2.1.1.

Sauf indication contraire, l'eau utilisée pour les opérations de dissolution, de dilution ou de rinçage doit obligatoirement être de l'eau distillée, de l'eau déionisée ou de l'eau minéralisée de pureté au moins équivalente.

2.1.2.

Par «solution» ou «dilution» (sans autre précision), on entend «solution dans l'eau» ou «dilution avec de l'eau».

5.1.1.

La répétabilité (r) est la valeur au-dessous de laquelle se situe la valeur absolue de la différence entre deux résultats individuels obtenus avec le même procédé sur un produit identique dans les mêmes conditions (même analyste, même appareillage, même laboratoire et court intervalle de temps).

5.1.2.

La reproductibilité (R) est la valeur au-dessous de laquelle se situe la valeur absolue de la différence entre deux résultats individuels obtenus avec le même procédé sur un produit identique dans des conditions différentes (analystes différents, appareillages différents, laboratoires différents et/ou intervalles de temps différents).

5.1.3.

Sauf indication contraire, concernant chacune des méthodes mises en œuvre, les valeurs de répétabilité et de reproductibilité sont exprimées au niveau de probabilité de 95 % selon la norme ISO 5725: deuxième édition 1986.

5.1.4.

Les essais circulaires et les études nécessaires devraient être planifiés et réalisés conformément aux orientations internationales.

4.2.2.1.

Mélanger le lait selon un procédé approprié avant de procéder à l'échantillonnage.

Pour mélanger le contenu des grands récipients, des cuves de stockage, des camions-citernes ou des wagons-citernes, l'agitation mécanique est conseillée (4.2.2.2).

La durée du mélange dépend de la période pendant laquelle on a laissé le lait. Il doit avoir été prouvé que le procédé de mélange appliqué dans chaque cas particulier est bien approprié aux besoins de l'analyse envisagée; l'efficacité du mélange influence considérablement la similitude des résultats d'analyses effectuées sur des échantillons prélevés soit en différents endroits du lot, soit à la sortie de la cuve à intervalles réguliers pendant la vidange. Le mode de mélange du lait (lait cru ou lait entier) est efficace si la différence de la teneur en matières grasses entre deux échantillons, prélevés dans ces conditions, est intérieure à 0,1 %.

Dans un grand récipient pourvu d'un trou de vidange à la partie inférieure, il peut y avoir, au point d'évacuation, une petite quantité de lait non représentative de l'ensemble du contenu même après mélange. C'est pourquoi il est préférable de prélever les échantillons par un trou d'homme. En cas de prélèvement des échantillons au trou de vidange, laisser s'écouler une quantité de lait suffisante pour assurer la représentativité des échantillons.

4.2.2.2.

Le mélange du contenu des grands récipients ou des cuves de stockage, des camions-citernes et des wagons-citernes peut s'effectuer:

—

lors du transport et du stockage, des précautions doivent être prises pour isoler l'échantillon de toute odeur indésirable et de la lumière directe du soleil. Si le récipient utilisé pour les échantillons est transparent, il doit être stocké à l'abri de la lumière.

4.1.

Balance analytique

4.2.

Dessiccateur, pourvu d'un déshydratant efficace (par exemple gel de silice séché récemment avec indicateur hygrométrique).

4.3.

Étuve ventilée, réglable par thermostat pour opérer dans tout l'espace de travail à 102 ± 2 oC.

4.4.

Capsules à fond plat de 20 à 25 mm de hauteur, de 50 à 75 mm de diamètre, en matériau approprié, munies de couvercles bien ajustés et faciles à enlever.

4.5.

Bain d'eau bouillante

4.6.

Homogénéisateur

6.3.1.

Sécher au préalable la capsule en la plaçant sur le bain d'eau; maintenir en ébullition pendant 30 minutes (4.5).

6.3.2.

Placer la capsule, avec son couvercle posé à côté, dans l'étuve (4.3), réglée à 102 ± 2 oC pendant deux heures. Mettre le couvercle sur la capsule et retirer de l'étuve.

