλλα ευαίσθητα κύτταρα. Η φυλή του Κολοράντο, Οξφόρδης ή οποιαδήποτε άλλη φυλή αναφοράς του ιού χρησιμοποιείται σε 100 TCID50 ανά 0,025 ml· δείγματα αδρανοποιημένου, μη αραιωμένου ορού αναμειγνύονται με ίσο όγκο (0,025 ml) αιωρήματος ιού. Τα μείγματα ιού/ορού επωάζονται επί 24 ώρες στους 37 °C στα τρυβλία μικροτιτλοδότησης πριν προστεθούν τα κύτταρα MDBK. Τα κύτταρα χρησιμοποιούνται σε συγκέντρωση τέτοια, ώστε να σχηματίζεται μία πλήρης μονοκυτταρική στοιβάδα ύστερα από 24 ώρες.

Έλεγχοι

:

δοκιμή μολυσματικότητας ιού, ii) έλεγχοι τοξικότητας ορού, iii) έλεγχοι μη εμβολιασμένης κυτταροκαλλιέργειας, iv) αντιοροί αναφοράς.

Ερμηνεία

:

Τα αποτελέσματα της δοκιμής ουδετεροποίησης και ο τίτλος του ιού που χρησιμοποιείται στη δοκιμή καταγράφονται μετά από επώαση τριών έως έξι ημερών στους 37 °C. Οι τίτλοι ορού θεωρούνται αρνητικοί εάν δεν υπάρξει ουδετεροποίηση σε διάλυμα 1/2 (μη αραιωμένου ορού).

Αντιδραστήρια

:

Πριν από τη δειγματοληψία, παρασκευάζεται μέσο μεταφοράς. Όγκοι 2 ml διανέμονται σε τόσα δοχεία συλλογής όσα και τα ζώα δειγματοληψίας. Τα χρησιμοποιούμενα δοχεία πρέπει να αντέχουν στην ψύξη με στερεό CO2 ή υγρό άζωτο. Τα δείγματα λαμβάνονται χρησιμοποιώντας ένα ειδικά σχεδιασμένο συλλέκτη σιέλου ή «probang». Για να ληφθεί ένα δείγμα, το κύπελλο του probang διέρχεται μέσα από το στόμα, πάνω από τη ράχη της γλώσσας και προς τα κάτω, μέσα στο πάνω τμήμα του οισοφάγου. Καταβάλλεται προσπάθεια να αποξεσθεί το επιφανειακό επιθήλιο του πάνω οισοφάγου και φάρυγγα με κινήσεις κατευθυνόμενες εγκαρσίως και επιμήκως. Κατόπιν το probang αποσύρεται, προτιμότερα αφού το ζώο καταπιεί. Το κύπελλο πρέπει να είναι γεμάτο και να περιέχει ένα μείγμα βλέννας, σιέλου, οισοφαγικού υγρού και κυτταρικών υπολειμμάτων. Πρέπει να λαμβάνεται μέριμνα να εξασφαλίζεται ότι κάθε δείγμα περιέχει ορισμένο ορατό κυτταρικό υλικό. Πρέπει να αποφεύγεται ο αδέξιος χειρισμός που προκαλεί αιμορραγία. Τα δείγματα μερικών ζώων μπορεί να είναι σοβαρά μολυσμένα με περιεχόμενα μηρυκασμού. Τέτοια δείγματα πρέπει να απορρίπτονται και το στόμα των ζώων να ξεπλένεται με νερό, ή κατά προτίμηση φυσιολογικό ορό (αλατούχο διάλυμα), πριν επαναληφθεί η δειγματοληψία.

Μεταχείριση των δειγμάτων

:

Κάθε δείγμα που συλλέγεται στο κύπελλο του probang εξετάζεται ποιοτικά και 2 ml προστίθενται σε ίσο όγκο μέσου μεταφοράς σε δοχείο που μπορεί να αντέξει σε ψύξη. Τα δοχεία συλλογής κλείνονται σφιχτά, σφραγίζονται, απολυμαίνονται και καταχωρούνται με ετικέτες. Τα δείγματα διατηρούνται δροσερά (+4 °C) και εξετάζονται μέσα σε τρεις έως τέσσερις ώρες ή τοποθετούνται πάνω σε ξηρό πάγο (–69 °C) ή υγρό άζωτο και διατηρούνται παγωμένα μέχρι να εξεταστούν. Από ζώο σε ζώο το probang απολυμαίνεται και πλένεται τρεις φορές με καθαρό νερό.

Δοκιμή για ιό FMD

:

Τα δείγματα επωάζονται σε καλλιέργειες πρωτογενών κυττάρων θυρεοειδούς βοοειδούς χρησιμοποιώντας τουλάχιστον τρεις σωλήνες ανά δείγμα. Επιτρέπεται να χρησιμοποιούνται και άλλα ευαίσθητα κύτταρα π.χ. πρωτογενή κύτταρα νεφρού βοοειδών ή χοίρων, αλλά πρέπει να λαμβάνεται υπόψη ότι για ορισμένα στελέχη του ιού του αφθώδους πυρετού είναι λιγότερο ευαίσθητα. Οι σωλήνες επωάζονται στους 37 °C σε συσκευή περιστροφής και εξετάζονται καθημερινά επί 48 ώρες ως προς κυτοπαθολογικό σύμπτωμα (ΚΠΣ). Εάν αποδειχθούν αρνητικές, οι καλλιέργειες περνούνται χωρίς δοκιμή σε νέες καλλιέργειες και επανεξετάζονται επί 48 ώρες. Η εξειδίκευση κάθε ΚΠΣ πρέπει να επιβεβαιώνεται.

1.

Ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού οξέος 0,08 Μ, pH 7,2 περιέχον 0,01 % αλβουμίνης ορού βοοειδών, 0,002 % ερυθρού φαινόλης και αντιβιοτικά.

2.

Μέσο ιστοκαλλιέργειας (π.χ. Eagle's ΜΕΜ) περιέχον ρυθμιστικό διάλυμα HEPES 0,04 Μ, 0,01 % αλβουμίνη ορού βοοειδών και αντιβιοτικά, pH 7,2.

