++++

VERORDNUNG ( EWG ) NR . 1058/77 DER KOMMISSION

VOM 18 . MAI 1977

ÜBER MERKMALE VON OLIVENÖL UND EINIGEN OLIVENÖL ENTHALTENDEN ERZEUGNISSEN SOWIE ZUR ÄNDERUNG DES SCHEMAS DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS IN BEZUG AUF OLIVENÖL

DIE KOMMISSION DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN -

GESTÜTZT AUF DEN VERTRAG ZUR GRÜNDUNG DER EUROPÄISCHEN WIRTSCHAFTSGEMEINSCHAFT ,

GESTÜTZT AUF DIE VERORDNUNG NR . 136/66/EWG DES RATES VOM 22 . SEPTEMBER 1966 ÜBER DIE ERRICHTUNG EINER GEMEINSAMEN MARKTORGANISATION FÜR FETTE ( 1 ) , ZULETZT GEÄNDERT DURCH DIE VERORDNUNG ( EWG ) NR . 1707/73 ( 2 ) , INSBESONDERE AUF ARTIKEL 13 ABSATZ 4 UND ARTIKEL 18 ABSATZ 3 ,

GESTÜTZT AUF DIE VERORDNUNG NR . 162/66/EWG DES RATES VOM 27 . OKTOBER 1966 ÜBER DEN HANDEL MIT FETTEN ZWISCHEN DER GEMEINSCHAFT UND GRIECHENLAND ( 3 ) , INSBESONDERE AUF ARTIKEL 3 ABSATZ 4 UND ARTIKEL 9 .

GESTÜTZT AUF DIE VERORDNUNG ( EWG ) NR . 443/72 DES RATES VOM 29 . FEBRUAR 1972 ÜBER DIE ABSCHÖPFUNGEN AUF RAFFINIERTES OLIVENÖL UND EINIGE OLIVENÖLHALTIGE ERZEUGNISSE ( 4 ) , INSBESONDERE AUF ARTIKEL 8 ,

IN ERWAEGUNG NACHSTEHENDER GRÜNDE :

GEGENWÄRTIG WERDEN ALLE NATURREINEN OLIVENÖLE UNTER DER TARIFSTELLE 15.07 A II A ) DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS EINGEREIHT . DAHER WIRD FÜR DIESE ERZEUGNISSE EINE EINZIGE ABSCHÖPFUNG FESTGESETZT . UM DEN MIT DER EINFUHRABSCHÖPFUNG VERFOLGTEN ZWECK ZU ERREICHEN , IST DIE ABSCHÖPFUNG NACH DEN VERSCHIEDENEN SORTEN VON NATURREINEM ÖL FESTZUSETZEN . ZU DIESEM ZWECK SIND DIE OLIVENÖLE NACH IHREN PHYSIKALISCHEN UND CHEMISCHEN MERKMALEN ZU UNTERSCHEIDEN ; DAS SCHEMA DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS IST ENTSPRECHEND ANZUPASSEN .

DAS SICH AUS DER ANWENDUNG DER VERORDNUNG NR . 136/66/EWG ERGEBENDE ZOLLTARIFSCHEMA IST IM GEMEINSAMEN ZOLLTARIF IM ANHANG ZUR VERORDNUNG ( EWG ) NR . 950/68 ( 5 ) , ZULETZT GEÄNDERT DURCH DIE VERORDNUNG ( EWG ) NR . 874/77 ( 6 ) , WIEDERGEGEBEN .

UM EIN ORDNUNGSGEMÄSSES FUNKTIONIEREN DER ABSCHÖPFUNGSREGELUNG BEI DER EINFUHR VON OLIVENÖLTRESTER SICHERZUSTELLEN , MUSS EIN EINHEITLICHES VERFAHREN ZUR BESTIMMUNG DES ÖLGEHALTS DIESER ERZEUGNISSE VORGESEHEN WERDEN .

DIE VERORDNUNG ( EWG ) NR . 618/72 DER KOMMISSION VOM 29 . MÄRZ 1972 ÜBER DIE MERKMALE VON OLIVENÖL UND BESTIMMTEN , OLIVENÖL ENTHALTENDEN ERZEUGNISSEN ( 7 ) IST MEHRFACH GEÄNDERT WORDEN , INSBESONDERE DURCH DIE VERORDNUNG ( EWG ) NR . 3366/75 ( 8 ) . IN ANBETRACHT DER NEUERLICHEN ÄNDERUNGEN , DIE IN DIESE VERORDNUNG EINGEARBEITET WERDEN MÜSSEN , SCHIEN ES ANGEZEIGT , DIE VERORDNUNG AUFZUHEBEN UND SÄMTLICHE VORSCHRIFTEN IN EINER NEUEN VERORDNUNG ZUSAMMENZUFASSEN .

DIE IN DIESER VERORDNUNG VORGESEHENEN MASSNAHMEN ENTSPRECHEN DER STELLUNGNAHME DES VERWALTUNGSAUSSCHUSSES FÜR FETTE -

HAT FOLGENDE VERORDNUNG ERLASSEN :

ARTIKEL 1

( 1 ) ALS OLIVENÖL IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS GILT NUR DAS AUSSCHLIESSLICH AUS DER VERARBEITUNG VON OLIVEN GEWONNENE ÖL , NICHT JEDOCH WIEDERVERESTERTES OLIVENÖL UND MISCHUNGEN VON OLIVENÖL MIT ANDEREN ÖLEN .

DIE FESTSTELLUNG , OB ES SICH UM WIEDERVERESTERTES OLIVENÖL ODER MISCHUNGEN MIT ANDEREN ÖLEN HANDELT , ERFOLGT NACH DEN IN DEN ANHÄNGEN VII UND VIII BESCHRIEBENEN VERFAHREN .

( 2 ) ZU DEN TARIFSTELLEN 15.07 A I A ) , 15.07 A I B ) UND 15.07 A I C ) DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS GEHÖREN DIE ÖLE , WELCHE DIE IM ANHANG I PUNKTE 1 , 2 UND 3 AUFGEFÜHRTEN MERKMALE AUFWEISEN . DIE BESTIMMUNG DER OBENGENANNTEN MERKMALE ERFOLGT NACH DEN IN DEN ANHÄNGEN IV , V UND VI BESCHRIEBENEN VERFAHREN .

( 3 ) ZU DER TARIFSTELLE 15.07 A II A ) DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS GEHÖREN DIE ÖLE , DIE DIE IN ANHANG I PUNKT 4 BESCHRIEBENEN MERKMALE AUFWEISEN .

( 4 ) NICHT ZUR TARIFSTELLE 15.17 A DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS GEHÖREN DIE ERZEUGNISSE DER TARIFNUMMER 15.17 , DIE DIE IN ANHANG II BESCHRIEBENEN MERKMALE AUFWEISEN .

ARTIKEL 2

( 1 ) DER ÖLGEHALT VON OLIVENTRESTER UND ANDEREN RÜCKSTÄNDEN AUS DER OLIVENÖLGEWINNUNG DER TARIFSTELLE 23.04 A WIRD NACH DEM VERFAHREN IN ANHANG IX FESTGESTELLT .

( 2 ) DER OLIVENÖLGEHALT GEMÄSS ABSATZ 1 WIRD PROZENTUAL ZU SEINEM GEWICHT IN DER TROCKENMASSE AUSGEDRÜCKT .

ARTIKEL 3

DER GEMEINSAME ZOLLTARIF IM ANHANG ZUR VERORDNUNG ( EWG ) NR . 950/68 WIRD WIE FOLGT GEÄNDERT :

1 . IN DER ZUSÄTZLICHEN VORSCHRIFT NR . 1 ZU KAPITEL 15 WIRD " 15.07 " DURCH " TARIFSTELLE 15.07 D " ERSETZT .

2 . DIE ZUSÄTZLICHEN VORSCHRIFTEN NR . 2 , 3 UND 4 ZU KAPITEL 15 WERDEN DURCH DIE ZUSÄTZLICHEN VORSCHRIFTEN NR . 2 , 3 UND 4 IM ANHANG III ZU DIESER VERORDNUNG ERSETZT .

3 . DIE TARIFSTELLE 15.07 A ERHÄLT FOLGENDE FASSUNG : SIEHE ABL .

ARTIKEL 4

IN ALLEN GEMEINSCHAFTLICHEN RECHTSAKTEN , IN DENEN AUF DIE TARIFSTELLEN 15.07 A II ODER 15.07 A I A ) UND B ) DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS BEZUG GENOMMEN WIRD , SIND HIERUNTER JE NACH DEN MERKMALEN DES BETREFFENDEN ERZEUGNISSES DIE TARIFSTELLEN 15.07 A I A ) , B ) UND C ) BEZIEHUNGSWEISE 15.07 A II A ) UND B ) DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS ZU VERSTEHEN .

ARTIKEL 5

DIE VERORDNUNG ( EWG ) NR . 618/72 DER KOMMISSION VOM 29 . MÄRZ 1972 WIRD AUFGEHOBEN .

ARTIKEL 6

DIESE VERORDNUNG TRITT AM 43 . TAG NACH IHRER VERÖFFENTLICHUNG IM AMTSBLATT DER EUROPÄISCHEN GEMEINSCHAFTEN IN KRAFT .

DIESE VERORDNUNG IST IN ALLEN IHREN TEILEN VERBINDLICH UND GILT UNMITTELBAR IN JEDEM MITGLIEDSTAAT .

BRÜSSEL , DEN 18 . MAI 1977

FÜR DIE KOMMISSION

DER VIZEPRÄSIDENT

FINN GUNDELACH

( 1 ) ABL . NR . 172 VOM 30 . 9 . 1966 , S . 3025/66 .

( 2 ) ABL . NR . L 175 VOM 29 . 6 . 1973 , S . 5 .

( 3 ) ABL . NR . 197 VOM 29 . 10 . 1966 , S . 3393/66 .

( 4 ) ABL . NR . L 54 VOM 3 . 3 . 1972 , S . 3 .

( 5 ) ABL . NR . L 172 VOM 22 . 7 . 1968 , S . 1 .

( 6 ) ABL . NR . L 106 VOM 29 . 4 . 1977 , S . 20 .

( 7 ) ABL . NR . L 78 VOM 31 . 3 . 1972 , S . 5 .

( 8 ) ABL . NR . L 333 VOM 30 . 12 . 1975 , S . 13 .

ANHÄNGE

INHALTSANGABE

ANHANG I : *MERKMALE VON OLIVENÖL . *

ANHANG II : *ERZEUGNISSE DER TARIFSTELLE 15.17 A . *

ANHANG III : *ZUSÄTZLICHE VORSCHRIFTEN 2 , 3 UND 4 ZU KAPITEL 15 DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS . *

ANHANG IV : *I . BEHANDLUNG DER ÖLPROBE MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID . *

*II . NEUTRALISIEREN UND BLEICHEN DES OLIVENÖLS IM LABORATORIUM . *

ANHANG V : *NACHWEIS VON TRESTERÖL IN OLIVENÖL . *

*A . DIE SOGENANNTE BELLIER-METHODE . *

*B . DIE SOGENANNTE MODIFIZIERTE VIZERN-METHODE . *

ANHANG VI : *NACHWEIS VON SEIFE DURCH NACHWEIS DER ALKALITÄT . *

ANHANG VII : *NACHWEIS VON WIEDERVERESTERTEM ÖL . *

ANHANG VIII : *NACHWEIS VON ANDEREN ÖLEN IN OLIVENÖL DURCH ANALYSE DER STERINFRAKTION VON FETTSTOFFEN . *

ANHANG IX : *METHODE ZUR BESTIMMUNG DES OLIVENÖLGEHALTS DER TRESTER . *

ANHANG I

MERKMALE VON OLIVENÖL

1 . ALS " NATURREINES OLIVENÖL " IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A I A ) DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS GILT NATÜRLICHES OLIVENÖL , DAS NUR DURCH MECHANISCHE VERFAHREN , EINSCHLIESSLICH PRESSUNG , GEWONNEN WURDE - AUSGENOMMEN JEDE MISCHUNG MIT OLIVENÖL , DAS AUF ANDERE WEISE GEWONNEN WURDE - UND DAS FOLGENDE MERKMALE AUFWEIST :

A ) GEHALT AN FREIEN FETTSAUREN , BERECHNET ALS ÖLSÄURE , HÖCHSTENS 3 % ;

B ) EXTINKTIONSKÖFFIZIENT K270 ( EXTINKTION EINER AUF 100 ML AUFGEFÜLLTEN LÖSUNG VON 1 G ÖL IN ISOOKTAN ( 2.2,4-TRIMETHYLPENTAN ) BEI EINER SCHICHTDICKE VON 1 CM IM WELLENLÄNGENBEREICH VON 270 NM ) VON NICHT MEHR ALS 0,25 NACH BEHANDLUNG DER PLPROBE MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID NICHT MEHR ALS 0,11 ;

C ) SCHWANKUNG DES EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN IM BEREICH VON 270 NM HÖCHSTENS 0,01 .

DIESE SCHWANKUNG IST WIE FOLGT DEFINIERT :

DK = KM - 0,5 ( KM - 4 + KM + 4 ) .

KM BEZEICHNET DEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN FÜR DIE IM BEREICH VON 270 NM LIEGENDE WELLENLÄNGE , DIE IM MAXIMUM DER ABSORPTIONSKURVE LIEGT .

