RAADETS DIREKTIV af 14 . juni 1988 om aendring af direktiv 64/432/EOEF for saa vidt angaar enzootisk kvaegleukose og om ophaevelse af direktiv 80/1102/EOEF ( 88/406/EOEF )

RAADET FOR DE EUROPAEISKE FAELLESSKABER HAR - under henvisning til Traktaten om Oprettelse af Det Europaeiske OEkonomiske Faellesskab, saerlig artikel 43,

under henvisning til forslag fra Kommissionen ( 1 ),

under henvisning til udtalelse fra Europa-Parlamentet ( 2 ),

under henvisning til udtalelse fra Det OEkonomiske og Sociale Udvalg ( 3 ), og ud fra foelgende betragtninger :

En af Faellesskabets opgaver paa det veterinaere omraade er at forbedre husdyrbestandens sundhedstilstand med henblik paa at opnaa en forbedret avlsrentabilitet;

i dette oejemed er det noedvendigt at beskytte Faellesskabet mod enzootisk kvaegleukose; Faellesskabet har i oevrigt allerede ved direktiv 77/391/EOEF ( 4 ) og 78/52/EOEF ( 5 ) samt ved beslutning 87 /58/EOEF ( 6 ) ivaerksat en aktion med henblik paa udryddelse af denne sygdom;

saadanne aktioner skal bidrage til at fjerne de hindringer, der stadig findes for samhandel i Faellesskabet med levende dyr, og som skyldes forskelle i sundhedstilstanden;

med henblik herpaa er der indtil den 31 . december 1987 ved Raadets direktiv 64/432/EOEF af 26 . juni 1964 om veterinaer - politimaessige problemer ved handel inden for Faellesskabet med kvaeg og svin ( 7), senest aendret ved forordning ( EOEF ) nr . 3805/87 ( 8 ) indfoert beskyttelsesforanstaltninger mod enzootisk kvaegleukose;

gyldigheden af disse foranstaltninger boer forlaenges, samtidig med at nye metoder til paavisning af enzootisk kvaegleukose godkendes;

ved udloebet af en overgangsperiode boer gyldigheden af de saerlige regler, der er fastsat i den for tiden gaeldende ordning, bringes til ophoer for lande, der anvender nationale programmer i kampen mod denne sygdom;

det vil vaere hensigtsmaessigt at fastsaette regler vedroerende besaetningernes betegnelse for saa vidt angaar enzootisk kvaeg - leukose;

medlemsstaterne boer, for at deres bestand kan betegnes som vaerende fri for enzootisk kvaegleukose, gennemfoere et program, der indebaerer, at bestanden underkastes en af de proever til paavisning af leukose, der er fastlagt i bilag G til direktiv 64/432/EOEF;

med undtagelse af slagtedyr paa under 30 maaneder skal dyr bestemt til handel inden for Faellesskabet stamme fra en besaetning, der har vaeret genstand for en proeve og har vaeret underkastet en enkeltdyrsproeve - UDSTEDT FOELGENDE DIREKTIV :

Artikel 1 Med virkning fra 1 . juli 1988 foretages foelgende aendringer i direktiv 64/432/EOEF :

1 ) I artikel 2 indsaettes som litra s ):

"s ) Kvaegbesaetning, fri for enzootisk kvaegleukose; en besaetning, hvor :

iii ) tilfaelde af enzootisk kvaegleukose hverken er paavist, det vaere sig klinisk eller ved en proeve gennemfoert i henhold til bilag G, eller bekraeftet inden for de seneste to aar iii ) samtlige dyr paa over 24 maaneder - i loebet af de seneste tolv maaneder - har reageret negativt paa to proever, der er gennemfoert i henhold til bilag G med et interval paa mindst fire maaneder, eller, i tilfaelde af en besaetning, der allerede opfylder dette krav, én enkelt proeve gennemfoert i henhold til naevnte bilag iii ) der efter datoen for den foerste kontrol ikke laengere findes andre dyr end dem, der er foedt der, eller som stammer fra en besaetning, der er fri for enzootisk kvaegleukose ." 2 ) I artikel 3, stk . 2, indsaettes som litra j ):

