++++

RAADETS DIREKTIV

af 27 . juli 1967

om anvendelse af visse konserveringsstoffer til overfladebehandling af citrusfrugter samt om kontrolforanstaltninger til paavisning og til bestemmelse af konserveringsstoffer i og paa citrusfrugter

( 67/427/EOEF )

RAADET FOR DE EUROPAEISKE OEKONOMISKE FAELLESSKAB HAR

under henvisning til traktaten om oprettelse af Det europaeiske oekonomiske Faellesskab , saerlig artikel 100 ,

under henvisning til forslag fra Kommissionen ,

under henvisning til udtalelse fra Det europaeiske Parlament ( 1 ) ,

under henvisning til udtalelse fra Det oekonomiske og sociale Udvalg ( 2 ) , og

ud fra foelgende betragtninger :

Ifoelge artikel 5 i Raadets direktiv af 5 . november 1963 om tilnaermelser af medlemsstaternes lovgivning om konserveringsstoffer , som maa anvendes i levnedsmidler ( 3 ) , senest aendret ved artikel 1 i Raadets direktiv af 14 . december 1966 ( 4 ) , kan medlemsstaterne indtil 30 . juni 1967 opretholde den nationale lovgivning , som giver regler for overfladebehandlingen af citrusfrugter med biphenyl ( diphenyl ) , orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat ;

anvendelsen af disse stoffer til overfladebehandling af citrusfrugter frembyder ingen sundhedsfare , naar restindholdet af diphenyl ikke overstiger 70 mg og af orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat , beregnet som orthophenylphenol , ikke overstiger 12 mg pr . kg af hele citrusfrugter ;

i oevrigt boer behandlingen angives paa passende maade i alle handelsled ;

at de naevnte tre stoffer tillades inden for Faellesskabets omraade , forudsaetter ligeledes , at der fastsaettes faelles regler for den offentlige kontrol med de behandlede citrusfrugter ;

ivaerksaettelsen af dette direktiv i medlemsstaterne kan foerst ske efter en overgangstid ; det er derfor noedvendigt indtil udloebet af denne at opretholde den nationale lovgivning om overfladebehandlingen af citrusfrugter med de tre forannaevnte konserveringsstoffer ;

der boer ikke paalaegges en medlemsstat forpligtelse til at tillade et konserveringsstof i de levnedsmidler , der fremstilles og fortaeres inden for dens omraade , naar der ikke bestaar nogen teknologisk noedvendighed herfor ,

UDSTEDT FOELGENDE DIREKTIV :

Artikel 1

Raadets direktiv af 5 . november 1963 om tilnaermelse af medlemsstaternes lovgivning om konserveringsstoffer , der maa anvendes i levnedsmidler , aendres saaledes :

1 . I artikel 2 , stk . 2 , erstattes anden saetning af foelgende tekst :

" En medlemsstats lovgivning kan dog kun fuldstaendig udelukke anvendelse af et af de i bilaget anfoerte konserveringsstoffer , naar der ikke bestaar nogen teknologisk noedvendighed for dets anvendelse i de paa dens eget omraade fremstillede og fortaerede levnedsmidler " .

2 . Til de i bilagets afsnit I anfoerte stoffer tilfoejes foelgende konserveringsstoffer :

EOEF-Nr . * Betegnelse * Anvendelsesbetingelser *

E 230 * Diphenyl ( biphenyl ) * a ) Udelukkende til overfladebehandling af citrusfrugter ; *

* * b ) paa det tidspunkt , hvor citrusfrugterne bringes i handelen *

* * i ) maa restindholdet pr . kg ( hele ) citrusfrugter ikke overstige : *

* * 70 mg diphenyl , samt ikke overstige 12 mg orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat , enkeltvis eller tilsammen , beregnet som orthophenylphenol ; *

* * ii ) skal behandlingen angives : *

* * - i engroshandelen paa regningerne og paa en af ydersiderne af beholderne ved angivelsen . " Konserveret med ... " fulgt af betegnelsen paa den eller de anvendte stoffer , *

* * - i detailhandelen ved en tydelig angivelse , som sikrer en entydig oplysning for forbrugeren . *

E 231 * Orthophenylphenol * a ) Udelukkende til overfladebehandling af citrusfrugter ; *

* * b ) paa det tidspunkt , hvor citrusfrugterne bringes i handelen *

* * i ) maa restindholdet pr . kg ( hele ) citrusfrugter ikke overstige : *

* * 70 mg diphenyl , samt ikke overstige 12 mg orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat , enkeltvis eller tilsammen , beregnet som orthophenylphenol ; *

* * ii ) skal behandlingen angives : *

* * - i engroshandelen paa regningerne og paa en af ydersiderne af beholderne ved angivelsen . " Konserveret med ... " fulgt af betegnelsen paa den eller de anvendte stoffer , *

* * - i detailhandelen ved en tydelig angivelse , som sikrer en entydig oplysning for forbrugeren . *

E 232 * Natriumorthophenylphenolat * a ) Udelukkende til overfladebehandling af citrusfrugter ; *

* * b ) paa det tidspunkt , hvor citrusfrugterne bringes i handelen *

* * i ) maa restindholdet pr . kg ( hele ) citrusfrugter ikke overstige : *

* * 70 mg diphenyl , samt ikke overstige 12 mg orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat , enkeltvis eller tilsammen , beregnet som orthophenylphenol ; *

* * ii ) skal behandlingen angives : *

* * - i engroshandelen paa regningerne og paa en af ydersiderne af beholderne ved angivelsen . " Konserveret med ... " fulgt af betegnelsen paa den eller de anvendte stoffer , *

* * - i detailhandelen ved en tydelig angivelse , som sikrer en entydig oplysning for forbrugeren . *

3 . I artikel 5 udgaar litra b ) .

Artikel 2

Medlemsstaterne traeffer alle noedvendige foranstaltninger , for at proeveudtagningen og analyserne til paavisning og til bestemmelse af diphenyl , orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat i og paa citrusfrugter gennemfoeres i overensstemmelse med forskrifterne i bilagene I , II , III og IV til dette direktiv .

Artikel 3

1 . Medlemsstaterne ivaerksaetter de noedvendige foranstaltninger for at efterkomme dette direktiv senest 1 . juli 1968 og underretter straks Kommissionen herom .

2 . Indtil 1 . juli 1968 kan medlemsstaterne opretholde den nationale lovgivning vedroerende overfladebehandling af citrusfrugter med diphenyl , diphenylorthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat .

Artikel 4

Dette direktiv er rettet til medlemsstaterne .

Udfaerdiget i Bruxelles , den 27 . juni 1967 .