6.3.3.

Laisser refroidir dans le dessiccateur (4.2) à température ambiante (30 minutes au moins) et peser à 0,1 mg près.

6.3.4.

Placer à nouveau la capsule, avec son couvercle posé à côté, dans l'étuve pendant une heure. Mettre le couvercle sur la capsule et retirer de l'étuve. Laisser refroidir pendant 30 minutes environ dans le dessiccateur et peser à 0,1 mg près.

6.3.5.

Répéter les opérations décrites au point 6.3.4 jusqu'à ce que la différence de masse entre deux pesées successives ne dépasse pas 0,5 mg. Relever la masse la plus faible.

WT

=

la matière sèche en g pour 100 g

m0

=

la masse, en grammes, de la capsule et du couvercle (6.1)

m1

=

la masse, en grammes, de la capsule, du couvercle et de la prise d'essai (6.2)

m2

=

la masse, en grammes, de la capsule, du couvercle et de la prise d'essai sèche (6.3.5)

7.2.1.

Répétabilité (r): 0,10 g de matière sèche pour 100 g de produit.

7.2.2.

Reproductibilité (R): 0,20 g de matière sèche pour 100 g de produit.

4.1.

«Hydroxyde d'ammonium»: solution à environ 25% (m/m) NH3. Une solution d'hydroxyde d'ammonium plus concentrée peut également être utilisée (6.5.1 et A.1.5.1).

4.2.

Éthanol, au moins 94 % (v/v). De l'éthanol dénaturé par du méthanol peut être utilisé pour autant qu'il soit certain que cela ne modifiera en rien les résultats de la détermination.

4.3.

Dissoudre 1 g de rouge congo ou de rouge de crésol dans l'eau et diluer à 100 ml.

Note: L'emploi de cette solution, qui permet de mieux voir l'interface entre le solvant et la couche aqueuse, est facultatif (6.5.2). D'autres solutions aqueuses de colorants peuvent être utilisées pour autant qu'elles ne modifient pas le résultat de la détermination.

4.4.

Oxyde diéthylique, exempt de peroxydes, ne contenant pas plus de 2 mg/kg d'antioxydants et conforme aux spécifications de l'essai à blanc (6.3).

4.5.

Éther de pétrole ayant un point d'ébullition entre 30 et 60 oC.

4.6

Mélange de solvants préparé peu de temps avant l'emploi par mélange de volumes égaux d'oxyde diéthylique (4.4) et d'éther de pétrole (4.5).

5.1.

5.2.

Centrifugeuse dans laquelle les fioles ou les tubes d'extraction (5.6) peuvent être soumis à une vitesse de rotation de 500 à 600 tr/min-1, de façon à produire un champ de gravitation de 80 à 90 g à l'extrémité extérieure des fioles ou des tubes.

Note: L'emploi d'une centrifugeuse est facultatif (6.5.5).

5.3.

Appareils de distillation ou d'évaporation permettant de distiller les solvants et l'éthanol des fioles ou de les évaporer des béchers et des capsules (6.5.12 et 6.5.15) à une température n'excédant pas 100 oC.

5.4.

Étuve, à chauffage électrique, munie d'ouïes de ventilation complètement ouvertes, réglables à une température de 102 ± 2 oC dans l'espace utilisé. L'étuve doit être munie d'un thermomètre convenable.

5.5.

Bain d'eau réglable à une température de 35 à 40 oC.

5.6.

Note: On peut également utiliser des tubes d'extraction des matières grasses munis d'un siphon ou d'un dispositif de lavage dont le mode opératoire, différent dans ce cas, est décrit à l'appendice.

Les fioles (ou les tubes) doivent être pourvus de bouchons en verre dépoli, en liège de bonne qualité ou en une autre matière inaltérable aux réactifs utilisés. Les bouchons en liège doivent être lavés à l'oxyde diéthylique (4.4), maintenus dans l'eau à 60 oC ou plus pendant au moins 15 minutes et ensuite mis à refroidir dans l'eau, de façon à en être imprégnés au moment de l'emploi.