"j ) naar det drejer sig om meget vaerdifuldt racerent avlskvaeg, som defineret i artikel 1 i direktiv 77/504/EOEF, og som udelukkende skal anvendes til avlsbrug, stamme fra en besaetning :

ii ) hvor intet i de for embedsdyrlaegen foreliggende oplysninger tyder paa, at der i de seneste to aar har vaeret tilfaelde af enzootisk kvaegleukose ii ) hvis ejer har erklaeret, at han ikke har haft kendskab til saadanne tilfaelde, og endvidere skriftligt har erklaeret, at det eller de dyr, der er bestemt til handel inden for Faellesskabet, enten er foedt eller opdraettet i besaetningen eller har udgjort en del af denne i de seneste tolv maaneder ." 3 ) I artikel 3, stk . 3, indsaettes som litra d ):

"d ) stamme fra en besaetning, hvor intet tyder paa, at der i loebet af de sidste to aar har vaeret tilfaelde af enzootisk kvaegleukose, og hvis dyrene er mere end tolv maaneder gamle, skal de have reageret negativt paa en enkeltdyrsproeve gennemfoert i henhold til bilag G inden for 30 dage foer indladningen .

En saadan proeve kraeves dog ikke for tyre og kastrerede dyr, der er mindre end 30 maaneder gamle og bestemt til koedproduktion, forudsat at disse dyr ved indladnigen identificeres ved hjaelp af et saerligt maerke, og at medlemsstaten traeffer forholdsregler for at undgaa smitte af besaetningerne paa dens omraade ." 4 ) I artikel 7, stk . 1, indsaettes som litra G :

"G . Koeer, der er mindre end 30 maaneder gamle og bestemt til koedproduktion, og som uanset artikel 3, stk . 3, litra d ), ikke har vaeret underkastet en enkeltdyrsproeve . Disse dyr skal forsynes med et saerligt maerke . Bestemmelseslandet traeffer enhver forholdsregel for at undgaa smitte af besaetningerne paa dets omraade ." 5 ) I artikel 8, stk . 2, indsaettes foelgende afsnit :

"For saa vidt angaar de i artikel 3, stk . 2, litra j ), omhandlede dyr, og navnlig i forbindelse med leukose, kan medlemsstaterne under overholdelse af Traktatens almindelige bestemmelser desuden kraeve, at alle dyr fra oprindelsesbesaetningen, der paa tidspunktet for proeven er over 24 maaneder gamle, inden for de seneste tolv maaneder har reageret negativt paa en proeve, der er foretaget i henhold til bilag G . Der kan dog ikke kraeves saadanne garantier ved indfoersel af dyr fra en medlemsstat, om hvilken det efter fremgangsmaaden i artikel 12 er fastslaaet, at den giver tilstraekkelig garanti for saa vidt angaar leukose ." 6 ) Foelgende indsaettes som artikel 8a :

"Artikel 8a 1 . De medlemsstater, som siden 1980 har anvendt et obligatorisk nationalt program for forebyggelse af enzootisk kvaegleukose, kan ved indfoersel til deres omraade af brugs - og avlskvaeg, beregnet til indlemmelse i kvaegbesaetninger, der ikke formodes at have leukose, kraeve fremlaeggelse af en attest, som paa datoen for indladningen er udfaerdiget af en kompetent embedsdyrlaege paa i hvert fald bestemmelseslandets sprog til godtgoerelse af, at :

a ) intet i de for dyrlaegen foreliggende oplysninger tyder paa, at der i de seneste tre aar har vaeret tilfaelde af enzootisk kvaegleukose i oprindelsesbesaetningen, og at besaetningens ejer skriftligt har erklaeret, dels at han ikke har konstateret symptomer paa leukose i besaetningen, dels at det eller de dyr, der er bestemt til handel inden for Faellesskabet, er foedt og opdraettet i besaetningen eller har vaeret i besaetningen de seneste tolv maaneder b ) alle dyr i oprindelsesbesaetningen, der paa datoen for en serologisk proeve er over 24 maaneder gamle, i loebet af de seneste tolv maaneder har reageret negativt paa en saadan proeve, der er gennemfoert i henhold til bilag G .