Paa Raadets vegne

R . VAN ELSLANDE

Formand

( 1 ) EFT nr . 63 af 3 . 4 . 1967 , s . 990/67 .

( 2 ) EFT nr . 64 af 5 . 4 . 1967 , s . 1005/67 .

( 3 ) EFT nr . 12 af 27 . 1 . 1964 , s . 161/64 .

( 4 ) EFT nr . 233 af 20 . 12 . 1966 , s . 3947/66 .

BILAG I

NAERMERE BESTEMMELSER FOR PROEVEUDTAGNING AF CITRUSFRUGTER TIL UNDERSOEGELSE FOR KONSERVERINGSSTOFFER

A . Proveudtagning

I . Proeverne udtages efter videnskabelige metoder , som goer det muligt at faa proever , der er repraesentative for det parti , der skal undersoeges .

II . Proeverne maa i det mindste opfylde nedenstaaende krav :

1 . Indpakkede varer ( kasser , kartoner og lignende beholdere )

Antal af beholdere i partiet * indtil 20 * fra 21 til 500 * fra 501 til 1 000 * over 1 000 *

Mindste antal af beholdere , der skal udtages * 1 * 2 * 3 * 4 *

Maengde i kg af frugter , der skal udtages fra hver beholder * 2 * 2 * 2 * 2 *

2 . Varer i loes vaegt

Maengde af partiet , i kg * indtil 20 * fra 21 til 500 * over 500 *

Maengde , der skal udtages , i kg * 2 * 4 * 8 *

III . Som et parti skal anses en saadan del af sendingen , som har samme egenskaber , som f.eks . sort , modenhedsgrad og emballagens art .

B . Emballering og oversendelse af proeverne

1 . Proeverne emballeres i hermetisk lukkede beholdere .

2 . Beholderne forsegles .

3 . De saaledes emballerede proever oversendes til kontrollaboratorierne paa hurtigste maade .

BILAG II

PAAVISNING AF RESTER AF DIPHENYL , ORTHOPHENYLPHENOL OG NATRIUMORTHOPHENYLPHENOLAT I SKALLER AF CITRUSFRUGTER

1 . Formaal og anvendelsesomraade :

Ved den nedenfor beskrevne metode kan man fastslaa rester af diphenyl , orthophenylphenol ( OPP ) eller natriumorthophenylphenolat i skaller af citrusfrugter . Den absolutte foelsomhedsgraense ligger ved 5 mg diphenyl og ved 1mg OPP eller natriumorthophenylphenolat svarende til henholdsvis 5 mg diphenyl ( 5 ppm ) og 1 mg OPP ( 1 ppm ) i skallerne af 1 kg citrusfrugter .

Behandlingen af citrusfrugterne med de ovennaevnte produkter bevirker , at resterne for stoerstedelen befinder sig i frugternes skaller . Bestemmelsen af rester i hele frugter viser sig derfor kun noedvendigt i de tilfaelde , hvor deres tilstedevaerelse paavises i skallerne .

2 . Princip :

Skallerne ekstraheres med dichlormethan i surt medium . Ekstrakten koncentreres og kromatograferes i tyndt lag paa silikagel . Tilstede vaerelsen af diphenyl , orthophenylphenol eller natriumorthophenylphenolat paavises ved fluorescens og farveanalyse .

3 . Reagenser :

Cyclohexan p.a .

Dichlormethan p.a .

Saltsyre 25 w/v %

Silikagel GF 254 Merck eller tilsvarende produkt

0,5 % oploesning af 2.4.7-trinitrofluorenon i acetone ( Fluka , B.D.H . eller tilsvarende produkt ) ( TNF )

0,1 % oploesning af 2,6-dibrom-benzo-chinon-4-klorimid i ethanol ( holdbarhed hoejst 1 uge i koeleskab )

Koncentreret ammoniakoploesning d : 0,9

Sammenligningsoploesning , 1 % rent diphenyl i cyclohexan

Sammenligningsoploesning , 1 % rent orthophenylphenol i cyclohexan

4 . Apparatur :

Blandeapparat

250 ml slibkolbe med tilbageloebskoeler

Vakuumfordamper

Mikropipetter

Apparat til tyndtlagskromatografi med 20 gange 20 cm plader

Ultraviolet lampe ( 254 nm ) . Intensiteten skal vaere saa staerk , at en plet af 5 mg diphenyl endnu kan paavirkes

Forstoever

Toerreskab

5 . Fremgangsmaade :

a ) Forberedelse af proeven og ekstraktion

Samtlige frugter i den til kontrol udtagne proeve skaeres i to halvdele . Den ene halvdel af hver frugt forbeholdes paavisningen af diphenyl og ( eller ) orthophenylphenol . Fra de andre halvdele udtages skalfragmenter for at faa en proeve paa ca . 80 g . Disse fragmenter snittes i stykker , findeles i blandeapparatet og fyldes i 250-ml-kolben . Derefter tilsaettes 1 ml saltsyre 25 % samt 100 ml dichlormethan . Denne blanding opvarmes under tilbageloeb i 10 minutter . Efter afkoeling og udvaskning af koeleren med ca . 5 ml dichlormethan filtreres fra med et foldefilter . Oploesningen tilsaettes i fordamperen nogle smaa kogesten og koncentreres under vakuum ved 60 * C til et slutrumfang af ca . 10 ml . Anvendes der en rotationsfordamper , skal kolben staa fast for at undgaa diphenyltab ved , at fordampningsresten danner film paa kolbevaeggen .

b ) Kromatografi :

30 g silikagel og 60 ml vand blandes i et blandeapparat i et minut og derpaa fordeles blandingen med en lagtykkelse af ca . 0,250 mm paa 5 kromatografiplader . Disse plader udsaettes i 15 minutter for en varmluftstroem og anbringes derefter i et toerreskab , hvor de forbliver i 30 minutter ved en temperatur af 110 * C .

Efter afkoeling deles belaegningen paa hver plade ved parallelle streger , der traenger igennem til glaspladens overflade , i strimler af 2 cm's bredde . Paa hver strimmel anbringes i en afstand af ca . 1,5 cm fra randen 50 m 1 af den ekstrakt , der skal undersoeges , i en raekke draaber ved siden af hinanden . Paa mindst en strimmel paafoeres sammenligningsproeven , som bestaar af en blanding af hver 1 m 1 , ( d . v . s . 10 mg ) af diphenyl - og orthophenylphenol-sammenligningsoploesningerne .