KM - 4 UND KM + 4 BEZEICHNEN DIE EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN FÜR EINE UM 4 NM NIEDRIGER BZW . HÖHER LIEGENDE WELLENLÄNGE ALS KM ;

D ) NEGATIVE REAKTIONEN BEI ANWENDUNG DER IN ANHANG V . BUCHSTABEN A UND B BESCHRIEBENEN BELLIER-METHODE UND DER MODIFIZIERTEN VIZERN-METHODE ;

E ) NACHWEIS VON SEIFE BEI ANWENDUNG DER IN ANHANG VI BESCHRIEBENEN METHODE NEGATIV .

2 . ALS " LAMPANTÖL " IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A I B ) DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS GILT UNABHÄNGIG VON SEINEM GEHALT AN FREIEN FETTSÄUREN OLIVENÖL , DAS FOLGENDE MERKMALE AUFWEIST :

A ) EXTINKTIONSKÖFFIZIENT K270 MEHR ALS 0,25 ; NACH BEHANDLUNG DER ÖLPROBE MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID NICHT MEHR ALS 0,11 .

ÖLE MIT EINEM GEHALT AN FREIEN FETTSÄUREN , BERECHNET ALS ÖLSÄURE , VON MEHR ALS 3 % KÖNNEN NACH BEHANDLUNG MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID EINEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN K270 VON MEHR ALS 0,11 HABEN . IN DIESEM FALL MUSS DAS ÖL , NACH NEUTRALISIEREN UND BLEICHEN IM LABORATORIUM UNTER ANWENDUNG DER IN ANHANG IV BESCHRIEBENEN METHODEN

- EINEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN K270 VON NICHT MEHR ALS 1,10 ,

- EINE SCHWANKUNG DES EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN IM BEREICH VON 270 NM VON MEHR ALS 0,01 , JEDOCH NICHT MEHR ALS 0,16

AUFWEISEN ;

B ) NEGATIVE REAKTIONEN BEI ANWENDUNG DER IN ANHANG V . BUCHSTABEN A UND B BESCHRIEBENEN BELLIER-METHODE UND DER MODIFIZIERTEN VIZERN-METHODE ;

C ) NACHWEIS VON SEITE BEI ANWENDUNG DER IN ANHANG VI BESCHRIEBENEN METHODE NEGATIV .

3 . ALS ÖL IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A I C ) DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS GILT ÖL , INSBESONDERE " OLIVENTRESTEROL " , DAS FOLGENDE MERKMALE AUFWEIST :

A ) GEHÄLT AN FREIEN FETTSAUREN , BERECHNET ALS ÖLSAURE , MEHR ALS 3 % ;

B ) POSITIVE REAKTION BEI ANWENDUNG DER IN ANHANG V . BUCHSTABE A BZW . B BESCHR EBENEN BELLIER-METHODE UND/ODER DER MODIFIZIERTEN VIZERN-METHODE ;

C ) NACHWEIS VON SEITE BEI ANWENDUNG DER IN ANHANG VI BESCHRIEBENEN METHODE NEGATIV .

4 . ALS OLIVENÖL IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A II A ) DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS GILT OLIVENÖL , DAS DURCH BEHANDLUNG VON ÖLEN DER TARIFSTELLEN 15.07 A I A ) ODER 15.07 A I B ) GEWONNEN WURDE , AUCH MIT NATURREINEM OLIVENÖL VERSCHNITTEN , UND DAS FOLGENDE MERKMALE AUFWEIST :

A ) GEHALT AN FREIEN FETTSAUREN , BERECHNET ALS ÖLSAURE , HOCHSTENS 3 % ;

B ) NACHWEIS VON SEIFE BEI ANWENDUNG DER IN ANHANG VI BESCHRIEBENEN METHODE POSITIV ODER

- EXTINKTORISKÖFFIZIENT K270 MEHR ALS 0,25 JEDOCH NICHT MEHR ALS 1,10 ; NACH BEHANDLUNG DER ÖLPROBE MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID MEHR ALS 0,11 ;

UND

- SCHWANKUNG DES EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN IM BEREICH VON 270 NM MEHR ALS 0,01 , JEDOCH NICHT MEHR ALS 0,16 .

DIESE SCHWANKUNG IST WIE FOLGT DEFINIERT : SIEHE ABL .

KM BEZEICHNET DEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN FÜR DIE IM BEREICH VON 270 NM LIEGENDE WELLENLÄNGE , DIE IM MAXIMUM DER ABSORPTIONSKURVE LIEGT .

KM - 4 UND KM + 4 BEZEICHNEN DIE EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN FÜR EINE UM 4 NM NIEDRIGER BZW . HÖHER LIEGENDE WELLENLÄNGE ALS KM ;

C ) NEGATIVE REAKTIONEN BEI ANWENDUNG DER IN ANHANG V . BUCHSTABEN A UND B BESCHRIEBENEN BELLIER-METHODE UND DER MODIFIZIERTEN VIZERN-METHODE .

ANHANG II

ERZEUGNISSE DER TARIFSTELLE 15.17 A

NICHT ZUR TARIFSTELLE 15.17 A GEHÖREN

A ) RÜCKSTÄNDE AUS DER VERARBEITUNG VON FETTSTOFFEN , DIE ÖL ENTHALTEN , DESSEN JODZAHL NACH DER METHODE WIJS OHNE KATALYSATOR KLEINER ALS 70 ODER GRÖSSER ALS 100 IST ;

B ) RÜCKSTÄNDE AUS DER VERARBEITUNG VON FETTSTOFFEN , DIE ÖL ENTHALTEN , DESSEN JODZAHL ZWISCHEN 70 UND 100 LIEGT , BEI DEM JEDOCH DIE FLÄCHE DES PEAKS , DER DEM RETENTIONSVOLUMEN DES B-SITOSTERINS ENTSPRICHT UND DER GEMÄSS ANHANG VIII BESTIMMT WURDE , WENIGER ALS 93 % DER GESAMTFLÄCHE DER STERINPEAKS BETRAEGT .

ANHANG III

ZUSÄTZLICHE VORSCHRIFTEN 2 , 3 UND 4 ZU KAPITEL 15 DES GEMEINSAMEN ZOLLTARIFS

2 . A . ALS OLIVENÖL IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A GILT NUR DAS AUSSCHLIESSLICH AUS DER VERARBEITUNG VON OLIVEN GEWONNENE ÖL , NICHT JEDOCH WIEDERVERESTERTES OLIVENÖL UND MISCHUNGEN VON OLIVENÖL MIT ANDEREN ÖLEN .

B . ALS NICHT BEHANDELTES OLIVENÖL GILT ÖL MIT DEN NACHSTEHEND UNTER I , II UND III BESCHRIEBENEN MERKMALEN .

I . ALS " NATURREINES OLIVENÖL " IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A I A ) GILT NATÜRLICHES OLIVENÖL , DAS NUR DURCH MECHANISCHE VERFAHREN , EINSCHLIESSLICH PRESSUNG , GEWONNEN WURDE - AUSGENOMMEN JEDE MISCHUNG MIT OLIVENÖL , DAS AUF ANDERE WEISE GEWONNEN WURDE - UND DAS FOLGENDE MERKMALE AUFWEIST :

A ) GEHALT AN FREIEN FETTSÄUREN , BERECHNET ALS ÖLSÄURE , HÖCHSTENS 3 % ;

B ) EXTINKTIONSKÖFFIZIENT K270 ( EXTINKTION EINER AUF 100 ML AUFGEFÜLLTEN LÖSUNG VON 1 G ÖL IN ISOOKTAN ( 2.2,4-TRIMETHYLPENTAN ) BEI EINER SCHICHTDICKE VON 1 CM IM WELLENIÄNGENBEREICH VON 270 NM ) VON NICHT MEHR ALS 0,25 , NACH BEHANDLUNG DER ÖLPROBE MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID NICHT MEHR ALS 0,11 ;

C ) SCHWANKUNG DES EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN IM BEREICH VON 270 NM HÖCHSTENS 0,01 .

DIESE SCHWANKUNG IST WIE FOLGT DEFINIERT : SIEHE ABL .

KM BEZEICHNET DEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN FÜR DIE IM BEREICH VON 270 NM LIEGENDE WELLENLÄNGE , DIE IM MAXIMUM DER ABSORPTIONSKURVE LIEGT .

KM - 4 UND KM + 4 BEZEICHNEN DIE EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN FÜR EINE UM 4 NM NIEDRIGER BZW . HÖHER LIEGENDE WELLENLÄNGE ALS KM ;

D ) NEGATIVE REAKTIONEN BEI ANWENDUNG DER BELLIER-METHODE UND DER MODIFIZIERTEN VIZERN-METHODE ;

E ) NACHWEIS VON SEIFE NEGATIV .

II . ALS " LAMPANTÖL " IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A I B ) GILT UNABHÄNGIG VON SEINEM GEHALT AN FREIEN FETTSÄUREN OLIVENÖL , DAS FOLGENDE MERKMALE AUFWEIST :

A ) EXTINKTIONSKÖFFIZIENT K270 MEHR ALS 0,25 ; NACH BEHANDLUNG DER ÖLPROBE MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID NICHT MEHR ALS 0,11 .

ÖLE MIT EINEM GEHALT AN FREIEN FETTSÄUREN , BERECHNET ALS ÖLSÄURE , VON MEHR ALS 3 % KÖNNEN NACH BEHANDLUNG MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID EINEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN K270 VON MEHR ALS 0,11 HABEN . IN DIESEM FALL MUSS DAS ÖL , NACH NEUTRALISIEREN UND BLEICHEN IM LABORATORIUM ,

- EINEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN K270 VON NICHT MEHR ALS 1,10 ,

- EINE SCHWANKUNG DES EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN IM BEREICH VON 270 NM VON MEHR ALS 0,01 , JEDOCH NICHT MEHR ALS 0,16 ,

AUFWEISEN ;

B ) NEGATIVE REAKTIONEN BEI ANWENDUNG DER BELLIER-METHODE UND DER MODIFIZIERTEN VIZERN-METHODE ;

C ) NACHWEIS VON SEIFE NEGATIV .

III . ALS ÖL IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A I C ) GILT ÖL , INSBESONDERE " TRESTERÖL " , DAS FOLGENDE MERKMALE AUFWEIST :

A ) GEHALT AN FREIEN FETTSÄUREN , BERECHNET ALS ÖLSÄURE , MEHR ALS 3 % ;

B ) POSITIVE REAKTION BEI ANWENDUNG DER BELLIER-METHODE UND/ODER DER MODIFZIERTEN VIZERN-METHODE ;

C ) NACHWEIS VON SEIFE NEGATIV .

C . ALS OLIVENÖL IM SINNE DER TARIFSTELLE 15.07 A II A ) GILT OLIVENÖL , DAS DURCH BEHANDLUNG VON ÖLEN DER TARIFSTELLE 15.07 A I A ) ODER 15.07 A I B ) GEWONNEN WURDE , AUCH MIT NATURREINEM OLIVENÖL VERSCHNITTEN , UND DAS FOLGENDE MERKMALE AUFWEIST :

A ) GEHALT AN FREIEN FETTSÄUREN , BERECHNET ALS ÖLSÄURE , HÖCHSTENS 3 % ;

B ) NACHWEIS VON SEIFE POSITIV

ODER

- EXTINKTIONSKÖFFIZIENT K270 MEHR ALS 0,25 , JEDOCH NICHT MEHR ALS 1,10 ; NACH BEHANDLUNG DER ÖLPROBE MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID MEHR ALS 0,11 ,

UND

- SCHWANKUNG DES EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN IM BEREICH VON 270 NM MEHR ALS 0,01 , JEDOCH NICHT MEHR ALS 0,16 .

DIESE SCHWANKUNG IST WIE FOLGT DEFINIERT : SIEHE ABL .

KM BEZEICHNET DEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN FÜR DIE IM BEREICH VON 270 NM LIEGENDE WELLENLÄNGE , DIE IM MAXIMUM DER ABSORPTIONSKURVE LIEGT .

KM - 4 UND KM + 4 BEZEICHNEN DIE EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN FÜR EINE UM 4 NM NIEDRIGER BZW . HÖHER LIEGENDE WELLENLÄNGE ALS KM ;

C ) NEGATIVE REAKTIONEN BEI ANWENDUNG DER BELLIER-METHODE UND DER MODIFIZIERTEN VIZERN-METHODE .

3 . NICHT ZUR TARIFSTELLE 15.17 A GEHÖREN :

A ) RÜCKSTÄNDE AUS DER VERARBEITUNG VON FETTSTOFFEN , DIE ÖL ENTHALTEN , DESSEN JODZAHL NACH DER METHODE WIJS OHNE KATALYSATOR KLEINER ALS 70 ODER GRÖSSER ALS 100 IST ;

B ) RÜCKSTÄNDE AUS DER VERARBEITUNG VON FETTSTOFFEN , DIE ÖL ENTHALTEN , DESSEN JODZAHL ZWISCHEN 70 UND 100 LIEGT , BEI DEM JEDOCH DIE FLÄCHE DES PEAKS , DER DEM RETENTIONSVOLUMEN DES BETA-SITOSTERINS ENTSPRICHT UND DER GEMÄSS ANHANG VIII DER IN DER NACHSTEHENDEN ZUSÄTZLICHEN VORSCHRIFT 4 GENANNTEN VERORDNUNG BESTIMMT WORDEN IST , WENIGER ALS 93 % DER GESAMTFLÄCHE DES STERINPEAKS AUSMACHT .

4 . FÜR DIE BESTIMMUNG DER MERKMALE DER OBENGENANNTEN WAREN SIND DIE IN DEN ANHÄNGEN DER VERORDNUNG ( EWG ) NR . 1058/77 BESCHRIEBENEN ANALYSEMETHODEN ANZUWENDEN .