5.7.

Portoir pour maintenir les fioles (ou les tubes) d'extraction des matières grasses (5.6).

5.8.

Flacon de lavage approprié à l'emploi du mélange de solvants (4.6). Ne pas utiliser de flacon de lavage en plastique.

5.9.

Récipients pour la récupération des matières grasses, par exemple fioles à ébullition (fioles à fond plat) ou d'Erlenmeyer d'une capacité de 125 à 250 ml ou capsules métalliques. Lorsqu'on utilise des capsules métalliques, elles doivent, de préférence, être en acier inoxydable, à fond plat, avec un bec et elles doivent avoir un diamètre de 80 à 100 mm et une hauteur d'environ 50 mm.

5.10.

Régulateurs d'ébullition, exempts de matières grasses, en porcelaine non poreuse, en carbure de silicium ou billes de verre (emploi facultatif dans le cas de capsules métalliques).

5.11.

Éprouvettes graduées de 5 et 25 ml de capacité.

5.12.

Pipettes graduées de 10 ml de capacité.

5.13.

Pinces métalliques permettant de tenir les fioles, béchers ou capsules.

6.5.1.

Ajouter 2 ml de solution d'hydroxyde d'ammonium (4.1) ou un volume équivalent d'une solution plus concentrée et mélanger vigoureusement avec la prise d'essai dans le bulbe étroit de la fiole. Après addition de l'hydroxyde d'ammonium, effectuer la détermination sans attendre.

6.5.2.

Ajouter 10 ml d'éthanol (4.2) et mélanger doucement, mais convenablement, en laissant le contenu de la fiole aller et venir entre les deux bulbes; éviter d'amener le liquide trop près du col de la fiole. Ajouter, éventuellement, deux gouttes de solution de rouge congo ou de rouge de cresol (4.3).

6.5.3.

Ajouter 25 ml d'oxyde diéthylique (4.4), fermer la fiole avec un bouchon en liège saturé d'eau ou avec un bouchon mouillé avec de l'eau (5.6), agiter la fiole vigoureusement, mais sans excès (afin d'éviter la formation d'émulsions persistantes) pendant une minute en position horizontale, le bulbe étroit étant en haut. De temps en temps, laisser le liquide du bulbe large passer dans le bulbe étroit. Si nécessaire, refroidir la fiole à l'eau courante puis retirer avec précaution le bouchon en liège ou le dispositif de fermeture et le rincer ainsi que le col de la fiole avec une petite quantité de mélange de solvants (4.6) en se servant du flacon de lavage (5.8), de façon à ce que les liquides de rinçage coulent dans la fiole.

6.5.4.

Ajouter 25 ml d'éther de pétrole (4.5), obturer la fiole à l'aide du bouchon en liège réhumidifié (réhumidification par trempage dans de l'eau) ou d'un autre dispositif de fermeture et agiter doucement la fiole pendant 30 secondes comme décrit au point 6.5.3.

6.5.5.

Centrifuger la fiole bouchée pendant 1 à 5 minutes à une vitesse de rotation de 500 à 600 tr/min-1 (5.2). En l'absence d'une centrifugeuse (voir la note au point 5.2), laisser la fiole bouchée reposer dans le portoir (5.7) pendant 30 minutes au moins jusqu'à ce que la couche surnageante soit claire et nettement séparée de la couche aqueuse. Si nécessaire, refroidir la fiole à l'eau courante.

6.5.6.

Enlever avec précaution le bouchon en liège ou tout autre dispositif de fermeture et le rincer ainsi que l'intérieur du col de la fiole avec un peu de mélange de solvants (4.6) de façon à ce que les liquides de rinçage coulent dans la fiole.

Si l'interface se situe au-dessous du fond du col de la fiole, le faire monter à ce niveau en ajoutant doucement de l'eau par le côté de la fiole, afin de faciliter la décantation du solvant.

6.5.7.