3.

Πρέπει να προστεθούν αντιβιοτικά (ανά ml τελικό) στο μέσο μεταφοράς π.χ.: πενικιλλίνη 1 000 IU, θειική νεομυκίνη 100 IU, θειική πολυμυξίνη Β 50 IU, μυκοστατίνη 100 IU.

Αντιδραστήρια

:

Παρασκευάζεται προς αποθήκευση αντιγόνο ΙΑΠ σε κυτταροκαλλιέργειες ή πάνω σε γλώσσες κατοικίδιων βοοειδών και διατηρείται στους –70 °C ή χαμηλότερα ή στους –20 °C μετά από προσθήκη γλυκερίνης 50 %. Αυτό είναι το αποθηκευμένο αντιγόνο. Ο ιός του αφθώδους πυρετού είναι σταθερός υπό τις συνθήκες αυτές και οι τίτλοι λίγο μεταβάλλονται για μία περίοδο μηνών.

Διαδικασία

:

Η δοκιμή εκτελείται σε τρυβλία μικροτιτλοδότησης βαθμού ιστοκαλλιέργειας, επίπεδου πυθμένα, χρησιμοποιώντας ευαίσθητα κύτταρα όπως IBRS-2, ΒΗΚ-21 ή κύτταρα νεφρού μοσχαριού. Οροί για δοκιμή αραιώνονται στο 1/4 με μέσο κυτταροκαλλιέργειας απηλλαγμένο ορού με την προσθήκη 100 IU/ml νεομυκίνης ή άλλων κατάλληλων αντιβιοτικών. Οι οροί αδρανοποιούνται στους 56 °C επί 30 λεπτά και ποσότητες των 0,05 ml χρησιμοποιούνται για την παρασκευή μίας διπλής σειράς σε τρυβλία μικροτιτλοδότησης χρησιμοποιώντας επαναληπτικές αραιώσεις των 0,05 ml. Κατόπιν προστίθεται σε κάθε κοιλότητα προτιτλοδοτημένος ιός επίσης αραιωμένος με μέσο καλλιέργειας απηλλαγμένο ορού και περιέχον 100 TCID50/0,05 ml. Ακολουθώντας επώαση στους 37 °C επί μία ώρα για να επέλθει ουδετεροποίηση, προστίθενται σε κάθε κοιλότητα 0,05 ml κυττάρων αιώρησης περιέχοντα 0,5-1,0 × 106 κύτταρα ανά 1 ml σε μέσο κυτταροκαλλιέργειας περιέχον ορό απηλλαγμένο αντισώματος αφθώδους πυρετού και τα τρυβλία σφραγίζονται. Τα τρυβλία επωάζονται σε 37 °C. Οι μονοκυτταρικές στοιβάδες είναι κανονικά σύγχρονες μέσα σε 24 ώρες. Το ΚΠΣ έχει συνήθως εξελιχθεί αρκετά σε 48 ώρες για μια μικροσκοπική ανάγνωση της δοκιμής. Κατά το χρόνο αυτόν μπορεί να γίνει μία τελική μικροσκοπική ανάγνωση ή τα τρυβλία μπορούν να στερεωθούν και να χρωματισθούν για μακροσκοπική ανάγνωση, για παράδειγμα χρησιμοποιώντας αλατούχο διάλυμα φορμόλης 10 % και κυανό του μεθυλενίου 0,05 %.

Έλεγχοι

:

Οι έλεγχοι σε κάθε δοκιμή περιλαμβάνουν ομόλογο αντιορό γνωστού τίτλου, ένα κυτταρικό έλεγχο, έναν έλεγχο τοξικότητας ορού, έναν έλεγχο μέσου και μια τιτλοδότηση ιού από την οποία υπολογίζεται η πραγματική ποσότητα ιού στη δοκιμή.

Ερμηνεία

:

Κοιλότητες με ένδειξη ΚΠΣ θεωρούνται μολυσμένες και οι τίτλοι ουδετεροποίησης εκφράζονται ως το αμοιβαίο της τελικής αραίωσης του ορού παρόντος στα μείγματα ορού/ιού στο 50 % τελικό σημείο, υπολογιζόμενο σύμφωνα με τη μέθοδο Spearman-Karber. (Karber, G., 1931, Archiv fuer Experimentelle Pathologie und Pharmakologie, 162, 480). Οι δοκιμές θεωρούνται έγκυρες όταν η πραγματική ποσότητα του ιού που χρησιμοποιείται ανά κοιλότητα στη δοκιμή είναι μεταξύ 101,5 και 102,5 TCID50 και όταν ο τίτλος του ορού αναφοράς βρίσκεται μέσα στο διπλάσιο του αναμενόμενου τίτλου του, υπολογιζόμενου από την πορεία των αποτελεσμάτων προηγουμένων τιτλοδοτήσεων. Όταν οι έλεγχοι βρίσκονται εκτός των ορίων αυτών, οι δοκιμές επαναλαμβάνονται. Τίτλος τελικού σημείου 1/11 ή λιγότερο θεωρείται αρνητικός.

Αντιδραστήρια

:

Αντιορός κουνελιού στο αντιγόνο 146S 7 τύπων ιού αφθώδους πυρετού (ΙΑΠ) χρησιμοποιούμενος σε προκαθορισμένη βέλτιστη συγκέντρωση σε ρυθμιστικό διάλυμα ανθρακικού/διττανθρακικού, pH 9,6. Τα αντιγόνα παρασκευάζονται από επιλεγμένες στελέχη του ιού ανεπτυγμένες πάνω σε μονοκυτταρική στοιβάδα κυττάρων ΒΗΚ-21. Χρησιμοποιούνται τα ακαθάριστα υπερκείμενα και προτιτλοδοτούνται σύμφωνα σε την πρότυπη διαδικασία, αλλά χωρίς ορό, ώστε να δώσουν μια αραίωση, η οποία, μετά την προσθήκη ίσου όγκου PBST (αλατούχο ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού περιέχον 0,05 % Tween-20 και δείκτη ερυθρό φαινόλης), θα έδινε μία τιμή οπτικής πυκνότητας μεταξύ 1,2 και 1,5. Οι ιοί μπορούν να χρησιμοποιηθούν αδρανοποιημένοι. Το PBST χρησιμοποιείται ως αραιωτικό. Παρασκευάζεται αντιορός ινδικού χοιριδίου με εμβολιασμό ινδικών χοιριδίων με αντιγόνο 146S κάθε οροτύπου. Παρασκευάζεται μία προκαθορισμένη βέλτιστη συγκέντρωση σε PBST περιέχοντας 10 % φυσιολογικό ορό βοοειδούς και 5 % φυσιολογικό ορό κουνελιού. Χρησιμοποιείται ανοσογλοβουλίνη αντιινδικού χοιριδίου από κουνέλι συζευγμένο με υπεροξειδάση αγριοραπανιού σε προκαθορισμένη βέλτιστη συγκέντρωση σε PBST περιέχοντας 10 % φυσιολογικό ορό βοοειδούς και 5 % φυσιολογικό ορό κουνελιού. Οι δοκιμαστικοί οροί αραιώνονται σε PBST.

1.

Τρυβλία για Elisa καλύπτονται με 50 ml ορού κουνελιού κατά του ιού και αφήνονται μέχρι την επομένη σε υγρό θάλαμο σε θερμοκρασία δωματίου.

2.

Παρασκευάζονται πενήντα μικρολίτρα διπλής, διπλασιαζόμενης σειράς κάθε δοκιμαστικού ορού ξεκινώντας κατά 1/4 σε τρυβλία πολλαπλών κοιλοτήτων, πυθμένα σχήματος U (τρυβλία-φορέας). Προστίθενται σε κάθε κοιλότητα πενήντα μικρολίτρα σταθερής δόσης αντιγόνου και αφήνονται τα μείγματα κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 4 °C. Η προσθήκη αντιγόνου περιορίζει την έναρξη της διάλυσης του ορού σε 1/8.

3.

Τα τρυβλία για Elisa πλένονται πέντε φορές με PBST.

4.

Κατόπιν μεταφέρονται πενήντα μικρολίτρα μειγμάτων ορού/αντιγόνου από τα τρυβλία-φορέας στα καλυμμένα με ορό κουνελιού τρυβλία για Elisa και επωάζονται στους 37 °C επί μία ώρα πάνω σε περιστρεφόμενο αναδευτήρα.

5.

Μετά την έκπλυση, προστίθενται σε κάθε κοιλότητα 50 μl αντιορού στο χρησιμοποιούμενο στο σημείο 4 αντιγόνο από ινδικό χοιρίδιο. Τα τρυβλία επωάζονται στους 37 °C επί μία ώρα πάνω σε περιστρεφόμενο αναδευτήρα.

6.

Τα τρυβλία πλένονται και προστίθενται σε κάθε κοιλότητα 50 μl ανοσογλοβουλίνης αντιινδικού χοιριδίου από κουνέλι συζευγμένης με υπεροξειδάση αγριοραπανιού. Τα τρυβλία επωάζονται στους 37 °C επί μία ώρα πάνω σε περιστρεφόμενο αναδευτήρα.

7.

Τα τρυβλία πλένονται και προστίθενται σε κάθε κοιλότητα 50 ml ορθοφαινυλενοδιαμίνης περιέχουσας 0,05 % H2O2 (30 % β/ο).

8.

Η αντίδραση διακόπτεται ύστερα από 15 λεπτά με H2SO4 σε 1,25 Μ.

Μάρτυρες

:

Για κάθε αντιγόνο που χρησιμοποιείται, 40 κοιλότητες δεν περιέχουν ορό αλλά αντιγόνο αραιωμένο σε PBST. Μια διπλή διπλασιαζόμενη σειρά αραίωσης ομόλογου αντιορού αναφοράς από βοοειδές. Μια διπλή διπλασιαζόμενη σειρά αραίωσης αρνητικού ορού βοοειδούς.

Ερμηνεία

:

Οι αντισωματικοί κύκλοι εκφράζονται ως η τελική αραίωση του δοκιμαστικού ορού που δίνει 50 % της μέσης τιμής απορρόφησης (OD) που καταγράφεται στις κοιλότητες ελέγχου του ιού όταν δεν υπάρχει δοκιμαστικός ορός. Τίτλοι μεγαλύτεροι από 1/40 θεωρούνται θετικοί.

Παραπομπές

:

Hamblin C, Barnett ITR and Hedger RS (1986) «A new enzyme-linked immunos orbent assay (ELISA) f or the detection of antibodies against foot-and-mouth disease virus. I. Development and method of ELISA.» Journal of Immunological Methods, 93, 115 έως 121.11.

Ορός

:

Όλοι οι οροί αδρανοποιούνται με θέρμανση στους 56 °C επί 30 λεπτά πριν χρησιμοποιηθούν.

Διαδικασία

:

Η δοκιμή ουδετεροποίησης σταθερού ιού-μεταβλητού ορού χρειάζεται Vero ή άλλο ευαίσθητο κυτταρικό σύστημα. Ο ιός TGE χρησιμοποιείται σε 100 TCID50 ανά 0,025 ml· δείγματα αδρανοποιημένου, μη αραιωμένου ορού αναμειγνύονται με ίσο όγκο (0,025 ml) αιωρήματος ιού. Τα μείγματα ιού/ορού επωάζονται επί δύο ώρες στους 37 °C στα τρυβλία μικροτιτλοδότησης πριν προστεθούν τα κατάλληλα κύτταρα. Τα κύτταρα χρησιμοποιούνται σε συγκέντρωση τέτοια, ώστε να σχηματίζεται μία πλήρης μονοκυτταρική στοιβάδα ύστερα από 24 ώρες.

Έλεγχοι

:

δοκιμή μολυσματικότητας ιού, ii) έλεγχοι τοξικότητας ορού, iii) έλεγχοι μη εμβολιασμένης κυτταροκαλλιέργειας, iv) αντιοροί αναφοράς.