Derpaa udvikles pladerne med en blanding af cyclohexan og dichlormethan ( 25 : 95 ) i et forud med et papirfilter foret kammer .

c ) Paavisning og identificering

Tilstedevaerelsen af diphenyl - og orthophenylphenol viser sig ved , at der optraeder pletter i det ultraviolette lys ( 254 nm ) . Efter at natriumorthophenylphenolatet er blevet omdannet til orthophenylphenol ved ekstrationen i surt medium , adskiller det sig ikke fra orthophenylphenolet . Produkterne paavises paa foelgende maade :

i ) diphenylet giver ved dagslys en gul plet ved paasproejtning med TNF-oploesningen ;

ii ) orthophenylphenolet giver en blaa plet ved paasproejtning med oploesningen af 2,6-dibrom-benzo-chinon-4-klorimid og paafoelgende kort efterbehandling i en varm luftstroem samt i en maettet ammoniakatmosfaere .

BILAG III

BESTEMMELSE AF DIPHENYLRESTER I CITRUSFRUGTER

1 . Formaal og anvendelsesomraade :

Den nedenfor beskrevne metode muliggoer bestemmelse af diphenylrester i citrusfrugter ( hele frugter ) . Fejlmarginen for diphenylindhold over 10 mg pr . kg frugt ( 10 ppm ) andrager ca . mere eller mindre 10 % .

2 . Princip :

Efter destillation i surt medium og paafoelgende ekstraktion med cyclohexan kromatograferes ekstraktet i tyndt lag paa silikagel . Kromatogrammet udvikles , diphenylet elueres og bestemmes spektralfotometrisk ved 248 nm .

3 . Reagenser :

Koncentreret svovlsyre

Antiskumemulsion paa silikonbasis

Cyclohexan p.a .

Hefan p.a .

Ethanol p.a .

Vandfrit natriumsulfat

Silikagel GF 254 Merck eller tilsvarende produkt

1 % stamoploesning af rent diphenyl i cyclohexan : fortyndes med cyclohexan for at opnaa foelgende tre oploesninger :

a ) 0,6 m/ml ,

b ) 1 m/ml ,

c ) 1,4 m/ml .

4 . Apparatur :

Blandeapparat 1 liter

2-liter destillationskolbe med udskiller ( modificeret Clevengertype ) ( 1 ) og tilbageloebskoeler

10-ml maalekolbe

50 ml mikropipetter

Apparat til tyndtlagskromatografi med 20 gange 20 cm plader

Toerreskab

Centrifuge med koniske roer paa 15 ml

Spektrofometer til maalinger i UV .

5 . Fremgangsmaade :

a ) Forberedelse af proeven og ekstraktion :

Samtlige frugter i den til kontrol udtagne proeve skaeres i to halvdele . Den ene halvdel af hver frugt forbeholdes paavisning af rester af diphenyl , orthophenylphenol henholdsvis natriumorthophenylphenolat . De andre halvdele kommes sammen , hakkes eller males i en moelle , indtil man opnaar en homogen blanding . Heraf udtages mindst to enkeltproever paa 200 g , som undersoeges efter nedenstaaende fremgangsmaade . Hver enkeltproeve kommes i et blandeapparat med 100 ml vand og formales i nogle sekunder ved lav hastighed . Der tilsaettes vand , indtil blandingens rumfang andrager 3/4 af blandeapparatets indhold . Derpaa finmales i 5 minutter ved hoej hastighed . Den paa denne maade dannede groed fyldes om i 2-liter destillationskolben . Blandeapparatet skylles med vand , og skyllevandet saettes til kolbeindholdet ( den for findelingen og skylningen noedvendige vandmaengde andrager i alt 1 ( 1 ) . Blandingen tilsaettes 2 ml svovlsyre , 1 ml antiskumemulsion samt nogle kogesten . Udskilleren og koeleren paasaettes kolben . I udskilleren fyldes destilleret vand , indtil dets niveau tydelig overstiger den underste afgrening af tilbageloebsroeret paa siden . Derpaa tilsaettes 7 ml cyclohexan . Der destilleres ca . 2 timer . Indholdet af udskilleren overfoeres i 10-ml maalekolben . Udskilleren skylles med ca . 1,5 ml cyclohexan . Skylleoploesningen tilsaettes kolbeindholdet , og kolben fyldes op til maerket med cyclohexan . Til sidst tilsaettes en ringe maengde vandfrit natriumsulfat , og der omrystes .

b ) Kromatografi :

30 g silikagel og 60 ml vand blandes i et blandeapparat i et minut . Derpaa fordeles blandingen med en lagtykkelse af ca . 0,250 mm paa 5 kromatografiplader . De saaledes belagte plader udsaettes i 15 minutter for en varm luftstroem og stilles derpaa i et toerreskab , i hvilket de forbliver i 30 minutter ved en temperatur af 110 * C . Efter afkoelingen deles laget paa hver plade ved parallelle adskillesesstreger , der traenger igennem til glaspladens overflade , i 4 strimler af 4,5 cm's bredde . Paa en af strimlerne anbringes i en afstand af ca . 1,5 cm fra pladens rand 50 ml af den ekstrakt , der skal undersoeges , i en raekke draaber ved siden af hinanden . Paa hver af de tre oevrige strimler dryppes 50 ml af sammenligningsoploesningerne a ) , b ) og c ) , svarende til diphenylmaengder paa henholdsvis 30 , 50 og 70 mg .

Ved serieanalyser kan bortses fra paafoeringen af sammenligningsoploesningerne paa hver plade . I dette tilfaelde kan man til grundlag for maalekurven laegge gennemsnittet af de vaerdier , som man har opnaaet paa mindst fem plader med de samme sammenligningsmaengder .

c ) Udvikling af kromatogrammerne og elution :

Kromatogrammerne udvikles med hexan i kamre , som forud er blevet indvendig foret med et papirfilter , til en hoejde af 17 cm . Pladerne toerres i luften . Zonerne , i hvilke diphenylet lokaliseres , markeres i ultraviolet lys ved 254 nm og afgraenses i lige store rektangulaere flader .

Paa de saaledes afgraensede flader afskrabes belaegningen straks i sin fulde tykkelse ved hjaelp af en spatel . Herfra ekstraheres diphenylet med 10 ml ethanol ved 10 minutters indvirkning under gentagen omrystning . Derpaa fylder man det i centrifugeroerene og centrifugerer i 5 minutter ved 2500 omdrejninger i minuttet .

Paa samme maade udtager man en blindproeve med samme maal . Ved serieanalyser udtager man denne flade fra en ikke benyttet strimmel fra pladen , ved enkeltanalyser fra en med ensammenligningsproeve forsynet strimmel neden for den zone , som indeholder diphenylet .

d ) Spektrofotometrisk bestemmelse :

Man dekanterer den ovenstaaende klare vaeske ned i spektrofotometrets kuvette og bestemmer ekstinktionen ved 248 nm i sammenligning med en blindvaerdi fra en diphenylfri zone i kromatogrammet .