2 . Efter fremgangsmaaden i artikel 12 kan andre end de i stk . 1 naevnte medlemsstater traeffe afgoerelse om, at de samme krav skal gaelde for hele deres omraade eller, for Det Forenede Kongeriges vedkommende, for Nordirland, hvis der her er ivaerksat en plan for udryddelse af enzootisk kvaegleukose i medfoer af beslutning 87/58/EOEF, eller hvis det er bevist, at de paa datoen for sagens forelaeggelse for Den Staaende Veterinaerkomité i mindst to aar har anvendt et minimumsprogram for udryddelse med mindst foelgende krav :

- alle tumorer i dyrenes organer og lymfesystem skal meddeles og underkastes en histologisk undersoegelse paa et veterinaert laboratorium, der staar under direkte tilsyn af et af de i bilag G naevnte laboratorier - alle dyr fra besaetninger, som har vaeret i smittende kontakt med et dyr med en leukosetumor, underkastes en proeve for enzootisk kvaegleukose, som udfoeres i henhold til bilag G paa et laboratorium, der staar under direkte tilsyn af et af de i bilag G naevnte laboratorier - smittede dyr kan kun udskilles fra besaetninger, hvor det er konstateret, at et dyr har en leukosetumor, eller hvor der er konstateret enzootisk kvaegleukose, for at blive slagtet under tilsyn af en kompetent veterinaermyndighed . Der foeres officielt tilsyn med besaetningen, indtil samtlige dyr paa mere end 24 maaneder i denne besaetning har reageret negativt paa mindst to proever foretaget med mindst fire maaneders mellemrum i henhold til bilag G paa et laboratorium, der staar under direkte tilsyn af et af de i dette bilag naevnte laboratorier .

De supplerende betingelser, som kan kraeves for denne udvidelse i enhver af de paagaeldende medlemsstater eller dele heraf, kan angives naermere i den i foerste afsnit omhandlede afgoerelse ." 7 ) I bilag E indsaettes i slutningen af litra a ) foelgende led :

"- Enzootisk kvaegleukose ".

8 ) I bilag F, formular I :

a ) punkt V :

aa ) indsaettes efter litra d ) foelgende litra e ):

"e ) - de har i de seneste tolv maaneder ( 9 ) eller, hvis de er mindre end tolv maaneder gamle, siden foedslen vaeret i en besaetning, hvor der i de seneste tre aar ( 10 ), saa vidt undertegnede ved og ifoelge ejerens forsikringer, ikke har vaeret paavist noget tilfaelde af enzootisk kvaegleukose ( 11 ) ( 12 ) - de stammer fra en besaetning, hvor intet tyder paa, at der i loebet af de sidste tre aar har vaeret tilfaelde af enzootisk kvaegleukose ( 13 ) - paa undersoegelsesdatoen havde samtlige dyr paa mere end 24 maaneder i loebet af de seneste tolv maaneder ( 14 ) reageret negativt ( 15 ) ( 16 ) paa en proeve ( 17 ) - de har inden for den foreskrevne frist paa 30 dage ( 18 ) reageret negativt ( 19 ) ( 20 ) ( 21 ) paa en enkeltdyrsproeve ( 22 ) for enzootisk kvaegleukose - de er bestemt til opfedning ( 23 ) ( 24 )" bb ) Bliver litra e ) til i ) henholdsvis litra f ) til j ) b ) indfoejes efter fodnote ( 25 ) foelgende fodnoter :

"( 26 ) Denne undtagelse gaelder kun tyre paa mindre end 30 maaneder bestemt til opfedning, naar disse dyr er tydeligt maerket og underkastes en saerlig kontrol i bestemmelseslandet .

"( 27 ) Denne angivelse er kun noedvendig for vaerdifuldt racerent avlskvaeg, som udelukkende skal anvendes til avlsbrug .

"( 28 ) Denne enkeltdyrsproeve er blevet udfoert i henhold til bilag G i direktiv 64/432/EOEF ." 9 ) Bilag G som anfoert i bilaget til dette direktiv tilfoejes .