En tenant la fiole d'extraction par le bulbe étroit, décanter avec soin le plus possible de la couche surnageante dans le récipient préparé, destiné à la récupération des matières grasses (6.4) contenant quelques régulateurs d'ébullition (5.10) dans le cas des fioles (facultatif avec les capsules métalliques), en évitant de décanter une partie quelconque de la couche aqueuse.

6.5.8.

Rincer l'extérieur du col de la fiole d'extraction avec un peu de mélange de solvants (4.6) en recueillant les liquides de rinçage dans le récipient destiné à la récupération des matières grasses et en veillant à ce que le mélange de solvants ne soit pas projeté sur l'extérieur de la fiole d'extraction.

Le solvant peut, éventuellement, être éliminé totalement ou partiellement du récipient par distillation ou évaporation comme décrit au point 6.5.12.

6.5.9.

Ajouter 5 ml d'éthanol (4.2) au contenu de la fiole d'extraction en se servant de l'éthanol pour rincer l'intérieur du col de la fiole et mélanger comme décrit au point 6.5.2.

6.5.10.

Effectuer une deuxième extraction en recommençant les opérations décrites aux points 6.5.3 à 6.5.8, mais en utilisant seulement 15 ml d'oxyde diéthylique (4.4) et 15 ml d'éther de pétrole (4.5); utiliser l'oxyde diéthylique pour rincer l'intérieur du col de la fiole d'extraction. Si nécessaire, faire monter l'interface au milieu du col de la fiole, pour permettre à la décantation finale des solvants d'être aussi complète que possible.

6.5.11.

Effectuer une troisième extraction en répétant à nouveau les opérations décrites aux points 6.5.3 à 6.5.8, mais en utilisant seulement 15 ml d'oxyde diéthylique (4.4) er 15 ml d'éther de pétrole (4.5); utiliser l'oxyde diéthylique pour rincer l'intérieur du col de la fiole d'extraction. Si nécessaire, faire monter l'interface au milieu du col de la fiole d'extraction pour permettre à la décantation finale des solvants d'être aussi complète que possible.

La troisième extraction peut être supprimée dans le cas du lait écrémé.

6.5.12.

Éliminer les solvants (y compris l'éthanol), aussi complètement que possible, de la fiole par distillation ou du bécher ou de la capsule par évaporation (5.3), en rinçant l'intérieur du col de la fiole avec un peu de mélange de solvants (4.6) avant de commencer la distillation.

6.5.13.

Chauffer le récipient destiné à la récupération des matières grasses (la fiole étant penchée pour permettre aux vapeurs de solvants de s'échapper) durant une heure dans l'étuve (5.4). Retirer le récipient destiné à la récupération des matières grasses de l'étuve, laisser refroidir (pas dans un dessiccateur, mais à l'abri de la poussière) à la température de la salle des balances (pendant une heure au moins pour les récipients en verre, pendant 30 minutes au moins pour les capsules métalliques) et peser à 0,1 mg près.

Ne pas essuyer le récipient juste avant la pesée. Placer le récipient sur la balance à l'aide de pinces pour éviter notamment les variations de température.

6.5.14.

Répéter les opérations décrites en 5.6.13 jusqu'à ce que la masse du récipient destiné à la récupération des matières grasses diminue de 0,5 mg ou moins, ou augmente, entre deux pesées successives. Noter la masse minimale comme étant la masse du récipient de récupération des matières grasses et de la matière extraite.

6.5.15.

Ajouter 25 ml d'éther de pétrole au récipient d'extraction des matières grasses, de façon à vérifier si, oui ou non, la matière extraite est entièrement soluble. Chauffer doucement et agiter le solvant par un mouvement rotatoire jusqu'à dissolution de toutes les matières grasses.

Si la matière extraite est entièrement soluble dans l'éther de pétrole, relever la masse des matières grasses comme étant la différence entre la masse finale de la fiole contenant l'extrait (6.5.14) et sa masse initiale (6.4).

6.5.16.

Si la matière extraite n'est pas entièrement soluble dans l'éther de pétrole, ou en cas de doute, extraire complètement les matières grasses du récipient par des lavages répétés avec de l'éther de pétrole chaud.