ANHANG IV

1 . BEHANDLUNG DER ÖLPROBE MIT AKTIVIERTEM ALUMINIUMOXID

1 . MAN GIBT 30 G BESISCHES ALUMINIUMOXID , DAS NACH DEM IN ABSATZ 2 BESCHRIEBENEN VERFAHREN HERGESTELLT WURDE , IN EINE CHROMATOGRAPHISCHE SÄULE VON ETWA 35 MM DURCHMESSER UND 450 MM LÄNGE MIT EINEM ABFLUSSROHR VON ETWA 10 MM DURCHMESSER .

DAS ALUMINIUMOXID WIRD DURCH MEHRMALIGES LEICHTES AUFSTOSSEN DER SÄULE AUF EINER HOLZUNTERLAGE FEST GESCHICHTET , WOBEI DIE SÄULE VERTIKAL GEHALTEN WIRD . IN DIE SO VORBEREITETE SÄULE GIBT MAN 100 ML EINER LÖSUNG VON 10 % ÖL IN HEXAN . DAS ELUAT WIRD AUFGEFANGEN UND DAS LÖSUNGSMITTEL IM VAKUUM BEI EINER TEMPERATUR UNTERHALB 25 * C VERDAMPFT .

VON DEM SO GEWONNENEN ÖL WIRD UNVERZUEGLICH DER EXTINKTIONSKÖFFIZIENT BEI 270 NM BESTIMMT .

2 . MAN GEWINNT BASISCHES ALUMINIUMOXID MIT DER BROCKMANNSCHEN AKTIVITÄTSSTUFE I ( 0 % WASSER ) , INDEM MAN BASISCHES ALUMINIUMOXID ( FÜR CHROMATOGRAPHIE ) MIT EINER KORNGRÖSSE ZWISCHEN 30 MM UND 130 MM ( MITTELWERT 80 MM ) 3 STUNDEN BEI 380 - 400 * C ERHITZT . ZU 100 G DIESES PRODUKTS GIBT MAN 5 ML DESTILLIERTES WASSER , RÜHRT KRÄFTIG UM UND LÄSST ES ÜBER NACHT IN EINEM GUT VERSCHLOSSENEN GEFÄSS STEHEN . MAN ERHÄLT SO BASISCHES ALUMINIUMOXID MIT EINER BROCKMANNSCHEN AKTIVITÄTSSTUFE ZWISCHEN II UND III .

PRÜFUNG DER AKTIVITÄT DES ALUMINIUMOXIDS

MAN GIBT 30 G BASISCHES ALUMINIUMOXID ( DAS NACH DEM VORSTEHEND BESCHRIEBENEN VERFAHREN HERGESTELLT WURDE ) IN EINE CHROMATOGRAPHISCHE SÄULE VON ETWA 35 MM DURCHMESSER UND 450 MM LÄNGE ; DURCH DIESE SÄULE LÄSST , MAN UNTER DEN IN DER METHODE ANGEGEBENEN BEDINGUNGEN EIN GEMISCH AUS 95 % " NATURREINEM OLIVENÖL " UND 5 % ERDNUSSÖL LAUFEN . DAS " NATURREINE OLIVENÖL " SOLL EINEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN K270 VON WENIGER ALS 0,18 UND DAS BEIM RAFFINIEREN MIT BLEICHERDE BEHANDELTE ERDNUSSÖL EINEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN VON NICHT WENIGER ALS 4 AUFWEISEN . ERGIBT DIESE MISCHUNG EINEN EXTINKTIONSKÖFFIZIENTEN VON MEHR ALS 0,11 , SO IST DAS ALUMINIUMOXID VERWENDBAR . ERFOLGT MIT DIESEM ALUMINIUMOXID KEINE ELUTION DER KONJUGIERTEN TRIENE , SO MUSS STÄRKER HYDRATISIERTES ALUMINIUMOXID VERWENDET WERDEN , NACHDEM ÜBERPRÜFT WURDE , OB ES DEN ANFORDERUNGEN DES TESTS GENÜGT .

II . NEUTRALISIEREN UND BLEICHEN DES OLIVENÖLS IM LABORATORIUM

A . NEUTRALISIEREN DES ÖLS

1 . GERÄTE

- HOHES 300-ML-BECHERGLAS ,

- LABORZENTRIFUGE MIT 100-ML-GLÄSERN ,

- 250-ML-BECHERGLAS ,

- 100-ML-RUNDKOLBEN ,

- 1-LITER-SCHEIDETRICHTER .

2 . REAGENZIEN

- 12 %IGE WÄSSRIGE NATRIUMHYDROXIDLÖSUNG ,

- 1 %IGE LÖSUNG VON PHENOLPHTHALEIN IN ÄTHYLALKOHOL ,

- HEXAN ANALYSENREIN ,

- ISOPROPYLALKOHOL , ANALYSENREIN .

3 . VERFAHREN

A ) ÖLE MIT EINEM GEHALT AN FREIEN FETTSÄUREN , BERECHNET ALS ÖLSÄURE , VON WENIGER ALS 30 %

MAN GIBT 50 G ROHES ÖL IN EIN HOHES 300-ML-BECHERGLAS UND ERWÄRMT IM WASSERBAD AUF 65 * C . UNTER LANGSAMEM RÜHREN GIBT MAN - MIT EINEM ÜBERSCHUSS VON 5 % - SO VIEL 12 %IGE NATRIUMHYDROXIDLÖSUNG HINZU , WIE DEM GEHALT DES ÖLS AN FREIEN FETTSÄUREN ENTSPRICHT . UNTER AUFRECHTERHALTUNG DER TEMPERATUR VON 65 * C WIRD 5 MINUTEN WEITERGERÜHRT .

DAS GANZE WIRD IN 100-ML-ZENTRIFUGENGLÄSER ÜBERFÜHRT UND DIE SEIFENMASSE DURCH ZENTRIFUGIEREN ABGETRENNT . DAS DEKANTIERTE ÖL WIRD IN EIN 250-ML-BECHERGLAS GEGEBEN UND MIT 50 BIS 60 ML KOCHENDEM DESTILLIERTEM WASSER GEWASCHEN . DIE WÄSSRIGE PHASE WIRD MIT HILFE EINES SAUGHEBERS ENTFERNT . DIE WASCHUNGEN WERDEN WIEDERHOLT , BIS AUCH SPUREN VON SEIFENRESTEN ENTFERNT SIND ( VERSCHWINDEN DER ROSAFÄRBUNG DES PHENOLPHTHALEINS ) .

ZUR ENTFERNUNG DER GERINGEN RESTWASSERMENGEN WIRD DAS ÖL ZENTRIFUGIERT .

B ) ÖLE MIT EINEM GEHALT AN FREIEN FETTSÄUREN , BERECHNET ALS ÖLSÄURE , VON MEHR ALS 30 %

IN EINEN 1-LITER-SCHEIDERTRICHTER GIBT MAN 50 G ROHES ÖL , 200 ML HEXAN , 100 ML ISOPROPYLALKOHOL UND - MIT EINEM ÜBERSCHUSS VON 0,3 % - SO VIEL 12 %IGE NATRIUMHYDROXIDLÖSUNG , WIE DEM GEHALT DES ÖLS AN FREIEN FETTSÄUREN ENTSPRICHT .

EINE MINUTE LANG KRÄFTIG RÜHREN , 100 ML DESTILLIERTES WASSER HINZUGEBEN , ERNEUT RÜHREN UND STEHEN LASSEN . NACH DER PHASENTRENNUNG WIRD DIE UNTERE SEIFENHALTIGE SCHICHT ABGELASSEN . IN VIELEN FÄLLEN BILDET SICH ZWISCHEN DEN BEIDEN PHASEN ( ÖLHALTIGE OBERE UND WÄSSRIGE UNTERE SCHICHT ) EINE ZWISCHENSCHICHT , DIE SCHLEIMSTOFFE UND UNLÖSLICHE SUBSTANZEN ENTHÄLT UND DIE EBENFALLS ENTFERNT WERDEN MUSS .

ANSCHLIESSEND WIRD DIE HEXANLÖSUNG DES NEUTRALEN ÖLS MIT PORTIONEN VON JEWEILS 50 BIS 60 ML EINER LOSUNG AUS ISOPROPYLALKOHOL UND DESTILLIERTEM WASSER IM VERHÄLTNIS 1 : 1 ( VOLUMENTEILE ) BIS ZUM VERSCHWINDEN DER ROSAFÄRBUNG DES PHENOLPHTHALEINS GEWASCHEN . DARAUF WIRD DAS HEXAN DURCH ABDESTILLIEREN IM VAKUUM ( Z . B . MIT HILFE EINES ROTATIONSVERDAMPFERS ) VOLLSTÄNDIG ENTFERNT .

B . BLEICHEN DES NEUTRALISIERTEN ÖLS

1 . GERÄTE

- 250-ML-DREIHALSKOLBEN MIT SCHLIFFANSÄTZEN FÜR :

A ) THERMOMETER MIT UNTERTEILUNG IN 1 * C FÜR MESSUNGEN BIS 90 * C ,

B ) MECHANISCHES RÜHRWERK , 250 BIS 300 UMDREHUNGEN/MIN . , GEEIGNET ZUM BETRIEB IM VAKUUM ,

C ) ANSCHLUSS FÜR DIE VAKUUMPUMPE ;

- VAKUUMPUMPE FÜR 15 BIS 30 MILLIBAR ENDVAKUUM , MIT MANOMETER .

2 . VERFAHREN

IN DEN DREIHALSKOLBEN WERDEN ETWA 100 G NEUTRALISIERTES ÖL EINGEWOGEN . THERMOMETER UND RÜHRWERK EINFÜHREN ; VAKUUMPUMPE ANSCHLIESSEN UND AUF 90 * C UNTER UMRÜHREN ERWÄRMEN ; DIE TEMPERATUR WIRD UNTER STÄNDIGEM RÜHREN SO LANGE AUFRECHTERHALTEN , BIS DAS ZU UNTERSUCHENDE ÖL VOLLSTÄNDIG VOM WASSER BEFREIT IST ( ETWA 30 MINUTEN ) .

DANACH WIRD DAS VAKUUM UNTERBROCHEN UND 2 BIS 3 G AKTIVIERTE BLEICHERDE ZUGEGEBEN .

DANN WIRD WIEDER EIN VAKUUM MIT EINEM DRUCK VON 15 BIS 30 MILLIBAR HERGESTELLT , WOBEI ÜBER EINE ZEIT VON 30 MINUTEN DIE TEMPERATUR AUF 90 * C UND DIE DREHZAHL DES RÜHRWERKS BEI ETWA 250 UMDREHUNGEN/MIN . GEHALTEN WERDEN . DANACH WIRD IN EINEM THERMOSTATISCH REGULIERTEN TROCKENSCHRANK WARM FILTRIERT ( 50 - 60 C ) .

ANHANG V

NACHWEIS VON TRESTERÖL IN OLIVENÖL

A . DIE SOGENANNTE BELLIER-METHODE

1 . GERÄTE

- 100-ML-RUNDKOLBEN MIT RÜCKFLUSSKÜHLER ,

- 5-ML-MESSPIPETTE MIT 0,1 ML GRADUIERUNG ,

- HEIZVORRICHTUNG , DIE EIN ERWÄRMEN DES KOLBENS AUF ETWA 80 * C ERMÖGLICHT ,

- THERMOMETER VON 15 BIS 60 * C .

2 . REAGENZIEN

- WÄSSRIG-ALKOHOLISCHE KALILAUGE ( 42,5 G KOH IN 72 ML DESTILLIERTEM WASSER AUFLÖSEN UND MIT 95 VOL.%IGEM ÄTHYLALKOHOL AUF 500 ML AUFFÜLLEN ) ,

- 70 VOL.%IGER ÄTHYLALKOHOL ,

- WÄSSRIGE LÖSUNG VON ESSIGSÄURE 1 + 2 ( VOLUMENTEILE ) ; 1,5 ML MÜSSEN GENAU 5 ML DER WÄSSRIG-ALKOHOLISCHEN KALILAUGE UNTER VERWENDUNG VON PHENOLPHTHALEIN ALS INDIKATOR NEUTRALISIEREN .

3 . VORBEREITUNG DER PROBE

DAS ÖL WIRD DURCH DEKANTIEREN UND FILTRIEREN DURCH EIN PAPIERFILTER VOM WASSER BEFREIT BEI EINER TEMPERATUR , DIE GERINGFÜGIG ÜBER DEM SCHMELZPUNKT EINIGER FESTER BESTANDTEILE LIEGT , DIE SICH MÖGLICHERWEISE AUS DEM FLÜSSIGEN ÖL ABGESETZT HABEN .