Ερμηνεία

:

Τα αποτελέσματα της δοκιμής ουδετεροποίησης και ο τίτλος του ιού που χρησιμοποιείται στη δοκιμή καταγράφονται μετά από επώαση τριών έως επτά ημερών στους 37 °C. Τίτλοι ορού κατώτεροι του 1/2 (αδιάλυτος ορός) θεωρούνται αρνητικοί.

Ορός

:

Όλοι οι οροί αδρανοποιούνται με θέρμανση στους 56 °C επί 30 λεπτά πριν χρησιμοποιηθούν.

Διαδικασία

:

Η δοκιμή ουδετεροποίησης σταθερού ιού-μεταβλητού ορού σε τρυβλία μικροτιτλοδότησης χρειάζεται κύτταρα Α72 (όγκου σκύλου) ή άλλο ευαίσθητο κυτταρικό σύστημα. Ο ιός TGE χρησιμοποιείται σε 100 TCID50 ανά 0,025 ml· δείγματα αδρανοποιημένου, μη αραιωμένου ορού αναμειγνύονται με ίσο όγκο (0,025 ml) αιωρήματος ιού. Τα μείγματα ιού/ορού επωάζονται επί 30 έως 60 λεπτά στους 37 °C στα τρυβλία μικροτιτλοδότησης πριν προστεθούν τα κατάλληλα κύτταρα. Τα κύτταρα χρησιμοποιούνται σε συγκέντρωση τέτοια, ώστε να σχηματίζεται μία πλήρης μονοκυτταρική στοιβάδα ύστερα από 24 ώρες. Κάθε κύτταρο λαμβάνει 0,1 ml κυτταρικού αιωρήματος.

Έλεγχοι

:

δοκιμή μολυσματικότητας ιού, ii) έλεγχοι τοξικότητας ορού, iii) έλεγχοι μη εμβολιασμένης κυτταροκαλλιέργειας, iv) αντιοροί αναφοράς.

Ερμηνεία

:

Τα αποτελέσματα της δοκιμής ουδετεροποίησης και ο τίτλος του ιού που χρησιμοποιείται στη δοκιμή καταγράφονται μετά από επώαση τριών έως επτά ημερών στους 37 °C. Τίτλοι ορού κατώτεροι του 1/2 (αδιάλυτος ορός) θεωρούνται αρνητικοί. Εάν μη αραιωμένα δείγματα ορού είναι τοξικά για τις κυτταροκαλλιέργειες, οι οροί αυτοί μπορούν να αραιωθούν κατά 1/2 πριν χρησιμοποιηθούν στη δοκιμή. Αυτό θα ισοδυναμεί με 1/4 τελικής αραίωσης ορού. Τίτλοι ορού μικρότεροι από 1/4 (τελική αραίωση) θεωρούνται αρνητικοί στις περιπτώσεις αυτές.

α)

Στο σταθμό καραντίνας μπορούν να εισάγονται ξεχωριστές παρτίδες. Ωστόσο, μετά την είσοδο στο σταθμό, όλα τα ζώα του ίδιου είδους θεωρούνται ως ενιαία ομάδα και έτσι δηλώνονται. Η περίοδος καραντίνας αρχίζει για ολόκληρη την ομάδα με την είσοδο του τελευταίου ζώου στην εγκατάσταση.

β)

Μέσα στο σταθμό καραντίνας κάθε συγκεκριμένη ομάδα ζώων πρέπει να παραμένει απομονωμένη, χωρίς άμεση ή έμμεση επαφή με άλλα ζώα, συμπεριλαμβανομένων και των ζώων από άλλες παρτίδες που μπορεί να βρίσκονται εκεί.

Κάθε παρτίδα πρέπει να παραμένει σε εγκεκριμένο σταθμό καραντίνας και να προστατεύεται από έντομα φορείς.

γ)

Εάν κατά την περίοδο καραντίνας δεν τηρείται η απομόνωση μιας ομάδας ζώων και υπάρχει επαφή με άλλα ζώα, η περίοδος καραντίνας πρέπει να αρχίσει εκ νέου για το ίδιο διάστημα με αυτό που είχε προβλεφθεί αρχικά κατά την είσοδο στο σταθμό καραντίνας.

δ)

Τα ζώα που προορίζονται για εξαγωγή στην Ένωση και διέρχονται από το σταθμό καραντίνας πρέπει να φορτώνονται και να αποστέλλονται κατευθείαν στην Ένωση:

α)

να τελούν υπό τον έλεγχο επίσημου κτηνιάτρου·

β)

να βρίσκονται στο κέντρο περιοχής διαμέτρου τουλάχιστον 20 χλμ. στην οποία, σύμφωνα με επίσημες γνωματεύσεις, κατά τις 30 τουλάχιστον ημέρες πριν από τη χρήση τους ως εγκεκριμένου σταθμού καραντίνας δεν εκδηλώθηκε κρούσμα αφθώδους πυρετού·

γ)

πριν από τη χρήση τους ως σταθμού καραντίνας, να καθαρίζονται και να απολυμαίνονται με απολυμαντική ουσία επίσημα εγκεκριμένη στο Σαιν Πιερ και Μικελόν για τον αποτελεσματικό έλεγχο των νόσων που αναφέρονται στο κεφάλαιο 2·

δ)

να διαθέτουν, λαμβανομένης υπόψη της χωρητικότητάς τους:

ε)

κατά τη λειτουργία τους, να έχουν επαρκή αριθμό κτηνιάτρων για την εκτέλεση όλων των καθηκόντων·

στ)

να δέχονται μόνο ζώα που έχουν ταυτοποιηθεί ατομικά ώστε να παρέχονται εγγυήσεις για την ανιχνευσιμότητα της προέλευσής τους. Για το σκοπό αυτό, όταν εισέρχονται ζώα, ο ιδιοκτήτης ή ο υπεύθυνος του σταθμού καραντίνας εξασφαλίζει ότι τα ζώα έχουν ταυτοποιηθεί σωστά και συνοδεύονται από τα απαιτούμενα για τα συγκεκριμένα είδη και κατηγορίες ζώων υγειονομικά έγγραφα ή πιστοποιητικά. Επιπλέον, ο ιδιοκτήτης ή ο υπεύθυνος του σταθμού καραντίνας πρέπει να καταγράφει σε μητρώο ή σε βάση δεδομένων και να διατηρεί επί τουλάχιστον τρία έτη το όνομα του ιδιοκτήτη, τον τόπο καταγωγής των ζώων της αποστολής, τις ημερομηνίες εισόδου και εξόδου των ζώων της αποστολής, τον αριθμό ταυτοποίησης των ζώων της αποστολής και τον τόπο προορισμού τους·