Laisser déposer les matières insolubles et décanter soigneusement l'éther de pétrole sans enlever les matières insolubles. Répéter cette opération trois fois en utilisant l'éther de pétrole pour rincer l'intérieur du col du récipient.

Enfin, rincer l'extérieur du sommet du récipient avec le mélange de solvants, de telle sorte que le solvant ne se répande pas à l'extérieur du récipient. Chasser les vapeurs d'éther de pétrole en chauffant le récipient pendant 1 heure dans l'étuve, laisser refroidir et peser comme décrit aux points 6.5.13 et 6.5.14.

Relever la masse des matières grasses comme étant la différence entre la masse déterminée au point 6.5.14 et cette masse finale.

F

=

la teneur en matières grasses

m0

=

la masse, en grammes, de la prise d'essai (6.2)

m1

=

la masse, en grammes, du récipient destiné à la récupération des matières grasses et de la matière extraite, déterminée au point 6.5.14

m2

=

la masse, en grammes, du récipient préparé pour la récupération des matières grasses ou, dans le cas de matières non dissoutes, du récipient destiné à la récupération des matières grasses et du résidu insoluble, déterminée au point 6.5.16

m3

=

la masse, en grammes, du récipient de récupération des matières grasses utilisé pour l'essai à blanc (6.3.) et de la matière extraite, déterminée au point 6.5.14

m4

=

la masse, en grammes, du récipient de récupération des matières grasses (6.4) utilisé pour l'essai à blanc (6.3.) ou, dans le cas des matières non dissoutes, du récipient de récupération des matières grasses et du résidu insoluble déterminée au point 6.5.16.

7.2.1.

7.2.2.

4.1.

Sulfate de potassium (K2SO4)

4.2.

Solution de sulfate de cuivre. Dissoudre 5,0 g de sulfate de cuivre (II) pentahydrate (CuSO4, 5H2O) dans de l'eau et compléter à 100 ml (à 20 oC) dans une fiole jaugée.

4.3.

Acide sulfurique, au moins 98,0% (m/m), H2SO4.

4.4.

Solution d'hydroxyde de sodium, 47% (m/m) 704 g NaOH/1 (à 20 oC).

Note: On peut également utiliser une solution d'hydroxyde de sodium moins concentrée, par exemple 40 % (m/m) 572 g/1, 20 oC ou 30% (m/m) 399 g/1, 20 oC.

4.5.

Solution d'acide borique. Dissoudre 40 g d'acide borique (H3BO3) dans un litre d'eau chaude, laisser refroidir et conserver dans une bouteille en verre borosilicaté.

4.6.

Indicateur. Dissoudre 0,01 g de rouge de méthyle, 0,02 g de bleu de bromothymol et 0,06 g de vert de bromocrésol dans 100 ml d'alcool éthylique. Conserver la solution dans une bouteille bouchée brune dans un endroit frais et sombre.

4.7.

C (1/2 H2SO4) ou c (HCl) = 0,05 mol/1 titrée à 0,0001 mol/1 près.

4.8.

4.9.

Sel d'ammonium, pur, tel que l'ammonium (NH4)2C2O4 · H2O ou le sulfate d'ammonium (NH4)2SO4.

4.10.

Tryptophane (C11H12N2O2), phénacétine (C10H7CH2CONH2) ou mono- ou dichlorhydrate de lysine (C6H14N2O2 · HCl ou C6H14N2O2 · 2HCl).

Note: Le degré de pureté des réactifs visés aux points 4.9 et 4.10 devrait être supérieur à la «qualité analytique». Pour le point 4.9 utiliser, si possible, une solution de sels d'ammonium certifiés.

5.1.

Ballons Kjeldahl de 500 ml de capacité

5.2.

Régulateurs d'ébullition, par exemple billes de verre d'environ 5 mm de diamètre, granules d' Hengar et pierre ponce.

5.3

Burette ou pipette automatique, délivrant 1,0 ml.

5.4.