Artikel 2 Med virkning fra 1 . juli 1990 foretages foelgende aendringer i direktiv 64/432/EOEF :

1 ) I artikel 3, stk . 2, udgaar litra j ).

2 ) I artikel 3, stk . 3, affattes litra d ) saaledes som anfoert nedenfor, og litra e ) og f ) indsaettes :

"d ) stamme fra en besaetning, der er fri for enzootisk kvaegleukose i henhold til artikel 2, litra s ) "e ) ud over betingelsen i litra d ), hvis dyrene er mere end tolv maaneder gamle, have reageret negativt paa en enkeltdyrsproeve foretaget i henhold til bilag G inden for 30 dage foer indladningen "f ) ikke underkastes kravene i litra d ) og e ), hvis det drejer sig om dyr, der er mindre end 30 maaneder gamle og bestemt til koedproduktion, hvis de :

ii ) stammer fra en besaetning, hvor der inden for de seneste to aar ikke er anmeldt og bekraeftet noget tilfaelde af enzootisk kvaegleukose ii ) ved indladningen er blevet forsynet med et saerligt maerke og indtil slagtningen forsat har vaeret under tilsyn for saa vidt bestemmelsesmedlemsstaten traeffer alle forholdsregler for at undgaa smitte af besaetningerne paa dens omraade ." 3 ) I artikel 7, stk . 1, udgaar afsnit G .

4 ) I artikel 8, stk . 2, udgaar sidste afsnit .

5 ) Artikel 8a udgaar .

6 ) I bilag F, formular I,

- affattes punkt V, litra e ), saaledes :

"e ) - de har i de seneste tolv maaneder ( 29) eller, hvis de er mindre end tolv maaneder gamle ( 30 ), siden foedslen vaeret i en besaetning, der er fri for enzootisk kvaegleukose ( 31 ) ( 32 ) - de har inden for den foreskrevne frist paa 30 dage ( 33 ) reageret negativt paa en enkeltdyrsproeve ( 34 ) for enzootisk kvaegleukose ( 35 ) ( 36 ) - de er bestemt til opfedning ( 37 )" - affattes fodnote ( 38 ) saaledes :

( 39 ) Denne undtagelse gaelder kun for dyr paa mindre end 30 maaneder bestemt til opfedning, naar disse dyr :

- stammer fra en besaetning, hvor der inden for de seneste to aar ikke er anmeldt og bekraeftet noget tilfaelde af enzootisk kvaegleukose - er tydeligt maerket og underkastes en saerlig kontrol i bestemmelseslandet .

- udgaar fodnote ( 40 ) - bliver fodnote ( 41 ) herefter fodnote ( 42 ).

Artikel 3 1 . For at deres bestande kan betegnes som vaerende fri for enzootisk kvaegleukose ivaerksaetter medlemsstaterne et program med det formaal at underkaste bestandene en af de proever, der er omhandlet i bilag G til direktiv 64/432/EOEF .

2 . Medlemsstaterne underretter mindst én gang om aaret Kommissionen om virkeliggoerelsen af deres program og om de opnaaede resultater ved dets gennemfoerelse .

Artikel 4 Raadet, der traeffer afgoerelse paa forslag af Kommissionen, fastlaegger inden den 1 . januar 1990 de kriterier, der goer det muligt for en medlemsstat eller en del af en medlemsstats omraade at blive anerkendt som vaerende fri for enzootisk kvaegleukose, og de forudsaetninger, der skal vaere opfyldt for at garantere opretholdelsen af denne status, samt regler for handelen med omraader eller medlemsstater, der er fri for enzootisk kvaegleukose .

Artikel 5 Medlemsstatene saetter de noedvendige bestemmelser i kraft for at efterkomme kravene :

- i artikel 1 og 3 senest den 1 . juli 1988 - i artikel 2 senest den 1 . juli 1990 .

De underretter straks Kommissionen herom .

Artikel 6 Direktiv 80/1102/EOEF ( 43 ) ophaeves .

Artikel 7 Dette direktiv er rettet til medlemsstaterne .