ζ)

η αρμόδια αρχή καθορίζει τη διαδικασία επίσημης εποπτείας του σταθμού καραντίνας και εξασφαλίζει την υλοποίηση της εν λόγω εποπτείας· η εποπτεία περιλαμβάνει τακτικές επιθεωρήσεις ώστε να διασφαλίζεται ότι εξακολουθούν να τηρούνται οι προϋποθέσεις της έγκρισής του. Σε περίπτωση μη τήρησης των όρων και αναστολής της λειτουργίας του σταθμού, η έγκριση είναι δυνατό να χορηγηθεί εκ νέου μόνο όταν η αρμόδια αρχή κρίνει ότι εγκαταστάσεις καραντίνας συμμορφώνονται πλήρως με όλουςτους όρους που ορίζονται στα ανωτέρω σημεία α) έως ζ).

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: συγκριτική δοκιμή ενδοδερμικής αντίδρασης με τη χρήση φυματινικού καθαρισμένου πρωτεϊνικού παραγώγου (ΚΠΠ) PPD Μ. bovis και M. avium, σύμφωνα με τις προδιαγραφές παρασκευής φυματινών bovis και avium, όπως περιγράφονται στο σημείο 2.1.2 του Παραρτήματος Β της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ.

Η δοκιμή πρέπει να εκτελείται στην περιοχή πίσω από την ωμοπλάτη (μασχαλιαία χώρα) σύμφωνα με την τεχνική που περιγράφεται στο σημείο 2.2.4 του παραρτήματος Β της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ.

β)

Χρόνος εξετάσεων: τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε εξετάσεις εντός δύο ημερών από την ημέρα της άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και μετά 42 μέρες από την ημέρα της πρώτης δοκιμής.

γ)

Ερμηνεία των δοκιμών:

η αντίδραση θεωρείται:

δ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές:

Εάν ένα ζώο παρουσιάσει θετικό αποτέλεσμα στην ενδοθερμική αντίδραση στη φυματίνη PPD Μ. bovis, το ζώο αυτό αποκλείεται από την ομάδα και πραγματοποιείται νέα δοκιμή στα άλλα ζώα η οποία αρχίζει τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την ημερομηνία του πρώτου θετικού αποτελέσματος στη δοκιμή και αυτή πρέπει να θεωρείται η πρώτη δοκιμή που περιγράφεται στο σημείο β).

Αν περισσότερα από ένα ζώα της ομάδας παρουσιάζουν θετικό αποτέλεσμα, ολόκληρη η ομάδα απορρίπτεται για εξαγωγή στην Ένωση.

Εάν ένα ή περισσότερα ζώα της ίδιας ομάδας παρουσιάσουν αβέβαιη αντίδραση, πρέπει να διενεργηθεί εκ νέου σε ολόκληρη την ομάδα νέα δοκιμή που θα αρχίσει τουλάχιστον 42 ημέρες από την ημερομηνία της πρώτης δοκιμής, η οποία θα θεωρείται ως η πρώτη δοκιμή που περιγράφεται στο σημείο β).

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται:

β)

Χρόνος εξετάσεων: τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε εξετάσεις εντός δύο ημερών από την ημέρα της άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και σε 42 ημέρες από την ημέρα της πρώτης δοκιμής.

γ)

Ερμηνεία των δοκιμών:

Θετική αντίδραση στις δοκιμές είναι αυτή που περιγράφεται στο παράρτημα Γ της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ.

δ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές:

Τα ζώα που παρουσιάζουν θετικό αποτέλεσμα σε μία από τις δοκιμές πρέπει να αποκλείονται από την ομάδα και τα άλλα ζώα πρέπει να επανεξετάζονται τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την ημερομηνία της πρώτης δοκιμής με θετικό αποτέλεσμα: αυτή θεωρείται και η πρώτη δοκιμή που περιγράφεται στο σημείο β).

Μόνο τα ζώα που παρουσιάζουν αρνητικό αποτέλεσμα σε δύο διαδοχικές δοκιμές που εκτελούνται σύμφωνα με τις διατάξεις του σημείου β) επιτρέπεται να εξαχθούν στην Ένωση.

α)

Δοκιμή που πρέπει να διενεργείται: δοκιμή ανοσοδιάχυσης σε πλάκες γκυκόζης (AGID) που περιγράφεται στο Μέρος 6 του Παραρτήματος Ι του κανονισμού (ΕΕ) αριθ. 206/2010 (SANCO/4787/2009).

Σε περίπτωση θετικής αντίδρασης, τα ζώα υποβάλλονται σε ανταγωνιστική ELISA (ενζυμική δοκιμή ανοσοπροσρόφησης), σύμφωνα με το Μέρος 6 του Παραρτήματος Ι του κανονισμού (ΕΕ) αριθ. 206/2010 (SANCO/4787/2009) για να γίνει διάκριση ανάμεσα στις δύο ασθένειες.

β)

Χρόνος εξετάσεων:

Τα ζώα πρέπει να παρουσιάσουν θετικό αποτέλεσμα σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία της άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 21 ημέρες μετά την ημερομηνία της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές:

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: Διαγνωστικές δοκιμές (μέθοδος λαρυγγοφαρυγγικής απόξεσης (probang) και ορολογικός έλεγχος) με τη χρήση των μεθόδων ELISA και εξουδετέρωσης του ιού (VN), σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στο Μέρος 6 του Παραρτήματος Ι του κανονισμού (ΕΕ) αριθ. 206/2010 (SANCO/4787/2009).