Éprouvettes graduées en verre, d'une capacité de 50, 100 et 250 ml.

5.5.

Appareil de digestion (5.1) en position inclinée (à environ 45o), équipé d'un dispositif de chauffage électrique ou de brûleurs à gaz réglables pour que le contenu du ballon ne monte pas au-dessus du tiers du col, et d'un dispositif d'extraction de fumées.

5.6.

Appareil de distillation, en verre borosilicaté, auquel peut être adapté le ballon Kjeldahl (5.1), se composant d'un déflegmateur efficace relié à un réfrigérant efficace à tube intérieur droit, à la partie inférieure duquel est relié un tube d'évacuation; le tube de raccordement et le(s) bouchon(s) doivent être étanches et de préférence en néoprène.

5.7.

Pipette ou pipette automatique, délivrant 0,10 ml.

5.8.

Fioles coniques de 500 ml de capacité, graduées à 200 ml.

5.9.

Burette de 50 ml de capacité, graduée tous les 0,1 ml, avec une erreur maximale de ± 0,05 ml.

5.10.

Loupe grossissante pour une lecture précise de la burette (5.9)..

5.11.

pH-mètre

5.12.

Burette automatique

6.1.

Introduire successivement dans le ballon Kjeldahl (5.1) les régulateurs d'ébullition (5.2) (par exemple 3 billes de verre), 15 g de sulfate de potassium (4.1), 1,0 ml de solution de sulfate de cuivre (4.2), environ 5 g de lait (pesé à 0,001 g près) et 25 ml d'acide sulfurique (4.3). Utiliser l'acide pour entraîner les résidus de la solution de sulfate de cuivre, de sulfate de potassium ou de lait qui seraient restés sur le col du ballon et mélanger le contenu du ballon.

Note: Étant donné que les matières organiques absorbent de l'acide sulfurique lors de l'ébullition, il est conseillé d'utiliser, pour la digestion, 30 et non 25 ml d'H2SO4 (4.3) si le lait contient plus de 5,0% (m/m) de matières grasses. Il en va de même pour l'essai à blanc.

6.2.

Chauffer chaque ballon Kjeldahl sur l'appareil de minéralisation (5.5) très doucement au début, de façon à ce que toute la mousse noire reste dans le ballon. Lorsque la mousse initiale disparaît pour faire place à de fortes fumées blanches, porter à forte ébullition (les vapeurs d'acide se condensent à mi-chemin dans le col du ballon) jusqu'à ce que les particules noires disparaissent complètement et que le contenu du ballon devienne limpide et bleu-vert pâle. Poursuivre l'ébullition plus modérément pendant au moins lh30. Veuillez noter les points suivants:

6.3.

Lorsque les ballons Kjeldahl sont refroidis, ajouter 300 ml d'eau (voir la note) dans chacun des récipients, de façon à entraîner toutes les particules adhérant au col du ballon. Mélanger soigneusement le contenu jusqu'à dissolution des cristaux qui se sont séparés. Ajouter quelques régulateurs d'ébullition (5.2) pour obtenir une ébullition homogène. Ajouter ensuite dans chaque ballon 70 ml de solution d'hydroxyde de sodium (4.4) (voir la note) en tenant le ballon incliné, de manière à ce que la solution d'hydroxyde de sodium forme la couche inférieure dans le ballon. Veiller à ne pas en répandre sur le dessus du col.

Note: Le volume combiné d'eau et de solution d'hydroxyde de sodium doit être de 370 ml pour pouvoir recueillir environ 150 ml de distillat avant que le contenu du ballon ne présente des soubresauts (6.4).

Si on ajoute une plus grande quantité de solution d'hydroxyde de sodium concentrée à moins de 47 % (m/m), le volume d'eau ajouté doit être proportionnellement réduit. Ainsi, si on ajoute 85 ml de solution à 40% (m/m) ou 125 ml de solution à 30% (m/m), le volume d'eau ajouté doit être respectivement de 282 ml et de 245 ml.

6.4.