6 . Beregning af resultaterne :

Der opstilles en maalekurve , i hvilken man som koordinater opfoerer diphenylmaengderne paa 30 , 50 og 70 mg samt de tilsvarende i spektrofotometeret bestemte ekstintionsvaerdier . Den paa denne maade opnaaede kurve er en ret linie , som gaar igennem nulpunktet . Derved muliggoer denne maalekurve direkte aflaesning af diphenylindholdet i proeverne i ppm ud fra ekstrakternes ekstinktion .

BILAG IV

BESTEMMELSE AF ORTHOPHENYLPHENOL OG NATRIUMORTHOPHENYLPHENOLAT I CITRUSFRUGTER

1 . Formaal og anvendelsesomraade :

Den nedenfor beskrevne metode muliggoer bestemmelse af orthophenylphenol ( OPP ) og natriumorthophenylphenolat i citrusfrugter ( hele frugter ) . Metoden giver ved et indhold af OPP eller natriumorthophenylphenolat paa ca . 12 ppm gennemsnitlige afvigelser nedadtil mellem 10 og 20 % .

2 . Princip :

Efter destillation i surt medium og paafoelgende ekstraktion med di-isopentylether , renses ekstrakten og behandles med en oploesning af 1-phenyl-2,3-dimethyl-4-amino pyrazolon ( 5 ) ( = 4 aminoantipyrin ) .

Der opstaar en roedfarvning , hvis intensitet maales spektrofotometrisk ved 510 nm .

3 . Reagenser :

Fosforsyre 70 %

Antiskumemulsion paa silikonbasis

Di-isopentylether p.a .

Renset cyclohexan : Der udrystes 3 gange med 4 % natriumhydroxydoploesning og udvaskes 3 gange med destilleret vand

4 % natriumhydroxydoploesning

Stoedpudeoploesning , pH 10,4 : 6,64 borsyre , 8,00 g kaliumchlorid og 93,1 ml 1 N natriumhydroxydoploesning fyldes i en 2-liter maalekolbe , blandes og fyldes op til maerket med destilleret vand .

Reagens I : 1,0 g 1-phenyl-2,3-dimethyl-4-aminopyrazolon ( 5 ) ( = 4-aminoantipyrin ) oploeses i 100 ml destilleret vand

Reagens II : 2,0 g kaliumhexacyanoferrat-(III ) oploeses i 100 ml destilleret vand . Reagenserne I og II skal opbevares i en moerk flaske og er kun holdbare i ca . 14 dage .

Silikagel

Maaleoploesning : 10 mg rent OPP oploeses i 1 ml 0,1 N NaOH , der fyldes op med 0,2 m Natriumborat-oploesning til 100 ml ( 1 ml = 100 mg ) .

Til maalekurven fortyndes 1 : 10 med stoedpudeoploesning .

4 . Apparatur :

Hakkemaskine eller moelle

Blandeapparat

1-liter destillationskolbe med udskiller ( modificeret Clevengertype ) ( 1 ) og tilbageloebskoeler

Infraroed-bad

200 ml skilletragt

25 - og 100-ml maalecylinder

25 - og 100-ml maalekolbe

Pipetter 1-10 ml

Maalepipetter 0,5 ml

Spektrofotometer med 5 cm kuvetter .

5 . Fremgangsmaade :

Samtlige frugter i den til kontrol udtagne proeve skaeres i to halvdele . En halvdel af hver frugt forbeholdes paavisningen af rester af diphenyl , orthophenylphenol henholdsvis natriumorthophenylphenolat . De andre halvdele kommes sammen , hakkes eller males i en moelle , indtil man opnaar en homogen blanding . Heraf udtages mindst 2 enkeltproever paa hver 250 g , som undersoeges efter den nedenstaaende fremgangsmaade .

Hver enkeltproeve kommes i et blandeapparat med 500 ml vand og formales , indtil man opnaar en homogen , fin groed , der ikke kan foeles , og i hvilken oliecellerne ikke laengere kan iagttages . Af den homogene groed afvejes alt efter det formodede OPP indhold , 150-300 g , som skylles over i 1-liter destillationskolben med saa meget vand , at den samlede maengde i kolben nu andrager 500 g . Efter tilsaetning af 10 ml fosforsyre 70 % , nogle kogesten og 0,5 ml antiskumemulsion paasaettes udskilleren og koeleren paa kolben . I udskilleren fyldes 10 ml di-isopentylaeter , og kolben opvarmes langsomt i infraroed-bad for at undgaa paabagning af groeden til skumdannelse . Den samlede destillationstid andrager ca . 6 timer . Efter afslutning af destillationen haeldes indholdet i udskilleren over i 200-ml skilletragten , udskilleren og koeleren skylles af med 60 ml cyclohexan og derpaa med 60 ml vand . Skyllevaeskerne foejes til indholdet i skilletragten . Denne rystes nu kraftigt . Efter adskillelse af lagene tages vandfasen fra og kastes bort .

For at ekstrahere OPP gennemrystes den organiske fase 5 gange , hver gang i 3 minutter , med 10 ml 4 % natriumhydroxydoploesning . De samlede portioner lud neutraliseres med fosforsyre overfor phenolphthaleinpapir til pH 9-10 og fyldes op til 100 ml med destilleret vand . For at klare den let uklare oploesning tilsaettes en spatelspids silikagel ; der omrystes og filtreres gennem et toert finporet filter . Da farveudviklingens maximale foelsomhed og noejagtighed ligger i omraadet fra 10-70 mg OPP , afpiptetteres aliquoter svarende til de forventede maengder OPP paa 0,5-10 ml stoedpudeoploesning og derefter 0,5 ml reagens II ; der fyldes op med stoedpudeoploesning til maerket og omrystes grundigt .

Efter 5 minutter maales extinktionen af det roede farvestof spektrofotometrisk ved 510 nm imod en blindvaerdi , der er ansat uden proeveoploesning . Farveintensiteten aendrer sig ikke inden for 30 minutter . Maengden aflaeses nu ved hjaelp af en maalekurve , der opstilles paa samme maade med OPP standardoploesningen .

6 . Bemaerkninger :

Det anbefales for hver proeveanalyse at gennemfoere den spektrofotometriske maaling som dobbeltbestemmelse med forskellige rumfang af de neutraliserede natronlududtraek .

Ubehandlede citrusfrugter giver efter denne metode blindvaerdier op til 0,5 ppm for appelsiner , og op til 0,8 ppm for citroner .