4 . ARBEITSVORSCHRIFT

IN DEN KOLBEN ETWA 1 ML DES NACH ABSATZ 3 VORBEREITETEN ÖLS GEBEN . 5 ML WÄSSRIG-ALKOHOLISCHE KALILAUGE HINZUFÜGEN . DEN RÜCKFLUSSKÜHLER ANSCHLIESSEN UND 10 MINUTEN UNTER GELEGENTLICHEM SCHÜTTELN KOCHEN . AUF RAUMTEMPERATUR ABKÜHLEN LASSEN . 1,5 ML DER WÄSSRIGEN ESSIGSÄURELÖSUNG UND 50 ML DES ZUVOR AUF 50 * C ERWÄRMTEN ÄTHYLALKOHOLS ZUGEBEN . DURCH UMRÜHREN MISCHEN , DAS THERMOMETER EINFÜHREN UND ABKÜHLEN LASSEN , WOBEI DAS AUSSEHEN DER LÖSUNG BEOBACHTET WIRD , SOBALD SIE DIE TEMPERATUR 45 * C ERREICHT HAT . BILDET SICH BEI MEHR ALS 40 * C EIN FLOCKIGER NIEDERSCHLAG , SO IST DIE REAKTION POSITIV . BILDET SICH KEIN FLOCKIGER NIEDERSCHLAG , SO WIRD DIE LÖSUNG BEI RAUMTEMPERATUR , D . H . ZWISCHEN 20 UND 22 * C , MINDESTENS 24 STUNDEN , ERFORDERLICHENFALLS 48 STUNDEN , STEHENGELASSEN UND ERNEUT BEOBACHTET . BILDET SICH EIN IN DER MITTE DER LÖSUNG SUSPENDIERTER FLOCKIGER NIEDERSCHLAG , SO IST DIE REAKTION EBENFALLS POSITIV .

FORMULIERUNG DER ERGEBNISSE

NACHWEIS VON TRESTERÖL ( BELLIER-METHODE ) : POSITIV ODER NEGATIV .

B . DIE SOGENANNTE MODIFIZIERTE VIZERN-METHODE

DAS UNVERSEIFBARE DES ZU ANALYSIERENDEN ÖLS WIRD ISOLIERT UND SEIN VERHALTEN IN EINER LÖSUNG VON 85 VOL.%IGEM ALKOHOL UNTER BESTIMMTEN BEDINGUNGEN GEPRÜFT .

1 . GERÄTE

- 300-ML-KOLBEN AUS ALKALIRESISTENTEM GLAS MIT RÜCKFLUSSKÜHLER ,

- 500-ML - ODER 1 000-ML-SCHEIDETRICHTER ,

- 300-ML - UND 250-ML-KOLBEN ,

- REAGENZGLAS .

2 . REAGENZIEN

- 2N ALKOHOLISCHE KALIUMHYDROXIDLÖSUNG ,

- PETROLATHER ,

- 50%IGER ATHYLALKOHOL ,

- 96 VOL.%IGER ALKOHOL ,

- 10%IGES WASSERSTOFFPEROXID ,

- 85 VOL.%IGER ALKOHOL .

3 . ARBEITSVORSCHRIFT

MAN WIEGT ETWA 5 G DER ZU ANALYSIERENDEN PROBE IN EINEN 300-ML-KOLBEN , 50 ML 2N ALKOHOLISCHE KALIUMHYDROXIDLOSUNG WERDEN ZUGEGEBEN . DER RÜCKFLUSSKÜHLER WIRD AUFGESETZT UND ES WIRD VORSICHTIG ZUM SIEDEN ERHITZT . NACH EINSTÜNDIGER ERHITZUNG WIRD UMGERÜHRT , AUF 30 - 35 * C ABGEKUHLT UND UNTER VERWENDUNG VON 50 ML WASSER IN EINEN SCHEIDETRICHTER ÜBERFÜHRT .

DER KOLBEN WIRD SORGFÄLTIG MIT 50 ML PETROLATHER AUSGESPÜLT UND DIESER VORGANG MEHRMALS WIEDERHOLT . DER PETROLATHER WIRD IN DEN SCHEIDETRICHTER GEGEBEN . DER INHALT WIRD EINE MINUTE KRAFTIG GESCHÜTTELT . NACH DEM ABSETZEN WIRD DIE WÄSSRIGE PHASE ABGETRENNT , INDEMSIE IN EINEN ZWEITEN SCHEIDETRICHTER UBERFÜHRT WIRD . MAN GIBT NOCHMALS 50 ML PETROLÄTHER ZU , SCHÜTTELT KRÄFTIG ETWAS MEHR ALS EINE MINUTE UND LASST ABSETZEN . DIE WASSRIGE PHASE WIRD IN EINEN DRITTEN SCHEIDETRICHTER ÜBERFÜHRT , IN DEN MAN WIEDER 50 ML PETROLÄTHER GIBT . DANACH WIRD KRÄFTIG GESCHÜTTELT UND MAN LASST ABSETZEN .

DIE PETROLATHEREXTRAKTE DER EINZELNEN EXTRAKTIONEN DES UNVERSEIFBAREN WERDEN IN EINEM SCHEIDETRICHTER GESAMMELT UND WENIGSTENS DREI MAL MIT 50%IGEM ALKOHOL ( JEWEILS 50 ML ) GEWASCHEN , BIS DAS WASCHWASSER GEGEN PHENOLPHTHALEIN NICHT MEHR ALKALISCH REAGIERT .

DIE LÖSUNG DES UNVERSEIFBAREN WIRD IN EINEN 300-ML-KOLBEN FILTRIERT , DAS FILTER MIT PETROLÄTHER GEWASCHEN UND DAS LOSUNGSMITTEL ABDESTILLIERT . ES WERDEN 10 ML 96%IGEN ALKOHOLS ZUGEGEBEN UND NACH VORSICHTIGEM ERWÄRMEN ( AUF ETWA 40 * C ) IN EIN 100-ML-KÖLBCHEN FILTRIERT . DER 300-ML-KOLBEN WIRD MIT 10 ML 96%IGEM ALKOHOL GEWASCHEN , ANSCHLIESSEND WIRD IN DEN ZWEITEN KOLBEN FILTRIERT .

IN DEN 100-ML-KOLBEN , DER DIE ALKOHOLISCHEN EXTRAKTE DES UNVERSEIFBAREN ENTHÄLT , WERDEN 5 ML 10%IGES WASSERSTOFFPEROXID GEGEBEN ; AUF DEM WASSERBAD WIRD BIS ZUR TROCKENE EINGEDAMPFT . ES WERDEN NOCHMALS 20 ML 96%IGEN ALKOHOLS UND 5 ML WASSERSTOFFPEROXID ZUGEGEBEN , ES WIRD WIEDER ZUR TRÖCKENE EINGEDAMPFT .

DER KOLBEN WIRD VOM WASSERBAD GENOMMEN UND 20 ML 85%IGEN ALKOHOLS ZUGEGEBEN . ES WIRD VORSICHTIG AUF DEM WASSERBAD ERHITZT , WOBEI ALKOHOLVERLUSTE SORGFÄLTIG VERMIEDEN WERDEN MÜSSEN , UM DIE KONZENTRATION NICHT ZU VERRINGERN . DAS IST SEHR WICHTIG UND SOLLTE NICHT AUSSER ACHT GELASSEN WERDEN .

MAN FILTRIERT DURCH EIN PAPIERFILTER IN EIN REAGENZGLAS , LÄSST ABKÜHLEN UND PRÜFT DAS VERHALTEN DER LÖSUNG NACH EINER STUNDE UND NACH 4 STUNDEN . IST DIE LÖSUNG NACH EINER STUNDE VÖLLIG TRANSPARENT , SO IST DAS ANALYSENERGEBNIS NEGATIV , DAS HEISST , DASS DAS ÖL KEIN TRESTERÖL ENTHÄLT .

WENN DIE LÖSUNG NACH EINER STUNDE TRÜBE IST , WIRD NACH 4 STUNDEN ERNEUT BEOBACHTET .

WENN DIE LÖSUNG NACH 4 STUNDEN NOCH TRÜBE IST , ABER KEINE FLÖCKEHEN VORHANDEN SIND , IST DAS ANALYSENERGEBNIS WIEDER NEGATIV . WENN ANDERERSEITS DIE BILDUNG VON FLÖCKEHEN BEOBACHTET WIRD , SO IST DAS ANALYSENERGEBNIS POSITIV UND TRESTERÖL VORHANDEN .

FORMULIERUNG DER ERGEBNISSE

NACHWEIS VON TRESTEROL ( MODIFIZIERTE VIZERN-METHODE ) ; POSITIV ODER NEGATIV .

ANMERKUNG :

OLIVENÖLE ERGEBEN WAHREND DES TESTS EINE TRANSPARENTE ODER HÖCHSTENS SCHWACH OPALESZIERENDE LÖSUNG . TRESTERÖLE ODER MISCHUNGEN VON TRESTERÖLEN ZEIGEN CHARAKTERISTISCHE FLÖCKCHEN , DIE WIE KLEINE WÖLKEHEN SUSPENDIERT BLEIBEN UND DIE SICH ERST NACH MEHREREN STUNDEN RUHIGEN STEHENS ABSETZEN .

ANHANG VI

NACHWEIS VON SEIFE DURCH NACHWEIS DER ALKALITÄT

PRINZIP DER METHODE

NACHWEIS ALKALISCHER SEIFEN DURCH BROMPHENOLBLAU .

REAGENZIEN

- 0,1%IGE LÖSUNG VON BROMPHENOLBLAU IN 96 VOL.%IGEM ALKOHOL ,

- ACETON , FRISCH DESTILLIERT , DEM 2 VOL .% WASSER ZUGESETZT WURDEN .

DAS 2 % WASSER ENTHALTENDE ACETON SOLL NACH ZUSATZ VON EINIGEN TROPFEN DER BROMPHENOLBLAU-LÖSUNG EINE GELBLICHE ODER GELB-GRÜNLICHE FARBE BESITZEN .

GERÄTE

REAGENZGLAS 150 MM MAL 15 MM .

ARBEITSVORSCHRIFT

MAN GIBT IN DAS REAGENZGLAS 10 ML ACETON UND EINEN TROPFEN BROMPHENOLBLAU-LÖSUNG ; DIE LÖSUNG MUSS GELBLICH WERDEN . WENN NICHT , SIND REAGENZGLAS UND STOPFEN MIT ACETON ZU SPÜLEN , BIS DIE BLAUFÄRBUNG VERSCHWINDET . ES WERDEN 10 G ÖL IN DAS REAGENZGLAS GEGEBEN , DAS DANN MIT EINEM SAUBEREN STOPFEN VERSCHLOSSEN WIRD . MAN SCHÜTTELT UND LÄSST STEHEN . EIN FARBUMSCHLAG DER OBEREN ACETONSCHICHT NACH BLAU ZEIGT DAS VORHANDENSEIN VON SEIFE AN .

FORMULIERUNG DER ERGEBNISSE

DIE ERGEBNISSE WERDEN ALS POSITIV ODER ALS NEGATIV BEZEICHNET .

ANHANG VII

NACHWEIS VON WIEDERVERESTERTEM ÖL

ZWECK DER METHODE IST DIE BESTIMMUNG DER ZUSAMMENSETZUNG DER FRAKTION DER FETTSÄUREN , DIE IN ÖLEN UND FETTEN IN 2-STELLUNG ( B-STELLUNG ODER INNERER STELLUNG ) DES GLYCERINS VERESTERT SIND .

WIEDERVERESTERTE OLIVENÖLE ENTHALTEN IN B-STELLUNG MEHR PALMITINSÄURE ALS OLIVENÖLE , DIE NICHT WIEDERVERESTERT WURDEN .

PRINZIP :

DIE METHODE BERUHT AUF DER PARTIELLEN UND SELEKTIVEN HYDROLYSE DER TRIGLYCERIDE DURCH PANKREASLIPASE , WOBEI VORWIEGEND 2-MONOGLYCERIDE ENTSTEHEN . DURCH DIE HYDROLYSE ENTSTEHT EIN GEMISCH , DAS NEBEN NICHTHYDROLYSIERTEN TRIGLYCERIDEN NOCH DIGLYCERIDE , 2-MONOGLYCERIDE UND FREIE FETTSÄUREN ENTHÄLT . DAS GEMISCH WIRD MIT HILFE DER DÜNNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE FRAKTIONIERT UND DIE MONOGLYCERIDE WERDEN ISOLIERT . DIE MONOGLYCERIDE WERDEN MIT METHANOL UMGEESTERT UND DIE GEWONNENEN METHYLESTER GASCHROMATOGRAPHISCH ANALYSIERT .

WENN DER PALMITINSÄUREGEHALT IN 2-STELLUNG DER TRIGLYCERIDE 2 % ÜBERSCHREITET , MUSS MAN DAVON AUSGEHEN , DASS DEM ANALYSIERTEN ERZEUGNIS WIEDERVERESTERTES ÖL ZUGESETZT WURDE .

1 . GERÄTE

- 500-ML-SCHEIDETRICHTER ,

- CHROMATOGRAPHISCHE SÄULE AUS GLAS , INNERER DURCHMESSER 13 MM , LÄNGE 400 MM , AUSGESTATTET MIT HAHN UND GLÄSERNEM FRITTENBODEN ,

- 250-ML-WEITHALSKOLBEN ,

- 100-ML-KOLBEN ,

- 10-ML-ZENTRIFUGENRÖHRCHEN , MIT SCHLIFFSTOPFEN ,

- 1-ML-INJEKTIONSSPRITZE , MIT FEINER KANÜLE ,

- 25-ML-KOLBEN MIT LUFTKÜHLER VON ETWA 1 METER LÄNGE UND SCHLIFFANSATZ ,

- 50-ML-BECHERGLAS ,

- 5-ML-BÜRETTE MIT 1/20 ML GRADUIERUNG ,

- BESCHICHTUNGSGERÄT FÜR DIE DÜNNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE MIT 20 MAL 20 CM GLASPLATTEN ,

- MIKROSPRITZE ZUR ABGABE VOM 3-4 ML-TROPFEN ,

- ROTATIONSVERDAMPFER ,

- TROCKENSCHRANK , EINSTELLBAR AUF 103 * C MEHR ODER WENIGER 2 * C ,

- THERMOSTAT , EINSTELLBAR AUF TEMPERATUREN ZWISCHEN 30 UND 45 * C MEHR ODER WENIGER 0,5 * C ,

- ELEKTRISCHES SCHÜTTEL - UND VIBRIERGERÄT ZUM KRÄFTIGEN SCHÜTTELN DER ZENTRIFUGENRÖHRCHEN ,

- SPRÜHER FÜR DIE DÜNNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE ,

- UV-LAMPE ZUR BETRACHTUNG DER DÜNNSCHICHTPLATTEN ,

- LABORRÜHRWERK ZUM ZERKLEINERN UND MISCHEN VON HETEROGENEM MATERIAL ,

- PH-METER ,

- PROPELLERRÜHRER ,

- STOPPUHR .

