„1. ОПРЕДЕЛЯНЕ НА СКОРБЯЛА
ПОЛЯРИМЕТРИЧЕН МЕТОД
1. Цел и обхват
Методът дава възможност за определяне на нивата на скорбяла и на скорбялоразграждащи продукти с високо молекулно тегло във храните за животни, с цел проверка за съответствие с Директива 86/174/ЕИО на Комисията и Директива 96/25/ЕО на Съвета.
2. Принцип
Методът включва две определяния. При първото, пробата се третира в горещо състояние с разредена солна киселина. След пречистване и филтрация се измерва оптичното въртене на разтвора чрез поляриметрия.
При второто, пробата се извлича с 40 % етанол. След подкисляване на филтрата със солна киселина, пречистване и филтрация, се измерва оптичното въртене, както при първото определяне.
Като се умножи разликата между двете измервания с коефициент, който е известен, се получава съдържанието на скорбяла в пробата.
3. Реактиви
3.1. 25 % (w/w) солна киселина, d: 1,126 g/ml.
3.2. 1,128 % (w/v) солна киселина.
Трябва да се провери концентрацията чрез титруване, като се използва разтвор на натриев хидроокис 0,1 mol/l, при наличието на 0,1 % (w/v) метилрот в 94 % (v/v) етанол. 10 ml = 30,94 ml NaOH 0,1 mol/l.
3.3. Карез реактив I: разтворете във вода 21,9 g цинков ацетат
и 3 g ледена оцетна киселина. Допълнете с вода до 100 ml.
3.4 Карез реактив II: разтворете във вода 10,6 g калиев фероцианид
. Допълнете с вода до 100 ml.
3.5. 40 % (v/v) етанол, d: 0,948 g/ml при 20 °С.
4. Апаратура
4.1. Ерленмайерова колба от 250 ml, със стандартен стъклен шлиф и с обратен хладник.
4.2. Поляриметър или захарометър.
5. Процедура
5.1. Приготвяне на пробата
Разтрошете пробата до получаване на достатъчно дребни частици, за да може цялата проба да премине през сито с кръгли отвори с големина 0,5 mm.
5.2. Определяне на общото оптично въртене (P или S) (виж забележка 7.1)
Претеглете с точност до mg 2,5 g от натрошената проба и поставете в 100-милилитрова мерителна колба. Прибавете 25 ml солна киселина (3.2), разклатете до получаване на равномерно разпределение на пробата и добавете още 25 ml солна киселина (3.2). Потопете колбата във водна баня с вряща вода, като не спирате да разклащате енергично през първите три минути, за да се предотврати образуването на агломерати. Количеството вода във водната баня трябва да е достатъчно, за да се задържи температурата на кипене при поставяне на колбата в нея. Колбата не трябва да се изважда от банята докато трае разклащането. Извадете от банята точно след 15 минути, добавете 30 ml студена вода и незабавно охладете до 20 °С.
Добавете 5 ml Карез реактив I (3.3) и разклащайте в продължение на една минута, след което добавете 5 ml Карез реактив II (3.4) и отново разклащайте в продължение на една минута. Допълнете с вода до получаване на обема, разбъркайте и филтрирайте. Ако филтратът не е идеално бистър (което рядко се случва), повторете определянето, като използвате по-голямо количество Карез реактиви I и II, например 10 ml.
С поляриметър или захарометър измерете оптичното въртене на разтвора в епруветка от 200 mm.
5.3. Определяне на оптичното въртене (P „или S“) на вещества, разтворими в 40 % етанол
Претеглете 5 g от пробата с точност до mg, поставете в 100-милилитрова мерителна колба и прибавете 80 ml етанол (3.5) (виж забележка 7.2). Оставете да престои един час при стайна температура, като на шест пъти през това време разклащате енергично, така че тестваната проба да може добре да се смеси с етанола. Допълнете с етанол (3.5) до получаване на обема, разбъркайте и филтрирайте. Отмерете с пипета 50 ml филтрат (= 2,5 g от пробата) и го поставете в ерленмайерова колба от 250 mm, прибавете 2,1 ml солна киселина (3.1) и разклатете енергично. Поставете обратния хладник към ерленмайеровата колба и я потопете в баня с вряща вода. Точно след 15 минути извадете ерленмайеровата колба от банята, прехвърлете съдържанието в мерителна колба от 100 ml, като обливате с малко студена вода, и охладете до 20 °С. Избистрете, като използвате Карез реактиви I (3.3) и II (3.4), допълнете с вода до получаване на обема, разбъркайте, филтрирайте и измерете оптичното въртене, както е посочено в параграфи две и три от 5.2.
6. Изчисление на резултатите
Съдържанието на скорбяла (%) се изчислява, както следва:
6.1. Измерване с поляриметър
|
P |
= |
общо оптично въртене в ъглови градуси |
||||||||||||||
|
P |
= |
оптично въртене в ъглови градуси на веществата, разтворими в 40 % (V/V) етанол |
||||||||||||||
|
|
= |
специфично оптично въртене на чиста скорбяла. Традиционно приети за коефициенти са следните числените стойности:
|
6.2. Измерване със захарометър
|
S |
= |
общо оптично въртене в захарометрови градуси |
||||||
|
S′ |
= |
оптично въртене в захарометрови градуси на веществата, разтворими в 40 % (V/V) етанол |
||||||
|
N |
= |
тегло (g) захароза в 100 ml вода, даващо оптична ротация на стойност 100 захарометрови градуса, измерени с епруветка от 200 mm
|
||||||
|
|
= |
специфично оптично въртене на чиста скорбяла (виж 6.1) |
6.3. Повторяемост
Разликата в резултатите от две паралелни определяния, проведени върху същата проба, не трябва да превишава 0,4 по абсолютна стойност при съдържание на скорбяла по-ниско от 40 %, и 1,1 % по относителна при съдържание на скорбяла равно или по-високо от 40 %.
7. Забележки
|
7.1. |
Ако пробата съдържа повече от 6 % карбонати, изчислено по отношение на калциев карбонат, те трябва да се неутрализират, като се обработят с подходящо количество разредена сярна киселина, преди определянето на общото оптично въртене. |
|
7.2. |
В случай на продукти с високо съдържание на лактоза, като серум от сухо мляко или сухо обезмаслено мляко, извършете следното след като добавите 80 ml етанол (3.5). Поставете обратния хладник към колбата и я потопете за 30 минути във водна баня при 50 °С. Оставете да се охлади и продължете анализа, както е посочено в 5.3. |
|
7.3. |
Известно е, че следните хранителни суровини, когато присъстват в храните за животни в значително количество, предизвикват смущения при определяне на съдържанието на скорбяла по поляриметричния метод, което би могло да доведе до неточни резултати:
|