Udfaerdiget i Luxembourg, den 14 . juni 1988 .

Paa Raadets vegne I . KIECHLE Formand EWG:L111UMBD00.94 FF : 1UDA; SETUP : 01; Hoehe : 1870 mm; 320 Zeilen; 13724 Zeichen;

Bediener : JUTT Pr .: C;

Kunde : 42090 ( 1 ) EFT nr . C 5 af 9 . 1 . 1988, s . 5 . ( 2 ) EFT nr . C 49 af 22 . 2 . 1988, s . 164 . ( 3 ) EFT nr . C 80 af 28 . 3 . 1988, s . 34 . ( 4 ) EFT nr . L 145 af 13 . 6 . 1977, s . 44 . ( 5 ) EFT nr . L 15 af 19 . 1 . 1978, s . 34 . ( 6 ) EFT nr . L 24 af 27 . 1 . 1987, s . 51.(7 ) EFT nr . 121 af 29 . 7 . 1964, s . 1977/64 . ( 8 ) EFT nr . L 357 af 19 . 12 . 1987, s . 1.(9 ) EFT nr . L 325 af 1 . 12 . 1980, s . 18. BILAG "BILAG G PROEVER TIL PAAVISNING AF ENZOOTISK KVAEGLEUKOSE Enzootisk kvaegleukose paavises ved en immuno-diffusionsproeve som beskrevet i punkt A og B nedenfor, eller ved en proeve med brug af enzymmaerket antistof ( ELISA ) som beskrevet i punkt C nedenfor . Immuno-diffusionsmetoden er forbeholdt enkeltdyrsproever .

Goeres der behoerigt begrundet indsigelse mod proeveresultaterne, benyttes en back-up test i form af en immuno-diffusionsproeve .

A . Agrar-gel-immunodiffusionsproeven for enzootisk kvaegleukose 1 . Til proeven anvendes et antigen, der indeholder glycoproteiner fra kvaegleukosevirus . Antigenet standardiseres efter et standardserum ( E.I . serum ) fra Statens Veterinaere Serumlaboratorium, Koebenhavn .

2 . De nedenfor angivne officielle institutter er ansvarlige for, at standardantigenet til laboratoriebrug korrigeres efter det officielle EOEF-standardserum ( E.I . serum) fra Statens Veterinaere Serumlaboratorium, Koebenhavn .

a ) Tyskland :

Bundesforschungsanstalt fuer Viruskrankheiten der Tiere, Tuebingen b ) Belgien :

Institut national de recherches vétérinaires, Bruxelles c ) Frankrig :

Laboratoire national de pathologie bovine, Lyon d ) Storhertugdoemmet Luxembourg :

- e ) Italien :

Istituto Zooprofilattico Sperimentale, Perugia f ) Nederlandene :

Centraal Diergeneeskundig Instituut, Afdeling Rotterdam g ) Danmark :

Statens Veterinaere Serumlaboratorium, Koebenhavn h ) Irland :

Veterinary Research Laboratory, Abbotstown, Dublin i ) Det Forenede Kongerige :

1 . Storbritannien :

The Central Veterinary Laboratory, Weybridge, England 2 . Nordirland :

The Veterinary Research Laboratory, Stormont, Belfast j ) Spanien:

Laboratorio de Sanidad y Producción Animal de Barcelona k ) Portugal :

Laboratório Nácional de Investigaçao Veterinária - Lisboa .

3 . Standardantigener til laboratoriebrug sendes mindst en gang om aaret til de under nr . 2 angivne EOEF-referencelaboratorier for at blive proevet over for det officielle EOEF-standardserum . Ud over denne standardisering kan det anvendte antigen korrigeres som angivet i punkt B .

4 . Reagenserne til proeven omfatter :

a ) antigen : antigenet skal indeholde specifikke glycoproteiner fra enzootisk kvaegleukosevirus, som er standardiseret efter det officielle EOEF-serum b ) det serum, der skal proeves c ) kendt positivt kontrolserum d ) agar-gel 0,8 % agar 8,5 % NaC 0,05 M TRIS-buffer, pH 7,2 15 ml af denne agar haeldes i en petriskaal med en diameter paa 85 mm, hvilket giver et 2,6 mm tykt agarlag .