2 . REAGENZIEN

- 12%IGE ( GEW./VOL . ) WÄSSRIGE NATRIUMHYDROXIDLÖSUNG ,

- 1%IGE ( GEW./VOL . ) LÖSUNG VON PHENOLPHTHALEIN IN 95 VOL.%IGEM ÄTHANOL ,

- DIÄTHYLÄTHER , PEROXIDFREI ,

- ISOPROPYLALKOHOL ODER 95 VOL.%IGER ÄTHYLALKOHOL , P.A . ,

- AKTIVIERTES ALUMINIUMOXID ZUR CHROMATOGRAPHIE , NEUTRAL , AKTIVITÄTSSTUFE I NACH BROCKMANN , UNMITTELBAR VORHER 2 STUNDEN BEI 260 * C AKTIVIERT UND IM EXSIKKATOR AUFBEWAHRT ,

- HEXAN ODER - FALLS NICHT VERFÜGBAR - PETROLÄTHER ( SIEDEPUNKT 30-50 * C ) , ZUR CHROMATOGRAPHIE ,

- AMEISENSÄURE , MINDESTENS 98 GEW.%IG ,

- PANKREASLIPASE MIT AUSREICHENDER AKTIVITÄT ( ANMERKUNGEN 1 UND 2 ) ,

- PUFFERLÖSUNG : WÄSSRIGE 1 M TRIS(HYDROXYMETHYL)AMINOMETHAN-LÖSUNG MIT 6 N SALZSÄURE AUF PH 8 EINGESTELLT ( POTENTIOMETRISCHE KONTROLLE ) ,

- 0,1%IGE ( GEW./VOL . ) WÄSSRIGE NATRIUMCHOLATLÖSUNG ( ENZYMATISCHE QUALITÄT ) ,

- 6 N SALZSÄURE ,

- FLIESSMITTEL : HEXAN ODER - FALLS NICHT VERFÜGBAR - PETROLÄTHER/DIÄTHYLÄTHER/AMEISENSÄURE : 70/30/1 ( VOL./VOL./VOL . ) ,

- 10%IGE ( GEW./VOL . ) WÄSSRIGE GUMMIARABICUMLÖSUNG ,

- 22%IGE ( GEW./VOL . ) WÄSSRIGE KALZIUMCHLORIDLÖSUNG ( CACL2 ) ,

- 0,2%IGE ( GEW./VOL . ) ALKOHOLISCHE 2',7'-DICHLORFLUORESCEINLÖSUNG , DURCH ZUSATZ VON EINEM TROPFEN 1 N NATRIUMHYDROXID JE 100 ML SCHWACH ALKALISCH GEMACHT ,

- KIESELGEL IN PULVERFORM , MIT BINDEMITTEL , DÜNNSCHICHT-QUALITÄT ,

- 20%IGE ( GEW./VOL . ) WÄSSRIGE NATRIUMCHOLATLÖSUNG ,

- 0,1 N WÄSSRIGE NATRIUMHYDROXIDLÖSUNG ,

- NEUTRALISIERTES PFLANZLICHES ÖL .

3 . VORBEREITUNG DER PROBE

PROBE MIT WENIGER ALS 3 % FREIEN FETTSÄUREN : NEUTRALISATION DIREKT AUF DEM ALUMINIUMOXID WIE UNTER 3.2 BESCHRIEBEN .

PROBE MIT MEHR ALS 3 % FREIEN FETTSÄUREN : ALKALINEUTRALISATION IN GEGENWART EINES LÖSUNGSMITTELS GEMÄSS 3.1 , ANSCHLIESSEND DURCHLAUF ÜBER ALUMINIUMOXID WIE UNTER 3.2 BESCHRIEBEN .

3.1 . NEUTRALISATION DURCH ALKALI IN GEGENWART EINES LÖSUNGSMITTELS

IN EINEN 500-ML-SCHEIDERTRICHTER GIBT MAN ETWA 10 G ROHES ÖL , 100 ML HEXAN ODER - WENN NICHT VORHANDEN - PETROLÄTHER , 50 ML ISOPROPYLALKOHOL ODER 95%IGEN ÄTHYLALKOHOL , EINIGE TROPFEN PHENOLPHTHALEINLÖSUNG UND MIT EINEM ÜBERSCHUSS VON 0,3 % SOVIEL 12%IGE NATRIUMHYDROXIDLÖSUNG , WIE DEM GEHALT DES ÖLES AN FREIEN FETTSÄUREN ENTSPRICHT . ES WIRD EINE MINUTE KRÄFTIG GERÜHRT , DANN WERDEN 50 ML DESTILLIERTES WASSER ZUGEGEBEN , NOCHMALS GERÜHRT UND DANN STEHEN GELASSEN .

NACH DEM ABSETZEN WIRD DIE UNTERE , DIE SEIFEN ENTHALTENDE SCHICHT ENTFERNT . ENTFERNT WERDEN AUCH EVENTÜLLE ZWISCHENSCHICHTEN ( SCHLEIM UND UNLÖSLICHES ) . DIE NEUTRALISIERTE HEXANLÖSUNG DES ÖLES WIRD NACHEINANDER MIT 25 ODER 30 ML EINER LÖSUNG VON ISOPROPYLALKOHOL ODER ÄTHYLALKOHOL UND DESTILLIERTEM WASSER IM VERHÄLTNIS 1 : 1 ( VOL./VOL . ) BIS ZUM VERSCHWINDEN DER ROSAFÄRBUNG DES PHENOLPHTHALEINS GEWASCHEN .

MAN ENTFERNT DEN GRÖSSTEN TEIL DES HEXANS DURCH VAKUUMDESTILLATION UND TROCKNET DAS ÖL BIS ZUM VÖLLIGEN VERSCHWINDEN DES LÖSUNGSMITTELS BEI 30-40 * C UNTER VAKUUM IM STICKSTOFFSTROM .

3.2 . DURCHLAUF ÜBER ALUMINIUMOXID

15 G AKTIVIERTES ALUMINIUMOXID WERDEN IN 50 ML HEXAN ODER - WENN NICHT VORHANDEN - IN PETROLÄTHER SUSPENDIERT UND INTER RÜHREN IN EINE CHROMATOGRAPHISCHE GLASSÄULE GEGOSSEN . DAS ALUMINIUMOXID WIRD GLEICHMÄSSIG VERTEILT , UND MAN LÄSST DAS LÖSUNGSMITTEL BIS AUF 1-2 MM OBERHALB DES ABSORPTIONSMITTELS ABLAUFEN . DANN WIRD EINE ETWA 15 MINUTEN ZUVOR HERGESTELLTE LÖSUNG AUS 5 G ÖL IN 25 ML HEXAN ODER - WENN NICHT VORHANDEN - IN PETROLÄTHER VORSICHTIG AUF DIE SÄULE GEGEBEN UND DIE GESAMTE AUS DER SÄULE ABLAUFENDE FLÜSSIGKEIT IN EINEM 100-ML-KOLBEN GESAMMELT .

DER GRÖSSTE TEIL DES LÖSUNGSMITTELS WIRD DURCH VAKUUMDESTILLATION ENTFERNT ; DANN WIRD DAS ÖL BEI 30-40 * C UNTER VAKUUM MIT HILFE EINES STICKSTOFFSTROMES BIS ZUM VÖLLIGEN VERSCHWINDEN DES LÖSUNGSMITTELS GETROCKNET .

4 . HERSTELLUNG DER DÜNNSCHICHT-PLATTEN

MAN GIBT IN EINEN 250-ML-WEITHALSKOLBEN 30 G KIESELGEL IN PULVERFORM MIT BINDEMITTEL UND 60 ML DESTILLIERTES WASSER UND SCHÜTTELT , BIS SICH EIN HOMOGENER BREI BILDET . DIESER WIRD EINE MINUTE DURCH ABSAUGEN MIT DER WASSERSTRAHLPUMPE ENTGAST .

DER BREI WIRD WIE ÜBLICH MIT DEM BESCHICHTUNGSGERÄT IN EINER 0,25 MM DICKEN SCHICHT AUF DIE PLATTEN AUFGETRAGEN .

DIE MENGE GENÜGT ZUR HERSTELLUNG VON FÜNF PLATTEN VOM FORMAT 20 MAL 20 CM . MAN LÄSST DIE PLATTEN ETWA 15 MINUTEN AN DER LUFT , ANSCHLIESSEND ZWEI STUNDEN IM TROCKENSCHRANK BEI 103 * C MEHR ODER WENIGER 2 * C TROCKNEN . DIE SO HERGESTELLTEN PLATTEN WERDEN IM EXSIKKATOR AUFBEWAHRT .

5 . VERFAHREN

5.1 . HYDROLYSE DURCH PANKREASLIPASE

IN EIN 10-ML-ZENTRIFUGENRÖHREHEN WERDEN ETWA 0,1 G DER PROBE EINGEWOGEN .

MAN SETZT 20 MG LIPASE UND 2 ML PUFFERLÖSUNG ZU . ES WIRD SORGFÄLTIG UND VORSICHTIG GESCHÜTTELT . ANSCHLIESSEND WERDEN 0,5 ML DER 0,1%IGEN NATRIUMCHOLATLÖSUNG UND 0,2 ML DER KALZIUMCHLORIDLÖSUNG ZUGESETZT . DAS ROHRCHEN WIRD MIT EINEM SCHLIFFSTOPFEN VERSCHLOSSEN , VORSICHTIG GESCHÜTTELT ( OHNE DEN STOPFEN ZU BEFEUCHTEN ) UND SOFORT IN DEN AUF 40 * C MEHR ODER WENIGER 0,5 * C EINGESTELLTEN THERMOSTATEN GESETZT , WOBEI GENAU EINE MINUTE GESCHUTTELT WIRD .

DAS RÖHRCHEN WIRD AUS DEM THERMOSTATEN GENOMMEN UND GENAU ZWEI MINUTEN KRÄFTIG GESCHÜTTELT .

DANACH WIRD SOFORT UNTER FLIESSENDEM WASSER GEKÜHLT ; ES WERDEN 1 ML 6 N SALZSÄURE UND 1 ML DIATHYLATHER ZUGESETZT . DAS RÖHRCHEN WIRD VERSCHLOSSEN , KRÄFTIG GESCHÜTTELT UND DANN STEHEN GELASSEN . ANSCHLIESSEND WIRD DIE OBERE ORGANISCHE PHASE MIT HILFE DER SPRITZE ABGENOMMEN .

5.2 . ABTRENNUNG DER MONOGLYCERIDE DURCH DÜNNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE

DER EXTRAKT WIRD IM ABSTAND VON ETWA 1,5 CM VOM UNTEREN RAND DER PLATTE ALS DURCHGEHENDER EINHEITLICHER STRICH AUFGETRAGEN , WOBEI EINE MÖGLICHST FEINE STARTLINIE ENTSTEHEN SOLLTE .

DIE PLATTE WIRD IN EINE GUT GESÄTTIGTE ENTWICKLUNGSKAMMER GESTELLT UND MIT DEM FLIESSMITTEL BIS ZU ETWA 1 CM ABSTAND VOM OBEREN RAND ENTWICKELT . DIE ENTWICKLUNG DER PLATTE ERFOLGT BEI ETWA 20 * C

DIE PLATTE WIRD AN DER LUFT BEI DER GLEICHEN TEMPERATUR , WIE SIE IN DER ENTWICKLUNGSKAMMER HERRSCHT , GETROCKNET UND MIT 2',7'-DICHLORFLUORESCEIN-LÖSUNG BESPRÜHT . DIE MONOGLYCERIDBANDE ( RF ETWA 0,035 ) WIRD UNTER UV-LICHT MARKIERT , MIT EINEM METALLSPATEL ABGEKRATZT ( WOBEI ZU VERMEIDEN IST , DASS AUCH DIE AUF DER STARLINIE VERBLIEBENEN BESTANDTEILE ENTFERNT WERDEN ) UND DAS KIESELGEL IN DEM 25-ML-METHYLIERUNGSKOLBCHEN GESAMMELT .

DIE MONOGLYCERIDE WERDEN IN METHYLESTER UMGEESTERT , INDEM DAS ZUVOR GESAMMELTE KIESELGEL DIREKT NACH DER UNTER PUNKT 7.3 BESCHRIEBENEN ALLGEMEINEN METHODE ZUR HERSTELLUNG VON FETTSÄUREMETHYLESTERN BEHANDELT WIRD . DIE ESTER WERDEN DANN NACH DER UNTER PUNKT 7,4 GENANNTEN METHODE GASCHROMATOGRAPHISCH UNTERSUCHT .