Raccorder immédiatement chaque ballon Kjeldahl à un appareil de distillation (5.6). Veiller à ce que l'extrémité du tube du réfrigérant plonge dans 50 ml de solution d'acide boriques (4.5) et 0,20 ml (5 à 6 gouttes) d'indicateur (4.6) contenus dans la fiole conique. Agiter le contenu de chaque ballon Kjeldahl pour bien mélanger et porter à ébullition tout d'abord à feu doux, pour éviter la formation excessive de mousse. Après avoir recueilli entre 100 et 125 ml de distillat, abaisser chaque fiole d'Erlenmeyer jusqu'à ce que l'extrémité du tube du réfrigérant se trouve environ 40 mm au-dessus du trait repère de 200 ml. Poursuivre chaque distillation jusqu'à ce que le contenu du ballon présente des soubresauts et couper immédiatement la source de chaleur. Enlever chaque ballon Kjeldahl et rincer l'extrémité de chaque tuyau d'évacuation du réfrigérant avec un peu d'eau en recueillant l'eau de rinçage dans une fiole d'Erlenmeyer. Veuillez noter les points suivants:

6.5 Titrer chaque distillat avec une solution volumétrique (4.7) jusqu'à pH 4,6 ± 0,1 en utilisant un ph-mètre et une burette automatique. L'addition d'un indicateur permet de contrôler si le titrage se déroule correctement. Relever les indications de chaque burette à 0,01 ml près en utilisant une loupe grossissante (5.10) pour éviter toute erreur de parallaxe.

Le titrage peut être réalisé à l'aide du seul indicateur. Titrer jusqu'à ce que la couleur du distillat corresponde à celle d'une solution récemment préparée à partir de 150 ml d'eau additionnée de 50 ml de la solution d'acide borique et de 0,20 ml de l'indicateur contenus dans une fiole d'Erlenmeyer (5.8).

6.6.

Effectuer un essai à blanc conformément aux points 6.1 à 6.5 inclus en utilisant 5 ml d'eau distillée avec environ 0,1 g de saccharose (4.8) au lieu de l'échantillon de lait.

Note: Pour le titrage du distillat blanc, il ne faut qu'une très faible quantité de solution volumétrique acide normalisée (4.7).

6.7.

Vérifier régulièrement l'exactitude des résultats en effectuant deux essais de récupération en suivant la procédure décrite aux points 6.1 à 6.5.

6.7.1.

S'assurer qu'il n'y a eu, au cours de la distillation, aucune perte d'azote due à une chaleur excessive ou à des fuites mécaniques en utilisant une prise d'essai composée de 0,15 g d'oxalate d'ammonium ou de sulfate d'ammonium (4.9) pesé à 0,001 g près et de 0,1 g de saccharose (4.8).

Le pourcentage d'azote récupéré doit être de 99% à 100%.

Des résultats inférieurs ou supérieurs sont l'indication d'une erreur de procédure et/ou d'une erreur de concentration de la solution normalisée (4.7).

6.7.2.

Vérifier que la procédure de minéralisation est capable de libérer tout l'azote protidique, en utilisant une prise d'essai composée de 0,20 g de tryptophane pur, 0,35 g de phénacétine ou 0,20 g de chlorhydrate de lysine (4.10). Tout doit être pesé à 0,001 g près. Le taux de récupération de l'azote doit être au moins de 98 à 99%.

N

=

la teneur en azote

V

=

le volume en ml de la solution volumétrique acide normalisée utilisée pour le dosage

Vo

=

le volume en ml de la solution volumétrique acide normalisée utilisée pour l'essai à blanc

c

=

la concentration, en mol/1, de la solution volumétrique acide normalisée (4.7)

m

=

la masse en g de la prise d'essai.

8.2.1.

Répétabilité (r): 0,007 g par 100 g

8.2.2.

Reproductibilité (R): 0,015 g par 100 g

9.1.

Utilisation d'un bloc chauffant de minéralisation au lieu du système de minéralisation avec ballon Kjeldahl (points 5.5 et 5.1). Dans ce cas, pour repérer les pannes éventuelles, vérifier chaque point individuellement (6.7).