β)

Χρόνος εξετάσεων: τα ζώα πρέπει να παρουσιάζουν αρνητικό αποτέλεσμα σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία της άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη σε τουλάχιστον 42 ημέρες από την ημερομηνία διενέργειας της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Εάν ένα ζώο παρουσιάσει θετικό αποτέλεσμα στον ιό του αφθώδους πυρετού (ΑΠ), τότε κανένα από τα ζώα που είναι παρόντα στο σταθμό καραντίνας δεν είναι δυνατό να εισαχθεί στην Ένωση.

Σημείωση: Κάθε ανίχνευση αντισωμάτων κατά δομικών ή μη δομικών πρωτεϊνών ΑΠ θα θεωρείται αποτέλεσμα προηγούμενης μόλυνσης από τον ΑΠ ανεξάρτητα από το καθεστώς εμβολιασμού.

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: Η ανταγωνιστική δοκιμή ELISA που περιγράφεται στην τελευταία έκδοση του Εγχειριδίου Διαγνωστικών Δοκιμών και Εμβολίων για Χερσαία Ζώα του ΔΓΕ, είναι η προτεινόμενη δοκιμή για το διεθνές εμπόριο και είναι δοκιμή επιλογής. Μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν η δοκιμή ουδετεροποίησης ορού ή άλλες αναγνωρισμένες δοκιμές σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα αντίστοιχα τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β)

Χρόνος εξετάσεων: Τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία της άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά τη διενέργεια της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Εάν ένα ζώο παρουσιάσει θετικό αποτέλεσμα στον ιό τής πανώλης των βοοειδών, τότε κανένα από τα ζώα που είναι παρόντα στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρείται επιλέξιμο για εισαγωγή στην Ένωση.

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: ELISA, δοκιμή ουδετεροποίησης του ιού ή άλλη αναγνωρισμένη δοκιμή, σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα σχετικά τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β)

Χρόνος εξετάσεων: Τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την ημερομηνία διενέργειας της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Εάν ένα ζώο παρουσιάσει θετικό αποτέλεσμα στη δοκιμή για την ανίχνευση του ιού της φυσαλιδώδους στοματίτιδας, τότε κανένα από τα ζώα που είναι παρόντα στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρείται επιλέξιμο για εισαγωγή στην Ένωση.

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: ELISA, δοκιμή ουδετεροποίησης του ιού ή άλλη αναγνωρισμένη δοκιμή, σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα σχετικά τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β)

Χρόνος εξετάσεων: Τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την ημέρα διενέργειας της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Εάν ένα ζώο παρουσιάσει στοιχεία έκθεσης στον παράγοντα της νόσου της κοιλάδας του Rift, τότε κανένα από τα ζώα που είναι παρόντα στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρείται επιλέξιμο για εισαγωγή στην Ένωση.

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: Ορολογικός έλεγχος με τη χρήση της τεχνικής ELISA, δοκιμή ουδετεροποίησης ιού ή άλλη αναγνωρισμένη δοκιμή σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα σχετικά τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β)

Χρόνος εξετάσεων: Τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την ημέρα διενέργειας της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Εάν ένα ζώο παρουσιάσει στοιχεία έκθεσης στην οζώδη δερματίτιδα, τότε κανένα από τα ζώα που είναι παρόντα στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρείται επιλέξιμο για εισαγωγή στην Ένωση.

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: ELISA, δοκιμή ουδετεροποίησης ιού, δοκιμή ανοσοφθορισμού ή άλλη αναγνωρισμένη δοκιμή.

β)

Χρόνος εξετάσεων: Τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την ημέρα διενέργειας της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Εάν ένα ζώο παρουσιάσει στοιχεία έκθεσης στον παράγοντα του αιμορραγικού πυρετού της Κριμαίας/του Κογκό, τότε κανένα από τα ζώα που είναι παρόντα στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρείται επιλέξιμο για εισαγωγή στην Ένωση.

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: Ο παρασιτικός παράγοντας πρέπει να ταυτοποιείται σε δείγματα συμπυκνωμένου αίματος, σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στα σχετικά τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β)

Χρόνος εξετάσεων: Τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία της άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την ημερομηνία διενέργειας της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Εάν ανιχνευθεί σε κάποιο ζώο της αποστολής Τρυπανόσωμα evansi, αυτό το ζώο δεν θεωρείται επιλέξιμο για εισαγωγή στην Ένωση. Τα υπόλοιπα ζώα της ομάδας υποβάλλονται σε εσωτερική και εξωτερική αντιπαρασιτική αγωγή με τη χρησιμοποίηση των κατάλληλων παραγόντων που είναι αποτελεσματικοί κατά του T. evansi.

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: Η ανίχνευση ιικού DNA βάσει εντοπισμού με ανοσοφθορισμό ή ανοσοκυτταροχημεία, με τη χρησιμοποίηση των πρωτοκόλλων που περιγράφονται στα σχετικά τμήματα του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β)

Χρόνος εξετάσεων: Τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία της άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την ημερομηνία διενέργειας της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Εάν κάποιο ζώο παρουσιάσει συμπτώματα έκθεσης στη γαγγραινώδη κόρυζα των βοοειδών, τότε κανένα από τα ζώα που είναι παρόντα στο σταθμό καραντίνας δεν θεωρείται επιλέξιμο για εισαγωγή στην Ένωση.

α)

Δοκιμή που πρέπει να χρησιμοποιείται: AGID ή παρεμποδιστική ELISA, σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται στην τελευταία έκδοση του εγχειριδίου του ΔΓΕ.

β)

Χρόνος εξετάσεων: Τα ζώα πρέπει να υποβάλλονται σε δύο δοκιμές: η πρώτη εντός δύο ημερών από την ημερομηνία άφιξής τους στο σταθμό καραντίνας και η δεύτερη τουλάχιστον 42 ημέρες μετά την ημερομηνία διενέργειας της πρώτης δοκιμής.