VON DERSELBEN PROBE IST AUCH DIE ZUSAMMENSETZUNG DER GESAMTFETTSÄUREN ZU BESTIMMEN . EIN VERGLEICH MIT DER ZUSAMMENSETZUNG DER IN 2-STELLUNG VERESTERTEN FETTSÄUREN IST ZUR INTERPRETATION DER ERGEBNISSE NUTZLICH .

6 . FORMULIERUNG DER ERGEBNISSE

DIE ZUSAMMENSETZUNG DER FETTSÄUREN IN 2-STELLUNG WIRD IN PROZENTEN AUF EINE DEZIMALE GENAU ANGEGEBEN ( ANMERKUNG 3 ) .

7 . ANMERKUNGEN

7.1 . KONTROLLE DER LIPASEAKTIVITÄT

DURCH ETWA 10 MINUTEN LANGES RÜHREN EINES GEMISCHES AUS 165 ML 10%IGER GUMMIARABICUMLÖSUNG , 15 G ZERSTOSSENEM EIS UND 20 ML DES ZUVOR NEUTRALISIERTEN ÖLES IN EINEM GEEIGNETEN MISCHGERÄT WIRD EINE ÖLEMULSION HERGESTELLT .

IN EIN 50-ML-BECHERGLAS WERDEN NACHEINANDER 10 ML DER EMULSION , 0,3 ML DER 20%IGEN NATRIUMCHOLATLÖSUNG UND 20 ML DESTILLIERTES WASSER GEGEBEN .

DAS BECHERGLAS WIRD IN DEN AUF 37 * C MEHR ODER WENIGER 0,5 * C EINGESTELLTEN THERMOSTAT GESTELLT , UND ES WERDEN DIE ELEKTRODEN EINES PH-MESSGERÄTS UND DER PROPELLERRÜHRER IN DAS BECHERGLAS GEFÜHRT .

MIT EINER 5-ML-BÜRETTE WIRD DIE 0,1-N-NATRIUMHYDROXIDLÖSUNG TROPFEN FÜR TROPFEN BIS ZU PH 8,5 ZUGESETZT .

DANN WIRD EINE ENTSPRECHENDE MENGE DER WÄSSRIGEN SUSPENSION DES LIPASEPULVERS ( SIEHE UNTEN ) ZUGESETZT . WENN DAS PH-MESSGERÄT DEN PH-WERT 8,3 ANZEIGT , WIRD DIE STOPPUHR ANGESTELLT UND LAUFEND SO VIEL 0,1-N-NATRIUMHYDROXIDLÖSUNG ZUGESETZT , DASS DER PH-WERT AUF 8,3 GEHALTEN WIRD . DIE VERBRAUCHTE MENGE DER ALKALILÖSUNG WIRD JEDE MINUTE NOTIERT . DIE ERHALTENEN WERTE WERDEN IN EIN KOORDINATENSYSTEM EINGETRAGEN , UND ZWAR MIT DER ZEIT ALS ABSZISSE UND DER ZUR KONSTANTHALTUNG DES PH-WERTES ERFORDERLICHEN ALKALILÖSUNG IN ML ALS ORDINATE . DABEI MUSS SICH EINE GERADE ERGEBEN .

DIE IM VORIGEN ABSATZ ERWÄHNTE LIPASESUSPENSION IST EINE 1 GEW.%IGE SUSPENSION IN WASSER . FÜR JEDEN VERSUCH WIRD SO VIEL SUSPENSION EINGESETZT , WIE ERFORDERLICH , DAMIT IN 4 ODER 5 MINUTEN ETWA 1 ML ALKALILÖSUNG VERBRAUCHT WIRD . NORMALERWEISE WIRD DIES MIT 1 BIS 5 MG LIPASEPULVER ERREICHT .

ALS LIPASEEINHEIT IST DIE ENZYMMENGE DEFINIERT , DIE 10 M-ÄQUIV . SÄURE PRO MINUTE FREISETZT .

DIE AKTIVITÄT " A " DES VERWENDETEN PULVERS , AUSGEDRÜCKT IN LIPASEEINHEITEN JE MG , BERECHNET SICH WIE FOLGT : SIEHE ABL .

DABEI SIND : *V = ANZAHL ML 0,1-N-NATRIUMHYDROXIDLÖSUNG , DIE PRO MINUTE VERBRAUCHT WERDEN , BERECHNET AUS DER GRAPHISCHEN DARSTELLUNG . *

*M = GEWICHT DER LIPASE-PROBE IN MG . *

DIE VERWENDETE LIPASE MUSS EINE AKTIVITÄT ZWISCHEN 0,8 UND 2 LIPASEEINHEITEN JE MG BESITZEN .

7.2 . HERSTELLUNG DER LIPASE

IM HANDEL SIND LIPASEN MIT AUSREICHENDER LIPASEAKTIVITÄT ERHÄLTLICH . SIE KÖNNEN ABER AUCH IM LABOR WIE FOLGT HERGESTELLT WERDEN :

5 KG FRISCHES SCHWEINEPANKREAS WERDEN AUF 0 * C ABGEKÜHLT , VON DEN UMHÜLLENDEN FESTEN FETTEN UND GEWEBEN BEFREIT UND MIT HILFE EINER SCHNEIDEMÜHLE SO ZERKLEINERT , DASS EIN FLÜSSIGER BREI ENTSTEHT . DIESER WIRD 4 BIS 6 STUNDEN KALT MIT 2,5 L WASSERFREIEM ACETON GERÜHRT UND ANSCHLIESSEND ZENTRIFUGIERT . DER RÜCKSTAND WIRD NOCH DREIMAL MIT DER GLEICHEN MENGE ACETON , ZWEIMAL MIT EINEM GEMISCH AUS ACETON UND DIÄTHYLÄTHER 1 : 1 ( VOL./VOL . ) UND ZWEIMAL MIT DIÄTHYLÄTHER EXTRAHIERT .

UM EIN HALTBARES PULVER ZU ERHALTEN , WIRD DER RÜCKSTAND 48 STUNDEN IM VAKUUM GETROCKNET UND IM KÜHLSCHRANK AUFBEWAHRT .

7.3 . HERSTELLUNG DER FETTSÄURE-METHYLESTER

NACH DER METHODE , BESCHRIEBEN UNTER PUNKT II DES ANHANGS VI DER VERORDNUNG ( EWG ) NR . 72/77 DER KOMMISSION VOM 13 . JANUAR 1977 ( 1 ) , DIE DIE VERORDNUNG ( EWG ) NR . 1470/68 ÜBER DIE ENTNAHME UND VERKLEINERUNG VON PROBEN SOWIE ÜBER DIE BESTIMMUNG DES GEHALTS DER ÖLSAATEN AN ÖL , FREMDBESTANDTEILEN UND FEUCHTIGKEIT ÄNDERT .

7.4 . GASCHROMATOGRAPHIE VON FETTSÄURE-METHYLESTERN

NACH DER UNTER PUNKT III DES ANHANGS VI DER VERORDNUNG ( EWG ) NR . 72/77 BESCHRIEBENEN METHODE .

( 1 ) ABL . NR . L 12 VOM 15 . 1 . 1977 , S . 11 .

ANHANG VIII

NACHWEIS VON ANDEREN ÖLEN IM OLIVENÖL DURCH ANALYSE DER STERINFRAKTION VON FETTSTOFFEN

PRINZIP

GAS-CHROMATOGRAPHISCHE ANALYSE DER AUS DEM UNVERSEIFBAREN DURCH DÜNNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE ABGETRENNTEN STERINE . DAS UNVERSEIFBARE DARF NUR VORSICHTIG GETROCKNET WERDEN .

GERÄTE

1 . GERÄTE FÜR DIE DÜNNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE EINSCHLIESSLICH VIER GLASPLATTEN 20 MAL 20 MAL 0,4 CM , ZWEI PLATTEN 20 MAL 5 MAL 0,4 CM SOWIE EINE 0,1-ML-MIKROSPRITZE ;

2 . 50-ML-BECHERGLAS ;

3 . GLASFILTERTIEGEL , DURCHLÄSSIGKEIT 3 , DURCHMESSER 15 MM ;

4 . 100-ML-RUNDKOLBEN ;

5 . 10-ML-ZENTRIFUGENGLAS MIT KONISCHEM BODEN UND SCHLIFFSTOPFEN ;

6 . 1-ML-MESSPIPETTE MIT GRADUIERUNG ;

7 . GAS-CHROMATOGRAPH , AUSGESTATTET MIT EINEM FLAMMENIONISATIONSDETEKTOR , EINEM SILBER - ODER GLASEINSPRITZSYSTEM ODER EINEM SYSTEM ZUR DIREKTEN EINSPRITZUNG AUF DIE SÄULE SOWIE EINEM SCHREIBER ;

8 . SÄULE FÜR DIE GAS-CHROMATOGRAPHIE AUS GLAS ODER NICHTROSTENDEM STAHL , U - ODER SPIRALFÖRMIG , LÄNGE 1-2 M , INNENDURCHMESSER 3-4 MM . DIE SÄULENFÜLLUNG ENTHÄLT ALS STATIONÄRE PHASE METHYLSILICONGUMMI ( 1 ) , DAS WENIGSTENS BIS 300 * C BESTÄNDIG IST . DAMIT WIRD KALZINIERTE , MIT SÄURE GEWASCHENE UND SILANISIERTE DIATOMEENERDE ZU 2-4 % IMPRAEGNIERT ; KORNGRÖSSE 80/100 ODER 100/200 MESH .

ANMERKUNG : DA EINIGE SÄULENTYPEN AUS ROSTFREIEM STAHL INFOLGE ZERSETZUNG VON STERINEN ZU FEHLERHAFTEN ERGEBNISSEN FÜHREN KÖNNEN , WIRD GLAS EMPFOHLEN .

9 . MIKROSPRITZE FÜR MENGEN VON 5 ODER 10 ML .

REAGENZIEN

1 . CHLOROFORM ZUR CHROMATOGRAPHIE ;

2 . BENZOL ZUR CHROMATOGRAPHIE ;

3 . HEPTAN ;

4 . KIESELGEL ( Z . B . KIESELGEL G ) ;

5 . BEZUGSLÖSUNG FÜR DIE DÜNNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE 5%IGE CHOLESTERINLÖSUNG IN CHLOROFORM ;

6 . ACETON ZUR CHROMATOGRAPHIE ;

7 . 0,1%IGE LÖSUNG DES NATRIUMSALZES DES 2',7'-DICHLORFLUORESCEINS IN ABSOLUTEM ÄTHYLALKOHOL ;

8 . PYRIDIN ;

9 . HEXAMETHYLDISILAZAN ;

10 . TRIMETHYLCHLORSILAN ;

11 . LÖSUNG FÜR DEN EMPFINDLICHKEITSTEST : 1 MG CHOLESTERIN PRO ML N-PENTAN ;

12 . LÖSUNG FÜR DEN PEAKAUFLÖSUNGSTEST : 0,9 MG RÜBÖL-PHYTOSTERINE UND 0,1 MG CHOLESTERIN PRO ML N-PENTAN . DIE STERINE MÜSSEN NACH DEM UNTER PUNKT B DER " ARBEITSVORSCHRIFT " BESCHRIEBENEN VERFAHREN FRISCH HERGESTELLT WERDEN ;

13 . LÖSUNG FÜR DEN REFERENZTEST : 1 MG SONNENBLUMENÖL-PHYTOSTERINE PRO ML N-PENTAN , FRISCH HERGESTELLT WIE UNTER PUNKT B DER " ARBEITSVORSCHRIFT " BESCHRIEBEN .

HERSTELLUNG DER DÜNNSCHICHTPLATTER

AUF DAS BESCHICHTUNGSGERÄT WERDEN DER REIHE NACH EINE PLATTE VON 20 MAL 5 MAL 0,4 CM , VIER PLATTEN VON 20 MAL 20 MAL 0,4 CM UND EINE PLATTE VON 20 MAL 5 MAL 0,4 CM GELEGT .

IN EINEN 500-ML-WEITHALSKOLBEN WERDEN 40 G KIESELGEL UND ETWA 80 ML WASSER GEGEBEN . MIT EINEM GLASSTAB BZW . MIT EINEM MECHANISCHEN GLARÜHRWERK WIRD UMGERÜHRT , BIS EINE HOMOGENE SUSPENSION ENTSTEHT .

ETWA EINGESCHLOSSENE GASE WERDEN DURCH MINDESTENS EINMINÜTIGES EVAKUIEREN MIT EINER WASSERSTRAHLPUMPE ENTFERNT . DANACH WIRD DIE SUSPENSION IN DAS STREICHGERÄT GEGEBEN , EINE SCHICHTDICKE VON 0,5 MM EINGESTELLT UND DIE PLATTEN WERDEN GLEICHMÄSSIG BESCHICHTET .

DIE PLATTEN WERDEN ETWA 15 MINUTEN AN DER LUFT UND ANSCHLIESSEND 2 STUNDEN IM TROCKENSCHRANK BEI 105 * C GETROCKNET . DIE SO HERGESTELLTEN PLATTEN WERDEN IM EXSIKKATOR UNTER VAKUUM AUFBEWAHRT .