5 . I agaren udskaeres syv fugtfri huller helt til skaalens bund; hullerne skal danne et moenster med et hul i midten og de oevrige seks huller som en cirkel rundt om .

Midterhullets diameter : 4 mm Periferihullernes diameter : 6 mm Afstand mellem midterhul og periferihuller : 3 mm .

6 . Midterhullet fyldes med standardantigenet . Periferihul 1 og 4 ( se tegningen ) fyldes med kendt positivt serum, og hul 2, 3, 5 og 6 fyldes med de sera, der skal proeves . Hullerne fyldes, indtil menisken forsvinder .

A . 6 .

1 k 6 kk 2 k 5 kk 3 k 4 7 . Dette giver foelgende reagensmaengder :

Antigen :

32 mikroliter Kontrolserum :

73 mikroliter Sera, der skal proeves :

73 mikroliter 8 . Herefter henstaar det 72 timer ved stuetemperatur ( 20 til 27 °C ) i et lukket fugtighedskammer .

9 . Proeven kan aflaeses efter 24 og 48 timer, men aflaesning af det endelige resultat maa foerst ske efter 72 timer .

a ) Det serum, der skal proeves, er positivt, hvis det danner en specifik praecipitinlinje med BLV-antigenet og en helt identisk linje med kontrolserumet b ) Det serum, der skal proeves, er negativt, hvis det ikke danner en specifik linje med BLV-antigenet, og hvis det ikke afboejer kontrolserumets linje c ) Reaktionen anses for usikker, hvis den :

i(i ) afboejer kontrolserumets linje mod hullet med BLV-antigen uden at danne en synlig praecipitinlinje med antigenet, eller ( ii ) hvis den hverken kan aflaeses som positiv eller negativ .

I tilfaelde af usikker reaktion kan proeven gentages med koncentreret serum .

B .

Metode til standardisering af antigener Oploesninger og materialer :

1 . 40 ml 1,6 % agarose i 0,05 M Tris/MCl buffer, pH 7,2 amed 8,5 % NaCl 2 . 15 ml kvaegleukoseserum, der kun indeholder antistoffer til glycoproteiner af kvaegleukosevirus; fortynding : 1:10 i 0,05 M Tris/HCl buffer, pH 7,2 med 8,5 % NaCl 3 . 15 ml kvaegleukoseserum, der kun indeholder antistoffer til glycoproteiner af kvaegleukosevirus; fortynding : 1:5 i 0,05 M Tris/HCl buffer, pH 7,2 med 8,5 % NaCl 4 . 4 petriskaale af plast med en diameter paa 85 mm 5 . 1 dorn med en diameter paa 4 til 6 mm 6 . referenceantigen 7 . det antigen, der skal standardiseres 8 . vandbad ( 56 °C ) Fremgangsmaade :

Agarosan ( 1,6 %) oploeses i Tris/HCl buffer ved forsigtig opvarmning til 100 °C . Den hensaettes derefter i vandbad paa 56 °C i ca . 1 time . Ogsaa kvaegleukoseserumfortyndingerne hensaettes i vandbad paa 56 °C .

Nu blandes 15 ml af den 56 ° varme agaroseoploesning med den 15 ml kvaegleukoseserum ( 1:10 ) og omrystes hurtigt; derefter haeldes det i 2 petriskaale, 15 ml i hver . Det samme goeres med kvaegleukoseserumet i fortyndingen 1:5 .

Naar agarosen er stoerknet, laves der huller paa foelgende maade :

Tilsaetning af antigen :

II . Petriskaal 1 og 3 hul A - ufortyndet referenceantigen hul B - referenceantigen, fortynding 1:2 hul C og E - referenceantigen hul D - ufortyndet antigen, der skal proeves II . Petriskaal 2 og 4 hul A - ufortyndet antigen, der skal proeves hul B - antigen, der skal proeves, fortynding 1:2 hul C - antigen, der skal proeves, fortynding 1:4 hul D - antigen, der skal proeves, fortynding 1:8 .