γ)

Επιλογές για δράση μετά τις δοκιμές: Τα ζώα που παρουσιάζουν θετικό αποτέλεσμα στη δοκιμή που περιγράφεται στο σημείο α) πρέπει να απομακρυνθούν από την ομάδα των ζώων που βρίσκονται στην εγκατάσταση καραντίνας και τα υπόλοιπα ζώα πρέπει να υποβηθούν σε νέα δοκιμή τουλάχιστον 21 ημέρες μετά την ημερομηνία διενέργειας της πρώτης δοκιμής με θετικό αποτέλεσμα: αυτή πρέπει να θεωρηθεί ως η πρώτη δοκιμή που περιγράφεται στο στοιχείο β).

Μόνο τα ζώα που παρουσιάζουν αρνητικό αποτέλεσμα σε δύο διαδοχικές δοκιμές οι οποίες διενεργούνται με τον τρόπο που περιγράφεται στο στοιχείο β) θεωρούνται επιλέξιμα για εισαγωγή στην Ένωση.

«BOV»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για νωπό κρέας, συμπεριλαμβανομένου του κιμά, κατοικίδιων βοοειδών (συμπεριλαμβανομένων των ειδών Bison και Bubalus και των διασταυρώσεών τους).

«OVI»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για νωπό κρέας, συμπεριλαμβανομένου του κιμά, κατοικίδιων προβάτων (Ovis aries) και αιγών (Capra hircus).

«POR»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για νωπό κρέας, συμπεριλαμβανομένου του κιμά, κατοικίδιων χοίρων (Sus scrofa).

«EQU»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για νωπό κρέας, συμπεριλαμβανομένου του κιμά, κατοικίδιων ιπποειδών (Equus caballus, Equus asinus και των διασταυρώσεών τους).

«RUF»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για νωπό κρέας, εξαιρουμένων των εντοσθίων και του κιμά, εκτρεφόμενων μη κατοικίδιων ζώων της τάξης των αρτιοδακτύλων (εκτός από τα βοοειδή (συμπεριλαμβανομένων των ειδών Bison και Bubalus και των διασταυρώσεών τους), και τα Ovis aries, Capra hircus, Suidae και Tayassuidae), και των οικογενειών Rhinocerotidae και Elephantidae.

«RUW»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για νωπό κρέας, εξαιρουμένων των εντοσθίων και του κιμά, άγριων μη κατοικίδιων ζώων της τάξης των αρτιοδακτύλων (εκτός από τα βοοειδή (συμπεριλαμβανομένων των ειδών Bison και Bubalus και των διασταυρώσεών τους), και τα Ovis aries, Capra hircus, Suidae και Tayassuidae), και των οικογενειών Rhinocerotidae και Elephantidae.

«SUF»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για νωπό κρέας, εξαιρουμένων των εντοσθίων και του κιμά, εκτρεφόμενων μη κατοικίδιων ζώων των οικογενειών Suidae, Tayassuidae ή Tapiridae.

«SUW»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για νωπό κρέας, εξαιρουμένων των εντοσθίων και του κιμά, άγριων μη κατοικίδιων ζώων των οικογενειών Suidae, Tayassuidae ή Tapiridae.

«EQW»

:

Υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού για νωπό κρέας ζώων, εξαιρουμένων των εντοσθίων και του κιμά, άγριων μονόπλων που ανήκουν στο υπογένος Hippotigris (ζέβρα).

«A»

:

εγγυήσεις σχετικά με την ωρίμανση, τη μέτρηση του pH και την αφαίρεση των οστών του νωπού κρέατος, εκτός εντοσθίων, που πιστοποιήθηκε σύμφωνα με τα υποδείγματα κτηνιατρικών πιστοποιητικών BOV (σημείο ΙΙ.2.6), OVI (σημείο ΙΙ.2.6), RUF (σημείο ΙΙ.2.7) και RUW (σημείο ΙΙ.2.4).

«Γ»

:

εγγυήσεις σχετικά με τις εργαστηριακές δοκιμές για την κλασική πανώλη των χοίρων στα σφάγια από τα οποία προήλθε το νωπό κρέας που πιστοποιήθηκε σύμφωνα με το υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού SUW (σημείο ΙΙ.2.3 Β).

«Δ»

:

εγγυήσεις σχετικά με τη σίτιση των ζώων με υπολείμματα τροφίμων σε εκμεταλλεύσεις από τις οποίες προήλθε το νωπό κρέας που πιστοποιήθηκε σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού POR (σημείο ΙΙ.2.3 δ).

«E»

:

εγγυήσεις σχετικά με τη δοκιμή για τη φυματίωση σε ζώα από τα οποία προήλθε το νωπό κρέας που πιστοποιήθηκε σύμφωνα με το υπόδειγμα πιστοποιητικού BOV (σημείο ΙΙ.2.4 δ).

«ΣΤ»

:

εγγυήσεις σχετικά με την ωρίμανση και την αφαίρεση των οστών του νωπού κρέατος, εκτός εντοσθίων, που πιστοποιήθηκε σύμφωνα με τα υποδείγματα πιστοποιητικών BOV (σημείο II.2.6), OVI (σημείο II.2.6), RUF (σημείο II.2.6) και RUW (σημείο II.2.7).

«Ζ»

:

εγγυήσεις σχετικά με τα σημεία 1, αποκλεισμός των εντοσθίων και του νωτιαίου μυελού, και 2, δοκιμές και καταγωγή ζώων του είδους των ελαφίδων σε σχέση με τη χρόνια εξασθενητική νόσο, όπως αναφέρεται στα υποδείγματα πιστοποιητικών RUF (σημείο ΙΙ.1.7) και RUW (σημείο ΙΙ.1.8).

«H»

:

συμπληρωματικές εγγυήσεις που απαιτούνται για τη Βραζιλία σχετικά με τις επαφές των ζώων, τα προγράμματα εμβολιασμού και την επιτήρηση των ζώων. Ωστόσο, δεδομένου ότι η Πολιτεία Santa Catarina της Βραζιλίας δεν διενεργεί εμβολιασμούς κατά του αφθώδους πυρετού, η αναφορά σε πρόγραμμα εμβολιασμού δεν ισχύει για το κρέας ζώων που κατάγονται από την εν λόγω Πολιτεία και σφάζονται στο έδαφός της.