ARBEITSVORSCHRIFT

A . HERSTELLUNG DES UNVERSEIFBAREN

EINLEITUNG

ALS UNVERSEIFBARES WERDEN DIE FETTLÖSLICHEN BES ANDTEILE BEZEICHNET , DIE NACH DER VERSEIFUNG IN WASSER UNLÖSLICH UND IN DEM ZUR BESTIMMUNG VERWENDETEN LÖSUNGSMITTEL LÖSLICH SIND . DAS UNVERSEIFBARE ENTHÄLT NATÜRLICHE FETTBESTANDTEILE ( STERINE , ALKOHOLE , KOHLENWASSERSTOFFE ) SOWIE DEN FETTSTOFFEN FREMDE ORGANISCHE , BEI 100 * C NICHT FLÜCHTIGE STOFFE ( MINERALÖLE ) , DIE MÖGLICHERWEISE VORKOMMEN KÖNNEN . ALS LÖSUNGSMITTEL WIRD PETROLÄTHER ODER ÄTHYLÄTHER VERWENDET . ES MUSS BERÜCKSICHTIGT WERDEN , DASS DIE MIT DEN BEIDEN LÖSUNGSMITTELN ERZIELTEN ERGEBNISSE MEISTENS DIFFERIEREN UND DASS MIT ÄTHER DIE PROZENTUAL HÖHEREN WERTE GEFUNDEN WERDEN .

FÜR OLIVENÖL WURDE IM HINBLICK AUF DIE KLIMATISCHEN VERHÄLTNISSE DER ORTE , AN DENEN SICH DIE MEISTEN ANALYTISCHEN LABORATORIEN BEFINDEN , PETROLÄTHER ALS DAS ZU VERWENDENDE LÖSUNGSMITTEL ANERKANNT .

PETROLÄTHER-METHODE

GERÄTE

- 150-ML-KOLBEN MIT RÜCKFLUSSKÜHLER ,

- 500-ML-SCHEIDETRICHTER ,

- TROCKENSCHRANK , EINGESTELLT AUF 103 * C MEHR ODER WENIGER 2 * C .

REAGENZIEN

- ETWA 2 N ALKOHOLISCHE KOH , IN 95 VOL.%IGEM ÄTHANOL . DAS REAGENZ DARF NICHT DUNKLER ALS STROHGELB SEIN .

- PETROLÄTHER , SIEDEBEREICH 40 BIS 60 * C , BROMZAHL NIEDRIGER ALS 1 , FREI VON RÜCKSTÄNDEN .

ARBEITSVORSCHRIFT

5 G FETT WERDEN AUF 0,01 G GENAU IN DEN KOLBEN EINGEWOGEN . HINZUGEFÜGT WERDEN 50 ML DER ETWA 2 N ALKOHOLISCHEN KOH . DER RÜCKFLUSSKÜHLER WIRD AUFGESETZT UND ES WIRD EINE STUNDE UNTER LEICHTEM SIEDEN ERHITZT . DIE HEIZUNG WIRD ABGESTELLT UND VON OBEN DURCH DEN KÜHLER WERDEN ETWA 50 ML DESTILLIERTES WASSER ZUGEGEBEN UND GESCHÜTTELT .

NACH DER ABKÜHLUNG WIRD KRÄFTIG GESCHÜTTELT . DANN LÄSST MAN BIS ZUR VOLLSTÄNDIGEN TRENNUNG DER BEIDEN PHASEN STEHEN UND ÜBERFÜHRT DIE SEIFENLÖSUNG IN EINEN ZWEITEN SCHEIDETRICHTER . SOLLTE SICH EINE EMULSION BILDEN , IST SIE DURCH ZUSATZ KLEINER MENGEN ÄTHANOL ODER EINER KONZENTRIERTEN KALIUMHYDROXIDLÖSUNG ZU ZERSTÖREN .

DIE SEIFENLÖSUNG WIRD NOCH ZWEIMAL MIT JE ETWA 50 ML PETROLÄTHER EXTRAHIERT . DIE DREI PETROLÄTHERFRAKTIONEN WERDEN IN EINEM SCHEIDERTRICHTER VEREINIGT UND DREIMAL MIT ETWA 50 ML 50 VOL.%IGEN ALKOHOL GEWASCHEN .

DIE PETROLÄTHERLÖSUNG WIRD - GEGEBENENFALLS SCHRITTWEISE - DURCH DEN AUSLAUF DES SCHEIDETRICHTERS IN EINEN GEWOGENEN 250-ML-KOLBEN UMGEFÜLLT ( WOBEI DER SCHEIDETRICHTER MIT KLEINEN MENGEN PETROLÄTHER GESPÜLT WIRD ) .

DAS LOSUNGSMITTEL WIRD UNTER VORSCHTIGEM ERWÄRMEN IM VAKUUM ENTFERNT UND DER RÜCKSTAND BEI TEMPERATUREN UNTER 50 * C IM VAKUUM GETROCKNET , UM UNERWÜNSCHTE OXYDATIVE VERÄNDERUNGEN ZU VERMEIDEN .

B . ABTRENNUNG DER STERINFRAKTION DURCH DÜNNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE

IN DIE ENTWICKLUNGSKAMMER WIRD BIS ZUR HÖHE VON CA . 1 CM EIN GEMISCH AUS BENZOL/ACETON 95 : 5 ODER N HEPTAN/ACETON 85 : 15 ( VOL./VOL . ) GEGEBEN ; DIE KAMMER WIRD MIT EINEM DECKEL VERSCHLOSSEN UND MINDESTENS DREI STUNDEN STEHEN GELASSEN , DAMIT SICH EIN GLEICHGEWICHT ZWISCHEN FLÜSSIGKEIT UND DAMPF EINSTELLT . ES WIRD EMPFOHLEN , AN DER INNENWAND DER KAMMER FILTERPAPIERSTREIFEN ZU BEFESTIGEN , DIE IN DAS FLIESSMITTEL TAUCHEN . DIESE VORSICHTSMASSNAHME HAT DEN VORTEIL , DIE LAUFZEIT DES FLIESSMITTELS UM ETWA EIN DRITTEL ZU VERKÜRZEN UND DIE KOMPONENTEN GLEICHMÄSSIGER ZU ELUIEREN .

IN DER ZWISCHENZEIT WIRD EINE 5%IGE CHLOROFORMLÖSUNG DES MIT PETROLÄTHER EXTRAHIERTEN UNVERSEIFBAREN HERGESTELLT . MAN ENTNIMMT CA . 0,3 ML DIESER LÖSUNG UND TRAEGT SIE MIT DER 0,1-ML-MIKROSPRITZE IN EINEM GLEICHMÄSSIGEN KONTINUIERLICHEN STREIFEN AUF DIE DÜNNSCHICHTPLATTE IN ETWA 1,5 CM ABSTAND VOM UNTEREN PLATTENRAND AUF , UND ZWAR SO , DASS MAN AM START EINEN MÖGLICHST SCHMALEN STREIFEN ERHÄLT . AM RANDE DER PLATTE WERDEN NACH DEM ÜBLICHEN VERFAHREN EINIGE ML DER CHOLESTERINHALTIGEN BEZUGSLÖSUNG AUFGETRAGEN , UM DEN RF-WERT DER STERINFRAKTION ZU BESTIMMEN .

DIE PLATTE WIRD IN DIE NACH OBIGER VORSCHRIFT VORBEREITETE ENTWICKLUNGSKAMMER GESTELLT . DIE TEMPERATUR DER UMGEBUNG MUSS ETWA 20 * C BERTRAGEN .

DER DECKEL WIRD GESCHLOSSEN UND ES WIRD ENTWICKELT , BIS DIE LÖSUNGSMITTELFRONT EINEN ABSTAND VON ETWA 1 CM VOM OBETEN RAND DER PLATT ERREICHT HAT . DIE PLATTE WIRD AUS DER ENTWICKLUNGSKAMMER GENOMMEN UND DAS LÖSUNGSMITTEL IM WARMLUFTSTROM VERDAMPFT .

DIE ZONEN WERDEN SICHTBAR GEMACHT , INDEM MAN DIE PLATTE GLEICHMÄSSIG UND VORSICHTIG MIT DER ALKOHOLISCHEN LÖSUNG DES NATRIUMSALZES DES 2',7'-DICHLORFLUORESCEINS BESPRÜHT . DIE PLATTE WIRD IM UV-LICHT BETRACHTET UND DIE LAGE DER STERINE MIT HILFE DES CHOLESTERINFLECKENS DER BEZUGSLÖSUNG BESTIMMT .

DIE STERINZONE WIRD MIT HILFE EINES METALLSPATELS ABGEKRATZT . DAS ABGETRENNTE KIESELGEL WIRD IN EIN 50-ML-BECHERGLAS MIT 15 ML WARMEN CHLOROFORM GEGEBEN , GERÜHRT , VOLLSTÄNDIG AUF DEN GASFILTERTIEGEL GEGEBEN UND FILTRIERT . DAS FILTER WIRD DREIMAL MIT JE 15 ML WARMEM CHLOROFORM GEWASCHEN UND DAS FILTRAT IN EINEM 100-ML-KOLBEN GESAMMELT .

DIE CHLOROFORMLOSUNG WIRD AUF 4-5 ML EINGEENGT UND IN EIN ZUVOR GEWOGENES ZENTRIFUGENGLAS MIT SCHLIFFSTOPFEN GEFÜLLT . DURCH VORSICHTIGES ERWÄRMEN IM STICKSTOFFSTROM WIRD DAS LÖSUNGSMITTEL BIS ZUR TROCKENE EINGEDAMPFT UND DIE SO GEWONNENE STERINFRAKTION GEWOGEN .

C . ANALYSE DER STERINE DURCH GAS-CHROMATOGRAPHIE

1 . HERSTELLUNG DER TRIMETHYLSTLYLÄTHER ( TMSÄ )

JE MG STERIN WERDEN 0,02 ML DES REAGENS FÜR DIE SILANISIERUNG , BESTEHEND AUS EINEM GEMISCH AUS PYRIDIN-HEXAMETHYLDISILAZAN-TRIMETHYLCHLORSILAN 9/3/1 ( VOL./VOL./VOL . ) IN DAS ZENTRIFUGENGLAS GEGEBEN , WOBEI JEDE SPUR VON FEUCHTIGKEIT ZU VERMEIDEN IST . DAS ZENTRIFUNGENGLAS WIRD ETWA 30 MINUTEN LANG IN DEN EXSIKKATOR GESTELLT , DANN GESCHLOSSEN UND EINIGE MINUTEN ZENTRIFUGIERT . FÜR DIE NACHFOLGENDE ANALYSE WIRD DIE ÜBERSTEHENDE LÖSUNG BENUTZT .

2 . ARBEITSHEDINGUNGEN FÜR DIE GASCHROMATISCHE ANALYSE

SAULENTEMPERATUR : 220 BIS 250 * C

TEMPERATUR DES EINSPRITZSYSTEMS , WENN ES GESONDERT BEHEIZT WERDEN KANN : 20 BIS 40 * C HÖHER ALS DIE SÄULENTEMPERATUR .

STICKSTOFFSTROM : 30-60 ML PRO MINUTE .

DEN DETEKTORENANSCHLUSS LOSEN UND NEUE SÄULEN UNTER DEN VORGENANNTEN BEDINGUNGEN IN 16-24 STUNDEN ZUR EINSTELLUNG EINES GLEICHGEWICHTS BRINGEN . DETEKTOR ANSCHLIESSEN . FLAMME ANZUENDEN UND WASSERSTOFF - , SAUERSTOFF - ODER LUFTSTROM SO EINSTELLEN , DASS EINE GEEIGNETE FLAMMENHÖHE UND EMPFINDLICHKEIT ERREICHT WERDEN . DEN SCHREIBER EINSCHALTEN UND EINEN GEEIGNETEN PAPIERVORSCHUB EINSTELLEN ; NULLPUNKT UND MESSBEREICH EINJUSTIEREN . IST DIE GRUNDLINIE STABIL , SO IST DAS GERAT EINSATZBEREIT .

3 . EMPFINDLICHKEITSTEST

VON DER LÖSUNG FÜR DEN EMPFINDLICHKEITSTEST WERDEN 5 ML ENTNOMMEN , DAS LÖSUNGSMITTEL VERDAMPFT , UND ES WIRD DANN WIE UNTER 1 . BESCHRIEBEN FORTGEFAHREN . EINGESPRITZT WERDEN 0,1 BIS 0,2 ML DER LÖSUNG . AUF DEM CHROMATOGRAMM DARF NUR EIN CHOLESTERIN-PEAK ERSCHEINEN .

DER MESSBEREICH IST SO EINZUREGULIEREN , DASS FAST DIE GESAMTE BREITE DES SCHREIBERS AUSGENUTZT WIRD .

4 . VON DER TESTLÖSUNG FÜR DIE PEAKAUFLÖSUNG WERDEN 5 ML ENTNOMMEN , DAS LÖSUNGSMITTEL VERDAMPFT UND ES WIRD WIE UNTER 1 BESCHRIEBEN FORTGEFAHREN .

0,1 BIS 0,2 ML DER SO HERGESTELLTEN LÖSUNG ( TMSÄ ) WERDEN EINGESPRITZT . AUF DEM CHROMATOGRAMM MÜSSEN DIE PEAKS VON CHOLESTERIN , BRASSICASTERIN , CAMPESTERIN UND SS-SITOSTERIN ERSCHEINEN . GEMESSEN WERDEN DIE RETENTIONSSTRECKEN DER PEAKS ( ABSATAND VOM EINSPRITZPUNKT BIS ZUM MAXIMUM DES PEAKS ) - DCH FÜR CHOLESTERIN DB FÜR BRASSICASTERIN , DC FÜR CAMPESTERIN UND DS FÜR SS-SITOSTERIN - SOWIE DIE BREITE AN DER PEAK-BASIS ( ABSTAND ZWISCHEN DEN SCHNITTPUNKTEN DER WENDETANGENTEN AN DER VORDER - UND DER RÜCKSEITE DER PEAKS MIT DER GRUNDLINIE ) OCH FÜR CHOLESTERIN UND OB FÜR BRASSICASTERIN .