CLEVENCER

( Bilag III , kapitel 4 ; bilag IV , kapitel 4 ) : Se EFT

( 1 ) Se figur paa side 160 . ++++

RAADETS DIREKTIV

af 27 . juli 1967

om anvendelse af visse konserveringsstoffer til overfladebehandling af citrusfrugter samt om kontrolforanstaltninger til paavisning og til bestemmelse af konserveringsstoffer i og paa citrusfrugter

( 67/427/EOEF )

RAADET FOR DET EUROPAEISKE OEKONOMISKE FAELLESSKAB HAR

under henvisning til traktaten om oprettelse af Det europaeiske oekonomiske Faellesskab , saerlig artikel 100 ,

under henvisning til forslag fra Kommissionen ,

under henvisning til udtalelse fra Det europaeiske Parlament ( 1 ) ,

under henvisning til udtalelse fra Det oekonomiske og sociale Udvalg ( 2 ) , og

ud fra foelgende betragtninger :

Ifoelge artikel 5 i Raadets direktiv af 5 . november 1963 om tilnaermelser af medlemsstaternes lovgivning om konserveringsstoffer , som maa anvendes i levnedsmidler ( 3 ) , senest aendret ved artikel 1 i Raadets direktiv af 14 . december 1966 ( 4 ) , kan medlemsstaterne indtil 30 . juni 1967 opretholde den nationale lovgivning , som giver regler for overfladebehandlingen af citrusfrugter med biphenyl ( diphenyl ) , orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat ;

anvendelsen af disse stoffer til overfladebehandling af citrusfrugter frembyder ingen sundhedsfare , naar restindholdet af diphenyl ikke overstiger 70 mg og af orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat , beregnet som orthophenylphenol , ikke overstiger 12 mg pr . kg af hele citrusfrugter ;

i oevrigt boer behandlingen angives paa passende maade i alle handelsled ;

at de naevnte tre stoffer tillades inden for Faellesskabets omraade , forudsaetter ligeledes , at der fastsaettes faelles regler for den offentlige kontrol med de behandlede citrusfrugter ; ivaerksaettelsen af dette direktiv i medlemsstaterne kan foerst ske efter en overgangstid ; det er derfor noedvendigt indtil udloebet af denne at opretholde den nationale lovgivning om overfladebehandlingen af citrusfrugter med de tre forannaevnte konserveringsstoffer ;

der boer ikke paalaegges en medlemsstat forpligtelse til at tillade et konserveringsstof i de levnedsmidler , der fremstilles og fortaeres inden for dens omraade , naar der ikke bestaar nogen teknologisk noedvendighed herfor ,

UDSTEDT FOELGENDE DIREKTIV :

Artikel 1

Raadets direktiv af 5 . november 1963 om tilnaermelse af medlemsstaternes lovgivning om konserveringsstoffer , der maa anvendes i levnedsmidler , aendres saaledes :

1 . I artikel 2 , stk . 2 , erstattes anden saetning af foelgende tekst :

" En medlemsstats lovgivning kan dog kun fuldstaendig udelukke anvendelse af et af de i bilaget anfoerte konserveringsstoffer , naar der ikke bestaar nogen teknologisk noedvendighed for dets anvendelse i de paa dens eget omraade fremstillede og fortaerede levnedsmidler " .

2 . Til de i bilagets afsnit I anfoerte stoffer tilfoejes foelgende konserveringsstoffer :

EOEF-Nr . * Betegnelse * Anvendelsesbetingelser *

E 230 * Diphenyl ( biphenyl ) * a ) Udelukkende til overfladebehandling af citrusfrugter ; *

* * b ) paa det tidspunkt , hvor citrusfrugterne bringes i handelen *

* * i ) maa restindholdet pr . kg ( hele ) citrusfrugter ikke overstige : *

* * 70 mg diphenyl , samt ikke overstige 12 mg orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat , enkeltvis eller tilsammen , beregnet som orthophenylphenol ; *

* ii ) skal behandlingen angives : *

* * - i engroshandelen paa regningerne og paa en af ydersiderne af beholderne ved angivelsen : " Konserveret med ... " fulgt af betegnelsen paa den eller de anvendte stoffer , *

* * - i detailhandelen ved en tydelig angivelse , som sikrer en entydig oplysning for forbrugeren . *

E 231 * Orthophenylphenol * a ) Udelukkende til overfladebehandling af citrusfrugter ; *

* * b ) paa det tidspunkt , hvor citrusfrugterne bringes i handelen *

* * i ) maa restindholdet pr . kg ( hele ) citrusfrugter ikke overstige : *

* * 70 mg diphenyl , samt ikke overstige 12 mg orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat , enkeltvis eller tilsammen , beregnet som orthophenylphenol ; *

* * ii ) skal behandlingen angives : *

* * - i engroshandelen paa regningerne og paa en af ydersiderne af beholderne ved angivelsen : " Konserveret med ... " fulgt af betegnelsen paa den eller de anvendte stoffer , *

* * - i detailhandelen ved en tydelig angivelse , som sikrer en entydig oplysning for forbrugeren . *

E 232 * Natriumorthophenylphenolat * a ) Udelukkende til overfladebehandling af citrusfrugter ; *

* * b ) paa det tidspunkt , hvor citrusfrugterne bringes i handelen *

* * i ) maa restindholdet pr . kg ( hele ) citrusfrugter ikke overstige : *

* * 70 mg diphenyl , samt ikke overstige 12 mg orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat , enkeltvis eller tilsammen , beregnet som orthophenylphenol ; *

* * ii ) skal behandlingen angives : *

* * - i engroshandelen paa regningerne og paa en af ydersiderne af beholderne ved angivelsen : " Konserveret med ... " fulgt af betegnelsen paa den eller de anvendte stoffer , *

* * - i detailhandelen ved en tydelig angivelse , som sikrer en entydig oplysning for forbrugeren . *

3 . I artikel 5 udgaar litra b ) .

Artikel 2

Medlemsstaterne traeffer alle noedvendige foranstaltninger , for at proeveudtagningen og analyserne til paavisning og til bestemmelse af diphenyl , orthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat i og paa citrusfrugter gennemfoeres i overensstemmelse med forskrifterne i bilagene I , II , III og IV til dette direktiv .

Artikel 3

1 . Medlemsstaterne ivaerksaetter de noedvendige foranstaltninger for at efterkomme dette direktiv senest 1 . juli 1968 og underretter straks Kommissionen herom .

2 . Indtil 1 . juli 1968 kan medlemsstaterne opretholde den nationale lovgivning vedroerende overfladebehandling af citrusfrugter med diphenyl , diphenylorthophenylphenol og natriumorthophenylphenolat .

Artikel 4

Dette direktiv er rettet til medlemsstaterne .

Udfaerdiget i Bruxelles , den 27 . juni 1967 .