*

Απαιτήσεις βάσει της Συμφωνίας μεταξύ της Ευρωπαϊκής Κοινότητας και της Ελβετικής Συνομοσπονδίας σχετικά με τις συναλλαγές γεωργικών προϊόντων (ΕΕ L 114 της 30.4.2002, σ. 132).

-

Δεν έχουν καθοριστεί πιστοποιητικά και οι εισαγωγές νωπού κρέατος απαγορεύονται (εκτός από τα είδη που αναφέρονται στη σειρά για ολόκληρη τη χώρα)

α)

Τα κτηνιατρικά πιστοποιητικά εκδίδονται από την τρίτη χώρα εξαγωγής με βάση τα υποδείγματα που ορίζονται στο Μέρος 2 των Παραρτημάτων I, ΙΙ και IV και στο Παράρτημα ΙΙΙ, σύμφωνα με τη μορφή του υποδείγματος που αντιστοιχεί στο σχετικό είδος των ζώντων ζώων/ κρέατος.

Περιλαμβάνουν, με την σειρά αρίθμησης που εμφανίζεται στο υπόδειγμα, τις βεβαιώσεις που απαιτούνται για κάθε τρίτη χώρα και, κατά περίπτωση, τις συμπληρωματικές εγγυήσεις που απαιτούνται για την τρίτη χώρα εξαγωγής ή τμήμα της.

Εάν το κράτος μέλος προορισμού επιβάλλει για τα εν λόγω ζώντα ζώα/νωπό κρέας πρόσθετες απαιτήσεις πιστοποίησης, οι βεβαιώσεις που πιστοποιούν ότι ικανοποιούνται αυτές οι απαιτήσεις ενσωματώνονται στο πρωτότυπο έντυπο του κτηνιατρικού πιστοποιητικού.

β)

Όταν το υπόδειγμα πιστοποιητικού αναφέρει ότι ορισμένες δηλώσεις πρέπει να τηρούνται ως ενδεδειγμένες, οι δηλώσεις που δεν είναι σχετικές μπορούν να διαγράφονται και να μονογράφονται και να σφραγίζονται από τον επίσημο κτηνίατρο ή να απαλείφονται εξ ολοκλήρου από το πιστοποιητικό.

γ)

Ένα χωριστό και ενιαίο πιστοποιητικό πρέπει να παρέχεται για ζώντα ζώα/νωπό κρέας τα οποία εξάγονται από περιοχή ή περιοχές της ίδιας χώρας εξαγωγής που αναγράφονται στις στήλες 2 και 3 του Μέρους 1 των Παραρτημάτων Ι, ΙΙ ή IV, τα οποία αποστέλλονται στον ίδιο προορισμό και μεταφέρονται με το ίδιο βαγόνι τραίνου, φορτηγό, αεροσκάφος ή πλοίο.

δ)

Το πρωτότυπο κάθε πιστοποιητικού αποτελείται από ένα μόνο φύλλο χαρτιού, διπλής όψης, ή, εάν απαιτείται περισσότερο κείμενο, συντάσσεται με τρόπο που όλα τα απαιτούμενα φύλλα χαρτιού να αποτελούν ενιαίο και αδιαίρετο σύνολο.

ε)

Το κτηνιατρικό πιστοποιητικό συντάσσεται σε τουλάχιστον μία από τις επίσημες γλώσσες του κράτους μέλους του σταθμού συνοριακού ελέγχου εισαγωγής της αποστολής στην Ένωση και του κράτους μέλους προορισμού. Εντούτοις, τα εν λόγω κράτη μέλη μπορούν να επιτρέψουν να συνταχθεί το πιστοποιητικό στην επίσημη γλώσσα ενός άλλου κράτους μέλους και να συνοδεύεται, εάν είναι απαραίτητο, από επίσημη μετάφραση.

στ)

Εάν, για λόγους ταυτοποίησης των μερών της παρτίδας (πίνακας στο τμήμα I.28 του υποδείγματος πιστοποιητικού), επισυνάπτονται πρόσθετα φύλλα στο πιστοποιητικό, τα φύλλα αυτά θεωρείται επίσης ότι αποτελούν μέρος του πρωτότυπου πιστοποιητικού και κάθε σελίδα φέρει την υπογραφή και σφραγίδα του επίσημου κτηνιάτρου ο οποίος εκδίδει το πιστοποιητικό.

ζ)

Όταν το πιστοποιητικό, συμπεριλαμβανομένων των πρόσθετων πινάκων που αναφέρονται στο στοιχείο στ), αποτελείται από περισσότερα του ενός φύλλα, κάθε σελίδα αριθμείται, (αριθμός σελίδας) από (συνολικός αριθμός σελίδων), στο κάτω μέρος της και στο επάνω μέρος της σελίδας αναγράφεται ο αριθμός αναφοράς του πιστοποιητικού που ορίστηκε από την αρμόδια αρχή.

η)

Το πρωτότυπο του πιστοποιητικού πρέπει να συμπληρώνεται και να υπογράφεται από επίσημο κτηνίατρο ή από άλλο εντεταλμένο επίσημο επιθεωρητή, όταν αυτό προβλέπεται στο υπόδειγμα κτηνιατρικού πιστοποιητικού. Στην περίπτωση των ζώντων ζώων, το πιστοποιητικό πρέπει να συμπληρώνεται και να υπογράφεται εντός 24 ωρών πριν από τη φόρτωση της αποστολής για εισαγωγή στην Ένωση. Οι αρμόδιες αρχές της τρίτης χώρας εξαγωγής εγγυώνται ότι τηρούνται κανόνες πιστοποίησης ισοδύναμοι με αυτούς που ορίζονται στην οδηγία 96/93/ΕΚ (1).

Το χρώμα της μελάνης της υπογραφής πρέπει να είναι διαφορετικό από το χρώμα των τυπογραφικών στοιχείων. Το ίδιο ισχύει και για τις σφραγίδες, με εξαίρεση τις ανάγλυφες σφραγίδες και τα υδατόσημα.

θ)

Ο αριθμός αναφοράς του πιστοποιητικού που αναγράφεται στα τμήματα I.2 και II.α. πρέπει να εκδίδεται από την αρμόδια αρχή.