9.2.

Utilisation d'un système de distillation par entraînement à la vapeur au lieu d'un chauffage direct (6.4). Si l'appareillage ne permet pas d'utiliser de l'eau distillée, s'assurer que l'eau ne contient pas de matières volatiles acides ou alcalines.

9.3.

Il est possible d'utiliser une prise d'essai de 1 g de lait (semi-macro Kjeldahl) au lieu de 5 g (6.1), à condition que:

Note: L'emploi de l'une ou l'autre de ces options n'est acceptable que si la répétabilité (8.2.1) et les résultats des deux essais de contrôle de la précision (6.7) correspondent aux valeurs données dans la norme.

4.1.

L'aréomètre à masse volumique est un instrument se composant d'un flotteur en verre, large et lesté à son extrémité inférieure et d'une tige cylindrique en verre, soudée à la partie supérieure du flotteur et coaxiale à celui-ci, l'extrémité supérieure de la tige étant fermée.

Le flotteur en verre contient le lest (plomb, mercure, etc.) destiné à ajuster la masse de l'aréomètre. La tige comporte une échelle graduée de 1,025 à 1,035 g/ml.

L'aréomètre doit être contrôlé par la méthode pycnométrique, en utilisant un pycnomètre de 100 ml environ de capacité, équipé d'un thermomètre de précision.

4.2.

Éprouvettes cylindriques (en verre ou en acier inoxydable) ayant les dimensions minimales suivantes:

4.3.

Bain d'eau réglé à 20 ± 0,1 oC.

4.4.

Bain d'eau réglé à 40 ± 2 oC.

4.5.

Thermomètre gradué au moins par 0,5 oC.

5.1.

Mélanger l'échantillon en le retournant pour disperser les matières grasses. Placer l'échantillon dans le bain d'eau (4.4) jusqu'à ce qu'il atteigne 40 oC et le laisser à cette température pendant 5 minutes. Mélanger convenablement par retournements successifs pour obtenir une répartition homogène des matières grasses. Refroidir à 20 oC dans le deuxième bain d'eau (4.3).

5.2.

Mélanger convenablement l'échantillon en le retournant soigneusement pour éviter l'incorporation d'air. Verser le lait dans l'éprouvette cylindrique (4.2), maintenir en position inclinée pour éviter la formation de mousse ou de bulles. Utiliser suffisamment de lait pour provoquer un débordement de liquide lors de l'introduction de l'aréomètre (4.1) dans l'éprouvette. Plonger avec précaution l'aréomètre dans le lait et le laisser flotter librement jusqu'à ce qu'il atteigne son point d'équilibre. Placer l'éprouvette en position verticale. L'aréomètre doit être placé au milieu de la colonne de liquide et ne doit pas toucher les parois de l'éprouvette.

5.3.

Lorsque l'aréomètre a atteint son point d'équilibre, effectuer la lecture de la graduation à la partie supérieure du ménisque.

5.4.

Immédiatement après la lecture de l'aréomètre, introduire le thermomètre (4.5) dans l'échantillon et lire la température par 0,5 oC. La température ne doit pas différer de plus de ± 2 oC par rapport à 20 oC.

6.1.

Si la température du lait à analyser n'est pas exactement de 20 oC lors de la mesure de la masse volumique, le résultat obtenu doit être corrigé en ajoutant à la masse volumique lue 0,0002 par degré Celsius au-dessus de 20 oC ou en retranchant 0,0002 par degré Celsius au-dessous de 20 oC. Cette correction est uniquement valable si la température de l'échantillon diffère de 5 oC au maximum par rapport à 20 oC.

mv

=

la masse volumique de l'échantillon, résultant de la lecture de l'aréomètre (5.4) en g/1

MG

=

la teneur en matières grasses de l'échantillon (g/1)

0,92

=

la densité des matières grasses.

8.1.

Répétabilité (r): 0,0003 g/ml

8.2.

Reproductibilité (R): 0,0015 g/ml