Bemaerkninger 1 . For at faa optimal udfaeldning boer forsoeget foretages med to serumfortyndinger ( 1:5 og 1:10 ).

2 . Hvis udfaeldningsdiameteren er for lille med begge fortyndinger, fortyndes serumet yderligere .

3 . Hvis udfaeldningsdiameteren med begge fortyndinger er for stor og udviskes, vaelges en mindre fortyndet serum .

4 . Agarosens endelige koncentration skal vaere 0,8 %; serumkoncentrationernes henholdsvis 5 % og 10 %.

5 . De maalte diametre indsaettes i foelgende koordinatsystem . Den fortynding af det antigen, der skal proeves, som har samme diameter som referenceantigenet, er den fortynding, der skal anvendes .

C . Proeve med brug af enzymmaerket antistof ( ELISA ) til paavisning af enzootisk kvaegleukose 1 . Til ELISA-proeven anvendes foelgende materialer og reagenser :

a ) mikroplader, skaale eller enhver anden form for fast fase b ) antigenet bindes til den faste fase med eller uden brug af polyklonale eller monoklonale antistoffer . Hvis antigenet paafoeres den faste fase direkte, maa alle testproever med positiv reaktion gentestes med kontrolantigen . Kontrolantigenet boer vaere identisk med antigenet, undtagen naar det gaelder BLV-antigener . Hvis den faste fase paafoeres capture-antistoffer, maa antistofferne ikke reagere med andre antigener end BLV-antigener c ) den biologiske proeve ( serum eller maelk ) d ) en positiv og en negativ kontrol e ) konjugat - et biotinyleret eller enzymkonjugeret antibovint immunglobulin eller et biotinyleret eller enzymkonjugeret anti-BLV immunglobulin f ) avidin - enzym til maalinger ved brug af biotinylerede immunglobulin-praeparater g ) et substrat, der svarer til det anvendte enzym h ) en stopoploesning i ) bufferoploesninger til fortynding af proeverne, til fremstilling af reagenserne og til vask j ) et aflaesningssystem med filtre svarende til det anvendte substrat .

2 . Teststandardisering og -foelsomhed ELISA-proeven maa vaere saa foelsom, at E4-serum reagerer positivt, naar det fortyndes ti gange ( serumproever ) eller 250 gange ( maelkeproever ) mere end den oploesning, der faas ved pooling af proever .

Hvor proever ( serum og maelk ) testes separat, maa E4-serum, der fortyndes i forholdet 1:10 ( i negativt serum ) eller 1:250 ( i negativ maelk ), reagere positivt, naar det testes i samme proeveoploesning som den, der anvendes til enkeltdyrsproever .

E4 -serummet leveres af Statens Veterinaere Serumlaboratorium i Koebenhavn .

3 . Betingelser for anvendelse af ELISA-proeven ELISA-metoden kan anvendes ved hjaelp af en proeve, der udtages af en pooling af maelk fra en bedrift, hvor der findes mindst en tredjedel malkekoeer, paa betingelse af at proeven omfatter maelk produceret af mindst 50 koeer samt en koncentrering af valle i tilfaelde af pooling fra mellem 20 og hoejst 50 koeer, og at antallet af proever, naar poolingen foretages af maelk stammende fra mere end 50 koeer, forhoejes tilsvarende .

ELISA-metoden kan ligeledes anvendes ved en pooling af blodproever fra hoejst 50 dyr .

Anvendes en af ovennaenvte muligheder, skal der traeffes foranstaltninger til sikring af, at de udtagne proever kan henfoeres til de dyr, fra hvilke den testede maelk eller de testede sera stammer .

Hvis én af proeverne giver positiv reaktion, skal besaetningen forblive under officielt tilsyn indtil en negativ reaktion har kunnet konstateres ved mindst to enkeltdyrsproever foretaget med mindst fire maaneders mellemrum paa alle dyr, der er over seks maaneder gamle, i henhold til de ovenfor anfoerte bestemmelser i et laboratorium, der staar under direkte tilsyn af et af de i punkt A naevnte laboratorier ."