DIE PEAKAUFLÖSUNG AUSGEDRÜCKT DURCH DIE FORMEL : SIEHE ABL .

MUSS MINDESTENS 1 SEIN .

ES WERDEN DANN DIE RELATIVEN RETENTIONSZEITEN ( CHOLESTERIN = 1,00 ) FÜR BRASSICASTERIN , CAMPESTERIN UND SS-SITOSTERIN BERECHNET .

5 . REFERENZTEST

5 ML DER LÖSUNG FÜR DEN REFERENZTEST WERDEN ENTNOMMEN , DAS LÖSUNGSMITTEL VERDAMPFT UND ES WIRD WIE UNTER 1 BESCHRIEBEN FORTGEFAHREN . 0,1 BIS 0,2 ML DER SO HERGESTELLTEN LÖSUNG ( TMSÄ ) WERDEN EINGESPRITZT . AUF DEM CHROMATOGRAMM MÜSSEN DIE PEAKS VON CAMPESTERIN , STIGMASTERIN , SS-SITOSTERIN UND D 7-STIGMASTERIN ERSCHEINEN . GEMESSEN WERDEN DIE RETENTIONSSTRECKEN DER PEAKS - UND DC FÜR CAMPESTERIN , DST FÜR STIGMASTERIN , DS FÜR SS-SITOSTERIN UND DST-7 FÜR D 7-STIGMASTERIN .

DIE RELATIVEN RETENTIONSZEITEN WERDEN BERECHNET . SIE BETRAGEN ETWA FÜR :

CHOLESTERIN*1,0 ( UNGEFÄHR 15 MINUTEN ) *

BRASSICASTERIN*1,1*

CAMPESTERIN*1,3*

STIGMASTERIN*1,4*

SS-SITOSTERIN*1,6 ( 2 )*

D 7-STIGMASTERIN*1,8 ( 3 )*

6 . ANALYSE

0,1-0,2 ML DER ZU ANALYSIERENDEN TMSÄ-LÖSUNG WERDEN EINGESPRITZT UND DAS CHROMATOGRAMM AUFGEZEICHNET .

D . ERGEBNISSE

BEI DER ERMITTLUNG DER ZUSAMMENSETZUNG DER ANALYSIERTEN STERIN-FRAKTION BRAUCHEN PEAKS , DEREN RETENTIONSZEITEN VON DER EXPERIMENTELL ERMITTELTEN ZEIT DER SECHS OBENGENANNTEN STERINE ABWEICHEN , NICHT BERÜCKSICHTIGT ZU WERDEN .

DER PROZENTUALE GEHALT AN SS-SITOSTERIN WIRD DURCH FOLGENDE FORMEL ERMITTELT : SIEHE ABL .

DER GEHALT AN SS-SITOSTERIN DARF NICHT KLEINER ALS 93 % , BEZOGEN AUF DIE PROZENTUALE ZUSAMMENSETZUNG DER GESAMTSTERINE , SEIN .

( 1 ) Z B SE 10

( 2 ) WENN ANDERE STERINE - WIE DAS D 5-AVENASTERIN - UNTER DIESEN BEDINGUNGEN DAS GLEICHE RETENTIONSVOLUMEN BESITZEN WIE DAS SS-SITOSTERIN , SO WERDEN SIE ALS SS-SITOSTERIN GEWERTET .

( 3 ) WENN ANDERE STERINE UNTER DIESEN BEDINGUNGEN DAS GLEICHE RETENTIONSVOLUMEN BESITZEN WIE DAS D 7-STIGMASTERIN , SO WERDEN SIE ALS D 7-STIGMASTERIN GEWERTET

ANHANG IX

ÖLGEHALT DER OLIVENTRESTER

GERÄTE

- GEEIGNETER EXTRAKTIONSAPPARAT MIT 200 - BIS 250-ML-KOLBEN .

- ELEKTRISCH BEHEIZTES BAD ( SANDBAD , WASSERBAD USW . ) ODER HEIZPLATTE .

- ANALYSENWAAGE ,

- TROCKENSCHRANK , EINGESTELLT AUF HÖCHSTENS 80 * C ,

- ELEKTRISCHER TROCKENSCHRANK MIT THERMOSTAT , EINGESTELLT AUF 103 * C MEHR ODER WENIGER 2 * C , DER UNTER EINBLASEN VON LUFT ODER UNTER VERMINDERTEM DRUCK BETRIEBEN WERDEN KANN .

- MECHANISCHE MÜHLE , LEICHT ZU REINIGEN , MIT DER DIE TRESTER OHNE ERWÄRMUNG UND OHNE MERKLICHE VERRINGERUNG IHRES GEHALTS AN WASSER UND ÖL ZERKLEINERT WERDEN KÖNNEN .

- EXTRAKTIONSHÜLSE UND WATTE ODER FILTERPAPIER , FREI VON MIT HEXAN EXTRAHIERBAREN STOFFEN ,

- EXSIKKATOR ,

- SIEB , MASCHENDURCHMESSER 1 MM ,

- SIEDERSTEINCHEN , ZUVOR GETROCKNET .

REGENZIEN

- TECHNISCHES N-HEXAN : RÜCKSTAND BEI VOLLSTANDIGER VERDAMPFUNG UNTER 0,002 G/100 ML .

ARBEITSVORSCHRIFT

VORBEREITUNG DER PROBE

DIE PROBE WIRD , WENN NÖTIG , IN DER ZUVOR GUT GEREINIGTEN MECHANISCHEN MÜHLE SO WERT GEMAHLEN , DASS DIE TEILCHEN VOLLSTÄNDIG DAS SIEB PASSIEREN KÖNNEN .

ETWA EIN ZWANZIGSTEL DER PROBE IST ZUR REINIGUNG DER MÜHLE ZU BENUTZEN ; DIESES MAHLGUT IST ZU VERWERFEN . DER REST IST FEIN ZU MAHLEN , DAS MAHLGUT AUFZUFANGEN , SORGFÄLTIG ZU MISCHEN UND UNVERZUEGLICH ZU ANALYSIEREN .

UNTERSUCHUNGSPROBE

ETWA 10 G DER PROBE WERDEN NACH DEM MAHLEN AUF 0,01 G GENAU FÜR DIE UNTERSUCHUNG ABGEWOGEN .

VORBEREITUNG DER EXTRAKTIONSHÜLSE

DIE PROBE WIRD IN DIE HÜLSE GEGEBEN UND DIESE MIT EINEM WATTEBAUSCH VERSCHLOSSEN . BEI VERWENDUNG VON FILTERPAPIER WIRD DAS MAHLGUT DARIN EINGESCHLAGEN .

VORTROCKNUNG

WENN DIE TRESTER SEHR FEUCHT SIND ( GEHALT AN WASSER UND FLÜCHTIGEN STOFFEN GRÖSSER ALS 10 % ) . IST VORZUTROCKNEN , WOBEI DIE GEFÜLLTE HULSE ( BZW . DAS FILTERPAPIER ) SO LANGE WIE NÖTIG IN DEN AUF HÖCHSTENS 80 * C GEHEIZTEN TROCKENSCHRANK GESTELLT WIRD , UM DEN GEHALT AN WASSER UND FLUCHTIGEN STOFFEN AUF UNTER 10 % ZU SENKEN .

VORBEREITUNG DES KOLBENS

DER KOLBEN , DER 1 BIS 2 SIEDESTEINCHEN ENTHALT UND ZUVOR IM TROCKENSCHRANK BEI 103 * C MEHR ODER WENIGER 2 * C GETROCKNET UND DANACH MINDESTENS 1 STUNDE LANG IM EXSIKKATOR ABGEKÜHLT WURDE , WIRD AUF 1 MG GENAU GEWOGEN .

ERSTE EXTRAKTION

DIE HÜLSE ( BZW . DAS FILTERPAPIER ) MIT DER PROBE WIRD IN DEN EXTRAKTIONSAPPARAT GESTELLT , DIE BENÖTIGTE MENGE HEXAN IN DEN KOLBEN GEGEBEN , DER KOLBEN AN DEN EXTRAKTIONSAPPARAT ANGESCHLOSSEN UND DAS GANZE AUF DAS ELEKTRISCHE HEIZBAD GESTELLT . DIE HEIZUNG IST SO EINZUSTELLEN , DASS DER RÜCKFLUSS MINDESTENS 3 TROPFEN IN DER SEKUNDE BETRAEGT ( MASSIGES , NICHT HEFTIGES SIEDEN ) .

NACH 4STUNDIGER EXTRAKTION LÄSST MAN ABLUHLEN . DIE HÜLSE WIRD AUS DEM EXTRAKTIONSAPPARAT GENOMMEN UND IN EINEN LUFTSTROM GESTELLT , UM DEN GRÖSSTEN TEIL DES LÖSUNGSMITTELS , MIT DEM SIE DUCHTRÄNKT IST , ZU ENTFERNEN .

ZWEITE EXTRAKTION

DIE HÜLSE WIRD IN DIE MIKROKUGELMÜHLE ENTLEERT UND ES WIRD SO FEIN WIE MÖGLICH GEMAHLEN . DAS MAHLGUT WIRD QUANTITATIV IN DIE HÜLSE ZURÜCKGEGEBEN UND DIESE WIEDER IN DEN EXTRAKTIONSAPPARAT GESTELLT .

ES WIRD NOCHMALS 2 STUNDEN EXTRAHIERT , WOBEI DER DIE ERSTE EXTRAKTION ENTHALTENDE KOLBEN VERWENDET WIRD .

DIE IM EXTRAKTIONSKOLBEN ENTHALTENE LÖSUNG MUSS KLAR SEIN WENN NICHT , IST SIE ÜBER FILTERPAPIER ZU FILTRIEREN , WOBEI DER ERSTE KOLBEN UND DAS FILTERPAPIER MEHRMALS MIT HEXAN GEWASCHEN WERDEN . DAS FILTRAT UND DIE WASCHFLÜSSIGKEIT WERDEN IN EINEM ZWEITEN , ZUVOR GETROCKNETEN UND AUF 1 MG ABGEWOGENEN KOLBEN AUFGEFANGEN .

ENTFERNUNG DES LÖSUNGSMITTELS UND WIEGEN DES EXTRAKTS

DURCH DESTILLIEREN AUF DEM ELEKTRISCHEN HEIZBAD WIRD DER GRÖSSTE TEIL DES LÖSUNGSMITTELS ENTFERNT .

DIE LETZTEN LÖSUNGSMITTELSPUREN WERDEN DURCH 20MINUTIGES ERHITZEN DES KOLBENS IM TROCKENSCHRANK BEI 103 * C MEHR ODER WENIGER 2 * C BESEITIGT . DIE BESEITIGUNG DER LÖSUNGSMITTELRESTE WIRD DURCH ZEITWEILIGES EINFÜHREN EINES LUFTSTROMES ODER BESSER EINES INERTGASSTROMES ODER DURCH ARBEITEN UNTER VERMINDERTEM DRUCK ERLEICHTERT .

DEN KOLBEN LÄSST MAN WENIGESTENS 1 STUNDE IM EXSIKKATOR ABKÜHLEN UND WIEGT IHN DANN AUF 1 MG GENAU .

DANACH WIRD DER KOLBEN ERNEUT 10 MINUTEN UNTER DEN GLEICHEN BEDINGUNGEN ERHITZT , IM EXSIKKATOR ABGEKÜHLT UND GEWOGEN .

DER UNTERSCHIED ZWISCHEN DEN ERGEBNISSEN DER ZWEI WAGUNGEN DARF HÖCHSTENS 10 MG BETRAGEN . WENN NICHT , IST ERNEUT 10 MINUTEN ZU ERHITZEN , DANN WIEDER ABKÜHLEN ZU LASSEN UND ZU WIEGEN , BIS DER GEWICHTSUNTERSCHIED HÖCHSTENS 10 MG BETRAEGT . DAS LETZTE GEWICHT DES KOLBENS WIRD NOTIERT .

FÜR JEDE UNTERSUCHUNG WERDEN MIT DER GLEICHEN PROBE ZWEI BESTIMMUNGEN DURCHGEFÜHRT .

ERGEBNISSE

BERECHNUNG UND FORMEL

A ) DER EXTRAKT DES ROHPRODUKRES LÄSST SICH IN GEWICHTSPROZENTEN DURCH NACHSTEHENDE FORMEL BERECHNEN : SIEHE ABL .

B ) DER EXTRAKT , BEZOGEN AUF DEN TRUCKENSTOFF , LÄSST SICH BERECHNEN DURCH DIE FORMEL : SIEHE ABL .

WIEDERHOLBARKEIT

DIE DIFFERENZ ZWISCHEN DEN ERGEBNISSEN VON ZWEI GLEICHZEITIG ODER SCHNELL NACHEINANDER VON EIN UND DEMSELBEN ANALYTIKER VORGENOMMENEN BESTIMMUNGEN DARF NICHT MEHR ALS 0,2 G HEXAN-EXTRAKT JE 100 G PROBE BETRAGEN .

ANDERNFALLS IST DIE ANALYSE MIT ZWEI WEITEREN UNTERSUCHUNGSPROBEN ZU WIEDERHOLEN . LIEGT DIE DIFFERENZ WIEDER ÜBER 0,2 G . SO IST ALS ERGEBNIS DAS ARITHMETISCHE MITTEL AUS ALLEN VIER BESTIMMUNGEN ZU NEHMEN .