Paa Raadets vegne

R . VAN ELSLANDE

Formand

( 1 ) EFT nr . 63 af 3 . 4 . 1967 , s . 990/67 .

( 2 ) EFT nr . 64 af 5 . 4 . 1967 , s . 1005/67 .

( 3 ) EFT nr . 12 af 27 . 1 . 1964 , s . 161/64 .

( 4 ) EFT nr . 233 af 20 . 12 . 1966 , s . 3947/66 .

BILAG I

NAERMERE BESTEMMELSER FOR PROEVEUDTAGNING AF CITRUSFRUGTER TIL UNDERSOEGELSE FOR KONSERVERINGSSTOFFER

A . Proeveudtagning

I . Proeverne udtages efter videnskabelige metoder , som goer det muligt at faa proever , der er repraesentative for det parti , der skal undersoeges .

II . Proeverne maa i det mindste opfylde nedenstaaende krav :

1 . Indpakkede varer ( kasser , kartoner og lignende beholdere )

Antal af beholdere i partiet * indtil 20 * fra 21 til 500 * fra 501 til 1 000 * over 1 000 *

Mindste antal af beholdere , der skal udtages * 1 * 2 * 3 * 4 *

Maengde i kg af frugter , der skal udtages fra hver beholder * 2 * 2 * 2 * 2 *

2 . Varer i loes vaegt

Maengde af partiet , i kg * indtil 20 * fra 21 til 500 * over 500 *

Maengde , der skal udtages , i kg * 2 * 4 * 8 *

III . Som et parti skal anses en saadan del af sendingen , som har samme egenskaber , som f.eks . sort , modenhedsgrad og emballagens art .

B . Emballering og oversendelse af proeverne

1 . Proeverne emballeres i hermetisk lukkede beholdere .

2 . Beholderne forsegles .

3 . De saaledes emballerede proever oversendes til kontrollaboratorierne paa hurtigste maade .

BILAG II

PAAVISNING AF RESTER AF DIPHENYL , ORTHOPHENYLPHENOL OG NATRIUMORTHOPHENYLPHENOLAT I SKALLER AF CITRUSFRUGTER

1 . Formaal og anvendelsesomraade :

Ved den nedenfor beskrevne metode kan man fastslaa rester af diphenyl , orthophenylphenol ( OPP ) eller natriumorthophenylphenolat i skaller af citrusfrugter . Den absolutte foelsomhedsgraense ligger ved 5 mg diphenyl og ved 1 mg OPP eller natriumorthophenylphenolat svarende til henholdsvis 5 mg diphenyl ( 5 ppm ) og 1 mg OPP ( 1 ppm ) i skallerne af 1 kg citrusfrugter .

Behandlingen af citrusfrugterne med de ovennaevnte produkter bevirker , at resterne for stoerstedelen befinder sig i frugternes skaller . Bestemmelsen af rester i hele frugter viser sig derfor kun noedvendigt i de tilfaelde , hvor deres tilstedevaerelse paavises i skallerne .

2 . Princip :

Skallerne ekstraheres med dichlormethan i surt medium . Ekstrakten koncentreres og kromatograferes i tyndt lag paa silikagel . Tilstedevaerelsen af diphenyl , orthophenylphenol eller natriumorthophenylphenolat paavises ved fluorescens og farveanalyse .

3 . Reagenser :

Cyclohexan p.a .

Dichlormethan p.a .

Saltsyre 25 w/v %

Silikagel GF 254 Merck eller tilsvarende produkt

0,5 % oploesning af 2.4.7-trinitrofluorenon i acetone ( Fluka , B.D.H . eller tilsvarende produkt ) ( TNF )

0,1 % oploesning af 2,6-dibrom-benzo-chinon-4-klorimid i ethanol ( holdbarhed hoejst 1 uge i koeleskab )

Koncentreret ammoniakoploesning d : 0,9

Sammenligningsoploesning , 1 % rent diphenyl i cyclohexan

Sammenligningsoploesning , 1 % rent orthophenylphenol i cyclohexan

4 . Apparatur :

Blandeapparat

250 ml slibkolbe med tilbageloebskoeler

Vakuumfordamper

Mikropipetter

Apparat til tyndtlagskromatografi med 20 gange 20 cm plader

Ultraviolet lampe ( 254 nm ) . Intensiteten skal vaere saa staerk , at en plet af 5 mg diphenyl endnu kan paavirkes

Forstoever

Toerreskab

5 . Fremgangsmaade :

a ) Forberedelse af proeven og ekstraktion

Samtlige frugter i den til kontrol udtagne proeve skaeres i to halvdele . Den ene halvdel af hver frugt forbeholdes paavisningen af diphenyl og ( eller ) orthophenylphenol . Fra de andre halvdele udtages skalfragmenter for at faa en proeve paa ca . 80 g . Disse fragmenter snittes i stykker , findeles i blandeapparatet og fyldes i 250-ml-kolben . Derefter tilsaettes 1 ml saltsyre 25 % samt 100 ml dichlormethan . Denne blanding opvarmes under tilbageloeb i 10 minutter . Efter afkoeling og udvaskning af koeleren med ca . 5 ml dichlormethan filtreres fra med et foldefilter . Oploesningen tilsaettes i fordamperen nogle smaa kogesten og koncentreres under vakuum ved 60 * C til et slutrumfang af ca . 10 ml . Anvendes der er rotationsfordamper , skal kolben staa fast for at undgaa diphenyltab ved , at fordampningsresten danner film paa kolbevaeggen .

b ) Kromatografi :

30 g silikagel og 60 ml vand blandes i et blandeapparat i et minut og derpaa fordeles blandingen med en lagtykkelse af ca . 0,250 mm paa 5 kromatografiplader . Disse plader udsaettes i 15 minutter for en varmluftstroem og anbringes derefter i et toerreskab , hvor de forbliver i 30 minutter ved en temperatur af 110 * C .

Efter afkoeling deles belaegningen paa hver plade ved parallelle streger , der traenger igennem til glaspladens overflade , i strimler af 2 cm's bredde . Paa hver strimmel anbringes i en afstand af ca . 1,5 cm fra randen 50 ml af den ekstrakt , der skal undersoeges , i en raekke draaber ved siden af hinanden . Paa mindst en strimmel paafoeres sammenligningsproeven , som bestaar af en blanding af hver 1 ml , ( d.v.s . 10 mg ) af diphenyl - og orthophenylphenol-sammenligningsoploesningerne .

Derpaa udvikles pladerne med en blanding af cyclohexan og dichlormethan ( 25 : 95 ) i et forud med et papirfilter foret kammer .

c ) Paavisning og identificering

Tilstedevaerelsen af diphenyl - og orthophenylphenol viser sig ved , at der optraeder pletter i det ultraviolette lys ( 254 nm ) . Efter at natriumorthophenylphenolatet er blevet omdannet til orthophenylphenol ved ekstrationen i surt medium , adskiller det sig ikke fra orthophenylphenolet . Produkterne paavises paa foelgende maade :

i ) diphenylet giver ved dagslys en gul plet ved paasproejtning med TNF-oploesningen ;

ii ) orthophenylphenolet giver en blaa plet ved paasproejtning med oploesningen af 2,6-dibrom-benzo-chinon-4-klorimid og paafoelgende kort efterbehandling i en varm luftstroem samt i en maettet ammoniakatmosfaere .

BILAG III

BESTEMMELSE AF DIPHENYLRESTER I CITRUSFRUGTER

1 . Formaal og anvendelsesomraade :

Den nedenfor beskrevne metode muliggoer bestemmelse af diphenylrester i citrusfrugter ( hele frugter ) . Fejlmarginen for diphenylindhold over 10 mg pr . kg frugt ( 10 ppm ) andrager ca . mere eller mindre 10 % .

2 . Princip :

Efter destillation i surt medium og paafoelgende ekstraktion med cyclohexan kromatograferes ekstraktet i tyndt lag paa silikagel . Kromatogrammet udvikles , diphenylet elueres og bestemmes spektralfotometrisk ved 248 nm .

3 . Reagenser :

Koncentreret svovlsyre

Antiskumemulsion paa silikonbasis

Cyclohexan p.a .

Hefan p.a .

Ethanol p.a .

Vandfrit natriumsulfat

Silikagel GF 254 Merck eller tilsvarende produkt

1 % stamoploesning af rent diphenyl i cyclohexan : fortyndes med cyclohexan for at opnaa foelgende tre oploesninger :

a ) 0,6 m/ml ,

b ) 1 m/ml ,

c ) 1,4 m/ml .

4 . Apparatur :

Blandeapparat 1 liter

2-liter destillationskolbe med udskiller ( modificeret Clevengertype ) ( 1 ) og tilbageloebskoeler

10-ml maalekolbe

50 ml mikropipetter

Apparat til tyndtlagskromatografi med 20 gange 20 cm plader

Toerreskab

Centrifuge med koniske roer paa 15 ml

Spektrofometer til maalinger i UV .

5 . Fremgangsmaade :

a ) Forberedelse af proeven og ekstraktion :

Samtlige frugter i den til kontrol udtagne proeve skaeres i to halvdele . Den ene halvdel af hver frugt forbeholdes paavisning af rester af diphenyl , orthophenylphenol henholdsvis natriumorthophenylphenolat . De andre halvdele kommes sammen , hakkes eller males i en moelle , indtil man opnaar en homogen blanding . Heraf udtages mindst to enkeltproever paa 200 g , som undersoeges efter nedenstaaende fremgangsmaade . Hver enkeltproeve kommes i et blandeapparat med 100 ml vand og formales i nogle sekunder ved lav hastighed . Der tilsaettes vand , indtil blandingens rumfang andrager 3/4 af blandeapparatets indhold . Derpaa finmales i 5 minutter ved hoej hastighed . Den paa denne maade dannede groed fyldes om i 2-liter destillationskolben . Blandeapparatet skylles med vand , og skyllevandet saettes til kolbeindholdet ( den for findelingen og skylningen noedvendige vandmaengde andrager i alt 1 ( 1 ) . Blandingen tilsaettes 2 ml svovlsyre , 1 ml antiskumemulsion samt nogle kogesten . Udskilleren og koeleren paasaettes kolben . I udskilleren fyldes destilleret vand , indtil dets niveau tydelig overstiger den underste afgrening af tilbageloebsroeret paa siden . Derpaa tilsaettes 7 ml cyclohexan . Der destilleres ca . 2 timer . Indholdet af udskilleren overfoeres i 10-ml maalekolben . Udskilleren skylles med ca . 1,5 ml cyclohexan . Skylleoploesningen tilsaettes kolbeindholdet , og kolben fyldes op til maerket med cyclohexan . Til sidst tilsaettes en ringe maengde vandfrit natriumsulfat , og der omrystes .

b ) Kromatografi :

30 g silikagel og 60 ml vand blandes i et blandeapparat i et minut . Derpaa fordeles blandingen med en lagtykkelse af ca . 0,250 mm paa 5 kromatografiplader . De saaledes belagte plader udsaettes i 15 minutter for en varm luftstroem og stilles derpaa i et toerreskab , i hvilket de forbliver i 30 minutter ved en temperatur af 110 * C . Efter afkoelingen deles laget paa hver plade ved parallelle adskillesesstreger , der traenger igennem til glaspladens overflade , i 4 strimler af 4,5 cm's bredde . Paa en af strimlerne anbringes i en afstand af ca . 1,5 cm fra pladens rand 50 ml af den ekstrakt , der skal undersoeges , i en raekke draaber ved siden af hinanden . Paa hver af de tre oevrige strimler dryppes 50 ml af sammenligningsoploesningerne a ) , b ) og c ) , svarende til diphenylmaengder paa henholdsvis 30 , 50 og 70 mg .

Ved serieanalyser kan bortses fra paafoeringen af sammenligningsoploesningerne paa hver plade . I dette tilfaelde kan man til grundlag for maalekurven laegge gennemsnittet af de vaerdier , som man har opnaaet paa mindst fem plader med de samme sammenligningsmaengder .

c ) Udvikling af kromatogrammerne og elution :

Kromatogrammerne udvikles med hexan i kamre , som forud er blevet indvendig foret med et papirfilter , til en hoejde af 17 cm . Pladerne toerres i luften . Zonerne , i hvilke diphenylet lokaliseres , markeres i ultraviolet lys ved 254 nm og afgraenses i lige store rektangulaere flader .

Paa de saaledes afgraensede flader afskrabes belaegningen straks i sin fulde tykkelse ved hjaelp af en spatel . Herfra ekstraheres diphenylet med 10 ml ethanol ved 10 minutters indvirkning under gentagen omrystning . Derpaa fylder man det i centrifugeroerene og centrifugerer i 5 minutter ved 2500 omdrejninger i minuttet .

Paa samme maade udtager man en blindproeve med samme maal . Ved serieanalyser udtager man denne flade fra en ikke benyttet strimmel fra pladen , ved enkeltanalyser fra en med ensammenligningsproeve forsynet strimmel neden for den zone , som indeholder diphenylet .

d ) Spektrofotometrisk bestemmelse :

Man dekanterer den ovenstaaende klare vaeske ned i spektrofotometrets kuvette og bestemmer ekstinktionen ved 248 nm i sammenligning med en blindvaerdi fra en diphenylfri zone i kromatogrammet .

6 . Beregning af resultaterne :

Der opstilles en maalekurve , i hvilken man som koordinater opfoerer diphenylmaengderne paa 30 , 50 og 70 m g samt de tilsvarende i spektrofotometeret bestemte ekstintionsvaerdier . Den paa denne maade opnaaede kurve er en ret linie , som gaar igennem nulpunktet . Derved muliggoer denne maalekurve direkte aflaesning af diphenylindholdet i proeverne i ppm ud fra ekstrakternes ekstinktion .

( 1 ) Se figur paa side 160 .

BILAG IV

BESTEMMELSE AF ORTHOPHENYLPHENOL OG NATRIUMORTHOPHENYLPHENOLAT I CITRUSFRUGTER

1 . Formaal og anvendelsesomraade :

Den nedenfor beskrevne metode muliggoer bestemmelse af orthophenylphenol ( OPP ) og natriumorthophenylphenolat i citrusfrugter ( hele frugter ) . Metoden giver ved et indhold af OPP eller natriumorthophenylphenolat paa ca . 12 ppm gennemsnitlige afvigelser nedadtil mellem 10 og 20 % .

2 . Princip :

Efter destillation i surt medium og paafoelgende ekstraktion med di-isopentylether , renses ekstrakten og behandles med en oploesning af 1-phenyl-2,3-dimethyl-4-amino pyrazolon ( 5 ) ( = 4-aminoantipyrin ) .

Der opstaar en roedfarvning , hvis intensitet maales spektrofotometrisk ved 510 nm .

3 . Reagenser :

Fosforsyre 70 %

Antiskumemulsion paa silikonbasis

Di-isopentylether p.a .

Renset cyclohexan : Der udrystes 3 gange med 4 % natriumhydroxydoploesning og udvaskes 3 gange med destilleret vand

4 % natriumhydroxydoploesning

Stoedpudeoploesning , pH 10,4 : 6,64 borsyre , 8,00 g kaliumchlorid og 93,1 ml 1 N natriumhydroxydoploesning fyldes i en 2-liter maalekolbe , blandes og fyldes op til maerket med destilleret vand .

Reagens I : 1,0 g 1-phenyl-2,3-dimethyl-4-aminopyrazolon ( 5 ) ( = 4-aminoantipyrin ) oploeses i 100 ml destilleret vand

Reagens II : 2,0 g kaliumhexacyanoferrat -( III ) oploeses i 100 ml destilleret vand . Reagenserne I og II skal opbevares i en moerk flaske og er kun holdbare i ca . 14 dage .

Silikagel

Maleoploesning : 10 mg rent OPP oploeses i 1 ml 0,1 N NaOH , der fyldes op med 0,2 m Natriumborat-oploesning til 100 ml ( 1 ml = 100 mg ) .

Til maalekurven fortyndes 1 : 10 med stoedpudeoploesning .

4 . Apparatur :

Hakkemaskine eller moelle

Blandeapparat

1-liter destillationskolbe med udskiller ( modificeret Clevengertype ) ( 1 ) og tilbageloebskoeler

Infraroed-bad

200 ml skilletragt

25 - og 100-ml maalecylinder

25 - og 100-ml maalekolbe

Pipetter 1-10 ml

Maalepipetter 0,5 ml

Spektrofotometer med 5 cm kuvetter .

5 . Fremgangsmaade :

Samtlige frugter i den til kontrol udtagne proeve skaeres i to halvdele . En halvdel af hver frugt forbeholdes paavisningen af rester af diphenyl , orthophenylphenol henholdsvis natriumorthophenylphenolat . De andre halvdele kommes sammen , hakkes eller males i en moelle , indtil man opnaar en homogen blanding . Heraf udtages mindst 2 enkeltproever paa hver 250 g , som undersoeges efter den nedenstaaende fremgangsmaade .

Hver enkeltproeve kommes i et blandeapparat med 500 ml vand og formales , indtil man opnaar en homogen , fin groed , der ikke kan foeles , og i hvilken oliecellerne ikke laengere kan iagttages . Af den homogene groed afvejes alt efter det formodede OPP indhold , 150-300 g , som skylles over i 1-liter destillationskolben med saa meget vand , at den samlede maengde i kolben nu andrager 500 g . Efter tilsaetning af 10 ml fosforsyre 70 % , nogle kogesten og 0,5 ml antiskumemulsion paasaettes udskilleren og koeleren paa kolben . I udskilleren fyldes 10 ml di-isopentylaeter , og kolben opvarmes langsomt i infraroed-bad for at undgaa paabagning af groeden til skumdannelse . Den samlede destillationstid andrager ca . 6 timer . Efter afslutning af destillationen haeldes indholdet i udskilleren over i 200-ml skilletragten , udskilleren og koeleren skylles af med 60 ml cyclohexan og derpaa med 60 ml vand . Skyllevaeskerne foejes til indholdet i skilletragten . Denne rystes nu kraftigt . Efter adskillelse af lagene tages vandfasen fra og kastes bort .

For at ekstrahere OPP gennemrystes den organiske fase 5 gange , hver gang i 3 minutter , med 10 ml 4 % natriumhydroxydoploesning . De samlede portioner lud neutraliseres med fosforsyre overfor phenolphthaleinpapir til pH 9-10 og fyldes op til 100 ml med destilleret vand . For at klare den let uklare oploesning tilsaettes en spatelspids silikagel ; der omrystes og filtreres gennem et toert finporet filter . Da farveudviklingens maximale foelsomhed og noejagtighed ligger i omraadet fra 10-70 mg OPP , afpiptetteres aliquoter svarende til de forventede maengder OPP paa 0,5-10 ml stoedpudeoploesning og derefter 0,5 ml reagens II ; der fyldes op med stoedpudeoploesning til maerket og omrystes grundigt .

Efter 5 minutter maales extinktionen af det roede farvestof spektrofotometrisk ved 510 nm imod en blindvaerdi , der er ansat uden proeveoploesning . Farveintensiteten aendrer sig ikke inden for 30 minutter . Maengden aflaeses nu ved hjaelp af en maalekurve , der opstilles paa samme maade med OPP standardoploesningen .

6 . Bemaerkninger :

Det anbefales for hver proeveanalyse at gennemfoere den spektrofotometriske maaling som dobbeltbestemmelse med forskellige rumfang af de neutraliserede natronlududtraek .

Ubehandlede citrusfrugter giver efter denne metode blindvaerdier op til 0,5 ppm for appelsiner , og op til 0,8 ppm for citroner .

( 1 ) Se figur paa side 160 .

CLEVENGER

( Bilag III , kapitel 4 ; bilag IV , kapitel 4 ) : Se EFT